Rho-pathway selective serum response element-luciferase reporter (IC50 = 1.5 µM)
RhoA/ROCK1 (IC50 = 0.5 μM) [2]
Serum Response Factor (SRF)-mediated transcription (IC50 = 1 μM) [1]
Serum Response Factor (SRF)-dependent gene expression (IC50 = 0.8 μM) [3]
Myocardial fibroblast activation (IC50 = 0.6 μM) [6]

CCG-1423 选择性抑制 Rho 通路信号激活的 SRF 介导的转录，并特异性抑制 LPA 刺激的 DNA 合成。 CCG-1423 还选择性抑制 RhoC 过表达黑色素瘤细胞（A375M2 和 SK-Mel-147）的增殖，并强烈抑制 PC-3 细胞的 Rho 依赖性侵袭。 CCG-1423 与 LY294002 组合可增强小鼠胚胎干细胞通过 BMP7 阳性细胞分化为中间中胚层。在 H9c2 细胞中，CCG-1423 抑制 MRTF 核定位，并完全阻断 STARS 近端报告基因活性。 CCG-1423 作为 Rho/MRTF/SRF 通路抑制剂，还可抑制人结肠肌成纤维细胞中的基质硬度和 TGF-β 诱导的纤维形成。激酶测定：CCG-1423 具有纳摩尔至低微摩尔的效力以及对 Rho 过度表达和侵袭性癌细胞系的选择性，从而抑制 DNA 合成、细胞生长和/或侵袭。 CCG-1423 增强了高度转移性 RhoC 过度表达的 A375M2 黑色素瘤细胞系中的 Caspase-3 激活，而亲本 A375 细胞系中的 Caspase-3 激活程度较小，而柔红霉素则观察到相反的模式。细胞测定：将正常培养基中的细胞（每孔 2,000 个）铺板于涂有层粘连蛋白的 96 孔板中。贴壁后，将培养基更换为含 30 μmol/L LPA（含或不含 300 nM CCG-1423）的无血清培养基（0% FBS）。在第 5 天添加含有或不含 CCG-1423 的新鲜 LPA，以确保整个实验过程中存在 LPA 和化合物。第 8 天，将 WST-1 试剂添加到孔中 1 小时，并使用 Victor 读板器读取 450 nm 处的吸光度。

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用0.1-10 μM浓度的CCG-1423处理，通过阻断SRF介导的转录，显著抑制多种肿瘤细胞系（包括A549、HCT116、MDA-MB-231）的增殖，并诱导G1期细胞周期停滞，且无明显凋亡现象[1]
在0.5 μM浓度下，CCG-1423特异性抑制ROCK1激酶活性，抑制血管平滑肌细胞的迁移和侵袭，降低肌球蛋白轻链（MLC）的磷酸化水平[2]
在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，CCG-1423（0.1-10 μM）呈剂量依赖性抑制SRF依赖的基因表达，抑制细胞增殖和管腔形成，下调血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）的表达[3]
在脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞中，CCG-1423（1-5 μM）通过抑制RhoA/ROCK/SRF信号通路，减少促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）的分泌[4]
CCG-1423（0.6 μM）抑制从小鼠分离的心肌成纤维细胞活化，减少I型胶原和III型胶原的合成，下调α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达[6]

CCG-1423的药理学SRF抑制降低了体内胰岛素抵抗小鼠的核MKL1，改善了葡萄糖摄取和耐受。[6]

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研究了MKL1抑制剂CCG-142330对小鼠IRI的影响。当小鼠在IR手术前3天腹膜注射CCG-1423时，CCG-1423注射导致梗死面积显著减小，但心脏功能没有明显改善（图一）。当小鼠在IR手术前连续2周每天注射CCG-1423时，发现CCG-1423的长期预处理不仅减轻了心肌梗死（图1E），还减轻了心功能的丧失（图1F至1H）。两种CCG方案有效性的差异可以部分解释为，尽管与赋形剂组相比，2周的CCG注射几乎完全阻断了心脏巨噬细胞中MKL1的核积聚，但3天的注射仅略微改变了MKL1的定位（图二）。综上所述，这些数据表明，MKL1功能丧失可能会减轻心肌梗死，并有助于恢复IRI后的心功能丧失。[5]

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在携带HCT116结直肠癌异种移植瘤的裸鼠中，以50 mg/kg剂量腹腔注射CCG-1423，每周5次，持续3周，显著抑制肿瘤生长（肿瘤体积减少约60%），且未导致小鼠明显体重下降[1]
在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠结肠炎模型中，以10 mg/kg剂量口服CCG-1423，每日1次，持续7天，减轻肠黏膜炎症，降低结肠黏膜损伤评分，减少结肠组织中炎症细胞浸润[4]
在横向主动脉缩窄（TAC）诱导的小鼠心肌纤维化模型中，以20 mg/kg剂量腹腔注射CCG-1423，每周3次，持续4周，减少心肌胶原沉积，改善心脏舒张功能，抑制体内心肌成纤维细胞活化[6]

CCG-1423 对 Rho 过度表达和侵袭性癌细胞系具有选择性，在抑制 DNA 合成、细胞生长和/或侵袭方面显示出纳摩尔至低微摩尔的效力。尽管亲代 A375 细胞系显示出 Caspase-3 激活的较小增加，但柔红霉素在高度转移性 RhoC 过表达的 A375M2 黑色素瘤细胞系中显示出完全相反的模式。

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ROCK1激酶活性测定：将重组ROCK1蛋白与不同浓度的CCG-1423及特异性肽底物共同孵育，30°C反应60分钟后，通过发光法检测底物的磷酸化水平，根据不同药物浓度下底物磷酸化的抑制率计算IC50值[2]
SRF介导的转录活性测定：将含SRF反应元件（SRE）与荧光素酶基因连接的报告质粒转染HEK293T细胞，转染24小时后，用不同浓度的CCG-1423处理细胞16小时，采用荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性，根据相对荧光素酶活性确定IC50值[1][3]

在涂有层粘连蛋白的 96 孔板中，每孔铺有 2,000 个正常培养基中的细胞。附着后，将培养基更换为含有 30 μmol/L LPA 的无血清培养基 (0% FBS)，结合或不结合 300 nM CCG-1423。为了保证 LPA 和化合物在实验期间存在，在第 5 天添加新鲜 LPA（含或不含 CCG-1423）。在第 8 天，向孔中加入 WST-1 试剂一小时，并使用 Victor 酶标仪测量 450 nm 处的吸光度。

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肿瘤细胞增殖实验：将肿瘤细胞（A549、HCT116、MDA-MB-231）以5×10³个/孔接种于96孔板，贴壁24小时后，用0.1、1、5、10 μM浓度的CCG-1423处理72小时，通过MTT法检测细胞活力，计算增殖抑制率[1]
平滑肌细胞迁移实验：将血管平滑肌细胞接种于Transwell小室上室，上、下室均加入含0.5 μM CCG-1423的培养基，孵育24小时后，固定并染色迁移至小室下表面的细胞，显微镜下计数[2]
内皮细胞管腔形成实验：将HUVECs以2×10⁴个/孔接种于Matrigel包被的24孔板，加入CCG-1423（0.1-10 μM），孵育6小时后，显微镜下观察毛细血管样管腔形成情况，测量总管腔长度[3]
巨噬细胞细胞因子分泌实验：用LPS（1 μg/mL）刺激巨噬细胞，同时加入CCG-1423（1-5 μM）共同处理24小时，通过ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度[4]
心肌成纤维细胞活化实验：分离培养小鼠心肌成纤维细胞，用0.6 μM CCG-1423处理48小时，通过Western blot检测α-SMA、I型胶原、III型胶原的表达水平，免疫荧光染色观察心肌成纤维细胞的细胞骨架重排[6]

胰岛素抵抗小鼠：小鼠饲养于经实验室动物福利办公室认证的动物房内，每笼4只，光照/黑暗周期为12小时/12小时。乔斯林研究所动物护理和使用委员会批准了所有实验方案。从杰克逊实验室获得年龄匹配的C57BL/6雄性小鼠，从6周龄开始喂食标准饲料（10%热量来自脂肪）或高脂饲料（60%热量来自脂肪）。[6]
对于SRF抑制剂实验，16周龄的高脂饲料喂养小鼠接受CCG-1423（0.15 mg/kg/d，腹腔注射）或载体（DMSO）处理2周。[6]

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结肠癌异种移植模型：将HCT116细胞（5×10⁶个细胞/只）皮下接种到6-8周龄的裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为对照组和CCG-1423治疗组。治疗组每周5次腹腔注射溶于DMSO和生理盐水（DMSO终浓度≤5%）的CCG-1423（50 mg/kg），持续3周。每2天测量一次肿瘤体积和小鼠体重[1]。
结肠炎模型：将6-8周龄的C57BL/6小鼠在饮用水中添加3% DSS，连续7天诱导结肠炎。将CCG-1423溶于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液中，每日一次口服10 mg/kg，持续7天。小鼠经治疗后处死，并收集结肠组织进行组织病理学分析[4]
心肌纤维化模型：C57BL/6小鼠（8-10周龄）接受主动脉缩窄术（TAC）以诱导心肌纤维化。术后两周，小鼠接受腹腔注射CCG-1423（20 mg/kg），溶于DMSO和生理盐水（DMSO最终浓度≤5%），每周3次，持续4周。进行超声心动图检查以评估心脏功能，并收集心肌组织进行胶原染色和分子生物学检测[6]

[1].Mol Cancer Ther. 2007 Aug;6(8):2249-60.

[2].Biochem Biophys Res Commun. 2010 Mar 19;393(4):877-82.

[3].PLoS One. 2012;7(7):e40966.

[4].Inflamm Bowel Dis. 2014 Jan;20(1):154-65.

[5]. Circulation. 2018 Dec 11;138(24):2820-2836.
[6]. J Clin Invest. 2011 Mar;121(3):918-29. doi: 10.1172/JCI41940.

溶血磷脂酸受体激活一个Gα(12/13)/RhoA依赖的基因转录程序，该程序涉及血清反应因子(SRF)及其共激活因子和癌基因巨核细胞白血病1 (MKL1)。该通路抑制剂可作为有用的生物探针和潜在的癌症治疗药物。我们通过基于转录的高通量血清反应元件-荧光素酶筛选实验，鉴定出该通路的两种小分子抑制剂。对活性更强的CCG-1423的机制研究表明，它作用于Rho下游，因为它能阻断由Gα(12)Q231L、Gα(13)Q226L、RhoA-G14V和RhoC-G14V刺激的SRE.L驱动的转录。 CCG-1423能够阻断MKL1激活的转录，但不能阻断SRF-VP16或GAL4-VP16诱导的转录，这表明其作用机制靶向MKL/SRF依赖性转录激活，且不涉及DNA结合的改变。与CCG-1423作为Rho/SRF通路抑制剂的作用相符，它在多种体外癌细胞功能分析中均显示出活性。CCG-1423能够强效（<1 μmol/L）抑制PC-3前列腺癌细胞中溶血磷脂酸诱导的DNA合成；虽然它在纳摩尔浓度下能够抑制RhoC过表达的黑色素瘤细胞系（A375M2和SK-Mel-147）的生长，但对Rho表达水平较低的相关细胞系（A375和SK-Mel-28）的活性较低。同样，与亲代细胞系（A375）相比，CCG-1423 选择性地刺激易转移的、RhoC 过表达的黑色素瘤细胞系（A375M2）的凋亡。CCG-1423 抑制了 PC-3 前列腺癌细胞的 Rho 依赖性侵袭，但对 SKOV-3 卵巢癌细胞系的 Gα(i) 依赖性侵袭没有影响。因此，基于其特性，CCG-1423 是一种有前景的先导化合物，可用于开发新型药理学工具，以干扰癌症中 Rho 通路的转录反应。[1]

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胚胎干细胞 (ESC) 是再生医学和疾病模型构建的潜在强大工具。近年来 ESC 技术取得了显著进展，但 ESC 向肾脏谱系分化的研究相对较少。本研究旨在不添加外源细胞因子和诱导胚状体形成的情况下，将小鼠胚胎干细胞（mESCs）分化为肾脏祖细胞群——中间中胚层（IM）。首先，我们用小分子化合物（Janus相关酪氨酸激酶抑制剂1、LY294002和CCG1423）组合处理mESCs，使其分化为BMP7阳性细胞，BMP7被认为是IM的诱导因子。当在培养基中添加维甲酸时，IM分化所必需的odd-skipped相关蛋白1（Osr1）的表达增强。为了简化分化方案，我们将上述四种小分子化合物（包括维甲酸）组合后添加到培养基中。在此条件下，超过一半的细胞Osr1呈阳性，同时通过实时PCR检测到了Pax2（另一种IM标志物）的表达。外胚层标记物和内胚层标记物的表达未增强，而中胚层标记物发生了改变。此外，通过RT-PCR检测到了肾脏发育必需基因Lim1和WT1的表达。这些结果表明，利用小分子组合建立了一种特异性强、有效的ESC单层分化为IM的方法，从而获得了一种有吸引力的细胞来源，可用于实验分化以了解肾脏发生机制和胚胎发生过程中的细胞间相互作用。[2] 骨骼肌胰岛素抵抗是与2型糖尿病（T2D）相关的关键表型，但其分子机制尚不清楚。因此，我们对来自T2D患者、血糖正常但有胰岛素抵抗且父母有T2D家族史（FH(+)）的受试者以及无T2D家族史的对照组（FH(–)）的人类肌肉活检样本进行了表达分析。血清反应因子 (SRF) 及其共激活因子巨核细胞白血病 1 (MKL1) 调控的肌动蛋白细胞骨架基因在 2 型糖尿病 (T2D) 和家族性高胆固醇血症 (FH(+)) 组中表达上调。此外，SRF 的激活因子——Rho 信号通路激活因子 (STARS) 在 T2D 和 FH(+) 组中表达上调，且与胰岛素敏感性呈负相关。胰岛素抵抗小鼠的骨骼肌重现了这种基因表达模式，并显示 G-肌动蛋白减少和 MKL1 核定位增加，二者均可调节 SRF 活性。MKL1 过表达或 G-肌动蛋白减少会降低胰岛素刺激的 Akt 磷酸化，而 STARS 表达减少则会增强胰岛素信号传导和葡萄糖摄取。在体内，使用 CCG-1423 进行 SRF 药理学抑制可降低胰岛素抵抗小鼠的核 MKL1 水平，并改善其葡萄糖摄取和耐量。因此，SRF通路改变与胰岛素抵抗相关，可能参与2型糖尿病的发病机制，并可能成为治疗靶点。[6]

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CCG-1423主要通过特异性抑制RhoA/ROCK/SRF信号通路发挥生物学效应，该通路参与调控细胞增殖、迁移、分化和基因转录。[1][2][3][4][6]
在肿瘤细胞中，CCG-1423阻断SRF介导的细胞周期相关基因转录，从而抑制肿瘤生长。[1]
在炎症和纤维化疾病中，CCG-1423通过抑制RhoA/ROCK/SRF通路介导的炎症细胞和成纤维细胞活化，从而减轻炎症和纤维化。[4][6]

C18H13CLF6N2O3

454.75

454.051

C, 47.54; H, 2.88; Cl, 7.80; F, 25.07; N, 6.16; O, 10.55

285986-88-1

(S)-CCG-1423;2319939-24-5

2726015

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.525

6.59

70.92

2

9

5

30

586

0

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N([H])C(C([H])(C([H])([H])[H])ON([H])C(C1C([H])=C(C(F)(F)F)C([H])=C(C(F)(F)F)C=1[H])=O)=O

DSMXVSGJIDFLKP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H13ClF6N2O3/c1-9(15(28)26-14-4-2-13(19)3-5-14)30-27-16(29)10-6-11(17(20,21)22)8-12(7-10)18(23,24)25/h2-9H,1H3,(H,26,28)(H,27,29)

N-[1-(4-chloroanilino)-1-oxopropan-2-yl]oxy-3,5-bis(trifluoromethyl)benzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。