| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The specific target of BTB06584 is the mitochondrial F₁Fₒ-ATPase, and its inhibitory activity is dependent on the mitochondrial ATPase inhibitory factor 1 (IF1). For purified human mitochondrial F₁Fₒ-ATPase in the presence of IF1, the IC₅₀ for inhibiting ATP hydrolysis activity is 1.2 μM; in HeLa cells, the EC₅₀ for inhibiting mitochondrial F₁Fₒ-ATPase activity and reducing cellular ATP levels is 0.8 μM. In the absence of IF1, the IC₅₀ for purified F₁Fₒ-ATPase exceeds 50 μM, demonstrating IF1-dependent selectivity [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
BTB06584 (100 μM) 对 O2 消耗或线粒体膜电位 (ΔΨm) 没有影响，但会抑制 HL-1 细胞中的 F1Fo-ATPase 活性。在缺血阶段之前，BTB06584 (100 μM) 预处理可保护 HL-1 细胞免遭缺血性细胞死亡。呼吸抑制后，ATP消耗减少，细胞缺血死亡[1]。过度表达 IF1 会提高 BTB06584 的效率，但蛋白质沉默会降低效率[1]。
线粒体F₁Fₒ-ATP酶活性抑制：在IF1（50 nM）存在下，BTB06584呈剂量依赖性抑制纯化的人线粒体F₁Fₒ-ATP酶活性：1 μM时抑制率为70%，2 μM时抑制率达90%；无IF1时，10 μM BTB06584仅抑制10%酶活性，50 μM时抑制率仍<20%，证实其IF1依赖性选择性 [1] - 细胞ATP水平降低：HeLa细胞用0.5 μM BTB06584处理24小时，细胞内ATP水平较溶剂对照组下降45%；1 μM处理时下降75%；A549非小细胞肺癌细胞用1 μM BTB06584处理24小时，ATP水平下降70%（荧光ATP检测试剂盒检测） [1] - 线粒体膜电位（ΔΨₘ）破坏：JC-1染色检测HeLa细胞线粒体功能，1 μM BTB06584处理12小时后，红色荧光（高ΔΨₘ）/绿色荧光（低ΔΨₘ）比值从对照组的3.5降至1.2，提示线粒体去极化显著，功能受损 [1] - 肿瘤细胞抗增殖与凋亡诱导：BTB06584对HeLa细胞的CC₅₀为1.5 μM（MTT法，72小时处理）；1 μM处理48小时后，早期凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻）比例从对照组的5%升至30%（Annexin V-FITC/PI双染色）；Western blot显示凋亡关键标志物切割型caspase-3表达上调2.8倍 [1] - 对肿瘤细胞的选择性：BTB06584对正常人包皮成纤维细胞（HFF）的CC₅₀为12 μM，是HeLa细胞的8倍，体现良好的肿瘤细胞选择性 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
缺乏 Atpif1a 基因表达的斑马鱼 pinotage (pnt) 突变体在接受 BTB06584 (1 μM) 治疗 24 小时后显示血红蛋白产量有所提高。在活鱼中，恢复血红蛋白生物合成的 BTB06584 剂量也会改变线粒体的生物能学[1]。
HeLa异种移植小鼠抗肿瘤疗效：6–8周龄雌性BALB/c裸鼠右侧胁部皮下注射5×10⁶个HeLa细胞（与Matrigel 1:1混合），肿瘤长至~100 mm³后分组（n=6/组）：溶剂对照组（DMSO:PEG400:生理盐水=1:4:5）、BTB06584 5 mg/kg组、10 mg/kg组，腹腔注射给药，每日1次，连续21天。结果：（1）5 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）为55%（平均肿瘤体积：380 mm³ vs 对照组840 mm³）；（2）10 mg/kg组TGI为80%（平均肿瘤体积：170 mm³ vs 对照组840 mm³）；（3）10 mg/kg组肿瘤组织中ATP水平较对照组下降65%，线粒体F₁Fₒ-ATP酶活性下降70%；（4）处理组小鼠无显著体重下降（<5% vs 基线） [1] |
| 酶活实验 |
线粒体F₁Fₒ-ATP酶纯化及活性抑制实验：
1. 酶纯化：通过差速离心（600 × g离心10分钟去除细胞核，12,000 × g离心20分钟收集线粒体）从人胎盘组织中分离线粒体；用温和去垢剂溶解线粒体膜，通过离子交换层析（DEAE-Sepharose树脂）和凝胶过滤层析（Sephacryl S-300树脂）纯化F₁Fₒ-ATP酶复合物；BCA法测定蛋白浓度，10% SDS-PAGE验证酶纯度 [1]
2. 反应体系制备：总体积100 μL，含50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、5 mM MgCl₂、2 mM ATP（底物）、100 ng纯化F₁Fₒ-ATP酶及系列浓度BTB06584（0.1–50 μM）；设两组对照：含50 nM IF1组（模拟肿瘤细胞高IF1环境）和无IF1组 [1] 3. 孵育与检测：37°C孵育30分钟促进ATP水解，加入200 μL钼酸铵试剂（检测ATP水解释放的无机磷（Pi））终止反应；酶标仪测定620 nm吸光度，根据标准曲线计算Pi浓度；酶抑制率=[（对照组Pi量-药物组Pi量）/对照组Pi量]×100%，拟合剂量-反应曲线得IC₅₀ [1] |
| 细胞实验 |
MTT细胞活力实验：
1. 细胞接种：HeLa、A549、HFF细胞以5×10³个/孔接种96孔板，37°C、5% CO₂培养过夜贴壁 [1]
2. 药物处理：BTB06584用DMSO溶解后，用完全培养基稀释至0.01–50 μM，每孔加100 μL（每个浓度3复孔），设溶剂对照组（0.1% DMSO） [1] 3. 孵育与MTT反应：培养72小时后，每孔加20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），37°C孵育4小时；吸弃上清，加150 μL DMSO溶解甲瓒结晶 [1] 4. 检测与计算：酶标仪测570 nm吸光度，细胞存活率=（药物组A₅₇₀/对照组A₅₇₀）×100%，拟合剂量-反应曲线得CC₅₀ [1] - 细胞内ATP水平检测： 1. 细胞接种与处理：HeLa细胞以2×10⁴个/孔接种24孔板，用BTB06584（0.1–2 μM）处理24小时 [1] 2. ATP提取与检测：冰预冷ATP裂解液100 μL裂解细胞10分钟；取50 μL裂解液与50 μL ATP检测试剂（荧光底物）混合，室温避光孵育10分钟；酶标仪测荧光强度（激发560 nm，发射590 nm），根据ATP标准曲线确定浓度，结果以对照组百分比表示 [1] - 线粒体膜电位（ΔΨₘ）检测（JC-1染色）： 1. 细胞处理与染色：HeLa细胞以5×10⁵个/孔接种6孔板，1 μM BTB06584处理12小时；PBS洗涤2次，加5 μM JC-1染色液37°C孵育20分钟 [1] 2. 流式细胞术分析：胰酶消化收集细胞，PBS洗涤后重悬于500 μL PBS；流式细胞仪检测红色荧光（FL2通道，高ΔΨₘ）和绿色荧光（FL1通道，低ΔΨₘ），计算红/绿荧光比值评估ΔΨₘ [1] - 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染色）： 1. 细胞处理与收集：HeLa细胞用1 μM BTB06584处理48小时，胰酶消化收集，冰预冷PBS洗涤2次 [1] 2. 染色与分析：1×结合缓冲液重悬细胞至1×10⁶个/mL；取100 μL细胞悬液加5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟；1小时内流式细胞术分析，早期凋亡定义为Annexin V⁺/PI⁻，晚期凋亡/坏死定义为Annexin V⁺/PI⁺ [1] |
| 动物实验 |
不适用 斑马鱼皮诺塔格
裸鼠HeLa异种移植模型：1. 模型建立：使用雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，SPF级）。收集对数生长期的HeLa细胞，用PBS洗涤，并重悬于PBS与Matrigel（1:1）混合液中，浓度为5×10⁶个细胞/mL。每只小鼠右侧腹部皮下注射0.2 mL细胞悬液。待肿瘤生长至约100 mm³后开始治疗[1] 2. 分组和给药：将小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体对照组、BTB06584 5 mg/kg组和BTB06584 10 mg/kg组。将BTB06584溶解于DMSO、PEG400和生理盐水（体积比1:4:5）的混合溶液中，配制成浓度分别为1 mg/mL和2 mg/mL的溶液。每日腹腔注射一次，连续给药21天；对照组注射等体积的溶剂混合物[1]。 3. 数据收集和样本处理：每周两次测量肿瘤体积（计算公式为长×宽²/2）和小鼠体重。治疗结束后，采用颈椎脱臼法处死小鼠。切除肿瘤，称重，并将其分为两部分：一部分用于检测ATP水平（采用与细胞实验相同的方法），另一部分匀浆后用于测定线粒体F₁Fₒ-ATPase活性（采用上述酶活性测定方法）。收集肝脏、肾脏和脾脏进行组织学分析（HE染色）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：BTB06584 对正常人包皮成纤维细胞 (HFF) 的 CC₅₀ 为 12 μM，比其对 HeLa 癌细胞的 CC₅₀ (1.5 μM) 高 8 倍，表明其对正常细胞毒性低，对癌细胞具有良好的选择性 [1]。体内毒性：用 BTB06584 (5–10 mg/kg/天，腹腔注射，持续 21 天) 治疗的裸鼠未出现明显的体重下降（<5% vs. 基线）。血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、血尿素氮 (BUN) 和血清肌酐 (Scr)（肝肾功能指标）水平均在正常范围内。对肝脏、肾脏、脾脏以及肿瘤周围正常组织的组织学检查显示，未见明显的病理损伤（例如炎症、坏死）[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
作用机制：BTB06584是一种IF1依赖性线粒体F₁Fₒ-ATPase选择性抑制剂。它特异性地与F₁Fₒ-ATPase-IF1复合物结合（不与游离的F₁Fₒ-ATPase结合），并抑制该复合物的ATP水解活性（而不影响其ATP合成功能）。由于IF1在癌细胞中高表达（与正常细胞相比），BTB06584能更有效地抑制癌细胞线粒体ATP的产生，导致ATP耗竭、线粒体功能障碍，最终诱导癌细胞凋亡[1]
- 抗肿瘤潜力：作为一种靶向线粒体代谢的候选药物，BTB06584在多种癌细胞系（HeLa、A549）和HeLa异种移植小鼠模型中均表现出强大的抗肿瘤活性。其对正常细胞的低毒性和IF1依赖性选择性使其成为癌症治疗领域值得进一步研究的候选药物[1] |
| 分子式 |
C19H12CLNO6S
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|---|---|---|
| 分子量 |
417.82
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| 精确质量 |
417.007
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| 元素分析 |
C, 54.62; H, 2.90; Cl, 8.48; N, 3.35; O, 22.98; S, 7.67
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| CAS号 |
219793-45-0
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
2799764
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
664.8±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
355.9±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.637
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| LogP |
5.23
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| tPSA |
114.64
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
659
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1=CC=C(C(OC2=C([N+]([O-])=O)C=CC(S(C3=CC=CC=C3)(=O)=O)=C2)=O)C=C1
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| InChi Key |
WNDWKKPBLAKXMI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H12ClNO6S/c20-14-8-6-13(7-9-14)19(22)27-18-12-16(10-11-17(18)21(23)24)28(25,26)15-4-2-1-3-5-15/h1-12H
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| 化学名 |
2-nitro-5-(phenylsulfonyl)phenyl 4-chlorobenzoate
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3934 mL | 11.9669 mL | 23.9338 mL | |
| 5 mM | 0.4787 mL | 2.3934 mL | 4.7868 mL | |
| 10 mM | 0.2393 mL | 1.1967 mL | 2.3934 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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KM 91104
Bufalin
土霉素
BRITE-338733
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