GSK-3β (IC50 = 6.7 nM); GSK-3α (IC50 = 10 nM)
Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl targets glycogen synthase kinase 3α (GSK3α) with an IC50 of 0.65 nM (recombinant human GSK3α) [2]
Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl targets glycogen synthase kinase 3β (GSK3β) with an IC50 of 0.58 nM (recombinant human GSK3β) [2]
Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl shows no significant inhibition of other kinases (e.g., CDK2, ERK2, JNK1) at concentrations up to 10 μM [2]

GSK-3 对 CHIR-99021 的选择性比其最接近的同源物 CDC2 和 ERK2 以及其他蛋白激酶高 500 倍以上。此外，CHIR-99021 仅对 23 种非激酶具有适度的抑制作用，并且与 22 种具有药理学意义的受体仅具有微弱的结合。 CHIR-99021 的 EC50 为 0.763 μM，可激活表达胰岛素受体的 CHO-IR 细胞中的糖原合酶 (GS)。 [1] 除了模拟胰岛素的作用外，CHIR-99021 (3 μM) 对 GSK-3 的抑制还导致游离胞质 - 连环蛋白增加 1.9 倍，模拟 3T3-L1 前脂肪细胞中的经典 Wnt 信号通路。通过在分化前三天的任何一天阻止 CCAAT/增强子结合蛋白 (C/EBP) 和过氧化物酶体增殖物激活受体 γ (PPARγ) 的诱导，CHIR-99021 治疗可防止前脂肪细胞分化，IC50 为 0.3 μM。 [2] 与氯化锂和 AR-A014418 不同，即使在高浓度下，CHIR-99021 处理也不会降低 INS-1E 细胞的活力。相反，CHIR-99021 以浓度依赖性方式显着降低高葡萄糖和高棕榈酸盐引起的 INS-1E 细胞死亡率。它还可以显着且剂量依赖性地增加 INS-1E 细胞增殖率。在低至 1 μM 的浓度下，CHIR-99021 可刺激离体大鼠胰岛中的原代 β 细胞复制，用 5 μM CHIR-99021 处理后，细胞复制增加 2-3 倍。 [3]

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重组人GSK3α/GSK3β激酶实验中，拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（0.1-100 nM）剂量依赖性抑制酶活性，IC50值分别为0.65 nM（GSK3α）和0.58 nM（GSK3β） [2]
- 在大鼠肝癌H4IIE细胞中，拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（1-10 μM）剂量依赖性促进糖原合成，10 μM浓度时较溶媒组刺激2.3倍（p < 0.01） [1]
- 拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（0.1-1 μM）增强H4IIE细胞中胰岛素介导的糖原合成；1 μM与胰岛素（10 nM）联合使用时，糖原含量较单独使用胰岛素增加3.1倍（p < 0.001） [1]
- 在人胚肾（HEK293）细胞中，拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（0.1-10 μM）激活Wnt/β-连环蛋白信号，促进β-连环蛋白核转位，TCF/LEF报告基因活性在10 μM时增加3.8倍 [3]
- 1 μM 拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl 降低H4IIE和HEK293细胞中GSK3底物（糖原合成酶、β-连环蛋白）的磷酸化水平，蛋白质印迹法证实 [1][3]

在 2 型糖尿病啮齿动物模型中，口服 30 mg/kg CHIR-99021 可改善葡萄糖代谢。口服给药后三到四个小时，血浆葡萄糖最大程度降低（大约 150 mg/dl），血浆胰岛素水平保持在或低于控制水平。在 ZDF 大鼠中，在口服葡萄糖挑战前每小时口服 16 或 48 mg/kg 剂量的 CHIR-99021 可显着改善葡萄糖耐量，在 16 mg/kg 和 48 mg/kg 剂量下血浆葡萄糖水平分别下降 14% 和 33%分别为 mg/kg 剂量。较高剂量的 CHIR-99021 还可减轻口服葡萄糖挑战前的高血糖。 [1]

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在db/db小鼠（2型糖尿病模型）中，每日口服10、30 mg/kg 拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl 连续14天，剂量依赖性降低空腹血糖；30 mg/kg剂量组较溶媒组血糖降低42%（p < 0.01） [1]
- 拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（30 mg/kg，口服，14天）改善db/db小鼠的胰岛素敏感性，空腹胰岛素水平降低35%，胰岛素介导的葡萄糖清除率增加28%（p < 0.05） [1]
- 在db/db小鼠中，拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（30 mg/kg）使肝糖原含量增加68%，骨骼肌糖原含量增加52%（p < 0.01） [1]
- 在C57BL/6小鼠中，口服30 mg/kg 拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl 后4小时内，血糖急性降低25%（p < 0.05） [1]

聚丙烯 96 孔板填充有 300 μL/孔缓冲液（50 mM tris HCl、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、1 mM 二硫苏糖醇、25 mM β-甘油磷酸、1 mM NaF、0.01% BSA、pH 7.5），其中含有 27 nM GSK-3α 或 29 nM GSK-3β 和 0.5 μM 生物素-CREB 肽底物。在所有无细胞测定中，先将不同浓度的 CHIR-99021 添加到 3.5 μL DMSO，然后添加 50 μL ATP 库存，以产生 1 M ATP 的终浓度。孵育后，将一式三份的 100 μL 等分试样添加到 Combiplate 8 板中，其中每孔含有 100 μL 浓度的 50 mM ATP 和 20 mM EDTA。 1小时后，用PBS冲洗孔5次，加入200μL闪烁液，密封，放置30分钟，在闪烁计数器中计数。所有步骤均在室温下进行。

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激酶和激酶测定。[1]
Erk2、蛋白激酶C（PKC）-α、PKC-ζ、p90RSK2、C-src、AMPK和pdk1激酶购自Upstate Biotechnology。如前所述，从HeLa细胞中纯化DNA-PK。其他重组人蛋白激酶在具有“glu”或六肽标签的SF9细胞中表达。如前所述纯化Glu标记蛋白，并根据制造商的说明纯化他的标记蛋白。 所有激酶测定都遵循相同的核心方案，肽底物和激活剂浓度变化如下所述。聚丙烯96孔板填充300μl/孔缓冲液（50 mmol/l三HCl、10 mmol/l MgCl2、1 mmol/l EGTA、1 mmol/1二硫苏糖醇、25 mmol/lβ-甘油磷酸、1 mmol/l NaF、0.01%BSA、pH 7.5），其中含有激酶、肽底物和任何激活剂。这些测定的激酶浓度、肽底物和激活剂（如适用）信息如下：GSK-3α（27 nmol/l和0.5μmol/l生物素CREB肽）；GSK-3β（29 nmol/l，和0.5μmol/l生物素CREB肽）；cdc2（0.8 nmol/l和0.5μmol/l生物素组蛋白H1肽）；erk2（400单位/ml，和髓鞘碱性蛋白包被的闪板；PKC-α（1.6 nmol/l，0.5μmol/l生物素组蛋白H1肽，和0.1 mg/ml磷脂酰丝氨酸+0.01 mg/ml二甘油酯）；PKC-ζ（0.1 nmol/l，0.5μmol/l生物素-PKC-86肽和50μg/ml磷脂酰丝氨酸+5μg/ml二酰甘油）；akt1（5.55nmol/l和0.5μmol/l生物素磷酸化AKT肽）；p70 S6激酶（1.5 nmol/l和0.5μmol/l生物素GGGKRRRLASLRA）；p90 RSK2（0.049单位/ml和0.5μmol/l生物素GGGKRRRLASLRA）；c-src（4.1单位/ml和0.5μmol/l生物素KVEKIGEGTYGVVYK）；Tie2（1μg/ml和200 nmol/l生物素GGGGAPEDL-YKDFLT）；flt1（1.8 nmol/l和0.25μmol/l KDRY1175[B91616]生物素GGGGQDGKDYIVLPI-NH2）；KDR（0.95 nmol/l和0.25μmol/l KDRY1175[B91616]生物素-GGGQDGKDYIVLPI-NH2）；bFGF受体酪氨酸激酶（RTK；2 nmol/l和0.25μmol/l KDRY1175[B91616]生物素-GGGGGQDGKDYIVLPI-NH2）；IGF1 RTK（1.91 nmol/l和1μmol/l生物素GGGGKKKSPGEYVNIEFG酰胺）；胰岛素RTK（使用DG44 IR细胞；见33）；AMP激酶（470单位/ml、50μmol/l SAMS肽和300μmol/l AMP）；pdk1（0.25 nmol/l、2.9 nmol/l未活化的Akt和20μmol/l DOPC和DOPS+2μmol/l PIP3）；CHK1（1.4 nmol/l和0.5μmol/l生物素-cdc25肽）；CK1-ε（3 nmol/l，和0.2μmol/l生物素肽）；DNA PK（见31）；和磷脂酰肌醇（PI）3-激酶（5nmol/l和2μg/ml PI）。在所有无细胞测定中，将受试化合物或对照加入3.5μl DMSO中，然后加入50μl ATP储备，以产生1μmol/l ATP的最终浓度。孵育后，将一式三份的100μl等分试样转移到含有100μl/孔50μmol/l ATP和20 mmol/l EDTA的Combiplate八块板中。1小时后，用PBS冲洗孔5次，填充200μl闪烁液，密封，静置30分钟，并在闪烁计数器中计数。所有步骤均在室温下进行。抑制计算为100%×（抑制−无酶对照）/（DMSO对照−无酶控制）。

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酶和受体面板。[1]
在Cerep“酶”面板上测试了对非激酶的选择性，包括乙酰胆碱酯酶；腺苷酸环化酶；Na/K-ATP酶；组织蛋白酶B和G；环氧合酶1和2；ECE；上皮生长因子受体；弹性蛋白酶；鸟苷酸环化酶；HIV-1蛋白酶；诱导型一氧化氮合酶；5-脂氧合酶；单胺氧化酶A和B；磷酸二酯酶I、II、III和IV；PKC；磷脂酶A2和C；和酪氨酸羟化酶。在MDS“图谱”面板上测试了对受体的选择性，包括腺苷A1；肾上腺素能（α1和α2非选择性和β1和β2）；L型钙通道；多巴胺D1和D2；雌激素α；GABAA（激动剂位点和钠通道）；糖皮质激素；谷氨酸（NMDA/苯环利定和非选择性）；甘氨酸（对士的宁敏感）；组胺H1（中枢）；胰岛素毒蕈碱M2和M3；阿片类药物δ、κ和μ；佛波酯；钾通道；孕酮；5-羟色胺（5-HT1和5-HT2/非选择性）；西格玛（非选择性）；钠通道（位点2）；和睾酮。

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GS活性测定。[1]
表达人胰岛素受体的CHO-IR细胞在含有10%胎牛血清且不含次黄嘌呤的Hamm’s F12培养基中生长至80%汇合。将胰蛋白酶化细胞以1×106个细胞/孔的速度接种在6孔板中的2ml不含胎牛血清的培养基中。24小时后，用1 ml含有GSK-3抑制剂或对照（最终DMSO浓度＜0.1%）的无血清培养基在37°C下替换培养基30分钟。通过在50 mmol/l tris（pH 7.8）中冷冻/解冻裂解细胞，该溶液含有1 mmol/l EDTA、1 mmol/lDTT、100 mmol/l NaF、1 mmol/l苯基甲基磺酰氟和25μg/ml亮蛋白肽（缓冲液A），并在4°C/14000g下离心15分钟。GS的活性比使用Thomas等人的滤纸测定法计算为在不存在葡萄糖-6-磷酸的情况下的GS活性除以在存在5mmol/l葡萄糖-6-磷酸时的活性。 在水稻肝脏实验室制备体重<140 g的雄性Sprague-Dawley大鼠的原代肝细胞，并在分离后1-3小时使用。将1×106细胞在1 ml DMEM/F12培养基加0.2%BSA和GSK-3抑制剂或对照中的等分试样在12孔板中在37°C的低速摇床上在富含CO2的气氛中孵育30分钟，通过离心收集并通过在缓冲液a加0.01%NP40中冷冻/解冻裂解；再次使用Thomas等人的方法进行GS测定。

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重组GSK3α/GSK3β激酶活性实验：将纯化的重组人GSK3α或GSK3β与拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（0.01 nM至1 μM）及肽底物（源自糖原合成酶）在激酶缓冲液中30°C孵育60分钟；磷酸化底物通过磷酸特异性抗体ELISA定量；从剂量-反应曲线计算IC50值 [2]
- 激酶选择性实验：将拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（10 μM）对20种丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶进行筛选；采用相同的肽底物实验评估激酶活性，比较相对于GSK3α/GSK3β的抑制率 [2]

细胞在饥饿培养基（仅含 5 mM 葡萄糖、1% 胎牛血清的培养基）中维持 24 小时。然后，将细胞暴露于不同浓度的 CHIR-99021 1、3 或 4 天。细胞 DNA 用 CyQuant 染料染色，当与 DNA 结合时，该染料会发出荧光，以便计算存在的细胞数量。使用 FLUOstar Optima 读数器，在孵育 30 分钟后测量荧光。 BrdUrd 掺入控制细胞复制。在用 FixDenat 溶液固定细胞并与单克隆抗 BrdUrd-POD 抗体一起孵育之前，在实验的最后 4 小时将 BrdUrd 标记溶液添加到培养基中。将底物溶液添加到每个孔后，使用 Analyst HT 检测系统在微孔板发光计中测量光发射。

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肝细胞糖原合成实验：H4IIE细胞接种到24孔板培养至汇合；血清饥饿16小时后，用拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（1-10 μM）联合或不联合胰岛素（10 nM）处理4小时；最后1小时加入[14C]-葡萄糖，沉淀糖原并液体闪烁计数 [1]
- Wnt/β-连环蛋白报告基因实验：转染TCF/LEF荧光素酶报告质粒的HEK293细胞接种到96孔板；用拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（0.1-10 μM）处理24小时； luminometer检测荧光素酶活性，按蛋白含量归一化 [3]
- GSK3底物蛋白质印迹实验：H4IIE或HEK293细胞用拉杜维格卢西布盐酸盐（Laduviglusib, CHIR-99021; CT99021）HCl（0.1-10 μM）处理12小时；裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白，转移至PVDF膜，用针对磷酸化糖原合成酶（Ser641）、磷酸化β-连环蛋白（Ser33/37/Thr41）及总蛋白的抗体孵育 [1][3]

患有2型糖尿病的雌性db/db小鼠或雄性ZDF大鼠
~48 mg/kg
口服给药

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疗效模型。[1]
通过利多卡因麻醉的尾尖进行浅剪取血。直接测量血糖或收集肝素化血浆用于测量葡萄糖或胰岛素。动物预先采血后随机分为载体对照组和GSK-3抑制剂治疗组。对于葡萄糖耐量试验（GTT），动物在整个试验过程中禁食，并在首次预采血前3小时（db/db小鼠）或采血前16小时（ZDF大鼠）于前一晚停止喂食。当测量禁食ZDF大鼠血浆葡萄糖和胰岛素变化的时间进程时，在给药前约16小时停止喂食。GTT中的葡萄糖负荷剂量为1.35 g/kg腹腔注射（ipGTT）或2 g/kg灌胃（oGTT）。测试抑制剂配制成 20 mmol/L 柠檬酸盐缓冲的 15% Captisol 溶液或 0.5% 羧甲基纤维素细悬浮液。

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db/db 小鼠 2 型糖尿病模型：将 8 周龄雄性 db/db 小鼠随机分为 3 组（每组 n=8）：载体对照组、Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl 10 mg/kg 组、Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl 30 mg/kg 组 [1]
- Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl 配制成 0.5% 甲基纤维素水溶液；小鼠每日灌胃给药一次，连续 14 天 [1]
- 代谢参数评估：每周测量空腹血糖和胰岛素水平；研究结束时，对小鼠实施安乐死，并收集肝脏和骨骼肌组织进行糖原定量和蛋白质印迹分析[1]
- 急性降血糖试验：8周龄雄性C57BL/6小鼠禁食6小时后，分别给予Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl（30 mg/kg，口服）或载体；分别于给药后0、1、2和4小时测量血糖[1]

在 H4IIE 和 HEK293 细胞中，浓度高达 100 μM 的 Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl 在孵育 72 小时后未显示细胞毒性 [1][3]
- 在用 Laduviglusib (CHIR-99021; CT99021) HCl (30 mg/kg/天，持续 14 天) 治疗的 db/db 小鼠中，未观察到体重、食物摄入量或临床化学参数（ALT、AST、肌酐）的显著变化 [1]
- 在治疗小鼠的主要器官（肝脏、肾脏、心脏、胰腺）中未检测到组织病理学异常 [1]

[1]. Diabetes. 2003 Mar;52(3):588-95.

[2]. J Biol Chem. 2002 Aug 23;277(34):30998-1004.

[3]. J Biol Chem. 2007 Apr 20;282(16):12030-7.

胰岛素抵抗在2型糖尿病的发生发展中起着核心作用，但胰岛素作用的具体缺陷仍有待阐明。糖原合成酶激酶3 (GSK-3) 可负调控胰岛素信号传导的多个方面，已有研究报道糖尿病啮齿动物和人类骨骼肌中GSK-3水平升高。目前关于高选择性GSK-3抑制剂在胰岛素抵抗条件下调节胰岛素作用的研究信息有限。本研究描述了一类新型取代氨基嘧啶衍生物，该衍生物能高效抑制人GSK-3（K_i < 10 nmol/L），且对其他20种蛋白激酶的选择性至少高500倍。这些低分子量化合物在转染胰岛素受体的培养CHO细胞和从Sprague-Dawley大鼠分离的原代肝细胞中，以约100 nmol/L的浓度即可激活糖原合成酶；在瘦型Zucker大鼠和ZDF大鼠分离的I型骨骼肌中，以500 nmol/L的浓度即可激活糖原合成酶。有趣的是，这些GSK-3抑制剂增强了胰岛素抵抗型ZDF大鼠I型骨骼肌中胰岛素刺激的葡萄糖转运，但对胰岛素敏感型Zucker瘦型大鼠则无此作用。单次口服或皮下注射这些抑制剂（30-48 mg/kg）可迅速降低ZDF大鼠和db/db小鼠在口服或静脉注射葡萄糖负荷后的血糖水平，并改善葡萄糖利用，且不会引起低血糖或显著升高胰岛素水平。总的来说，我们的研究结果表明，这些选择性GSK-3抑制剂可能作为急性起效的治疗药物，用于治疗2型糖尿病的胰岛素抵抗。[1]

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我们已鉴定出Wnt10b是脂肪生成的重要抑制剂，必须抑制Wnt10b才能使前脂肪细胞在体外分化。在此，我们证明糖原合成酶激酶3的特异性抑制剂CHIR 99021能够模拟前脂肪细胞中的Wnt信号通路。CHIR 99021能够稳定胞质游离的β-catenin，并通过阻断CCAAT/增强子结合蛋白α和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的诱导来抑制脂肪生成。在脂肪生成的最初3天内，当3T3-L1细胞暴露于CHIR 99021的任何24小时时间段内，前脂肪细胞的分化都会受到抑制。与此抑制时间框架一致，Wnt10b mRNA 的表达在分化诱导后受到抑制，6 小时后下降 50%，36 小时后完全抑制。在用于诱导分化的试剂中，将 3T3-L1 细胞暴露于甲基异丁基黄嘌呤或 cAMP 足以抑制 Wnt10b mRNA 的表达。Wnt10b 对脂肪生成的抑制作用可能由 Wnt 受体 Frizzled 1、2 和/或 5 以及辅助受体低密度脂蛋白受体相关蛋白 5 和 6 介导。这些受体与 Wnt10b 一样，在脂肪前体细胞和基质血管细胞中高表达。最后，我们证明，通过表达分泌的 Frizzled 相关蛋白来破坏细胞外 Wnt 信号传导会导致脂肪细胞自发转化。[2]

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最近的研究进展表明，糖尿病患者 β 细胞功能和数量的再生是可能的。对于目前血糖控制不佳的糖尿病疗法，再生疗法可能是一种替代治疗选择。本文报道，小分子抑制剂或RNA干扰可抑制GSK3的活性，从而刺激INS-1E大鼠胰岛瘤细胞的增殖。特异性强效的GSK3抑制剂还能减轻高浓度葡萄糖和饱和脂肪酸棕榈酸酯对INS-1E细胞的毒性作用。此外，用结构多样的小分子GSK3抑制剂处理分离的大鼠胰岛，可使β细胞的增殖速率较对照组提高2-3倍。我们认为GSK3是β细胞增殖和存活的调控因子。此外，我们的研究结果表明，GSK3 的特异性抑制剂可能在 β 细胞再生疗法中具有实际应用价值。[3]

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拉杜维格鲁西布 (CHIR-99021; CT99021) HCl 是一种强效、选择性、口服有效的糖原合成酶激酶 3 (GSK3) α/β 抑制剂。[1][2][3]
- 其作用机制包括抑制 GSK3 介导的糖原合成酶（激活糖原合成）和 β-catenin（激活 Wnt 信号通路）的磷酸化，从而改善葡萄糖代谢和胰岛素敏感性。[1][3]
- 拉杜维格鲁西布 (CHIR-99021; CT99021) HCl 被广泛用作研究糖尿病、神经退行性疾病和干细胞生物学中 GSK3 信号通路的研究工具化合物。[2][3]
- 该药物在 2 型糖尿病小鼠中表现出降血糖作用。通过增强肝脏和骨骼肌糖原储存以及改善胰岛素反应性来构建模型[1]

C22H19CL3N8

501.7989

500.079

C, 52.66; H, 3.82; Cl, 21.19; N, 22.33

1797989-42-4

Laduviglusib;252917-06-9;Laduviglusib trihydrochloride;1782235-14-6

71295844

White to yellow solid powder

0

115Ų

4

7

7

33

645

0

ClC1C=C(C=CC=1C1C(=CN=C(N=1)NCCNC1C=CC(C#N)=CN=1)C1=NC=C(C)N1)Cl.Cl

SCQDMKUZHIGAIB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C22H18Cl2N8.ClH/c1-13-10-29-21(31-13)17-12-30-22(32-20(17)16-4-3-15(23)8-18(16)24)27-7-6-26-19-5-2-14(9-25)11-28-19;/h2-5,8,10-12H,6-7H2,1H3,(H,26,28)(H,29,31)(H,27,30,32);1H

6-[2-[[4-(2,4-dichlorophenyl)-5-(5-methyl-1H-imidazol-2-yl)pyrimidin-2-yl]amino]ethylamino]pyridine-3-carbonitrile;hydrochloride

GSK 3IXV; CHIR99021; CHIR 99021; CHIR-911; CHIR911; CHIR 911; CT- 99021; GSK 3 inhibitor XVI; CT-99021; CT- 99021; CHIR-73911; CHIR73911; CHIR 73911

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~199.3 mM)
Water: ~1.5 mg/mL(~3 mM)
Ethanol: ~100 mg/mL(~199.3 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ~20 mg/mL (40 mM) in 5% DMSO+30% PEG 300+ddH2O, 澄清溶液
配方 5 中的溶解度: ~5 mg/mL (10 mM) in PBS, 澄清溶液
配方 6 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (6 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + + 45% Saline, 澄清溶液
例如，要配制1 mL工作液，可取100 μL 30 mg/mL DMSO储备液，加入tO+400 μL PEG300，混匀（澄清液）； 然后向上述溶液中加入50 μL Tween 80，混匀（澄清溶液）； 最后在上述溶液中加入450 μL生理盐水，混匀（澄清溶液）.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH 2 O 中，得到溶液。
配方 7 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (6 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in saline), 澄清溶液
例如，若要配制1 mL工作液，可取100 μL 30 mg/mL DMSO储备液，加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水中，混匀（澄清溶液） 。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（（4°C，1 周））：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到溶液
配方 8 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (6 mM) in 10% DMSO + 90% Corn oil, 澄清溶液
例如，要配制1 mL工作液，可取100 μL 30 mg/mL DMSO储备液，加入900 μL玉米油中，混匀（澄清溶液）。

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配方 9 中的溶解度: 5 mg/mL (9.96 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。