Alnodesertib (ART-0380)

ATR kinase; Chk1
ART0380 is a potent and selective inhibitor of the ataxia telangiectasia and Rad3-related protein (ATR) kinase. It targets the ATR-ATRIP complex with an IC50 of 51.7 ± 14.2 nmol/L in biochemical assays. It demonstrates high selectivity over other PIKK family members, such as mTOR, with an EC50 for pRPS6 inhibition >3 μmol/L in cellular assays [1].

在HT-29结直肠腺癌细胞中，ART0380能强效抑制ATR依赖的Chk1在丝氨酸345位点的磷酸化（pChk1ser345），平均EC50为0.015 μmol/L。相反，它几乎不影响mTOR活性（通过检测核糖体蛋白S6的磷酸化pRPS6衡量），其EC50 >3 μmol/L，表明具有良好的细胞选择性 [1]。
在一组细胞系中，ART0380对ATM功能缺失的NCI-H23（肺癌）和Granta-519（套细胞淋巴瘤）细胞系，以及对复制应激较高的LoVo（结直肠癌）细胞系表现出强烈的生长抑制作用，而对正常结肠成纤维细胞CCD-18Co作用微弱 [1]。
使用ATM敲除的同源细胞系（NCI-H460, Calu-6, PC-3），ART0380对敲除细胞显示出更高的敏感性，与亲本ATM野生型细胞相比，生长抑制更强。处理后48小时，ATM敲除细胞中凋亡增加（通过Annexin V/PI染色证实）[1]。
细胞周期分析显示，连续（48小时）ART0380处理导致ATM功能正常细胞积累在G1期，但在ATM缺失细胞中此效应减弱。而间歇给药方案（给药24小时/停药24小时）则在ATM敲除细胞中特异性地引起S期阻滞、G2期积累以及γH2AX foci（DNA损伤标志物）增加，表明DNA复制受损和DNA损伤增强 [1]。
Alnodesertib是一种具有口服生物利用度的共济失调毛细血管扩张症和Rad3相关激酶（ATR）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。

口服给药后，Alnodesertib 能够选择性靶向并抑制 ATR 活性，阻断下游丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶检查点激酶 1 (CHK1) 的磷酸化。这一作用可阻止 ATR 介导的信号传导，从而抑制 DNA 损伤检查点的激活、破坏 DNA 损伤修复过程，并诱导肿瘤细胞凋亡。ATR 作为一种在多种癌细胞类型中上调表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在 DNA 修复、细胞周期进程和细胞存活中起着关键作用。该激酶通常在 DNA 复制相关应激引发的 DNA 损伤时被激活。 ART0380 在一系列具有不同程度 ATM 功能缺失 (LOF) 的临床前癌症模型中表现出强效且选择性的抗肿瘤活性。一项泛癌症分析在 8,587 例患者肿瘤中鉴定出 10,609 种 ATM 变异。研究发现，在癌症谱系之间存在以下特异性差异：有害变异（Tier 1）与未知/良性变异（Tier 2）的流行率、杂合性缺失的选择压力，以及有害变异与 ATM 蛋白缺失 (LOP) 的一致性。一种综合考虑变异分类、与 ATM LOP 的关系以及组织特异性外显率的新型 ATM LOF 生物标志物方法，显著富集了对铂类化疗或 ATR 抑制剂治疗获益的患者人群[1]。

---

在携带LoVo（结直肠癌）异种移植瘤的CD-1裸鼠中，口服ART0380（10, 30, 50, 100 mg/kg，每日一次）在整个研究期间产生剂量依赖性的肿瘤生长抑制。30 mg/kg剂量的效果与临床基准药物AZD6738相当；50 mg/kg时肿瘤生长抑制率达到84%；100 mg/kg时达到96%（P < 0.0001）。治疗耐受性良好 [1]。
在NSG小鼠的Granta-519（套细胞淋巴瘤，ATM功能缺失）异种移植模型中，ART0380 30或50 mg/kg每日一次治疗显著抑制了肿瘤生长 [1]。
在一个携带有害ATM变异（p.E473）且ATM蛋白几乎完全缺失的肺腺癌患者来源异种移植模型中，ART0380 100 mg/kg每日一次或采用间歇方案（如给药24小时/停药24小时）诱导了肿瘤消退 [1]。
在一组具有不同ATM变异状态和蛋白表达水平的结直肠癌PDX模型中，ART0380治疗显示出异质性的抗肿瘤疗效：在ATM蛋白缺失的模型（PDX1, PDX2）以及携带错义/移码变异但部分保留蛋白表达的模型（PDX3, PDX4）中观察到显著的肿瘤生长抑制；而在ATM野生型且蛋白保留的PDX5中效果最弱 [1]。

使用基于Caliper的激酶活性测定法评估ART0380对ATR-ATRIP复合物的抑制活性。全长FLAG-TEV-ATR和His6-ATRIP在HEK293细胞中共表达。裂解细胞后，通过抗FLAG树脂亲和层析纯化复合物。酶促反应在1×激酶反应缓冲液（含HEPES pH 8, Brij-35, MnCl2和DTT）中进行，以FAM标记的RAD17肽为底物，并加入ATP。将测试化合物（60 nL溶于100% DMSO）与酶预孵育30分钟（28°C），然后通过加入肽/ATP混合物启动反应。孵育后终止反应，利用Caliper读数器分离并定量磷酸化与非磷酸化肽段。根据剂量反应曲线计算IC50值 [1]。

通过pChk1 (Ser345) AlphaScreen实验检测ART0380对细胞中ATR活性的抑制。HT-29细胞接种于384孔板，用化合物处理90分钟，然后加入4-硝基喹啉-N-氧化物（终浓度12 μmol/L）诱导DNA损伤，再孵育120分钟。裂解细胞后，将裂解液转移至384孔ProxiPlate。依次加入受体微珠（Protein A）和生物素化的抗pChk1抗体进行孵育，然后加入供体微珠（链霉亲和素）。测量AlphaScreen信号，计算EC50值 [1]。
通过In-Cell Western实验评估对mTOR的选择性，检测pRPS6 (Ser235/236)。HT-29细胞接种于384孔板，用化合物处理2小时，然后固定、透化，与p-RPS6抗体孵育，随后加入IRDye 800CW二抗和CellTag 700用于归一化。使用Odison成像仪定量信号，计算EC50值 [1]。
使用CellTiter-Glo实验评估抗增殖效应。将细胞（NCI-H23, Granta-519, LoVo, CCD-18Co, NCI-H460亲本/ATM敲除, Calu-6亲本/ATM敲除, PC-3亲本/ATM敲除）接种于384孔（或96孔）板。24小时后，用系列稀释的ART0380处理，并孵育7-10天。通过加入CellTiter-Glo试剂并读取发光值来检测细胞活力。根据剂量反应曲线计算EC50值 [1]。
使用Annexin V/碘化丙啶染色分析细胞凋亡。将NCI-H460亲本和ATM敲除细胞接种于6孔板，用ART0380处理24或48小时，然后用Annexin V凋亡试剂盒处理，并通过流式细胞术分析 [1]。
通过免疫荧光和基于图像的定量细胞术评估细胞周期分布和γH2AX foci。细胞接种于96孔板，用ART0380处理（连续48小时或给药24小时/停药24小时），最后30分钟加入EdU标记，然后固定、透化，并用抗γH2AX和抗Geminin抗体染色，随后加二抗和DAPI。使用Operetta CLS成像系统采集图像，并使用Harmony软件分析，以量化细胞周期各时相细胞比例及geminin阳性细胞中的γH2AX foci数量 [1]。

Purpose: Mutations in the ATM gene are common in multiple cancers, but clinical studies of therapies targeting ATM-aberrant cancers have yielded mixed results. Refinement of ATM loss of function (LOF) as a predictive biomarker of response is urgently needed. Experimental design: We present the first disclosure and preclinical development of a novel, selective ATR inhibitor, ART0380, and test its antitumor activity in multiple preclinical cancer models. To refine ATM LOF as a predictive biomarker, we performed a comprehensive pan-cancer analysis of ATM variants in patient tumors and then assessed the ATM variant-to-protein relationship. Finally, we assessed a novel ATM LOF biomarker approach in retrospective clinical data sets of patients treated with platinum-based chemotherapy or ATR inhibition.

---

For LoVo xenograft studies, female CD-1 nude mice (6–12 weeks old) are subcutaneously injected with 1×10⁶ LoVo cells suspended in PBS/Matrigel (1:1). When tumors reach 150–250 mm³, mice are randomized into groups (vehicle, or ART0380 at 10, 30, 50, 100 mg/kg) and treated orally once daily (QD) for the study duration. Tumor volume is measured twice weekly with calipers, and body weight is monitored for tolerability. Tumor growth inhibition (TGI) is calculated as the percent difference between final median tumor volumes of treated and control groups [1].
For Granta-519 xenografts, female NSG mice are inoculated subcutaneously with 1×10⁶ Granta-519 cells in PBS/Matrigel (1:1). When tumors reach 150–250 mm³, mice are randomized to receive vehicle or ART0380 (30 or 50 mg/kg, PO, QD). Tumor growth is monitored as above [1].
For colorectal cancer PDX studies, tumor fragments from patient-derived xenografts (established under IRB-approved protocol) are transplanted subcutaneously into NSG mice. When tumors reach 150–250 mm³, mice are randomized and treated with ART0380 (dosing regimen not specified, but efficacy data shown in Fig. 2D). Tumor response is assessed by TGI [1].
For lung adenocarcinoma PDX (harboring ATM p.E473), mice are treated with ART0380 at 100 mg/kg PO QD or on an intermittent schedule (e.g., 24 h on/24 h off). Tumor regression is evaluated [1].

Absorption: Alnodesertib is rapidly absorbed following oral administration .
Elimination: After reaching peak concentration, plasma levels show an immediate decline to a low level, succeeded by a longer mean elimination half-life of 8.3 hours.
Linearity: The exposure of Alnodesertib is dose-proportional with increasing doses. For the dose range of 100 mg to 1200 mg, both the maximum plasma concentration (Cmax) and the area under the curve from 0 to 24 hours at steady state (AUC0-24ss) increase in proportion to the dose.
Dosing Regimen Compatibility: The pharmacokinetic profile of Alnodesertib is conducive to both intermittent (e.g., 3 days on, 4 days off) and continuous daily (QD) dosing schedules . The recommended Phase II doses established from pharmacokinetic and pharmacodynamic data are 600 mg for the intermittent schedule and 200 mg for the daily schedule.
Route of Administration: It is an orally administered (bioavailable) small molecule .

[1]. Ataxia-Telangiectasia Mutated (ATM) loss of function displays variant and tissue-specific differences across tumor types. Clin Cancer Res. 2024 May 15;30(10):2121-2139.

ART0380 (also referred to as ART-0380) is a novel, potent, selective, and orally bioavailable inhibitor of ATR kinase, discovered through lead optimization and selected for clinical development based on its excellent physicochemical and pharmacokinetic properties and compelling preclinical efficacy. It is currently being evaluated in a phase I clinical trial (NCT04657068) in patients with advanced or metastatic solid tumors. The compound binds competitively to the ATP pocket of ATR, engaging the hinge region via the morpholine oxygen and filling the ribose pocket with the sulfoximine group. Preclinical studies demonstrate that ART0380 exerts synthetic lethality in cancer cells with ATM loss-of-function, and its antitumor activity is influenced by ATM variant type, tissue lineage, and protein expression status. The work highlights the importance of refining ATM LOF as a predictive biomarker for patient selection in ATR inhibitor therapy [1].
These data help to better define ATM LOF across tumor types in order to optimize patient selection and improve molecularly targeted therapeutic approaches for patients with ATM LOF cancers.

C18H24N6O2S

388.49

388.1681

C, 55.65; H, 6.23; N, 21.63; O, 8.24; S, 8.25

2267316-76-5

2267316-75-4 [(R,R)-ART0380]

145766632

White to off-white solid at room temperature

1.9

115 Ų

1

8

4

27

635

2

C[C@@H]1COCCN1C2=NC(=NC(=C2)N=[S@](=O)(C)C3CC3)C4=CC(=NC=C4)N

JHPDHYAMSPMBIF-MUDIAHQHSA-N

InChI=1S/C18H24N6O2S/c1-12-11-26-8-7-24(12)17-10-16(23-27(2,25)14-3-4-14)21-18(22-17)13-5-6-20-15(19)9-13/h5-6,9-10,12,14H,3-4,7-8,11H2,1-2H3,(H2,19,20)/t12-,27+/m1/s1

4-[4-[(cyclopropyl-methyl-oxo-lambda6-sulfanylidene)amino]-6-[(3R)-3-methylmorpholin-4-yl]pyrimidin-2-yl]pyridin-2-amine

ART0380; Alnodesertib; ART-0380; alnodesertib [INN]; W7X77IH95R;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。