Microtubule; tubulin polymerization; β-tubulin (Kd = 0.4 μM)

FosbretabuLin disodium 抑制白血病 P-388、胰腺 BXPC-3、神经母细胞 SK-N-SH、甲状腺 SW1736、肺 NSC NCI-H460、前列腺 DU-145 和咽 FADU 的增殖，EC50 为 0.0029、0.23 和 0.00025分别为 0.00061、0.00035、0.00072 和 0.00045 μg/mL[8]。

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使用Combretastatin A4/考布他汀 A4 磷酸盐 (≥ 50 μM) 时，前向散射大大减少，膜联蛋白 V 结合细胞的比例显着增加。考布他汀 A4 磷酸盐不会显着增加溶血量。 Combretastatin A4 磷酸盐浓度为数百 μM 时可显着增强 Fluo3 荧光。当细胞外 Ca2+ 被去除时，Combretastatin A4 磷酸盐 (100 μM) 对膜联蛋白-V 结合的影响大大降低，但并未完全消除。考布他汀 A4 磷酸盐 (≥ 50 μM) 不会显着增加 ROS 和神经酰胺，但会显着降低 GSH 丰度和 ATP 水平 [2]。共封装阿霉素-考布他汀-A4磷酸盐（1:10）的聚合物胶囊对人鼻咽上皮癌（KB）细胞具有强协同细胞毒性[3]。这些重要分子的表达和 3-D 细胞中 VM 的数量不受考布他汀 A4 磷酸盐预处理的影响 [4]。

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将人红细胞暴露于Combretastatin A4/CA4P（≥50µM）48小时后，膜联蛋白-V结合细胞的百分比显著增加，前向散射显著降低Combretastatin A4/CA4P没有明显增加溶血。100µM CA4P显著增加了Fluo3荧光。通过去除细胞外Ca2+，CA4P（100µM）对膜联蛋白-V结合的影响显著减弱，但并未完全消除。CA4P（≥50µM）显著降低了GSH丰度和ATP水平，但没有显著增加ROS或神经酰胺。 结论：Combretastatin A4CA4P引发红细胞膜的细胞收缩和磷脂紊乱，这种作用至少部分是由于细胞外Ca2+的进入和能量消耗。[2]

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使用三维培养的体外模型来测试Combretastatin A4/CA4P对Walker 256细胞管形成的影响。进行Western blot分析以评估缺氧诱导因子（HIF）-1α和VM相关标志物的表达。在体外缺氧条件下48小时，W256细胞形成与VM标志物表达增加相关的VM网络。CA4P预处理不影响三维培养中VM的量以及这些关键分子的表达[4]。

在大鼠中，注射 fosbretabuLin disodium（100 mg/kg；腹膜内注射）可减少肿瘤血流量，并在注射后 1 小时和 6 小时提高平均动脉血压 (MABP)。在大鼠系统中评估了使用微管蛋白失稳剂考布他汀A-43-0-磷酸二钠（CA-4-P）靶向肿瘤血管的潜力。这种方法旨在关闭已建立的肿瘤血管系统，导致广泛的肿瘤细胞坏死。在皮下植入的P22癌肉瘤和一系列正常组织中评估了CA-4-P的早期血管效应。通过摄取放射性标记的碘安替比林来测量血流，并使用定量放射自显影来测量肿瘤切片中血流的空间异质性。CA-4-P（100mg/kg i.P.）在治疗后1和6小时导致平均动脉压显著升高，肿瘤血流量大幅减少，6小时后减少了约100倍。脾脏是受影响最严重的正常组织，6小时时血流量减少了7倍。血管阻力的计算显示，心脏和肾脏出现了一些血管变化，但血流量没有明显变化。定量放射自显影显示CA-4-P增加了肿瘤血流的空间异质性。该药物对周围肿瘤区域的影响小于中心区域。在一氧化氮合酶抑制剂N（ω）-硝基-L-精氨酸甲酯存在的情况下，给予CA-4-P（30mg/kg）可增强CA-4-P在肿瘤组织中的作用。与任何正常组织的不到7倍相比，该组合将肿瘤血管阻力增加了300倍。这表明，组织产生的一氧化氮可以防止CA-4-P对血管的破坏作用。在使用无细胞灌注液的孤立肿瘤灌注中，也可以获得肿瘤血管阻力的显著变化，尽管这些变化远小于体内观察到的变化。这表明CA-4-P的作用包括红细胞粘度、血管内凝血和中性粒细胞粘附以外的机制。CA-4-P和考布他汀A-4（CA-4）在肿瘤中的摄取比在骨骼肌组织中更有效，前者的CA-4-P去磷酸化为CA-4更快。这些结果有望将CA-4-P用作肿瘤血管靶向剂[9]。

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治疗30分钟后，给予120 mg/10 mL/kg Combretastatin A4磷酸二钠的大鼠具有更高的DBP和MBP。用康布他汀 A4 磷酸二钠 120 mg/10 mL/kg 治疗的大鼠显示出康布他汀 A4 及其磷酸盐的以下毒代动力学特征：康布他汀 A4 的 Cmax、T1/2 和 AUC0-inf 值为 156± 13 μM、5.87±1.69 h、89.4±10.1 h·μM[1]。 W256 肿瘤在考布他汀 A4 磷酸盐治疗后显示出明显的瘤内缺氧，这与 VM 发展的增加有关。 cercopetastatin A4 磷酸盐仅延迟肿瘤生长两天，但肿瘤生长很快恢复。第 8 天时，VM 密度与肿瘤重量和体积呈正相关。通过 HIF-1α/EphA2/PI3K/基质金属蛋白酶 (MMP) 信号通路，磷酸西西他汀 A4 刺激 W256 肿瘤中缺氧和 VM 形成，从而损害肿瘤更新[4]。

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在本研究中，我们设计了可生物降解的多聚体，用于联合递送抗血管生成药物Combretastatin A4磷酸盐（CA4P）和阿霉素（DOX），以破坏肿瘤新生血管系统并抑制癌症细胞增殖，目的是实现协同抗肿瘤效果。以甲氧基聚乙二醇-b-聚乳酸（mPEG-PLA）嵌段共聚物为药物载体，通过溶剂蒸发法制备了共包封DOX和CA4P的聚合物体（Ps-DOX-CA4P）。所得Ps-DOX-CA4P具有囊泡形状，大小均匀，约为50nm，DOX与CA4P的共包封率可控。更重要的是，Ps-DOX-CA4P（1:10）对人鼻咽表皮癌（KB）细胞显示出强烈的协同细胞毒性（组合指数CI=0.31）。此外，Ps-DOX-CA4P在裸鼠KB组织异种移植物中显著积累。与这些观察结果一致，Ps-DOX-CA4P（1:10）由于体内肿瘤血管系统的快速破坏和持续的肿瘤细胞增殖抑制而具有显著的抗肿瘤效力。总体研究结果表明，在多聚体中联合递送抗血管生成药物和化学治疗剂是癌症治疗的一种潜在的有前景的策略。[3]

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在体内，W256肿瘤在Combretastatin A4/CA4P治疗后表现出明显的瘤内缺氧，并伴有VM形成增加。CA4P在2天内仅表现出肿瘤生长的延迟，但随后肿瘤迅速再生。VM密度与第8天的肿瘤体积和肿瘤重量呈正相关。CA4P引起缺氧，通过HIF-1α/EphA2/PI3K/基质金属蛋白酶（MMP）信号通路诱导W256肿瘤中VM的形成，从而导致受损肿瘤的再生[4]。

体外微管蛋白聚合测定[5,6]
根据Wang等人描述的方法，将猪脑微管蛋白（纯度>97%）与普通微管蛋白缓冲液（80 mM PIPES、2.0 mM MgCl2、0.5 mM EGTA和1 mM GTP）混合，在4°C下达到3 mg/mL的最终浓度。在96孔板中混合微管蛋白溶液和测试化合物后，立即在37°C的SYNERGY 4微孔板读取器中孵育微管蛋白聚合测定，并在340nm下每30秒监测65分钟。以紫杉醇作为微管蛋白聚合的阳性对照，秋水仙碱和ABI-274作为微管蛋白解聚的阳性对照进行重复实验。

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用于亲和性测定的SPR[5,6]
在配备有葡聚糖SPR传感器芯片（Reichert Polycarboxylate Hydrogel chip P/N 13206067）的Reicher4SPR系统中使用SPR技术分析与微管蛋白的结合亲和力。然后，将50μg/mL微管蛋白固定在传感器芯片表面，以获得12μRIU。芯片上的四个流动池中的一个作为阴性对照。在传感器芯片表面上注射不同浓度的4v或秋水仙碱进行缔合分析，然后进行离解分析。实验数据在25°C下使用运行缓冲液PBST（8 mM Na2HPO4、136 mM NaCl、2 mM KH2PO4、2.6 mM KCl和0.05%（v/v）Tween 20，pH 7.4）获得。平衡离解常数（KD）是用TraceDrawer软件通过稳态拟合模式计算的。

细胞阻抗评估[1]
参照和修改早期研究中的方法，使用xCELLigence心脏分析仪对hiPS-CM的细胞阻抗进行了分析。简而言之，iCell hiPS CM是从Cellular Dynamics International购买的。根据制造商的方案，使用iCell hiPS CM专用的平板培养基和维持培养基，在96孔xCELLigence Cardio E-plate中以20000个细胞/孔和37°C在5%CO2中解冻和培养hiPS CM。在潜伏期，根据制造商的说明，使用xCELLigence心脏分析仪连续监测阻抗值。以12.9ms的间隔连续采样阻抗，并在每个测量点以20秒的扫描持续时间进行监测。孵育14天后，将测试化合物（100 nM、1μM和10μM CA4DP；100 nM，1μM，和10μMCombretastatin A4/CA4；CA4DP为0.1%H2O，CA4[载体]为0.1%DMSO）（n=3孔）加入培养物中。然后，使用专用软件计算阻抗细胞指数（CI）和搏动率16、18、20。CI和打浆率的数据由添加试验化合物前的值进行归一化。给药后36小时的CI用于检测细胞毒性作用。给药后15分钟、3小时和12小时的搏动率用于检测收缩性的变化。

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背景/目的：Combretastatin A4/康布他汀A4磷酸二钠（CA4P）用于治疗恶性肿瘤。该物质之前已被证明会引发自杀性细胞死亡或凋亡。与有核细胞的凋亡类似，红细胞也可能进入自杀性死亡或红细胞凋亡，其特征是细胞收缩和细胞膜紊乱，磷脂酰丝氨酸易位到红细胞表面。红细胞下垂的刺激因素包括细胞质Ca2+活性（[Ca2+]i）、神经酰胺、氧化应激和ATP耗竭的增加。本研究探讨了CA4P是否会诱导红细胞下垂，如果是，则深入了解相关机制。 方法：采用流式细胞术从膜联蛋白-V结合、前向散射的细胞体积、Fluo3荧光的[Ca2+]i、DCF荧光的活性氧（ROS）丰度、CMF荧光的谷胱甘肽（GSH）丰度和荧光抗体的神经酰胺丰度估算细胞表面的磷脂酰丝氨酸暴露量。此外，利用基于萤光素酶的测定法定量细胞质ATP水平，并根据上清液中的血红蛋白浓度估算溶血[2]。

动物/疾病模型： 雄性 BD9 大鼠（7-9 周龄），皮下植入 P22 肿瘤[9]
剂量： 100 mg/kg
给药途径： 单次腹腔注射
实验结果： 给药后 1 小时，平均动脉压显著升高约 30%，心率降低。肿瘤血流量减少。\n

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\n\n组织病理学变化评估[1]
\n共14只大鼠被分为四组，如表1所示。6周龄时，通过尾静脉推注给予CA4DP/康布瑞他汀A4（30或60 mg/10 mL/kg，间隔24小时，共4次；或120 mg/10 mL/kg，间隔72小时，共2次）或生理盐水（间隔72小时，共2次）。末次给药后第二天，用异氟烷麻醉大鼠，并进行尸检。此外，一只接受4次60 mg/10 mL/kg CA4DP给药的大鼠因CA4DP毒性在尸检前意外死亡。死因被认为是CA4DP的心脏毒性，因为在该大鼠中观察到了严重的心肌坏死。放血后，取出大鼠心脏并立即固定于10%中性磷酸盐缓冲福尔马林溶液中。按照先前报道⁷所述，将固定的心脏沿心室进行两个平面的横切。将固定的心脏包埋于石蜡中，并切片至4-6 μm厚。标本用苏木精-伊红（HE）染色。使用光学显微镜观察这些标本。\n

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\n\n心电图数据评估[1]
\n使用了两只大鼠（1号和2号动物）。在5周龄时，于戊巴比妥钠麻醉下，将一个用于传输心电图数据的微型遥测装置（重量3.9克，体积1.9毫升）植入大鼠背部皮下。该遥测装置自带的成对电极分别置于大鼠背部和腹部皮下，用于记录心尖-心底（A-B）导联心电图。术后一周，将每只大鼠置于信号接收板上的笼子中，记录其心电信号。心电图数据以1毫秒的间隔连续采样，所有心电图波形成分的数据分析均使用连接模数转换器的个人电脑上的心电图处理器分析系统进行；心电图数据存储在外部硬盘上。在心电图记录期间，通过尾静脉以推注方式向两只大鼠分别给予 CA4DP/康布瑞他汀 A4 50 mg/10 mL/kg，间隔 24 小时，共 3 次。心电图记录持续至第三次给药后 12 小时。连续记录 4 秒的心电图波形并取平均值，分析心电图波形成分（RR 间期、QRS 波时限、PR 间期和 QT 间期）。血压评估 [1] 共使用 9 只大鼠。6 周龄大鼠用异氟烷麻醉，并仰卧固定。暴露股动脉，插入充满肝素化生理盐水的聚乙烯导管。导管通过压力传感器连接至压力传感器放大设备，记录动脉血压。血压以1毫秒的间隔连续采样，所有数据分析均使用连接模数转换器的个人电脑上的心电图处理器分析系统进行。在血压记录期间，通过尾静脉单次推注给予CA4DP/康布瑞他汀A4 120毫克/10毫升/公斤或生理盐水10毫升/公斤（CA4DP组n=5，生理盐水组n=4）。血压记录持续至给药后30分钟。连续记录4秒的血压波并取平均值，分析血压成分（收缩压[SBP]、舒张压[DBP]和平均动脉压[MBP]）和心率(HR)。\n

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\n\n毒代动力学分析[1]
\n大鼠单次静脉注射120 mg/10 mL/kg的CA4DP/康布瑞他汀A4（n = 3）。分别于给药后10分钟、1小时、3小时、6小时和24小时，经颈静脉采血，并收集于肝素抗凝管中。采血后立即离心分离血浆。离心后，取等体积血浆与等体积的1%甲酸混合，并于-20°C保存。解冻后的血浆样本经固相萃取纯化，采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆中康布瑞他汀A4磷酸盐（CA4DP的游离碱；CA4P）和康布瑞他汀A4（CA4DP的代谢物；CA4）的浓度。采用Phoenix WinNonlin 6.3软件进行非房室模型分析，获得毒代动力学参数[最大浓度（Cmax）、末端半衰期（T1/2）和浓度-时间曲线下面积（AUC0-inf）]。

代谢/代谢物
康布瑞他汀 A4 已知的代谢物包括 (2S,3S,4S,5R)-3,4,5-三羟基-6-[2-甲氧基-5-[(Z)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙烯基]苯氧基]氧杂环己烷-2-羧酸。

[1]. Combretastatin A4 disodium phosphate-induced myocardial injury. J Toxicol Pathol. 2016 Jul;29(3):163-71.

[2]. Stimulation of Eryptosis by Combretastatin A4 Phosphate Disodium (CA4P). Cell Physiol Biochem. 2016;38(3):969-8.

[3]. Co-Encapsulation of Combretastatin-A4 Phosphate and Doxorubicin in Polymersomes for Synergistic Therapy of Nasopharyngeal Epidermal Carcinoma. J Biomed Nanotechnol. 2015 Jun;11(6):997-1006.

[4]. Combretastatin A4 phosphate treatment induces vasculogenic mimicry formation of W256 breast carcinoma tumor in vitro and in vivo. Tumour Biol. 2015 Nov;36(11):8499-510.

[5]. Structure-Activity Relationship Study of Novel 6-Aryl-2-benzoyl-pyridines as Tubulin Polymerization Inhibitors with Potent Antiproliferative Properties. J Med Chem. 2020 Jan 23;63(2):827-846.

[6]. Discovery of novel 2-aryl-4-benzoyl-imidazole (ABI-III) analogues targeting tubulin polymerization as antiproliferative agents. J Med Chem . 2012 Aug 23;55(16):7285-9.

[7]. Combretastatin A-4 inhibits cell growth and metastasis in bladder cancer cells and retards tumour growth in a murine orthotopic bladder tumour model. Br J Pharmacol. 2010 Aug;160(8):2008-27.

[8]. Antineoplastic agents. 445. Synthesis and evaluation of structural modifications of (Z)- and (E)-combretastatin A-41. J Med Chem. 2005 Jun 16;48(12):4087-99.

[9]. Combretastatin A-4 phosphate as a tumor vascular-targeting agent: early effects in tumors and normal tissues. Cancer Res. 1999 Apr 1;59(7):1626-34.

福斯布雷他布林二钠盐是源自非洲灌木柳（Combretum caffrum）的天然芪类酚类化合物的水溶性磷酸盐衍生物的二钠盐，具有潜在的血管破坏和抗肿瘤活性。给药后，前药福斯布雷他布林脱磷酸化生成其活性代谢物——微管解聚剂康布瑞他汀A4。康布瑞他汀A4与微管蛋白二聚体结合，阻止微管聚合，导致内皮细胞有丝分裂停滞和凋亡。此外，该药物还能破坏内皮细胞特异性连接分子血管内皮钙黏蛋白（VE-钙黏蛋白）的结合，从而抑制VE-钙黏蛋白/β-连环蛋白/Akt信号通路，这可能导致内皮细胞迁移和毛细血管形成受到抑制。由于福斯布瑞他汀的双重作用机制，肿瘤血管塌陷，导致肿瘤血流减少和肿瘤组织缺血性坏死。

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康布瑞他汀A4是一种芪类化合物。
据报道，康布瑞他汀A4存在于非洲使君子（Combretum caffrum）中，并有相关数据。
康布瑞他汀A4是一种微管聚合抑制剂，提取自南非柳树，可导致有丝分裂停滞，并选择性地靶向、减少或破坏现有血管，从而减少肿瘤的血液供应。
另见：福斯布瑞他汀（注释已移至）。
康布瑞他汀A4是一种微管聚合抑制剂，提取自南非柳树，可导致有丝分裂停滞，并选择性地靶向、减少或破坏现有血管，从而减少肿瘤的血液供应。

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康布瑞他汀A4二钠诱导的心肌病变的组织病理学和心电图特征本研究评估了磷酸盐（CA4DP）的作用，并探讨了心肌损伤与血管变化之间的关系以及CA4DP对心肌细胞的直接毒性作用。我们通过给大鼠注射CA4DP诱导心肌损伤，并通过组织病理学检查和心电图评估心肌损伤情况。我们评估了CA4DP处理组大鼠的血压，以及CA4DP对人诱导多能干细胞来源的心肌细胞（hiPS-CMs）基于细胞阻抗的收缩力的影响。结果显示，心肌出现多灶性坏死，主要累及室间隔和左心室心尖部心内膜下区域，同时伴有毛细血管损伤、ST段形态改变和QT间期延长。心肌损伤的组织病理学特征提示CA4DP导致心肌血流减少。 CA4DP可升高舒张压，并对hiPS-CMs产生直接作用。这些结果表明，CA4DP可诱导小动脉和毛细血管功能障碍，并对心肌细胞具有直接毒性。因此，推测CA4DP通过破坏心肌微循环而导致毛细血管和心肌损伤。此外，CA4DP对心肌细胞的直接毒性作用以协同的方式诱导心肌损伤。[1] 本研究旨在探讨单次给药后，磷酸康布瑞他汀A4 (CA4P) 对体外和体内血管生成拟态 (VM) 通道形成的影响及其支持 VM 的潜在机制。采用三维培养的体外模型检测CA4P对Walker 256细胞管状结构形成的影响。采用蛋白质印迹法分析缺氧诱导因子 (HIF)-1α 和血管生成拟态 (VM) 相关标志物的表达。建立 W256 荷瘤大鼠模型，通过双重染色和缺氧标志物匹莫尼达唑，研究 CA4P 对 VM 形成和肿瘤缺氧的影响。通过肿瘤生长曲线评估 CA4P 的抗肿瘤疗效。体外缺氧 48 小时后，W256 细胞形成 VM 网络，并伴有 VM 标志物表达增加。CA4P 预处理不影响三维培养中 VM 的数量以及这些关键分子的表达。体内实验表明，CA4P 治疗后 W256 肿瘤出现明显的瘤内缺氧，并伴有 VM 形成增加。CA4P 仅在 2 天内延缓肿瘤生长，之后肿瘤迅速复发。在第8天，VM密度与肿瘤体积和肿瘤重量呈正相关。CA4P引起缺氧，并通过HIF-1α/EphA2/PI3K/基质金属蛋白酶（MMP）信号通路诱导W256肿瘤中VM的形成，从而导致受损肿瘤的再生。[4]我们最近报道了微管蛋白与秋水仙碱结合位点抑制剂（CBSI）ABI-231（含有2-芳基-4-苯甲酰基咪唑（ABI））复合物的晶体结构。基于此以及其他晶体结构，我们在此报道了一系列新型ABI-231吡啶类似物的构效关系研究，其中化合物4v对多种癌细胞系表现出最强的活性（平均IC50约为1.8 nM）。我们解析了另一种强效CBSI ABI-274和4v与微管蛋白复合物的晶体结构，并证实了它们直接结合于秋水仙碱结合位点。4v抑制微管蛋白聚合，显著抑制A375黑色素瘤肿瘤生长，诱导肿瘤坏死，破坏肿瘤血管生成，并在体内诱导肿瘤细胞凋亡。综上所述，这些研究表明4v代表了一种很有前景的新一代微管蛋白抑制剂。[5]

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基于我们之前报道的ABI-I和ABI-II类似物，我们设计并合成了新型ABI-III化合物。ABI-III化合物对多种黑色素瘤和前列腺癌细胞系具有高度活性，其中活性最佳的化合物平均IC₅₀值为3.8 nM。它们不是Pgp的底物，因此可能有效克服Pgp介导的多药耐药性。ABI-III类似物通过抑制微管蛋白聚合发挥其作用机制。[6]

C18H19O8P.2NA

440.29

440.061

C, 49.10; H, 4.35; Na, 10.44; O, 29.07; P, 7.03

168555-66-6

168555-66-6 (disodium);222030-63-9 (free acid);404886-32-4 ( tromethamine);

6918309

White to off-white solid powder

611.8ºC at 760 mmHg

238-242ºC

7.99E-16mmHg at 25°C

4.239

119.15

0

8

7

29

496

0

COC1=C(C=C(C=C1)/C=C\C2=CC(=C(C(=C2)OC)OC)OC)OP(=O)([O-])[O-].[Na+].[Na+]

VXNQMUVMEIGUJW-XNOMRPDFSA-L

InChI=1S/C18H21O8P.2Na/c1-22-14-8-7-12(9-15(14)26-27(19,20)21)5-6-13-10-16(23-2)18(25-4)17(11-13)24-3;;/h5-11H,1-4H3,(H2,19,20,21);;/q;2*+1/p-2/b6-5-;;

disodium;[2-methoxy-5-[(Z)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethenyl]phenyl] phosphate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 14.29 mg/mL (32.46 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).

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配方 2 中的溶解度: 生理盐水加几滴 5% Na2CO3：30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。