ROS1 (Ki < 0.025 nM); c-Met (IC50 = 11 nM); NPM-ALK (IC50 = 24 nM)

体外活性：PF-2341066 在 mIMCD3 小鼠或 MDCK 犬上皮细胞中表现出类似的抗 c-Met 磷酸化功效，IC50 分别为 5 nM 和 20 nM。与 NIH3T3 细胞相比，PF-2341066 对工程表达 c-Met ATP 结合位点突变体 V1092I 或 H1094R 或 P 环突变体 M1250T 的 NIH3T3 细胞表现出改善或相似的活性，IC50 分别为 19 nM、2 nM 和 15 nM表达野生型受体，IC50 为 13 nM。相反，与野生型受体相比，观察到 PF-2341066 针对表达 c-Met 激活环突变体 Y1230C 和 Y1235D 的细胞的效力发生显着变化，IC50 分别为 127 nM 和 92 nM。 PF-2341066 还可有效防止 NCI-H69 和 HOP92 细胞中 c-Met 的磷酸化，IC50 分别为 13 nM 和 16 nM，这些细胞分别表达内源性 c-Met 变体 R988C 和 T1010I。与 c-Met 相比，PF-2341066 对 VEGFR2 和 PDGFRβ RTK 的选择性 > 1,000 倍，对 IRK 和 Lck 的选择性 > 250 倍，对 Tie2、TrkA 和 TrkB 的选择性大约 40 至 60 倍。 PF-2341066 对 RON 和 Axl RTK 的选择性是 20 至 30 倍。相比之下，PF-2341066 对 KARPAS299 人间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL) 细胞系表达的 ALK RTK 的核磷蛋白 (NPM)-间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 致癌融合变体显示出近乎等效的 IC50 为 24 nM。 PF-2341066 抑制癌细胞的 c-Met 依赖性肿瘤表型和内皮细胞的血管生成表型。 PF-2341066 抑制人 GTL-16 胃癌细胞生长，IC50 为 9.7 nM。 PF-2341066 诱导 GTL-16 细胞凋亡，IC50 为 8.4 nM。 PF-2341066 抑制 HGF 刺激的人 NCI-H441 肺癌细胞迁移和侵袭，IC50 分别为 11 nM 和 6.1 nM。 PF-2341066 抑制 MDCK 细胞散射，IC50 为 16 nM。 PF-2341066 可防止 HGF 刺激的 c-Met 磷酸化、细胞存活和基质胶侵袭，IC50 分别为 11 nM、14 nM 和 35 nM。此外，PF-2341066 还可防止纤维蛋白凝胶中血清刺激的 HMVEC 分支管生成（血管形成）。 PF-2341066 还可有效抑制 Karpas299 或 SU-DHL-1 ALCL 细胞中的 NPM-ALK 磷酸化，IC50 为 24 nM。 PF-2341066 有效防止细胞增殖，这与 G(1)-S 期细胞周期停滞和诱导 ALK 阳性 ALCL 细胞凋亡相关，IC50 为 30 nM，但与 ALK 阴性淋巴瘤细胞无关。此外，PF-2341066 还可预防与原发肿瘤生长（即增殖和存活）以及转移（例如侵袭和克隆性）相关的骨肉瘤行为。激酶测定：将细胞接种在 96 孔板中补充有 10% 胎牛血清 (FBS) 的培养基中，24 小时后转移至无血清培养基 [含 0.04% 牛血清白蛋白 (BSA)]。在研究配体依赖性 RTK 磷酸化的实验中，添加相应的生长因子长达 20 分钟。将细胞与 PF-2341066 和/或适当的配体孵育指定时间后，用补充有 1 mM Na3VO4 的 HBSS 洗涤细胞一次，并从细胞中产生蛋白质裂解物。随后，使用用于包被 96 孔板的特异性捕获抗体和对磷酸化酪氨酸残基具有特异性的检测抗体，通过夹心 ELISA 方法评估所选蛋白激酶的磷酸化。抗体包被板 (a) 在蛋白质裂解物存在下于 4°C 孵育过夜； (b) 用含 1% Tween 20 的 PBS 洗涤七次； (c) 在辣根过氧化物酶缀合的抗总磷酸酪氨酸 (PY-20) 抗体 (1:500) 中孵育 30 分钟； (d)再清洗七次； (e) 在 3,3',5,5'-四甲基联苯胺过氧化物酶底物中孵育以启动比色反应，通过添加 0.09 N H2SO4 来终止该反应； (f) 使用分光光度计测量 450 nm 处的吸光度。细胞测定：将包括GTL-16胃癌细胞和T47D乳腺癌细胞的细胞（GTL-16胃癌细胞和T47D乳腺癌细胞）接种到96孔板中补充有10%胎牛血清（FBS）的培养基中并转移24 小时后转移至无血清培养基 [含 0.04% 牛血清白蛋白 (BSA)]。在研究配体依赖性 RTK 磷酸化的实验中，添加相应的生长因子长达 20 分钟。将细胞与 PF-2341066 和/或适当的配体孵育指定时间后，用补充有 1 mM Na3VO4 的 HBSS 洗涤细胞一次，并从细胞中产生蛋白质裂解物。随后，使用用于包被 96 孔板的特异性捕获抗体和对磷酸化酪氨酸残基具有特异性的检测抗体，通过夹心 ELISA 方法评估所选蛋白激酶的磷酸化。抗体包被板 (a) 在蛋白质裂解物存在下于 4 °C 孵育过夜； (b) 用含 1% Tween 20 的 PBS 洗涤七次； (c) 在辣根过氧化物酶缀合的抗总磷酸酪氨酸 (PY-20) 抗体 (1:500) 中孵育 30 分钟； (d)再清洗七次； (e) 在 3,3',5,5'-四甲基联苯胺过氧化物酶底物中孵育以启动比色反应，通过添加 0.09 N H2SO4 来终止该反应； (f) 使用分光光度计测量 450 nm 处的吸光度。

在 GTL-16 模型中，PF-2341066 揭示了在 50 mg/kg/天和 75 mg/kg/天治疗组中，能够使已形成的大肿瘤 (>600 mm3) 显着消退，减少 60% 43 天给药方案的平均肿瘤体积。在另一项研究中，PF-2341066 显示出完全抑制 GTL-16 肿瘤生长超过 3 个月的能力，在 50 mg/kg/ 的 3 个月治疗方案中，12 只小鼠中只有 1 只表现出肿瘤生长显着增加。天。在 NCI-H441 NSCLC 模型中，在 38 天的 PF-2341066 给药周期中，每天 50 mg/kg 时观察到平均肿瘤体积减少 43%。在 Caki-1 RCC 模型中，在 33 天的 PF-2341066 给药周期中，观察到平均肿瘤体积减少 53%，与每天 50 mg/kg/天的每个肿瘤体积减少至少 30% 相关。 PF-2341066 还显示，在 U87MG 胶质母细胞瘤或 PC-3 前列腺癌异种移植模型中，每天 50 mg/kg 剂量时，PF-2341066 几乎完全预防已形成肿瘤的生长，在最后研究日分别抑制 97% 或 84%。相比之下，以 50 mg/kg/天口服给予 PF-2341066 不会显着抑制 MDA-MB-231 乳腺癌模型或 DLD-1 结肠癌模型中的肿瘤生长。在 GTL-16 肿瘤中，在 12.5 mg/kg/天、25 mg/kg/天和 50 mg/kg/天时观察到 CD31 阳性内皮细胞的显着剂量依赖性减少，表明 MVD 的抑制显示出剂量与抗肿瘤功效的依赖性相关性。 PF-2341066 在 GTL-16 和 U87MG 模型中均显示出人 VEGFA 和 IL-8 血浆水平的显着剂量依赖性降低。口服 PF-2341066 后，在 GTL-16 肿瘤中观察到磷酸化 c-Met、Akt、Erk、PLCλ1 和 STAT5 水平的显着抑制。对携带 Karpas299 ALCL 肿瘤异种移植物的严重联合免疫缺陷米色小鼠口服 PF-2341066 会产生剂量依赖性抗肿瘤功效，在初始化合物给药 15 天内，100 mg/kg/d 剂量下所有肿瘤完全消退。此外，在浓度或剂量水平下观察到 PF-2341066 对关键 NPM-ALK 信号传导介质（包括磷脂酶 C-gamma、信号转导器和转录激活剂 3、细胞外信号调节激酶和 Akt）的抑制作用，这与抑制作用相关NPM-ALK 磷酸化和功能。 PF-2341066 可预防与原发肿瘤生长（例如增殖和存活）以及转移（例如侵袭和克隆性）相关的骨肉瘤行为。在通过口服强饲法用 PF-2341066 治疗的裸鼠中，PF-2341066 阻止了骨肉瘤异种移植物的生长以及相关的骨质溶解和皮质外骨基质形成。用 50 mg/kg PF-2341066 处理 c-MET 扩增的 GTL-16 异种移植物可引起肿瘤消退，这与 18F-FDG 摄取缓慢减少有关，并降低葡萄糖转运蛋白 1 (GLUT-1) 的表达。

将细胞接种在含有 10% 胎牛血清 (FBS) 补充培养基的 96 孔板中，然后在 24 小时后切换至含有 0.04% 牛血清白蛋白 (BSA) 的无血清培养基。在检查配体依赖性 RTK 磷酸化的实验中添加相应的生长因子最多 20 分钟。与 PF-2341066 和/或适当的配体孵育指定时间一小时后，再次用补充有 1 毫克 Na₃VO₄ 的 HBSS 洗涤细胞，并且蛋白质裂解物是从细胞中产生的。然后使用夹心 ELISA 技术测量特定蛋白激酶的磷酸化，该技术采用对磷酸化酪氨酸残基具有特异性的检测抗体和用于包被 96 孔板的特定捕获抗体。抗体包被的板经历以下步骤：（a）在蛋白质裂解物存在下过夜孵育； (b) 用 1% Tween 20 进行 7 次 PBS 洗涤； (c) 在辣根过氧化物酶缀合的抗总磷酸酪氨酸 (PY-20) 抗体 (1:500) 中孵育 30 分钟； (d) 再用 PBS 洗涤七次； (e) 在3,3',5,5'-四甲基联苯胺过氧化物酶底物中孵育以启动比色反应，通过添加0.09 N H₂SO₄来停止该反应； (f) 用分光光度计测量 450 nm 处的吸光度。

将细胞（包括 GTL-16 胃癌细胞和 T47D 乳腺癌细胞）接种到含有 10% 胎牛血清 (FBS) 和 0.04% 牛血清白蛋白 (BSA) 的培养基的 96 孔板中 24 小时后，移动至无血清培养基。在检查配体依赖性 RTK 磷酸化的实验中添加相应的生长因子最多 20 分钟。 PF-2341066 孵育一小时或在指定时间内应用合适的配体后，再次用补充有 1 mM Na₃VO₄ 的 HBSS 洗涤细胞，然后从细胞中提取蛋白质裂解物。然后，使用夹心 ELISA 技术，采用磷酸化酪氨酸残基的磷酸化特异性检测抗体和特异性捕获抗体来包被 96 孔板，评估特定蛋白激酶的磷酸化。抗体包被的板经历以下步骤：（a）在蛋白质裂解物存在下过夜孵育； (b) 用 1% Tween 20 进行 7 次 PBS 洗涤； (c) 在辣根过氧化物酶缀合的抗总磷酸酪氨酸 (PY-20) 抗体 (1:500) 中孵育 30 分钟； (d) 再用 PBS 洗涤七次； (e) 在3,3',5,5'-四甲基联苯胺过氧化物酶底物中温育以启动比色反应，用0.09 N H₂SO₄终止该反应； (f) 用分光光度计测量 450 nm 处的吸光度。

将PF-2341066以预定剂量通过灌胃法给予携带异种移植瘤（300-800 mm³）的无胸腺小鼠。在给予PF-2341066后，按预定时间间隔对小鼠实施安乐死，并取出肿瘤。使用液氮冷却的低温研钵和研杵，将肿瘤组织快速冷冻，研磨成糊状，制备蛋白裂解液，并用BSA法测定蛋白浓度。通过免疫沉淀-免疫印迹或捕获ELISA法测定总蛋白和磷酸化蛋白的含量。

吸收
在接受克唑替尼治疗的胰腺癌、结直肠癌、肉瘤、间变性大细胞淋巴瘤和非小细胞肺癌（NSCLC）患者中，剂量范围为每日一次100 mg至每日两次300 mg，平均AUC和Cmax均呈剂量比例增加。单次服用克唑替尼后，中位达峰时间（tmax）为4至6小时。在接受克唑替尼250 mg每日两次多次给药的患者（n=167）中，平均AUC为2321.00 ng·hr/mL，平均Cmax为99.60 ng/mL，中位tmax为5.0小时。克唑替尼的平均绝对生物利用度为43%，范围为32%至66%。高脂饮食可使克唑替尼的 AUC0-INF 和 Cmax 降低约 14%。年龄、出生性别和种族（亚裔与非亚裔患者）对克唑替尼的药代动力学无临床意义上的影响。在 18 岁以下的患者中，体重越高，克唑替尼的暴露量越低。
排泄途径
健康受试者单次服用 250 mg 放射性标记的克唑替尼后，粪便和尿液中分别回收了 63% 和 22% 的给药剂量。粪便和尿液中未代谢的克唑替尼分别约占给药剂量的 53% 和 2.3%。
分布容积
单次静脉给药后，克唑替尼的平均分布容积 (Vss) 为 1772 L。
清除率
稳态时（每日两次，每次 250 mg），克唑替尼的平均表观清除率 (CL/F) 为 60 L/hr。该值低于单次口服 250 mg 后测得的清除率 (100 L/hr)，这可能是由于 CYP3A 自身抑制所致。

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代谢/代谢物
克唑替尼主要在肝脏中通过 CYP3A4 和 CYP3A5 代谢，并经历 O-去烷基化，随后进行 II 期结合反应。不能排除非代谢性清除，例如胆汁排泄。 PF-06260182（由两种非对映异构体组成，分别为PF-06270079和PF-06270080）是目前已鉴定的唯一克唑替尼活性代谢物。体外研究表明，与克唑替尼相比，PF-06270079和PF-06270080对间变性淋巴瘤激酶（ALK）的抑制活性降低约3至8倍，对肝细胞生长因子受体（HGFR，c-Met）的抑制活性降低约2.5至4倍。

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生物半衰期
单次给药后，克唑替尼的血浆末端半衰期为42小时。

肝毒性
在早期的大型临床试验中，接受标准剂量克唑替尼治疗的患者中，高达 57% 出现血清转氨酶水平升高，6% 的患者转氨酶水平超过正常值上限的 5 倍，2% 至 4% 的患者因此提前终止治疗。血清转氨酶升高通常在治疗 4 至 12 周后出现，但通常不伴有黄疸或碱性磷酸酶升高。转氨酶异常恢复正常后，可从降低剂量开始重新使用克唑替尼。大多数克唑替尼引起的肝损伤病例症状轻微或无症状，停药后 1 至 2 个月内即可恢复（病例 1）。然而，也有报道称，克唑替尼治疗期间出现黄疸和相关症状的病例，其中 0.1% 的患者死亡（病例 2）。克唑替尼引起的严重肝损伤病例通常在开始治疗后 2 至 6 周内出现，表现为血清转氨酶水平显著升高，随后出现黄疸、进行性肝功能障碍、凝血功能障碍、肝性脑病和死亡。因此，建议在治疗期间每 2 至 4 周进行一次常规肝功能检查。可能性评分：C（可能导致临床上明显的急性肝损伤）。

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妊娠和哺乳期用药
◉哺乳期用药概述
目前尚无克唑替尼在哺乳期临床应用的信息。由于克唑替尼与血浆蛋白的结合率为 91%，因此其在乳汁中的含量可能较低。然而，其半衰期约为 42 小时，可能会在婴儿体内蓄积。生产商建议在克唑替尼治疗期间以及末次给药后 45 天内停止哺乳。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合率
克唑替尼与血浆蛋白的结合率为 91%。体外研究表明，药物浓度不影响其蛋白结合率。

[1]. An orally available small-molecule inhibitor of c-Met, PF-2341066, exhibits cytoreductive antitumor efficacy through antiproliferative and antiangiogenic mechanisms. Cancer Res. 2007, 67(9), 4408-4417.

[2]. Cytoreductive antitumor activity of PF-2341066, a novel inhibitor of anaplastic lymphoma kinase and c-Met, in experimental models of anaplastic large-cell lymphoma. Mol Cancer Ther. 2007, 6(12 Pt 1), 3314-3322.

[3]. Structure based drug design of crizotinib (PF-02341066), a potent and selective dual inhibitor of mesenchymal-epithelial transition factor (c-MET) kinase and anaplastic lymphoma kinase (ALK). J Med Chem. 2011 Sep 22;54(18):6342-63.

[4]. Differential (18)F-FDG and 3'-deoxy-3'-(18)F-fluorothymidine PET responses to pharmacologic inhibition of the c-MET receptor in preclinical tumor models. J Nucl Med. 2011 Aug;52(8):1261-7.

c-Met受体酪氨酸激酶及其配体肝细胞生长因子（HGF）与多种人类癌症的进展密切相关，是极具吸引力的治疗靶点。PF-2341066是一种高效、口服生物利用度高的ATP竞争性小分子抑制剂，可抑制c-Met激酶的催化活性。与超过120种不同的酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶相比，PF-2341066对c-Met（以及间变性淋巴瘤激酶）具有选择性。体外实验表明，PF-2341066能有效抑制c-Met磷酸化以及c-Met依赖的人肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭（IC50值为5-20 nmol/L）。此外，PF-2341066在体外能有效抑制HGF刺激的内皮细胞存活或侵袭以及血清刺激的管状结构形成，表明该药物也具有抗血管生成特性。在多种表达活化c-Met的肿瘤模型中，PF-2341066在耐受性良好的剂量下显示出疗效，包括显著的细胞减灭抗肿瘤活性。PF-2341066的抗肿瘤疗效呈剂量依赖性，并与体内c-Met磷酸化抑制密切相关。在整个给药间隔内，c-Met活性的抑制接近最大值是PF-2341066发挥最大疗效的必要条件。其他作用机制研究表明，PF-2341066能剂量依赖性地抑制c-Met依赖性信号转导、肿瘤细胞增殖（Ki67）、诱导细胞凋亡（caspase-3）以及降低微血管密度（CD31）。这些结果表明，PF-2341066 的抗肿瘤活性可能是通过直接影响肿瘤细胞的生长或存活以及抗血管生成机制实现的。总的来说，这些结果显示了使用选择性小分子抑制剂靶向 c-Met 治疗人类癌症的治疗潜力。[1]

C₂₁H₂₃CL₃FN₅O

486.80

485.095

1415560-69-8

Crizotinib;877399-52-5;Crizotinib-d5;1395950-84-1; 877399-53-6 (acetate)

71576688

Yellow to brown solid

6.749

77.99

3

6

5

31

558

1

ClC1=C(C([H])=C([H])C(=C1[C@@]([H])(C([H])([H])[H])OC1=C(N([H])[H])N=C([H])C(=C1[H])C1C([H])=NN(C=1[H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C1([H])[H])Cl)F.Cl[H]

BTDNHKQCPIBABF-UTONKHPSSA-N

InChI=1S/C21H22Cl2FN5O.ClH/c1-12(19-16(22)2-3-17(24)20(19)23)30-18-8-13(9-27-21(18)25)14-10-28-29(11-14)15-4-6-26-7-5-15;/h2-3,8-12,15,26H,4-7H2,1H3,(H2,25,27);1H/t12-;/m1./s1

3-[(1R)-1-(2,6-dichloro-3-fluorophenyl)ethoxy]-5-(1-piperidin-4-ylpyrazol-4-yl)pyridin-2-amine;hydrochloride

PF-02341066 hydrochloride; PF2341066; PF-2341066; PF-02341066; PF02341066; PF 02341066; PF 2341066; Crizotinib; US trade name: Xalkori

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~97 mg/mL (~199.3 mM)
Ethanol: ~97 mg/mL (~199.3 mM)
Water: ~97 mg/mL (~199.3 mM)

配方 1 中的溶解度: 55 mg/mL (112.98 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。