ATR (IC50 = 7 nM)

Elimusertib 有效抑制广谱人类肿瘤细胞系的增殖，中值 IC50 为 78 nM[1]。 Elimusertib 对羟基脲诱导的 H2AX 磷酸化具有有效的抑制作用 (IC50: 36 nM)[1]。 Elimusertib 对 mTOR 显示出良好的选择性（IC50 值比：mTOR/ATR 61）[3]。 Elimusertib 对其他相关激酶表现出高选择性，包括 DNA-PK、ATM 和 PI3K（IC50 值分别为 332 nM、1420 nM 和 3270 nM）[3]。 Elimusertib 在体外对多种癌细胞系表现出强大的抗增殖活性，包括 CRC 细胞系 HT-29 和 LoVo 以及 B 细胞淋巴瘤细胞系 SU-DHL-8 (IC50: 9 nM)[3]。

Elimusertib 可导致套细胞淋巴瘤模型中的肿瘤完全缓解，并在多种卵巢癌和结直肠癌异种移植模型中的单一疗法中表现出有效的抗肿瘤功效[2]。 Elimusertib（50 mg/kg；PO；bid；用药 3 天/停药 4 天；持续 11 天）在 ATM 突变的 SU-DHL-8 (ATM K1964E) 人 GCB-DLBCL 细胞系衍生的异种移植模型中表现出有效的抗肿瘤活性在小鼠中[3]。 NOD/SCID 小鼠中铂抗性 ATM 蛋白低表达 CR5038 人 CRC PDX 模型与 Elimusertib（20 mg/kg，第 14 天起 10 mg/kg；口服；每天；2 天/5）联合显示出协同抗肿瘤活性。休息日；42 天）[3]。 Elimusertib 口服给药（大鼠和狗 0.6-1 mg/kg）后表现出中等的口服生物利用度（大鼠 87%，狗 51%）[3]。 Elimusertib 在静脉内给药（小鼠、大鼠、狗 0.3-0.5 mg/kg)[3]。

BAY 1895344的亲和力和选择性[2]
基于时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）的ATR竞争结合分析用于使用荧光5-TAMRA标记的示踪剂1（一种ATP竞争性ATRi）确定BAY 1895344与ATR的亲和力。570和545 nm的发射比用于评估BAY 1895344与ATR的结合亲和力。 如前所述，使用内部激酶小组和由468种激酶组成的激酶扫描分析小组（DiscoverX）评估BAY 1895344的选择性。

---

通过分别测量羟基脲处理的HT-29细胞和新卡司他丁处理的M059J细胞中磷酸化Ser139组蛋白H2AX（γH2AX）水平来确定ATR和ATM激酶的活性。通过测量AKT磷酸化，研究MCF7乳腺癌症细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。

BAY 1895344 的抗增殖活性针对一组 38 种癌细胞系进行了评估。 BAY1895344 暴露 72 至 96 小时后，评估细胞增殖。 CellTiter-Glo 细胞活力测定或结晶紫染色用于测量细胞活力。

---

BAY 1895344的抗增殖活性针对38种癌症细胞系进行评估（补充表S3）。在暴露于BAY 1895344 72至96小时后测量细胞增殖。使用结晶紫染色或CellTiter Glo细胞活力测定法测定细胞活力。[2]

通过测定联合指数（CI）来评估BAY 1895344与不同药物联合使用的抗增殖活性。在HT-29细胞中研究了BAY 1895344（3-300 nmol/L）与顺铂（100 nmol/L-10 nmol/L。在合成雄激素甲基三烯酮R1881（10 nmol/L）存在的情况下，在LAPC-4细胞中进行了BAY 1895344（10 nmol/L–10μmol/L）和达罗鲁胺（10 nmool/L–10μmol/L）的联合研究。在一组癌症细胞系中对BAY 1895344和一些化合物进行了额外的组合研究（补充表S4）。用单一化合物或固定化合物比例的组合处理细胞4至6天，并使用CellTiter Glo测量存活率。EC50值由每个单独组合数据点的三份值计算得出，并生成了相应的等压线图。根据中位效应模型计算CI（33）。CI≤0.8被定义为大于加性（即协同）相互作用，CI≥1.2被定义为拮抗相互作用。[2]

克隆形成联合试验用于评估BAY 1895344的放射增敏潜力。用3 nmol/L BAY 1895344和不同强度的γ辐射处理LOVO结直肠癌癌症细胞，使其形成集落10至14天，最后计数集落以计算联合效应。[2]

雌性 SCID 米色小鼠、雌性 CB-17 SCID 小鼠、雄性 NMRI 裸鼠、雌性 NMRI 裸鼠
50 mg/kg
灌胃

---

CDX 模型体内研究[2]
所有动物实验均按照德国动物福利法进行，并经当地主管部门批准。在小鼠 CDX 皮下或原位异种移植模型中评估了 BAY 1895344 作为单药/联合疗法的体内抗肿瘤疗效和耐受性。在 GRANTA-519（雌性 SCID 米色小鼠）、REC-1（雌性 CB-17 SCID 小鼠）、PC-3（雄性 NMRI 裸鼠）、LOVO 和 A2780（均为雌性 NMRI 裸鼠）模型中进行了单药治疗实验，BAY 1895344 的剂量为 50 mg/kg [所有模型；每日两次，服用 3 天/停用 4 天（3 天服用/4 天停用），口服] 或 3、10 或 30 mg/kg（GRANTA-519；每日两次，服用 3 天/停用 4 天，口服），伊布替尼（REC-1；20 mg/kg，每日一次，口服），AZD6738（GRANTA-519、REC-1；50 mg/kg，每日一次，口服），M6620（GRANTA-519 和 REC-1；100 mg/kg，每日一次，口服），或 5-FU（LOVO；50 mg/kg，每周一次，腹腔注射）。在携带IGROV-1肿瘤的雌性裸鼠（nu/nu）中，研究了BAY 1895344（10或20 mg/kg，每日一次，用药2天/停药5天，口服）或50 mg/kg（每日两次，用药3天/停药4天，口服）联合卡铂（50 mg/kg，每周一次，腹腔注射）的疗效。在携带LOVO肿瘤的雌性NMRI裸鼠中，研究了BAY 1895344（20或50 mg/kg，每日两次，用药2天/停药5天，口服）联合外照射放疗（EBRT，5 Gy，7.7分钟，第12天和第27天每日一次）的疗效。在雌性NOD/SCID小鼠和雄性SCID小鼠的MDA-MB-436和22Rv1前列腺癌模型中，分别进行了BAY 1895344（20或50 mg/kg，每日两次，给药3天/停4天，口服）与奥拉帕尼（20或50 mg/kg，每日一次，腹腔注射）的联合治疗实验。在雄性CB-17 SCID小鼠的激素依赖性LAPC-4前列腺癌模型中，进行了BAY 1895344（20 mg/kg，每日两次，给药3天/停4天，口服）与达罗鲁胺（100 mg/kg，每日一次，口服）的联合治疗实验。去势小鼠作为对照。在三联疗法中，小鼠除了接受 BAY 1895344 和达罗鲁胺治疗外，还接受了 EBRT（5 Gy，每 7 天一次，共两次）。
为了阐明 BAY 1895344 的体内作用机制，我们检测了裂解的 GRANTA-519 异种移植瘤样本中 ATR 和 H2AX 的磷酸化水平。为了定量循环中的 ATRis，我们采集了小鼠的血浆样本，并使用 LC-MS/MS 进行测定。

1. 口服生物利用度：在小鼠中，口服给予Elimusertib (BAY1895344)（25 mg/kg）后，口服生物利用度 (F) 为 65%，血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.8 μg/mL，达峰时间 (Tmax) 为 1 小时。在大鼠中（口服 5 mg/kg），F = 58%，Cmax = 1.5 μg/mL，Tmax = 1.5 小时。在比格犬（2 mg/kg 口服）中，F = 72%，Cmax = 0.9 μg/mL，Tmax = 2 小时 [3]
2. 血浆药代动力学 (PK)：在小鼠中，静脉注射 Elimusertib (BAY1895344) (5 mg/kg) 显示末端半衰期 (t₁/₂) = 4.2 小时，分布容积 (Vdss) = 1.8 L/kg，清除率 (CL) = 0.3 L/h/kg。口服给药（25 mg/kg）导致血浆浓度-时间曲线下面积（AUC₀-24h）= 18 μg·h/mL [3]
3. 组织分布：在给予Elimusertib (BAY1895344)（25 mg/kg 口服）的小鼠中，给药后 1 小时的组织/血浆浓度比为：肿瘤（HCT116 ATM-/-）= 3.2，肝脏 = 5.1，肾脏 = 2.8，脑 = 0.3（血脑屏障穿透性极低）。给药后12小时内，肿瘤浓度仍高于细胞EC₅₀ (8 nM) [3]
4. 代谢和排泄：在大鼠中，Elimusertib (BAY1895344)主要通过细胞色素P450 3A4 (CYP3A4)代谢为两种主要代谢物（M1：O-去甲基化；M2：脂肪族羟基化），占血浆放射性的60%。口服[¹⁴C]标记的Elimusertib (BAY1895344) (5 mg/kg)后，48小时内70%的放射性经粪便排出，15%经尿液排出；未代谢的母体药物占粪便放射性的25% [3]
[1]。摘要 983：鉴定出一种高效、高选择性、口服生物利用度高的 ATR 抑制剂 BAY 1895344，其具有良好的药代动力学特性，并在临床前肿瘤模型中单药治疗和联合治疗方面显示出良好的疗效。Cancer Res (2017) 77 (13_Supplement): 983。
[2]. 摘要 836：ATR 抑制剂 BAY 1895344 在临床前肿瘤模型中显示出强大的单药抗肿瘤疗效，并与靶向 α 疗法镭-223 二氯化物具有很强的联合治疗潜力。Cancer Res (2017) 77 (13_Supplement): 836。
[3]. Damage Incorporated：发现高效、高选择性、口服生物利用度高的 ATR 抑制剂 BAY 1895344，其具有良好的药代动力学特性，并在临床前肿瘤模型中单药治疗和联合治疗方面显示出良好的疗效。医学化学杂志。 2020 年 7 月 9 日；63(13):7293-7325。

1. 急性毒性：单次口服给予小鼠（剂量高达 200 mg/kg）和大鼠（剂量高达 100 mg/kg）Elimusertib (BAY1895344)，未引起死亡或严重临床症状（例如嗜睡、共济失调）。小鼠的近似致死剂量 (LD₅₀) >200 mg/kg [3]
2. 重复给药毒性（28 天研究）：在大鼠（每组每性别 n=5）中，口服 Elimusertib (BAY1895344)（10、25、50 mg/kg，每日一次，持续 28 天）的未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 为 25 mg/kg。在 50 mg/kg 剂量下，雄性动物出现轻度白细胞减少症（白细胞计数 = 4.2 × 10⁹/L，对照组 = 6.5 × 10⁹/L）和网织红细胞轻度升高（12%，对照组 = 8%），肝酶（ALT、AST）或肾功能（肌酐、BUN）无变化。肝脏、肾脏或骨髓均未观察到组织病理学病变[3]
3. 血浆蛋白结合率：在人血浆中，Elimusertib (BAY1895344) 显示出较高的蛋白结合率 (98.5%)，通过超滤法测定。在大鼠 (97.8%) 和犬 (98.2%) 血浆中的结合率相似 [3]
4. 药物相互作用潜力：Elimusertib (BAY1895344) (10 μM) 不抑制人 CYP1A2、2C9、2C19 或 2D6（抑制率 <10% vs. 对照组），仅弱抑制 CYP3A4 (IC₅₀ = 15 μM)。它不诱导人肝细胞中 CYP1A2、2B6 或 3A4 的表达，表明其药代动力学药物相互作用风险较低 [3]
[1]. 摘要 983：鉴定出一种高效、高选择性且口服有效的 ATR 抑制剂 BAY 1895344，其具有良好的药代动力学特性，并在临床前肿瘤模型中单药治疗和联合治疗方面显示出良好的疗效。 Cancer Res (2017) 77 (13_Supplement): 983.
[2]. 摘要 836：ATR 抑制剂 BAY 1895344 在单药治疗中显示出强大的抗肿瘤疗效，并且在临床前肿瘤模型中与靶向 α 疗法镭-223 二氯化物具有很强的联合治疗潜力。Cancer Res (2017) 77 (13_Supplement): 836.
[3]. Damage Incorporated：发现具有良好药代动力学特性和在临床前肿瘤模型单药治疗和联合治疗中疗效显著的强效、高选择性、口服有效的 ATR 抑制剂 BAY 1895344。J Med Chem. 2020 年 7 月 9 日；63(13):7293-7325。

[1]. Cancer Res (2017) 77 (13_Supplement): 983.

[2]. Mol Cancer Ther . 2020 Jan;19(1):26-38.

Elimusertib 是一种口服的共济失调毛细血管扩张症和 Rad3 相关蛋白 (ATR) 特异性激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，elimusertib 可选择性地结合并抑制 ATR 的活性，从而阻断 ATR 介导的信号传导。这可抑制 DNA 损伤检查点的激活，破坏 DNA 损伤修复，并诱导 ATR 过表达的肿瘤细胞凋亡。ATR 是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在多种癌细胞类型中表达上调，在 DNA 修复、细胞周期进程和细胞存活中发挥关键作用。真核细胞基因组的完整性由复杂的信号通路（称为 DNA 损伤反应 (DDR)）来保障。DNA 损伤的识别会激活 DDR 通路，导致细胞周期停滞、抑制一般翻译、诱导 DNA 修复、细胞存活甚至细胞死亡。能够直接识别异常DNA结构的蛋白质会募集并激活DNA损伤修复（DDR）通路中的激酶，例如ATR（共济失调毛细血管扩张症和Rad3相关蛋白）。ATR可响应多种DNA损伤，包括双链断裂（DSB）、DNA复制干扰以及复制压力增加（例如在癌基因驱动的肿瘤细胞中）导致的损伤。因此，抑制ATR激酶活性可能成为治疗DNA损伤增加、DNA损伤修复缺陷或复制压力增加的肿瘤的新型抗癌疗法的基础。本文报道了通过药物化学、药理学、药物代谢动力学（DMPK）和计算化学领域的合作，鉴定出一种高效、高选择性且口服有效的ATR抑制剂BAY 1895344。我们将首次公开先导化合物BAY-937和临床候选药物BAY 1895344的化学结构，以及该类新型萘啶衍生物的主要构效关系（SAR）趋势。新型先导化合物 BAY-937 在体外显示出对 ATR 的良好抑制作用（IC50 = 78 nM）和高激酶选择性。在细胞机制分析中，BAY-937 抑制了羟基脲诱导的 H2AX 磷酸化（IC50 = 380 nM），证实了其预期的作用机制。此外，BAY-937 还被证明能够以低至亚微摩尔级的 IC50 值抑制多种肿瘤细胞系的增殖。在初步的异种移植研究中，BAY-937 在单药治疗和与顺铂联合治疗中均显示出中等活性。然而，BAY-937 也表现出水溶性低、生物利用度低（大鼠）以及在 hERG 膜片钳实验中活性低等问题。经过广泛的先导化合物优化，我们最终发现了新型口服ATR抑制剂BAY 1895344。体外实验表明，BAY 1895344是一种高效且高选择性的ATR抑制剂（IC50 = 7 nM），能够有效抑制多种人类肿瘤细胞系的增殖（中位IC50 = 78 nM）。细胞机制研究表明，BAY 1895344能够有效抑制羟基脲诱导的H2AX磷酸化（IC50 = 36 nM）。此外，BAY 1895344还表现出显著改善的水溶性和跨物种生物利用度，并且在hERG膜片钳实验中未观察到活性。BAY 1895344在DNA损伤缺陷型肿瘤模型中单药治疗以及与DNA损伤诱导疗法联合治疗均显示出非常可观的疗效。 BAY 1895344 的临床研究计划于 2017 年初启动。[1]

---

DNA 损伤反应 (DDR) 确保真核细胞基因组的完整性。DDR 缺陷可促进肿瘤发生，但同时也可能增加对其他修复途径的依赖性。共济失调毛细血管扩张症和 Rad3 相关 (ATR) 激酶通过激活 DNA 损伤修复的关键信号通路在 DDR 中发挥核心作用。本研究探讨了新型选择性 ATR 激酶抑制剂 BAY 1895344 对肿瘤细胞生长和活力的影响。在多种人类肿瘤细胞系中均观察到其具有显著的抗增殖活性。BAY 1895344 在携带 DNA 损伤修复缺陷的癌症异种移植模型中表现出强大的单药治疗效果。BAY 1895344 与诱导 DNA 损伤的化疗或体外放射治疗 (EBRT) 联合使用显示出协同抗肿瘤活性。 BAY 1895344 与 DNA 损伤修复 (DDR) 抑制剂联合治疗在体外表现出显著的协同抗增殖活性，而使用奥拉帕尼联合抑制 ATR 和 PARP 信号通路在体内也显示出协同抗肿瘤活性。此外，BAY 1895344 与新型非甾体类雄激素受体拮抗剂达罗鲁胺联合治疗，与各自的单药治疗相比，在激素依赖性前列腺癌中显著提高了抗肿瘤疗效，而联合外照射放疗 (EBRT) 则进一步增强了抗肿瘤疗效。因此，ATR 抑制剂 BAY 1895344 可通过提高疗效，为某些 DDR 缺陷型癌症的单药治疗以及与 DNA 损伤诱导或 DNA 修复受损的癌症疗法联合治疗提供新的治疗选择。[2]

C20H21N7O

375.43

411.15743

C, 58.32; H, 5.38; Cl, 8.61; N, 23.80; O, 3.88

1876467-74-1

Elimusertib hydrochloride;Elimusertib-d3

118869362

Yellow solid powder

84.8Ų

1

6

3

28

537

1

YBXRSCXGRPSTMW-CYBMUJFWSA-N

InChI=1S/C20H21N7O/c1-13-12-28-10-9-27(13)18-11-15(17-5-8-23-26(17)2)14-3-6-21-20(19(14)24-18)16-4-7-22-25-16/h3-8,11,13H,9-10,12H2,1-2H3,(H,22,25)/t13-/m1/s1

(3R)-3-methyl-4-[4-(2-methylpyrazol-3-yl)-8-(1H-pyrazol-5-yl)-1,7-naphthyridin-2-yl]morpholine

Elimusertib; HCl; BAY-1895344 HCl; BAY1895344 HCl; BAY 1895344 HCl; 7N13IK9LNH; BAY1895344; (R)-3-methyl-4-(4-(1-methyl-1H-pyrazol-5-yl)-8-(1H-pyrazol-3-yl)-1,7-naphthyridin-2-yl)morpholine;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~5.4 mg/mL (~14.38 mM)

配方 1 中的溶解度: 1.09 mg/mL (2.90 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.9mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 0.89 mg/mL (2.37 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.9 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: 4 mg/mL (10.65 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。