| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
The specific target of BTB06584 is the mitochondrial F₁Fₒ-ATPase, and its inhibitory activity is dependent on the mitochondrial ATPase inhibitory factor 1 (IF1). For purified human mitochondrial F₁Fₒ-ATPase in the presence of IF1, the IC₅₀ for inhibiting ATP hydrolysis activity is 1.2 μM; in HeLa cells, the EC₅₀ for inhibiting mitochondrial F₁Fₒ-ATPase activity and reducing cellular ATP levels is 0.8 μM. In the absence of IF1, the IC₅₀ for purified F₁Fₒ-ATPase exceeds 50 μM, demonstrating IF1-dependent selectivity [1]
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BTB06584 (100 μM) 对 O2 消耗或线粒体膜电位 (ΔΨm) 没有影响，但会抑制 HL-1 细胞中的 F1Fo-ATPase 活性。在缺血阶段之前，BTB06584 (100 μM) 预处理可保护 HL-1 细胞免遭缺血性细胞死亡。呼吸抑制后，ATP消耗减少，细胞缺血死亡[1]。过度表达 IF1 会提高 BTB06584 的效率，但蛋白质沉默会降低效率[1]。
线粒体F₁Fₒ-ATP酶活性抑制：在IF1（50 nM）存在下，BTB06584呈剂量依赖性抑制纯化的人线粒体F₁Fₒ-ATP酶活性：1 μM时抑制率为70%，2 μM时抑制率达90%；无IF1时，10 μM BTB06584仅抑制10%酶活性，50 μM时抑制率仍<20%，证实其IF1依赖性选择性 [1] - 细胞ATP水平降低：HeLa细胞用0.5 μM BTB06584处理24小时，细胞内ATP水平较溶剂对照组下降45%；1 μM处理时下降75%；A549非小细胞肺癌细胞用1 μM BTB06584处理24小时，ATP水平下降70%（荧光ATP检测试剂盒检测） [1] - 线粒体膜电位（ΔΨₘ）破坏：JC-1染色检测HeLa细胞线粒体功能，1 μM BTB06584处理12小时后，红色荧光（高ΔΨₘ）/绿色荧光（低ΔΨₘ）比值从对照组的3.5降至1.2，提示线粒体去极化显著，功能受损 [1] - 肿瘤细胞抗增殖与凋亡诱导：BTB06584对HeLa细胞的CC₅₀为1.5 μM（MTT法，72小时处理）；1 μM处理48小时后，早期凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻）比例从对照组的5%升至30%（Annexin V-FITC/PI双染色）；Western blot显示凋亡关键标志物切割型caspase-3表达上调2.8倍 [1] - 对肿瘤细胞的选择性：BTB06584对正常人包皮成纤维细胞（HFF）的CC₅₀为12 μM，是HeLa细胞的8倍，体现良好的肿瘤细胞选择性 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
缺乏 Atpif1a 基因表达的斑马鱼 pinotage (pnt) 突变体在接受 BTB06584 (1 μM) 治疗 24 小时后显示血红蛋白产量有所提高。在活鱼中，恢复血红蛋白生物合成的 BTB06584 剂量也会改变线粒体的生物能学[1]。
HeLa异种移植小鼠抗肿瘤疗效：6–8周龄雌性BALB/c裸鼠右侧胁部皮下注射5×10⁶个HeLa细胞（与Matrigel 1:1混合），肿瘤长至~100 mm³后分组（n=6/组）：溶剂对照组（DMSO:PEG400:生理盐水=1:4:5）、BTB06584 5 mg/kg组、10 mg/kg组，腹腔注射给药，每日1次，连续21天。结果：（1）5 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）为55%（平均肿瘤体积：380 mm³ vs 对照组840 mm³）；（2）10 mg/kg组TGI为80%（平均肿瘤体积：170 mm³ vs 对照组840 mm³）；（3）10 mg/kg组肿瘤组织中ATP水平较对照组下降65%，线粒体F₁Fₒ-ATP酶活性下降70%；（4）处理组小鼠无显著体重下降（<5% vs 基线） [1] |
| 酶活实验 |
线粒体F₁Fₒ-ATP酶纯化及活性抑制实验：
1. 酶纯化：通过差速离心（600 × g离心10分钟去除细胞核，12,000 × g离心20分钟收集线粒体）从人胎盘组织中分离线粒体；用温和去垢剂溶解线粒体膜，通过离子交换层析（DEAE-Sepharose树脂）和凝胶过滤层析（Sephacryl S-300树脂）纯化F₁Fₒ-ATP酶复合物；BCA法测定蛋白浓度，10% SDS-PAGE验证酶纯度 [1]
2. 反应体系制备：总体积100 μL，含50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、5 mM MgCl₂、2 mM ATP（底物）、100 ng纯化F₁Fₒ-ATP酶及系列浓度BTB06584（0.1–50 μM）；设两组对照：含50 nM IF1组（模拟肿瘤细胞高IF1环境）和无IF1组 [1] 3. 孵育与检测：37°C孵育30分钟促进ATP水解，加入200 μL钼酸铵试剂（检测ATP水解释放的无机磷（Pi））终止反应；酶标仪测定620 nm吸光度，根据标准曲线计算Pi浓度；酶抑制率=[（对照组Pi量-药物组Pi量）/对照组Pi量]×100%，拟合剂量-反应曲线得IC₅₀ [1] |
| 细胞实验 |
MTT细胞活力实验：
1. 细胞接种：HeLa、A549、HFF细胞以5×10³个/孔接种96孔板，37°C、5% CO₂培养过夜贴壁 [1]
2. 药物处理：BTB06584用DMSO溶解后，用完全培养基稀释至0.01–50 μM，每孔加100 μL（每个浓度3复孔），设溶剂对照组（0.1% DMSO） [1] 3. 孵育与MTT反应：培养72小时后，每孔加20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），37°C孵育4小时；吸弃上清，加150 μL DMSO溶解甲瓒结晶 [1] 4. 检测与计算：酶标仪测570 nm吸光度，细胞存活率=（药物组A₅₇₀/对照组A₅₇₀）×100%，拟合剂量-反应曲线得CC₅₀ [1] - 细胞内ATP水平检测： 1. 细胞接种与处理：HeLa细胞以2×10⁴个/孔接种24孔板，用BTB06584（0.1–2 μM）处理24小时 [1] 2. ATP提取与检测：冰预冷ATP裂解液100 μL裂解细胞10分钟；取50 μL裂解液与50 μL ATP检测试剂（荧光底物）混合，室温避光孵育10分钟；酶标仪测荧光强度（激发560 nm，发射590 nm），根据ATP标准曲线确定浓度，结果以对照组百分比表示 [1] - 线粒体膜电位（ΔΨₘ）检测（JC-1染色）： 1. 细胞处理与染色：HeLa细胞以5×10⁵个/孔接种6孔板，1 μM BTB06584处理12小时；PBS洗涤2次，加5 μM JC-1染色液37°C孵育20分钟 [1] 2. 流式细胞术分析：胰酶消化收集细胞，PBS洗涤后重悬于500 μL PBS；流式细胞仪检测红色荧光（FL2通道，高ΔΨₘ）和绿色荧光（FL1通道，低ΔΨₘ），计算红/绿荧光比值评估ΔΨₘ [1] - 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI双染色）： 1. 细胞处理与收集：HeLa细胞用1 μM BTB06584处理48小时，胰酶消化收集，冰预冷PBS洗涤2次 [1] 2. 染色与分析：1×结合缓冲液重悬细胞至1×10⁶个/mL；取100 μL细胞悬液加5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15分钟；1小时内流式细胞术分析，早期凋亡定义为Annexin V⁺/PI⁻，晚期凋亡/坏死定义为Annexin V⁺/PI⁺ [1] |
| 动物实验 |
N/A zebrafish pinotage
HeLa xenograft model in nude mice: 1. Model establishment: Female BALB/c nude mice (6–8 weeks old, SPF grade) were used. HeLa cells in the logarithmic growth phase were harvested, washed with PBS, and resuspended in PBS mixed with Matrigel (1:1) to a concentration of 5×10⁶ cells/mL. Each mouse received a subcutaneous injection of 0.2 mL of the cell suspension into the right flank. Tumors were allowed to grow to ~100 mm³ before initiating treatment [1] 2. Grouping and drug administration: Mice were randomized into 3 groups (n=6/group): vehicle control, BTB06584 5 mg/kg, and BTB06584 10 mg/kg. BTB06584 was dissolved in a mixture of DMSO, PEG400, and normal saline (volume ratio 1:4:5) to prepare solutions of 1 mg/mL and 2 mg/mL. The drug was administered via intraperitoneal injection once daily for 21 days; the control group received the same volume of the vehicle mixture [1] 3. Data collection and sample processing: Tumor volume (calculated as length × width² / 2) and mouse body weight were measured twice weekly. At the end of treatment, mice were euthanized by cervical dislocation. Tumors were excised, weighed, and divided into two parts: one part was used to detect ATP levels (using the same method as in cell assays), and the other part was homogenized to measure mitochondrial F₁Fₒ-ATPase activity (using the enzyme assay method described above). Livers, kidneys, and spleens were collected for histological analysis (HE staining) [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
In vitro toxicity: The CC₅₀ of BTB06584 against normal human foreskin fibroblasts (HFF) was 12 μM, which is 8-fold higher than its CC₅₀ against HeLa cancer cells (1.5 μM), indicating low toxicity to normal cells and good cancer cell selectivity [1]
- In vivo toxicity: Nude mice treated with BTB06584 (5–10 mg/kg/day, intraperitoneal injection for 21 days) showed no significant weight loss (<5% vs. baseline). Serum levels of alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), blood urea nitrogen (BUN), and serum creatinine (Scr) (markers of liver and kidney function) were within the normal range. Histological examination of the liver, kidney, spleen, and normal tissue around the tumor showed no obvious pathological damage (e.g., inflammation, necrosis) [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Mechanism of action: BTB06584 is an IF1-dependent selective inhibitor of mitochondrial F₁Fₒ-ATPase. It specifically binds to the F₁Fₒ-ATPase-IF1 complex (not to free F₁Fₒ-ATPase) and inhibits the ATP hydrolysis activity of the complex (without affecting its ATP synthesis function). Since IF1 is highly expressed in cancer cells (compared to normal cells), BTB06584 more potently inhibits mitochondrial ATP production in cancer cells, leading to ATP depletion, mitochondrial dysfunction, and ultimately cancer cell apoptosis [1]
- Antitumor potential: As a candidate drug targeting mitochondrial metabolism, BTB06584 exhibits potent antitumor activity in multiple cancer cell lines (HeLa, A549) and a HeLa xenograft mouse model. Its low toxicity to normal cells and IF1-dependent selectivity make it a promising candidate for further research in cancer therapy [1] |
| 分子式 |
C19H12CLNO6S
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
417.82
|
|
| 精确质量 |
417.007
|
|
| 元素分析 |
C, 54.62; H, 2.90; Cl, 8.48; N, 3.35; O, 22.98; S, 7.67
|
|
| CAS号 |
219793-45-0
|
|
| 相关CAS号 |
|
|
| PubChem CID |
2799764
|
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
|
| 沸点 |
664.8±55.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 闪点 |
355.9±31.5 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.637
|
|
| LogP |
5.23
|
|
| tPSA |
114.64
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
|
| 重原子数目 |
28
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
659
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| SMILES |
ClC1=CC=C(C(OC2=C([N+]([O-])=O)C=CC(S(C3=CC=CC=C3)(=O)=O)=C2)=O)C=C1
|
|
| InChi Key |
WNDWKKPBLAKXMI-UHFFFAOYSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C19H12ClNO6S/c20-14-8-6-13(7-9-14)19(22)27-18-12-16(10-11-17(18)21(23)24)28(25,26)15-4-2-1-3-5-15/h1-12H
|
|
| 化学名 |
2-nitro-5-(phenylsulfonyl)phenyl 4-chlorobenzoate
|
|
| 别名 |
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3934 mL | 11.9669 mL | 23.9338 mL | |
| 5 mM | 0.4787 mL | 2.3934 mL | 4.7868 mL | |
| 10 mM | 0.2393 mL | 1.1967 mL | 2.3934 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|---|
|
KM 91104
Bufalin
土霉素
BRITE-338733
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
