HIV-1(EC50=0.03-6.92 nM);HIV-2(EC50=0.018-0.02 nM)

Azvudine（RO-0622）对野生型 HIV-1IIIB 和 HIV-1RF 显示出强烈的抑制作用，EC50 范围为 30 至 110 pM。 Azvudine 针对 HIV-1KM018、HIV-1TC-1 和 HIV-1WAN T69N 的 EC50 值分别为 6.92、0.34 和 0.45 nM。 Azvudine 对 NRTIs 耐药株 HIV-174V、PIs 耐药株 HIV-1L10R/M46I/L63P/V82T/I84V 和 HIV-1RF V82F/184V 以及 FIs 耐药株 pNL4-3 gp41 (36G) V38A/N42T 敏感。 Azvudine 针对这些耐药菌株的 EC50 值分别为 0.11、0.14、0.37 和 0.36 nM[1]。 在细胞模型中，阿扎夫定（FNC）以剂量依赖的方式有效地抑制了HBV抗原的分泌，在第9天，乙肝表面抗原的50%有效浓度值为0.037μM，乙肝e抗原为0.044μM。与HBV抗原减少一致，阿扎夫定（FNC）也分别在细胞内和细胞外将HBV DNA水平降低了92.31%和93.90%。[2]

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阿扎夫定（FNC）以剂量依赖的方式抑制野生型和拉米夫定耐药HBV临床分离株的复制，平均±SD EC（50）值分别为0.12±0.01μM和0.27±0.01μM。 结论：Azvudine（FNC）是一种潜在的抗病毒药物，可对抗野生型和拉米夫定耐药的HBV临床分离株，因此值得进一步评估其治疗HBV感染的效果。[3]

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Azvudine（FNC）以0.95-4.55μM的IC（50）有效抑制多种侵袭性人类癌症细胞系的细胞增殖，包括B细胞非霍奇金淋巴瘤、肺腺癌和急性髓系白血病。用阿扎夫定（FNC）处理的细胞在高剂量和低剂量下分别表现出G1和S细胞周期阻滞，这证实了核苷类似物的作用机制。FNC治疗B-NHL细胞系以剂量和时间依赖的方式诱导凋亡。

体内抗病毒药效[2]
经0.5、1.0和2.0 mg/kg•天剂量的Azvudine (FNC) 治疗后，DHBV DNA水平显著降低。在第10天，2.0 mg/kg•d剂量的Azvudine (FNC) 在鸭血清和肝脏中的抑制率分别达到91.68%和81.96%。此外，通过组织病理学分析评估，观察到FNC治疗后肝脏组织学明显恢复。[2]

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体内抗肿瘤药效[4]
最后，肝癌（H22）、肉瘤（S180）和胃癌（SGC7901）的小鼠异种移植物模型表明，Azvudine (FNC) 以剂量依赖的方式具有显著的肿瘤生长抑制活性，且毒性低[4]。

通过荧光定量PCR定量HBV[2]
DNA为了进一步证实FNC在HepG2.2.15细胞中的抗病毒活性，通过荧光定量（FQ）-PCR评估了细胞外和细胞内HBV DNA水平。从培养上清液和细胞中提取病毒DNA，然后根据制造商的方案，使用HBV荧光定量PCR检测试剂盒 在Light Cycler 1.5中进行实时定量PCR。循环程序如下：在初始变性（95°C下2分钟）后，样品经历了40个变性循环（94°C下5秒）和退火/延伸循环（每个循环在56°C下45秒）。

体外抗HIV活性[1]
C8166细胞感染了不同浓度的HIV-1或HIV-2实验室菌株和耐药菌株，感染复数（MOI）为0.075-0.6。PHA刺激的PBMC与不同临床菌株在RPMI-1640（含10%FBS、50 U/ml IL-2和2µg/ml聚异戊二烯）中以0.1的MOI孵育。在37°C的5%CO2中感染2小时后，将C8166细胞洗涤三次以去除游离病毒，并用RPMI-1640（含10%FBS）重新悬浮。将100µl 4×104个细胞（PBMC为5×105个细胞）接种在96孔板上，板上有梯度浓度的Azvudine (FNC) 。将平板置于37°C、5%CO2的加湿培养箱中。3TC和AZT作为对照。孵育3-7天后，对合胞体形成的抑制百分比进行评分，或通过ELISA测量p24水平[19]，并计算50%有效浓度（EC50）。

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细胞毒性试验[1]
简而言之，将连续浓度的FNC加入96孔板中，然后加入100µl 4×104 C8166细胞（PBMC为5×105细胞）。在37°C、5%CO2下孵育3天后（PBMC为7天），每孔加入20µl MTT。孵育4小时后，去除100µl上清液，加入100µl 20%SDS-50%DMF。将平板在37°C下孵育过夜。通过ELISA阅读器在570nm和630nm处测量吸光度，并计算50%细胞毒性浓度（CC50）。3TC和AZT作为对照。

鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染及药物治疗实验[2]
每只1日龄的鸭子，在第3天经胫静脉注射0.2 ml来自DHBV血清学检测呈阳性鸭子的血清。在鸭子感染DHBV 7天后进行药物治疗实验。将DHBV阳性鸭子随机分为5组，每组16只。分别对DHBV感染的鸭子口服不同浓度的阿兹夫定（FNC）和3TC（作为对照）。观察5个组：FNC 0.5 mg/kg·d、阿兹夫定（FNC）1.0 mg/kg·d、阿兹夫定（FNC）2.0 mg/kg·d和3TC 20 mg/kg·d（作为阳性对照）。阴性对照组采用生理盐水作为模拟治疗。药物每日给药一次，连续给药10天。分别于治疗前、用药5天和10天后以及停药3天后，从所有鸭子的腿静脉抽取血液。分离血清和肝脏样本，并储存于-80℃。

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采用FQ-PCR法检测DHBV DNA[2]
在治疗期间的第0天、第5天和第10天，以及停药后的第3天（即第13天），采用FQ-PCR法检测DHBV DNA。对于DHBV DNA，使用DNA提取试剂盒从血清中提取DNA，并在LightCycler 1.5上用SYBR Green I进行荧光定量PCR（FQ-PCR）。根据先前发表的文献报道的序列设计了一对引物，用于扩增DHBV基因组，并将扩增的PCR片段克隆到pMD-18T载体中。基于DHBV S基因的保守序列，设计了另一对用于实时荧光定量PCR的引物，用于扩增重组质粒以构建标准曲线。同时，测试了该检测方法的特异性、灵敏度和重复性。最终建立了一种快速、特异的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法，用于检测DHBV。本研究采用该检测方法在不同时间点检测了实验感染雏鸭血清和肝脏中的DHBV DNA。[2]

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小鼠异种移植研究[4]
所有小鼠均在屏障条件下饲养，实验方案和条件均经机构动物护理部门批准。昆明小鼠（包括雄性和雌性，体重20±2 g，购自上海西克莱生物科技有限公司）右前腹皮下注射1×10⁷个肉瘤（S-180）和肝癌（H22）细胞，并随机分为若干不同的实验组，每组8-10只小鼠。肿瘤细胞植入后一天，小鼠每天通过静脉注射（IV）或关节内注射（IG）给予赋形剂（生理盐水）或5-氟尿嘧啶（5-FU，15 mg/kg/天）、顺铂（1.0 mg/kg/天）、卡培他滨（400或600 mg/kg/天）和阿兹夫定（FNC）（0.5、1.0、2.0 mg/kg/天），所有药物均溶于生理盐水或蒸馏水（卡培他滨），连续给药8天。治疗结束后24小时，处死小鼠，切除肿瘤并称重，以评估肿瘤生长抑制情况。BALB/c裸鼠（nu/nu）由上海西克莱生物科技有限公司提供，人胃癌细胞（SGC7901）以1 × 10⁷个细胞/ml的PBS悬液200 μl皮下注射于小鼠右后背部。当肿瘤平均直径达到 5–8 mm 时，对小鼠进行称重，并根据肿瘤大小随机分组，分配至不同的研究组，然后通过灌胃法（IG）每日给予赋形剂（生理盐水）、卡培他滨（600 mg/kg/天）或阿兹夫定（FNC）（0.5、1.0、2.0 mg/kg/天）治疗，持续 20 天。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重，以评估肿瘤生长抑制情况。所有结果均以 8 或 10 只动物的平均值 ± 标准误（SEM）表示。

[1]. Azvudine, a novel nucleoside reverse transcriptase inhibitor showed good drug combination features and better inhibition on drug-resistant strains than lamivudine in vitro. PLoS One. 2014 Aug 21;9(8):e105617.

[2]. Novel nucleoside analogue FNC is effective against both wild-type and lamivudine-resistant HBV clinical isolates. Antivir Ther. 2012;17(8):1593-9.

[3]. Antiviral activity of FNC, 2'-deoxy-2'-β-fluoro-4'-azidocytidine, against human and duck HBV replication. Antivir Ther. 2012;17(4):679-87.

[4]. FNC, a novel nucleoside analogue inhibits cell proliferation and tumor growth in a variety of human cancer cells. J Biol Chem. 2008 Jan 25;283(4):2167-75.

阿兹夫定正在临床试验 NCT04668235（阿兹夫定治疗 COVID-19 患者（SARS-CoV-2 感染）的安全性和临床疗效研究）中进行研究。

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作用机制：阿兹夫定是一种核苷类逆转录酶抑制剂，可对抗 HIV、HBV 和 HCV。一些研究还表明，它能够调节 P-糖蛋白 (P-gp)、MRP2 和 BCRP 等蛋白的表达；在一项研究中，它还能增强 P-gp 的活性。2020 年，该化合物在多项临床试验中用于治疗轻症和常见 COVID-19。

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阿兹夫定是一种新型核苷类逆转录酶抑制剂，对人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒具有抗病毒活性。本文报道了阿兹夫定单独使用或与其他抗逆转录病毒药物联合使用时对HIV-1和HIV-2的体外活性及其耐药特性。阿兹夫定对HIV-1（EC50范围为0.03至6.92 nM）和HIV-2（EC50范围为0.018至0.025 nM）均表现出高效的抑制作用。它与六种已批准的抗HIV药物联合使用时，在C8166细胞和外周血单核细胞（PBMC）上均显示出协同作用。在联合用药试验中，阿兹夫定的用药浓度比其他药物低1000倍或500倍。阿兹夫定对核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）耐药毒株（L74V和T69N）也表现出强效抑制作用。尽管M184V突变导致敏感性降低250倍，但阿兹夫定在纳摩尔浓度范围内仍保持活性。在体外诱导耐药性试验中，M184I突变的频率随诱导时间的延长而增加，这表明M184I是阿兹夫定治疗的关键突变。作为对照，在相同的诱导时间下，拉米夫定治疗导致M184I/V突变的频率更高，并且M184V的发生率也更高。分子建模分析表明，由于阿兹夫定的叠氮基团，突变体M184I的空间位阻比M184V更显著。目前的数据表明，阿兹夫定具有作为现有抗HIV药物的补充药物的潜力。M184I应该是关键突变，然而，阿兹夫定在纳摩尔浓度范围内仍然对HIV-1LAI-M184V有效。[2]

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新型核苷类似物FNC对野生型和拉米夫定耐药的HBV临床分离株均有效。HBV感染是全球主要的公共卫生问题。目前用于治疗乙型肝炎病毒（HBV）的抗病毒药物，如拉米夫定，其临床局限性导致长期抗病毒治疗期间耐药病毒株的快速出现。因此，迫切需要新的抗病毒药物来预防或延缓耐药HBV突变株的选择。一种新型胞苷类似物FNC（2'-脱氧-2'-β-氟-4'-叠氮胞苷）最近被证实能够分别在体外和体内强效抑制人HBV和鸭HBV（DHBV）的复制。本研究旨在评估FNC在瞬时转染细胞中对临床野生型和拉米夫定耐药HBV分离株的体外抗病毒活性。方法：从拉米夫定治疗前和病毒突破时采集的血清样本中提取HBV DNA，并采用PCR进行扩增。将扩增子克隆到一种新型表达载体pHY106中，该载体可在细胞转染后启动细胞内HBV复制周期。将克隆的扩增子转染到HepG2细胞后，进行药物敏感性试验。采用定量实时PCR测定细胞内HBV DNA的含量，并计算抑制HBV复制50%所需的有效浓度（EC50）。结果：FNC以剂量依赖的方式抑制野生型和拉米夫定耐药HBV临床分离株的复制，其平均±标准差EC50值分别为0.12±0.01 μM和0.27±0.01 μM。结论：FNC是一种潜在的抗病毒药物，可有效对抗野生型和拉米夫定耐药HBV临床分离株，因此值得进一步评估其在HBV感染治疗中的应用。[3]

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阿兹夫定/FNC是一种新型核苷类似物，可抑制多种人类癌细胞的增殖和肿瘤生长。抑制细胞DNA合成是阻断癌细胞分裂的一种策略。核苷类似物可以掺入DNA并终止DNA链的延伸。目前，已有多种核苷类似物成功用作抗癌药物。FNC，即2'-脱氧-2'-β-氟-4'-叠氮胞苷，是一种新型胞苷类似物，对丙型肝炎病毒（HCV）表现出强效活性。为了研究FNC在人类癌症中的治疗潜力，我们研究了其在体外和体内对多种癌细胞的活性。[4]

C9H12CLFN6O4

322.68078327179

322.059

1333126-31-0

Azvudine;1011529-10-4

54579399

Light yellow to khaki solid powder

123Ų

4

7

3

21

533

4

Cl.F[C@@H]1[C@H](N2C(N=C(C=C2)N)=O)O[C@](CO)([C@H]1O)N=[N+]=[N-]

MKMLHJHSIBILJH-DBSFTZRASA-N

InChI=1S/C9H11FN6O4.ClH/c10-5-6(18)9(3-17,14-15-12)20-7(5)16-2-1-4(11)13-8(16)19;/h1-2,5-7,17-18H,3H2,(H2,11,13,19);1H/t5-,6-,7+,9+;/m0./s1

4-amino-1-[(2R,3S,4R,5R)-5-azido-3-fluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidin-2-one;hydrochloride

Azvudine HCl; RO-0622; FNC; RO0622; Azvudine (hydrochloride); Azvudine hydrochloride; 1333126-31-0; 4-amino-1-[(2R,3S,4R,5R)-5-azido-3-fluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidin-2-one;hydrochloride; CHEMBL1822611;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~125 mg/mL (~387.38 mM)

配方 1 中的溶解度: 14.29 mg/mL (44.29 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。