Rat Brain PKC (IC50 = 158 nM)
PKC-α (IC50 = 53 nM)
PKC-βI (IC50 = 195 nM)
PKC-βII (IC50 = 163 nM)
PKC-γ (IC50 = 213 nM)
PKC-ε (IC50 = 175 nM)
Bisindolylmaleimide VIII acetate targets protein kinase C (PKC), a family of serine/threonine kinases involved in various cellular processes including cell growth, differentiation, and apoptosis. It acts as a selective PKC inhibitor with an IC50 of 158 nM for rat brain PKC. The compound binds to the ATP-binding site of PKC, thereby inhibiting its kinase activity. It is considered a selective inhibitor compared to other kinase inhibitors.

双吲哚基马来酰亚胺VIII (Bis VIII) 此前已被证实可通过一种不依赖于蛋白激酶C的机制增强Fas介导的细胞凋亡。在本研究中，我们使用激动型抗人DR5单克隆抗体TRA-8，检测了Bis VIII对DR5 (TRAIL-R2)诱导的细胞凋亡的影响。结果表明，Bis VIII能够在体外和体内增强TRA-8的促凋亡活性。TRA-8与Bis VIII联用可协同且持续地激活c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶，该过程由MAPK激酶4介导，并依赖于caspase-8。线粒体途径参与了Bis VIII和TRA-8协同诱导细胞凋亡的过程。单独使用Bis VIII可诱导线粒体膜电位丧失，且不依赖于caspase，也不会释放细胞色素c。然而，在Bis VIII存在的情况下，TRA-8可诱导更显著的线粒体膜电位丧失和细胞色素c释放。这些结果表明，JNK/p38的增强和持续激活以及线粒体膜电位的降低在Bis VIII协同诱导死亡受体介导的细胞凋亡中起着关键作用。Bis VIII增强DR5介导的细胞凋亡信号转导的独特能力揭示了该化合物与抗DR5抗体联合用于癌症治疗的潜在应用价值。[2] 在时间依赖性和TRA-8剂量依赖性条件下，双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯（Ro 31-7549乙酸酯；5 μM；8、12小时）显著加速TRA-8诱导的细胞死亡[2]与TRA-8同时处理后，在4小时内procaspase-8显著降低，并在6小时内完全消失（使用双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯，5 μM；6小时）[2]。体外实验表明，双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯对PKC具有强效抑制作用，对大鼠脑PKC的IC50值为158 nM。它对PKC的抑制作用优于其他激酶。该化合物作用于PKC的ATP结合位点，竞争性抑制ATP的结合。它广泛用于细胞研究中，以探索PKC依赖性信号通路，包括细胞增殖、凋亡和分化等。乙酸盐形式用于提高溶解度。

当双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯（Ro 31-7549乙酸酯；100 μg；腹腔注射；隔日一次，共三次）与TRA-8联合使用时，肿瘤几乎完全消退。单独使用双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯治疗无法显著抑制肿瘤生长[2]。
由于TRA-8在体内对1321N1细胞具有杀瘤活性，我们进一步研究了双吲哚基马来酰亚胺VIII/Bis VIII与TRA-8联合给药对肿瘤生长的体内影响。与对照组小鼠相比，单独使用Bis VIII治疗并未诱导显著的肿瘤消退（图1D）。虽然单独使用TRA-8显著抑制了肿瘤生长，但始终未能实现完全的肿瘤消退。然而，TRA-8与Bis VIII联合治疗几乎完全抑制了肿瘤生长。这些结果表明，与对Fas诱导的细胞死亡的作用类似，Bis VIII在体外和体内均对DR5介导的细胞死亡具有协同作用[2]。
在体内，Bisindolylmaleimide VIII乙酸酯已被用于研究PKC在各种生理和病理过程中的作用。PKC抑制可以影响免疫反应、神经元信号传导和肿瘤生长。该化合物的体内作用取决于不同组织中表达的特定PKC亚型。体内研究通常评估PKC抑制对包括炎症、细胞增殖和神经功能在内的各种终点的影响。

PKC活性测定[1]
测定混合物包含0.2 mg/ml肽-y、10 M MgCl2、0.6 mM CaCl2、10 1 M [γ-32P]ATP、1.25 mg/ml磷脂酰丝氨酸和1.25 ng/ml佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯，溶于20 mM HEPES（pH 7.5）、2 mM EDTA、1 mM二硫苏糖醇和0.02% (w/v) Triton X-100中。肽-y是一种合成肽，GPRPLFCRKGSLRQKW，其结构与PKC-y假底物位点相似，不同之处在于丝氨酸残基取代了假底物丙氨酸，从而使该肽从抑制剂转变为底物。实验开始时加入 2.5 m 单位的酶，在 30 °C 下孵育 10 分钟，然后点样至 P81 滤纸上终止反应，并用 75 mM 磷酸溶液充分洗涤。之后用乙醇洗涤滤纸，干燥，并通过液体闪烁计数法测定放射性 [1]。蛋白激酶 C (PKC) 同工酶家族被认为介导多种不同细胞类型中的广泛信号转导通路。一系列双吲哚基马来酰亚胺类化合物，例如双吲哚基马来酰亚胺 VIII，已被评估为传统 PKC 家族成员（PKC-α、-β、-γ）以及新型 Ca²⁺ 非依赖性 PKC 家族代表成员 PKC-ε 的抑制剂。与吲哚咔唑类化合物星形孢菌素相比，所有研究的双吲哚基马来酰亚胺类化合物对 PKC-α 的选择性均略高于其他同工酶。此外，具有构象受限侧链的双吲哚基马来酰亚胺类化合物对 PKC-ε 的抑制活性较低。其中最显著的是 Ro 32-0432，其对 PKC-α 的选择性是 PKC-ε 的 10 倍，对 PKC-β I 的选择性是 PKC-ε 的 4 倍。[1]
双吲哚基马来酰亚胺 VIII 乙酸酯的非细胞酶/受体结合试验方案包括测定 PKC 抑制率。PKC 活性通过纯化的 PKC 酶和肽底物进行激酶活性测定来评估。IC50 值通过测定化合物在不同浓度下对激酶活性的抑制率来确定。进行针对其他激酶的选择性测定以确认其特异性。结合研究可采用表面等离子体共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC）进行。

细胞凋亡分析[2]
细胞类型： 1321N1 细胞
测试浓度： 5 μM
孵育时间： 8、12 小时
实验结果： TRA-8 诱导的细胞死亡以时间和 TRA-8 剂量依赖的方式显著增加。

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蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： 1321N1 细胞
测试浓度： 5 μM
孵育时间： 6 小时
实验结果： procaspase-8 在 4 小时显著减少，并在 6 小时完全消失。

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细胞活力检测[2]
进行细胞活力检测时，将细胞（1–2 × 10³ 个细胞/孔）接种于 96 孔板中，每孔 50 μl。在加入刺激物前 1 小时加入 caspase 抑制剂。在指定时间孵育细胞后，使用 ATPLite 试剂盒，按照制造商的说明测定细胞活力。对于台盼蓝染色排除法，移除培养基，用含10 mM EDTA的磷酸盐缓冲液在室温下处理2分钟，使贴壁细胞脱落。将培养基和贴壁细胞一同置于离心管中，离心收集细胞。取一定量的细胞悬液与0.4%台盼蓝按1:1的比例混合。使用血细胞计数器对活细胞和死细胞进行定量。

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Western Blot分析[2]
经所需处理后，用磷酸盐缓冲液洗涤细胞（1–3 × 10⁶），并在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）样品缓冲液（100–120 μl）中裂解细胞，立即煮沸4分钟。为了测定线粒体释放的细胞色素c，按照所述方法制备胞质和线粒体组分。每个样品均进行 7.5%、10% 或 12.5% SDS-PAGE 电泳，分离后的蛋白质随后电转印至聚偏二氟乙烯 (PVDF) 膜上。室温下，用 5% 脱脂奶粉（溶于 TBS-T 缓冲液，即 20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、8 g/L NaCl 和 0.1% Tween 20）封闭 PVDF 膜 1-2 小时。之后，将 PVDF 膜与含有 5% 脱脂奶粉或 5% 牛血清白蛋白 (BSA) 的 TBS-T 缓冲液中的指定一抗于 4℃ 孵育过夜。用 TBS-T 缓冲液洗涤 PVDF 膜 3 次后，室温下与辣根过氧化物酶标记的二抗孵育 1.5-2 小时。用 TBS-T 缓冲液洗涤 4 次后，按照制造商的说明，使用 ECL Plus Western blotting 检测系统进行显色。使用 Quantify One 程序通过密度分析法对蛋白质进行定量。分别使用 SAPK/JNK 和 p38 MAPK 检测试剂盒测定细胞提取物中 JNK 和 p38 的激酶活性。

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半胱天冬酶活性测定 [2]
经过所需处理后，收集细胞 (2.5 × 10⁶) 并重悬于 100 μl 裂解缓冲液（10 mM HEPES，pH 7.4，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM 二硫苏糖醇和 0.2% Nonidet P-40）中。将细胞置于冰上裂解 20 分钟，然后剧烈混匀。在 4 °C 下以 14,000 rpm 离心 15 分钟后，使用 Bio-Rad 蛋白质测定试剂盒测定上清液中的蛋白质浓度。为了检测 caspase-3 的激活，将 20 μg 的每种细胞提取物在 37 °C 下与含有 200 μmAc-DEVD-对硝基苯胺底物的检测缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4，100 mM NaCl，10 mM 二硫苏糖醇，1 mM EDTA，0.1% CHAPS 和 10% 蔗糖）孵育。使用酶标仪在 405 nm 处测量 Caspase-3 介导的 Ac-DEVD-p-硝基苯胺裂解为 p-硝基苯胺的量。

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DNA 片段化和核染色分析 [2]
对细胞 (1 × 106) 进行所需处理后，如上所述收集贴壁细胞和脱落细胞，用磷酸盐缓冲液洗涤一次，并在含有 10 mM Tris-HCl (pH 7.4)、10 mM EDTA 和 0.5% Triton X-100 的 100 μl TE-T 缓冲液中裂解。将细胞裂解液在 4 °C 下以 14,000 rpm 离心 5 分钟，取上清液，加入核糖核酸酶 A (0.2 mg/ml) 于 37 °C 消化 1 小时，再加入蛋白酶 K (0.2 mg/ml) 于 37 °C 孵育 1 小时。将样品置于 50% 异丙醇和 0.5 M NaCl 溶液中，于 -20 °C 过夜处理，然后以 14,000 rpm 离心 15 分钟沉淀 DNA。将 DNA 重悬于 30 μl TE 缓冲液中，并在含有 0.2 μg/ml 溴化乙锭的 2% 琼脂糖凝胶上进行电泳分析。为了对凋亡细胞进行荧光显微镜分析，在培养基中加入Hoechst 33342（300 ng/ml），室温孵育20分钟后进行显微镜观察。

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线粒体膜电位测定[2]
使用JC-1（一种可选择性进入线粒体的亲脂性阳离子）评估线粒体膜电位。将JC-1溶解于二甲基亚砜中，配制成1 mg/ml的溶液。然后将其进一步稀释至20 μg/ml，稀释液为含5%胎牛血清和0.1%叠氮化钠的荧光激活细胞分选缓冲液（FACS），并用0.45 μm滤膜过滤。细胞（2 × 10⁵）经所需处理后，按上述方法收集贴壁细胞和脱落细胞，并重悬于 125 μl 荧光激活细胞分选缓冲液中。将细胞悬液与 250 μl 过滤后的 JC-1 工作液在室温下孵育 20 分钟。使用流式细胞仪分析红色和绿色荧光发射。每个样本至少采集 10,000 个细胞，并使用 Winmdi 软件进行分析。线粒体膜电位的降低通过红色与绿色荧光强度比值的降低来确定。
双吲哚基马来酰亚胺 VIII 乙酸酯的细胞检测方案包括用该化合物处理细胞。将细胞与不同浓度的 BIM VIII 孵育一定时间。通过蛋白质印迹法检测 PKC 底物的磷酸化水平来评估 PKC 活性。采用适当的检测方法（例如，MTT法检测细胞活力，Annexin V法检测细胞凋亡）评估细胞增殖、凋亡和分化等细胞效应。该化合物用于研究蛋白激酶C (PKC) 依赖性信号通路。

动物/疾病模型： 6-8周龄雌性NOD/SCID（重症联合免疫缺陷）小鼠[2]。
剂量： 100 μg
给药途径： 腹腔注射；隔日一次，共三次
实验结果： 与TRA-8联合使用时，肿瘤几乎完全消退。

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体内肿瘤杀伤活性分析[2]
将6-8周龄雌性NOD/SCID小鼠皮下接种1321N1细胞（1 × 10⁷）。接种7天后，每隔一天腹腔注射100 μg TRA-8和/或100 μg双吲哚马来酰亚胺VIII/Bis VIII，共三次。治疗七天后，通过肿瘤重量测定1321N1细胞的生长情况。
双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯的体内动物实验方案包括向啮齿动物给药。给药途径包括腹腔注射、静脉注射或口服。实验终点取决于所研究的具体疾病模型，可能包括测量组织中蛋白激酶C (PKC) 的活性、评估炎症标志物、评估肿瘤生长或进行神经功能测试。收集组织样本进行生化分析。

双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯的药代动力学性质尚未得到充分表征。作为一种小分子（分子量458.51 g/mol），预计其具有良好的生物利用度。乙酸酯盐可提高其水溶性。需要进一步的药代动力学研究来全面表征其吸收、分布、代谢和排泄情况，包括半衰期（t½）、最大浓度（Cmax）和清除率（CL）。

比吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯的毒性尚未得到广泛报道。作为一种蛋白激酶C (PKC) 抑制剂，它可能对多种生理过程产生影响。标准的毒理学评估包括啮齿动物急性及亚慢性毒性研究、遗传毒性试验和心血管安全性评估。该化合物仅供研究使用，不得用于人类治疗。

[1]. Isoenzyme specificity of bisindolylmaleimides, selective inhibitors of protein kinase C. Biochem J. 1993 Sep 1;294 ( Pt 2):335-7.

[2]. Bisindolylmaleimide VIII enhances DR5-mediated apoptosis through the MKK4/JNK/p38 kinase and the mitochondrial pathways. J Biol Chem. 2002 Aug 9;277(32):29294-303.

蛋白激酶C (PKC) 同工酶家族被认为介导多种细胞类型中的广泛信号转导通路。一系列双吲哚基马来酰亚胺类化合物已被评估为传统PKC家族成员（PKC-α、-β、-γ）以及新型钙非依赖性PKC家族成员PKC-ε的抑制剂。与吲哚咔唑类化合物星酮不同，所有研究的双吲哚基马来酰亚胺类化合物均对PKC-α表现出轻微的选择性，而对其他同工酶则无显著选择性。此外，具有构象受限侧链的双吲哚基马来酰亚胺类化合物作为PKC-ε抑制剂的活性较低。最值得注意的是，化合物 Ro 32-0432 对 PKC-α 的选择性是其他化合物的 10 倍，对 PKC-β I 的选择性是其他化合物的 4 倍。[1]此前已有研究表明，双吲哚基马来酰亚胺 VIII (Bis VIII) 可通过一种不依赖于蛋白激酶 C 的机制增强 Fas 介导的细胞凋亡。在本研究中，我们使用激动剂抗人 DR5 单克隆抗体 TRA-8 来研究 Bis VIII 对 DR5 (TRAIL-R2) 诱导的细胞凋亡的影响。我们的结果表明，Bis VIII 在体外和体内均能增强 TRA-8 的促凋亡活性。 TRA-8 和 Bis VIII 的联合作用可导致 c-Jun N 端激酶 (JNK) 和 p38 丝裂原活化蛋白激酶的协同且持续激活，该过程由 MAPK 激酶 4 介导，并依赖于 caspase-8。线粒体途径参与了 Bis VIII 和 TRA-8 诱导的协同凋亡。Bis VIII 单独作用可导致线粒体膜电位丧失，该过程不依赖于 caspase，且不释放细胞色素 c。然而，在 Bis VIII 存在的情况下，TRA-8 可诱导更显著的线粒体膜电位丧失和细胞色素 c 的释放。这些结果表明，JNK/p38 的增强和持续激活以及线粒体膜电位的降低在 Bis VIII 介导的死亡受体介导的凋亡中起着关键作用。 Bis VIII 增强 DR5 介导的细胞凋亡信号的独特能力揭示了该化合物与抗 DR5 抗体联合用于癌症治疗的潜在应用价值。[2] 总之，我们提出了一种模型，其中 JNK/p38 通路与 caspase-8 之间的正向相互作用导致细胞凋亡信号增强。这一发现表明，任何通过 JNK/p38 通路对癌细胞的应激攻击都可能增强 TRA-8 或 TRAIL 的肿瘤杀伤活性。双吲哚基马来酰亚胺 VIII (Bis VIII) 通过靶向 JNK/p38 和线粒体通路增强 DR5 介导的细胞凋亡的发现，可能有助于设计和筛选更有效的化疗药物，以协同诱导癌细胞死亡受体介导的细胞凋亡。 [2] 大鼠脑组织中已发现 PKC-o、-/?1、-/3w、-y、-8、-E 和 -C，但每种同工酶的相对丰度尚不清楚。双吲哚基马来酰亚胺对 PKC-& 以及更值得注意的是，对非典型 PKC 家族成员 PKC-C 的影响仍有待研究。[1] 此外，大鼠脑组织中可能存在其他未鉴定的 PKC 同工酶。这些额外同工酶的存在或许可以解释为什么与大鼠脑 PKC 的 IC50 结果相比，针对单一同工酶获得的 IC50 结果并非始终恒定。然而，应避免从这些数据中得出过多结论，因为这些差异可能主要归因于测量的标准偏差。这些化合物对检测到的同工酶的选择性较低，且范围有限，因此不适合作为研究特定同工酶在细胞功能中作用的工具。然而，不同同工酶间IC50值的微小差异或许可以解释Ro 31-7549在佛波酯诱导的细胞反应中效力的差异，尽管这些差异可能不足以反映在细胞系统中。如果不同的过程由不同的同工酶介导，那么IC50值预计会有所不同。据报道，吲哚咔唑化合物K252a对常规PKC同工酶（PKC-α、-3、-γ）具有高度选择性，但对PKC4和PKC-ε的选择性较低。尽管K252a对PKC的选择性低于其他丝氨酸/苏氨酸激酶，但与本文所述的双吲哚基马来酰亚胺化合物不同，这一观察结果表明，设计高选择性的双吲哚基马来酰亚胺类蛋白激酶C抑制剂具有潜力，这些抑制剂也将对特定的PKC同工酶表现出高选择性。
双吲哚基马来酰亚胺VIII乙酸酯（CAS：138516-31-1）的分子式为C24H22N4O2·C2H4O2，分子量为458.51 g/mol。它也被称为Ro 31-7549乙酸酯或BIM VIII。它是一种高效且选择性的蛋白激酶C（PKC）抑制剂，对大鼠脑PKC的IC50值为158 nM。该化合物作用于PKC的ATP结合位点。纯度通常≥97%。储存：-20°C，可保存3年。本产品仅供研究使用。

C26H26N4O4

458.50904

458.195

C, 68.11; H, 5.72; N, 12.22; O, 13.96

138516-31-1

125313-65-7

9868770

Brown to reddish brown solid powder

693ºC at 760 mmHg

372.9ºC

4.7E-19mmHg at 25°C

4.169

119.35

3

5

5

34

766

0

CN1C=C(C2=C(C(NC2=O)=O)C3=CN(C4=CC=CC=C34)CCCN)C5=CC=CC=C51.CC(O)=O

VEOXVBTXROWDAH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H22N4O2.C2H4O2/c1-27-13-17(15-7-2-4-9-19(15)27)21-22(24(30)26-23(21)29)18-14-28(12-6-11-25)20-10-5-3-8-16(18)20;1-2(3)4/h2-5,7-10,13-14H,6,11-12,25H2,1H3,(H,26,29,30);1H3,(H,3,4)

3-(1-(3-aminopropyl)-1H-indol-3-yl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione acetate

Ro 31-7549 acetate;bisindolylmaleimide viii; 138516-31-1; Bisindolylmaleimide VIII acetate; Bisindolylmaleimide VIII (acetate); Bisindolylmaleimide VIII acetate salt; 1H-Pyrrole-2,5-dione, 3-[1-(3-aminopropyl)-1H-indol-3-yl]-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-, acetate (1:1); 3-(1-(3-Aminopropyl)-1H-indol-3-yl)-4-(1-methyl-1H-indol-3-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione acetate; Bisindolylmaleimide VIII Acetic Acid Salt; acetic acid;3-[1-(3-aminopropyl)indol-3-yl]-4-(1-methylindol-3-yl)pyrrole-2,5-dione; Ro-31-7549; 138516-31-1; Ro 31-7549; Bis VIII

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~545.24 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: Formulation 1: ≥ 2.1 mg/mL (4.5 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + + 45% Saline
例如，要配制1 mL工作液，可取100 μL 21 mg/mL DMSO储备液，加入tO+400 μL PEG300，混匀（澄清液）； 然后向上述溶液中加入50 μL Tween 80，混匀（澄清溶液）； 最后，向上述溶液中加入450 μL生理盐水，混匀（澄清溶液）。
Formulation 2: ≥ 2.1 mg/mL (4.5 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in saline)
例如，若要配制1 mL工作液，可取100 μL 21 mg/mL DMSO储备液，加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水中，混匀（澄清溶液）。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。