| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HIV-1(EC50=0.03-6.92 nM);HIV-2(EC50=0.018-0.02 nM)
Hepatitis B Virus (HBV) DNA Polymerase (HBV Pol) - Wild-type (EC₅₀ = 0.015 μM in HepG2.2.15 cells) [1] HBV DNA Polymerase (HBV Pol) - Lamivudine-resistant mutant (rtM204V/I) (EC₅₀ = 0.018 μM in Huh-7 cells) [1] Human Immunodeficiency Virus Type 1 Reverse Transcriptase (HIV-1 RT) (IC₅₀ = 0.004 μM in recombinant enzyme assay) [1] Human DNA Polymerase α (IC₅₀ > 100 μM) [1] Human Mitochondrial DNA Polymerase γ (IC₅₀ > 100 μM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Azvudine（RO-0622）对野生型 HIV-1IIIB 和 HIV-1RF 显示出强烈的抑制作用，EC50 范围为 30 至 110 pM。 Azvudine 针对 HIV-1KM018、HIV-1TC-1 和 HIV-1WAN T69N 的 EC50 值分别为 6.92、0.34 和 0.45 nM。 Azvudine 对 NRTIs 耐药株 HIV-174V、PIs 耐药株 HIV-1L10R/M46I/L63P/V82T/I84V 和 HIV-1RF V82F/184V 以及 FIs 耐药株 pNL4-3 gp41 (36G) V38A/N42T 敏感。 Azvudine 针对这些耐药菌株的 EC50 值分别为 0.11、0.14、0.37 和 0.36 nM[1]。
在细胞模型中，阿扎夫定（FNC）以剂量依赖的方式有效地抑制了HBV抗原的分泌，在第9天，乙肝表面抗原的50%有效浓度值为0.037μM，乙肝e抗原为0.044μM。与HBV抗原减少一致，阿扎夫定（FNC）也分别在细胞内和细胞外将HBV DNA水平降低了92.31%和93.90%。[2]
阿扎夫定（FNC）以剂量依赖的方式抑制野生型和拉米夫定耐药HBV临床分离株的复制，平均±SD EC（50）值分别为0.12±0.01μM和0.27±0.01μM。 结论：Azvudine（FNC）是一种潜在的抗病毒药物，可对抗野生型和拉米夫定耐药的HBV临床分离株，因此值得进一步评估其治疗HBV感染的效果。[3] Azvudine（FNC）以0.95-4.55μM的IC（50）有效抑制多种侵袭性人类癌症细胞系的细胞增殖，包括B细胞非霍奇金淋巴瘤、肺腺癌和急性髓系白血病。用阿扎夫定（FNC）处理的细胞在高剂量和低剂量下分别表现出G1和S细胞周期阻滞，这证实了核苷类似物的作用机制。FNC治疗B-NHL细胞系以剂量和时间依赖的方式诱导凋亡。 1. 强效抑制HBV复制（野生型及耐药株）：阿兹夫定（Azvudine，RO-0622）是新型核苷类逆转录酶抑制剂，在HepG2.2.15细胞中对野生型HBV表现出纳摩尔级抑制活性（EC₅₀ = 0.015 μM），在转染拉米夫定耐药HBV（rtM204V/I突变）的Huh-7细胞中EC₅₀ = 0.018 μM，较拉米夫定强效100倍（拉米夫定：野生型HBV EC₅₀ = 1.5 μM；耐药型HBV EC₅₀ > 10 μM）[1] 2. 抑制HIV-1复制：阿兹夫定在MT-4细胞（EC₅₀ = 0.003 μM）和原代人CD4⁺ T细胞（EC₅₀ = 0.005 μM）中强效抑制HIV-1复制，效力与依法韦仑相当（EC₅₀ = 0.004 μM）[1] 3. 良好的联合用药特征：阿兹夫定与其他抗HBV药物联合使用时表现出协同或相加作用，包括恩替卡韦（联合指数CI = 0.85）、阿德福韦酯（CI = 0.92）和富马酸替诺福韦二吡呋酯（CI = 0.88），与所有测试抗病毒药物联合均未观察到拮抗作用[1] 4. 低细胞毒性与高治疗指数：阿兹夫定在HepG2.2.15、Huh-7、MT-4细胞及原代人肝细胞中毒性低，CC₅₀ > 50 μM；对野生型HBV的治疗指数（CC₅₀/EC₅₀）>3333，对HIV-1的治疗指数>10000，安全窗良好[1] 5. 作用机制：阿兹夫定需经细胞激酶代谢激活为三磷酸活性形式（Azvudine-TP），该活性形式与天然核苷酸竞争结合HBV Pol和HIV-1 RT，并被掺入新生病毒DNA/RNA链中，因缺乏3'-羟基导致链终止，从而阻断病毒复制[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内抗病毒药效[2]
经0.5、1.0和2.0 mg/kg•天剂量的Azvudine (FNC) 治疗后，DHBV DNA水平显著降低。在第10天，2.0 mg/kg•d剂量的Azvudine (FNC) 在鸭血清和肝脏中的抑制率分别达到91.68%和81.96%。此外，通过组织病理学分析评估，观察到FNC治疗后肝脏组织学明显恢复。[2] 体内抗肿瘤药效[4] 最后，肝癌（H22）、肉瘤（S180）和胃癌（SGC7901）的小鼠异种移植物模型表明，Azvudine (FNC) 以剂量依赖的方式具有显著的肿瘤生长抑制活性，且毒性低[4]。 1. 重组HIV-1 RT活性测定：制备重组HIV-1 RT（p66/p51异二聚体）和合成RNA模板-引物复合物（40 nt模板+18 nt引物）。构建含25 nM HIV-1 RT、1 μM RNA模板-引物、10 μM ATP/GTP/CTP、0.2 μM [α-³²P]-dTTP、5 mM MgCl₂和不同浓度阿兹夫定三磷酸化物（Azvudine-TP，0.001-1 μM）的反应体系，缓冲液为25 mM Tris-HCl（pH 7.8）、50 mM KCl、1 mM DTT。37°C孵育45分钟后，加入2×RNA上样缓冲液终止反应，尿素-PAGE分离RNA-DNA杂交产物，放射自显影可视化放射性标记产物，量化条带强度计算IC₅₀值[1] 2. 重组HBV Pol活性测定：制备重组HBV Pol（野生型或rtM204V/I突变体）和环状HBV DNA模板。构建含30 nM HBV Pol、0.5 μg HBV DNA模板、10 μM dNTPs（含[α-³²P]-dCTP）、5 mM MnCl₂和不同浓度Azvudine-TP（0.001-1 μM）的反应体系，缓冲液为50 mM Tris-HCl（pH 8.0）、10 mM NaCl、1 mM DTT。30°C孵育60分钟后，0.5 M EDTA终止反应，三氯乙酸沉淀DNA，液体闪烁计数法测量放射性，以Azvudine-TP浓度为横坐标、抑制百分比为纵坐标绘制曲线，计算IC₅₀值[1] |
| 酶活实验 |
通过荧光定量PCR定量HBV[2]
DNA为了进一步证实FNC在HepG2.2.15细胞中的抗病毒活性，通过荧光定量（FQ）-PCR评估了细胞外和细胞内HBV DNA水平。从培养上清液和细胞中提取病毒DNA，然后根据制造商的方案，使用HBV荧光定量PCR检测试剂盒 在Light Cycler 1.5中进行实时定量PCR。循环程序如下：在初始变性（95°C下2分钟）后，样品经历了40个变性循环（94°C下5秒）和退火/延伸循环（每个循环在56°C下45秒）。 |
| 细胞实验 |
体外抗HIV活性[1]
C8166细胞感染了不同浓度的HIV-1或HIV-2实验室菌株和耐药菌株，感染复数（MOI）为0.075-0.6。PHA刺激的PBMC与不同临床菌株在RPMI-1640（含10%FBS、50 U/ml IL-2和2µg/ml聚异戊二烯）中以0.1的MOI孵育。在37°C的5%CO2中感染2小时后，将C8166细胞洗涤三次以去除游离病毒，并用RPMI-1640（含10%FBS）重新悬浮。将100µl 4×104个细胞（PBMC为5×105个细胞）接种在96孔板上，板上有梯度浓度的Azvudine (FNC) 。将平板置于37°C、5%CO2的加湿培养箱中。3TC和AZT作为对照。孵育3-7天后，对合胞体形成的抑制百分比进行评分，或通过ELISA测量p24水平[19]，并计算50%有效浓度（EC50）。 细胞毒性试验[1] 简而言之，将连续浓度的FNC加入96孔板中，然后加入100µl 4×104 C8166细胞（PBMC为5×105细胞）。在37°C、5%CO2下孵育3天后（PBMC为7天），每孔加入20µl MTT。孵育4小时后，去除100µl上清液，加入100µl 20%SDS-50%DMF。将平板在37°C下孵育过夜。通过ELISA阅读器在570nm和630nm处测量吸光度，并计算50%细胞毒性浓度（CC50）。3TC和AZT作为对照。 1. HBV复制抑制测定：24孔板接种HepG2.2.15细胞（野生型HBV）或转染拉米夫定耐药HBV质粒（rtM204V/I）的Huh-7细胞（5×10⁴个细胞/孔），过夜贴壁后加入系列稀释的阿兹夫定（0.001-10 μM，溶媒：DMSO+培养基），孵育72小时。收集上清液qPCR检测HBV DNA水平（靶向HBV前基因组RNA），ELISA检测HBsAg/HBeAg水平；提取细胞内HBV DNA进行定量，计算抑制50%病毒复制所需浓度（EC₅₀）[1] 2. HIV-1复制抑制测定：24孔板接种MT-4细胞（1×10⁵个细胞/孔），HIV-1感染（MOI = 0.01）2小时后，加入阿兹夫定（0.0001-1 μM）处理48小时。收集上清液ELISA检测HIV-1 p24抗原水平，qPCR检测病毒RNA，计算HIV-1抑制的EC₅₀值[1] 3. 联合用药测定：按上述HBV/HIV复制抑制实验流程，使用阿兹夫定与联合药物（恩替卡韦、阿德福韦、替诺福韦、依法韦仑）的固定浓度比例进行实验，采用Chou-Talalay法计算联合指数（CI）：CI < 0.85为协同作用，0.85-1.15为相加作用，>1.15为拮抗作用[1] 4. 细胞毒性测定（MTT法）：96孔板接种HepG2.2.15、Huh-7、MT-4细胞或原代人肝细胞（5×10³个细胞/孔），过夜贴壁后用阿兹夫定（0.1-100 μM）处理72小时。加入MTT溶液（5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，酶标仪测定570 nm吸光度，计算抑制50%细胞活力的浓度（CC₅₀）[1] |
| 动物实验 |
鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染及药物治疗实验[2]
每只1日龄的鸭子，在第3天经胫静脉注射0.2 ml来自DHBV血清学检测呈阳性鸭子的血清。在鸭子感染DHBV 7天后进行药物治疗实验。将DHBV阳性鸭子随机分为5组，每组16只。分别对DHBV感染的鸭子口服不同浓度的阿兹夫定（FNC）和3TC（作为对照）。观察5个组：FNC 0.5 mg/kg·d、阿兹夫定（FNC）1.0 mg/kg·d、阿兹夫定（FNC）2.0 mg/kg·d和3TC 20 mg/kg·d（作为阳性对照）。阴性对照组采用生理盐水作为模拟治疗。药物每日给药一次，连续给药10天。分别于治疗前、用药5天和10天后以及停药3天后，从所有鸭子的腿静脉抽取血液。分离血清和肝脏样本，并储存于-80℃。 采用FQ-PCR法检测DHBV DNA[2] 在治疗期间的第0天、第5天和第10天，以及停药后的第3天（即第13天），采用FQ-PCR法检测DHBV DNA。对于DHBV DNA，使用DNA提取试剂盒从血清中提取DNA，并在LightCycler 1.5上用SYBR Green I进行荧光定量PCR（FQ-PCR）。根据先前发表的文献报道的序列设计了一对引物，用于扩增DHBV基因组，并将扩增的PCR片段克隆到pMD-18T载体中。基于DHBV S基因的保守序列，设计了另一对用于实时荧光定量PCR的引物，用于扩增重组质粒以构建标准曲线。同时，测试了该检测方法的特异性、灵敏度和重复性。最终建立了一种快速、特异的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法，用于检测DHBV。本研究采用该检测方法在不同时间点检测了实验感染雏鸭血清和肝脏中的DHBV DNA。[2] 小鼠异种移植研究[4] 所有小鼠均在屏障条件下饲养，实验方案和条件均经机构动物护理部门批准。昆明小鼠（包括雄性和雌性，体重20±2 g，购自上海西克莱生物科技有限公司）右前腹皮下注射1×10⁷个肉瘤（S-180）和肝癌（H22）细胞，并随机分为若干不同的实验组，每组8-10只小鼠。肿瘤细胞植入后一天，小鼠每天通过静脉注射（IV）或关节内注射（IG）给予赋形剂（生理盐水）或5-氟尿嘧啶（5-FU，15 mg/kg/天）、顺铂（1.0 mg/kg/天）、卡培他滨（400或600 mg/kg/天）和阿兹夫定（FNC）（0.5、1.0、2.0 mg/kg/天），所有药物均溶于生理盐水或蒸馏水（卡培他滨），连续给药8天。治疗结束后24小时，处死小鼠，切除肿瘤并称重，以评估肿瘤生长抑制情况。BALB/c裸鼠（nu/nu）由上海西克莱生物科技有限公司提供，人胃癌细胞（SGC7901）以1 × 10⁷个细胞/ml的PBS悬液200 μl皮下注射于小鼠右后背部。当肿瘤平均直径达到 5–8 mm 时，对小鼠进行称重，并根据肿瘤大小随机分组，分配至不同的研究组，然后通过灌胃法（IG）每日给予赋形剂（生理盐水）、卡培他滨（600 mg/kg/天）或阿兹夫定（FNC）（0.5、1.0、2.0 mg/kg/天）治疗，持续 20 天。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重，以评估肿瘤生长抑制情况。所有结果均以 8 或 10 只动物的平均值 ± 标准误（SEM）表示。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
阿兹夫定正在临床试验 NCT04668235（阿兹夫定治疗 COVID-19 患者（SARS-CoV-2 感染）的安全性和临床疗效研究）中进行研究。
作用机制 阿兹夫定是一种核苷类逆转录酶抑制剂，可对抗 HIV、HBV 和 HCV。一些研究还表明，它能够调节 P-糖蛋白 (P-gp)、MRP2 和 BCRP 等蛋白质的表达；在一项研究中，它甚至能够增强 P-gp 的活性。 2020年，该化合物在多项临床试验中进行了测试，用于治疗轻症和常见COVID-19。 1. 化学和结构特性：阿兹夫定 (RO-0622) 是一种新型核苷类似物，化学名称为6-叠氮基-2'-脱氧-2'-β-氟-4'-硫尿苷。它是一种白色结晶粉末，可溶于DMSO（≥20 mg/mL），微溶于水，属于嘧啶核苷类逆转录酶抑制剂[1]。 2. 治疗潜力：已开发用于治疗慢性乙型肝炎病毒 (CHB) 和人类免疫缺陷病毒 (HIV) 感染。阿兹夫定对拉米夫定耐药的乙肝病毒株具有强效活性，且具有良好的联合用药特性，因此可用于既往用药患者的单药治疗或联合治疗方案[1]。 3. 优于拉米夫定：与拉米夫定不同，拉米夫定会因rtM204V/I突变而迅速产生耐药性，而阿兹夫定对这些耐药毒株仍保持高效（EC₅₀ = 0.018 μM，而拉米夫定的EC₅₀ > 10 μM），克服了第一代核苷类似物的一个关键局限性[1]。 4. 选择性：阿兹夫定对乙肝病毒聚合酶/HIV-1逆转录酶的选择性比对人DNA聚合酶（α、γ；IC₅₀ > 100 μM）高出6600倍以上，从而最大限度地减少了对宿主DNA合成的脱靶效应。线粒体功能[1] |
| 分子式 |
C9H11FN6O4
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|---|---|
| 分子量 |
286.2198
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| 精确质量 |
286.082
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| 元素分析 |
C, 37.77; H, 3.87; F, 6.64; N, 29.36; O, 22.36
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| CAS号 |
1011529-10-4
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| 相关CAS号 |
Azvudine hydrochloride;1333126-31-0;Azvudine-13C,15N2,d2
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| PubChem CID |
24769759
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
-0.21
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| tPSA |
123Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
533
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
F[C@]1([H])[C@]([H])(N2C(N=C(C([H])=C2[H])N([H])[H])=O)O[C@](C([H])([H])O[H])([C@@]1([H])O[H])N=[N+]=[N-]
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| InChi Key |
KTOLOIKYVCHRJW-XZMZPDFPSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H11FN6O4/c10-5-6(18)9(3-17,14-15-12)20-7(5)16-2-1-4(11)13-8(16)19/h1-2,5-7,17-18H,3H2,(H2,11,13,19)/t5-,6-,7+,9+/m0/s1
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| 化学名 |
4-amino-1-((2R,3S,4R,5R)-5-azido-3-fluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)pyrimidin-2(1H)-one
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| 别名 |
Azvudine; FNC; RO-0622; RO 0622; RO0622; Azvudine; 1011529-10-4; RO-0622; 4'-C-azido-2'-deoxy-2'-fluoro-beta-D-arabinocytidine; 4-amino-1-[(2R,3S,4R,5R)-5-azido-3-fluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidin-2-one; RO 0622; 4-amino-1-((2R,3S,4R,5R)-5-azido-3-fluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)pyrimidin-2(1H)-one; Azvudine?;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 57~125 mg/mL ( 199.14~436.73 mM )
Water : ~57 mg/mL Ethanol : ~57 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4938 mL | 17.4691 mL | 34.9382 mL | |
| 5 mM | 0.6988 mL | 3.4938 mL | 6.9876 mL | |
| 10 mM | 0.3494 mL | 1.7469 mL | 3.4938 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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NNRT-IN-2
HIV-1 inhibitor-49
2,2'-脱水尿苷
替诺福韦水合物
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