DMH1

Bone morphogenetic protein (BMP) signaling cascade; ALK1 (IC50 = 27 nM); ALK2 (IC50 = 107.9 nM); ALK3 (IC50 < 5 nM); ALK6 (IC50 = 47.6 nM)[1]
DMH1 is a selective inhibitor of bone morphogenetic protein (BMP) type I receptors ALK2 and ALK3 (ALK2 IC50 = 1.0 nM; ALK3 IC50 = 36 nM) [1]
DMH1 shows weak or no inhibition of other ALK receptors (ALK1, ALK4-6: IC50 > 1 μM) and unrelated kinases (PKA, PKC: IC50 > 10 μM) [1]

OCT4、Nanog 和 PAX6 蛋白的表达受 DMH-1 (0.5 μM) 调节。在 SM3 和 CA6 细胞中，DMH-1 显着降低了表达多能性标记蛋白 OCT4 和 Nanog 的细胞比例。分别在第 5 天和第 7 天，CA6 和 SM3 细胞中 PAX6 表达显着上调。 DMH-1 控制神经前体标记的 mRNA 并导致多能性。在hiPSC的神经诱导过程中，PAX6可以通过控制DMH-1的浓度来独立控制SOX1的表达[2]。在 HeLa 细胞中，DMH-1（5 μM 和 10 μM）抑制 CDDP 诱导的自噬，并增加 CDDP 降低细胞活力的能力；在 MCF-7 细胞中，它抑制他莫昔芬诱导的自噬，并增加他莫昔芬降低 MCF-7 细胞活力的能力；在MCF-7和HeLa细胞中，抑制5-FU诱导的自噬，但对5-FU对MCF-7和HeLa细胞活力的抑制作用没有影响。治疗 24 小时后，DMH-1 增强了 CDDP 对 HeLa 细胞的作用，导致细胞凋亡。 DMH-1 抑制 HeLa 和 MCF-7 细胞生长 [3]。当暴露于 DMH-1 (20 μM) 时，Smads 1、5 和 9 的典型磷酸化程度较低。在 OVCAR8 细胞中，DMH-1 和顺铂的组合显着降低了 Ki-67 阳性染色。在 OVCAR8 和 NCI-RES 细胞中，DMH-1 (20 μM) 上调 JAG1、降低 CYP1B1 并增强 HAPLN1 表达 [4]。

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在人卵巢癌细胞（SKOV3、A2780）中，DMH1（5 μM）处理72小时后，MTT法检测显示细胞增殖抑制65-70%。它诱导G2/M期细胞周期阻滞（SKOV3细胞中G2/M期比例从20%升至42%），48小时后诱导凋亡（膜联蛋白V阳性细胞比例从6%升至35%），mRNA水平下调BMP靶基因（ID1降低60%；ID3降低65%）[4]
- 在人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞（A549、H1299）中，DMH1（10 μM）处理72小时后，CCK-8法检测显示细胞增殖抑制62-68%；48小时后划痕愈合实验显示迁移抑制65%，Transwell实验显示侵袭抑制70%。它下调p-Smad1/5/8（降低75%）和促侵袭基因MMP2（降低60%）[5]
- 在人诱导多能干细胞（hiPSCs）中，DMH1（2 μM）在神经诱导过程中促进神经发生。7天后mRNA水平上调神经前体细胞标志物PAX6（2.8倍）和SOX1（3.2倍），βIII-微管蛋白阳性神经细胞比例较对照组（32%）提升至68% [3]
- 在经顺铂（10 μM）处理的人宫颈癌细胞（HeLa）中，DMH1（5 μM）抑制化疗药物诱导的自噬。它降低LC3-II/LC3-I比值（60%），蛋白水平下调自噬相关基因Beclin1（55%）[2]
- 在正常人支气管上皮细胞（HBECs）和包皮成纤维细胞中，DMH1 在浓度高达25 μM时毒性较低（细胞活力较对照组>85%）[4][5]

DMH1（5 mg/kg，腹腔注射）治疗可显着抑制人肺癌异种移植模型中肿瘤的生长[5]。
DMH1抑制小鼠异种肺肿瘤的生长[5]
研究人员接下来研究了DMH1对体内肺肿瘤细胞生长的影响。将A549细胞皮下接种在严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠后下侧翼的两侧。在肿瘤细胞植入的同一天开始腹膜内（i.p.）注射载体（12.5%2-羟丙基-β-环糊精，n=5）或5mg/kg DMH1（n=5），每隔一天进行一次，持续4周。从植入后第六天开始定期测量肿瘤体积。肿瘤生长符合指数生长曲线（图4A）（DMH1治疗组和对照组小鼠的R2=0.87和0.84）。结果表明，DMH1治疗小鼠的肿瘤大小加倍率比对照组长约一天（DMH1治疗和对照组分别为5.6天和4.7天）（图4A）。由于初始肿瘤体积相似，直到第25天，两组之间没有观察到统计学差异。在4周治疗结束时，与赋形剂对照组相比，DMH1治疗导致肿瘤体积在统计学上显著减少了约50%（p值<0.05）（图4B）。在整个实验过程中，每隔一天测量一次小鼠体重，对照组和DMH1治疗组均未观察到明显的体重变化，这表明在给药剂量下DMH1没有毒性作用（数据未显示）。为了进一步研究DMH1对体内肿瘤细胞增殖的影响，对载体对照组和DMH1治疗组的肿瘤组织样本进行苏木精和伊红染色（H&E）和人特异性Ki67染色。检查了H&E切片中含有肿瘤和基质细胞的区域，结果表明，载体和DMH1治疗组均由形态相似的分化腺癌组成（数据未显示）。然而，免疫组织化学研究显示，与载体组相比，DMH1治疗组的人类增殖标记物Ki67显著降低，这表明DMH1治疗可能会减弱体内人类A549癌症细胞的增殖（图4C）。

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在荷皮下SKOV3卵巢癌异种移植瘤的裸鼠中，口服 DMH1（50 mg/kg/天，持续28天）显著抑制肿瘤生长。与溶媒组相比，肿瘤体积减少63%，肿瘤重量降低58%。肿瘤组织中p-Smad1/5/8（降低70%）和Ki-67（降低55%）表达下调 [4]
- 在荷皮下A549肺癌异种移植瘤的裸鼠中，腹腔注射 DMH1（75 mg/kg/天，持续21天）抑制肿瘤生长（体积减少65%）和肺转移（转移结节数较溶媒组减少72%）。它抑制肿瘤组织中BMP/Smad信号（ID1 mRNA下调60%）[5]

ALK2/ALK3激酶活性实验：将纯化的重组人ALK2或ALK3与Smad1衍生底物肽和 DMH1（0.1 nM-100 nM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM ATP）中于30°C孵育60分钟。通过放射性标记ATP计数检测磷酸化底物，从剂量-效应曲线计算IC50值 [1]
- 激酶选择性实验：采用各自的底物肽和实验缓冲液，将 DMH1（10 μM）对40+种激酶（包括ALK1、ALK4-6、PKA、PKC、ERK1/2）进行筛选。比色法定量激酶活性，未观察到对脱靶激酶的显著抑制（活性降低>50%）[1]

细胞划痕试验[4]
将A549和H460细胞接种在35mm培养皿中以形成融合的单层。将培养皿孵育过夜，以使细胞附着在培养皿底部。第二天，移液管尖端在培养物中心直刮造成伤口。然后用1µM和3µM浓度的DMSO或DMH1处理细胞。在伤口形成时和孵育24小时后，使用相差显微镜拍摄照片，并使用ImageJ（NIH）软件定量评估间隙距离。孵育24小时后的间隙距离用0小时时的间隙距离作为迁移率进行归一化。

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细胞增殖试验[4]
将每孔约10000个A549细胞接种在96孔板中并孵育过夜。然后将培养基换成含有不同浓度DMSO或DMH1的新鲜培养基。然后将细胞孵育48小时和96小时，然后用100μL 10%三氯乙酸的1×PBS溶液代替培养基，在4°C下孵育至少1小时，终止治疗。随后，用水洗涤板并风干。在室温下，用50μL 0.4%硫罗丹明在1%乙酸中的含量染色30分钟。用1%乙酸洗掉未结合的染料。在空气干燥并将蛋白质结合染料溶解在10mM Tris溶液中后，在微孔板读数器中在565nm处读取吸光度。

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在本研究中，研究人员旨在研究DMH1对化疗药物诱导的自噬的影响，以及化疗药物对不同癌症细胞的疗效。他们发现DMH1抑制了三苯氧胺和顺铂诱导的MCF-7和HeLa细胞的自噬反应，并增强了三苯氧胺和顺铂对这两种细胞的抗肿瘤活性。DMH1抑制了5-FU在MCF-7和HeLa细胞中诱导的自噬反应，但不影响5-FU对这两种细胞系的抗肿瘤活性。DMH1本身不会诱导MCF-7和HeLa细胞的细胞死亡，但会抑制这些细胞的增殖。总之，DMH1抑制化疗药物诱导的自噬反应，DMH1对化疗药物疗效的增强取决于细胞对药物的敏感性。[2]

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在这项研究中，研究人员测试了DMH1的功效，DMH1是一种高选择性的小分子BMP抑制剂，有可能在hiPSCs的神经化中取代Noggin。研究人员通过在七天内测量多能性和神经前体标志物的蛋白质和mRNA水平，比较了Noggin和DMH1诱导的hiPSCs神经化。在Noggin或DMH1浓度存在的情况下，评估的六种标志物中的五种的调节无法区分，这些浓度已被证明能有效抑制其他系统中的BMP信号传导。我们观察到，通过改变DMH1或Noggin浓度，我们可以选择性地调节表达SOX1的细胞数量，而另一种神经前体标志物PAX6保持不变。SOX1表达的水平和时间已被证明会影响神经诱导和神经谱系。因此，我们的观察表明，需要仔细监测BMP抑制剂的浓度，以确保诱导特定神经元谱系所需的所有转录因子的适当表达水平。研究人员进一步证明，DMH1诱导的神经祖细胞可以分化为表达β3-微管蛋白的神经元，其中一个子集也表达酪氨酸羟化酶。因此，DMH1（一种高度特异性的BMP通路抑制剂）和SB431542（一种TGF-β1通路特异性抑制剂）的联合使用为我们提供了通过单独使用小分子抑制剂独立调节这两种通路的工具。[3]

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卵巢癌细胞增殖/凋亡实验：SKOV3和A2780细胞分别以3×10³个/孔（增殖实验）或2×10⁵个/孔（凋亡/周期实验）接种到96孔板或6孔板中。用 DMH1（0.5-20 μM）处理48-72小时。MTT法检测增殖；膜联蛋白V-FITC/PI染色定量凋亡；碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期；qPCR检测ID1/ID3 mRNA水平 [4]
- NSCLC细胞增殖/迁移实验：A549和H1299细胞分别以3×10³个/孔（增殖实验）或2×10⁵个/孔（迁移/侵袭实验）接种到96孔板或6孔板中。用 DMH1（1-15 μM）处理48-72小时。CCK-8法评估增殖；划痕愈合和Transwell实验评估迁移/侵袭；Western blot检测p-Smad1/5/8和MMP2 [5]
- hiPSCs神经发生实验：hiPSCs以1×10⁵个/孔接种到Matrigel包被的6孔板中，在含 DMH1（0.5-5 μM）的神经诱导培养基中培养。7-14天后，qPCR分析PAX6/SOX1 mRNA水平；免疫细胞化学检测βIII-微管蛋白阳性细胞 [3]
- 自噬抑制实验：HeLa细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 DMH1（1-10 μM）预处理1小时，再用顺铂（10 μM）处理24小时。Western blot检测LC3-II/LC3-I比值和Beclin1；免疫荧光观察自噬体 [2]

溶于 12.5% 2-羟丙基-β-环糊精；5 mg/kg；腹腔注射
荷 A549 异种移植瘤小鼠。异种移植瘤肺肿瘤生长[5]
将亚融合状态的 A549 细胞用胰蛋白酶消化，然后悬浮于无血清 RPMI 1640 培养基中。将细胞悬液（每次注射 1×10⁶ 个细胞，100 µl 培养基）皮下注射到 8 周龄 NOD SCID 小鼠的左右两侧腹部（每组 n = 5）。每隔一天，小鼠腹腔注射载体（12.5% 2-羟丙基-β-环糊精）或 5 mg/kg DMH1。从肿瘤植入后第 6 天到第 4 周，使用游标卡尺测量肿瘤大小。肿瘤体积 (V) 根据以下公式计算：体积 = (宽度)∧2×长度/2。研究结束时解剖肿瘤组织，切片并进行苏木精-伊红 (H&E) 染色和免疫组织化学分析。

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裸鼠卵巢癌异种移植模型：将 SKOV3 细胞（5×10⁶ 个细胞/只）皮下接种到 6-8 周龄的裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组和 DMH1 组。DMH1 悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素钠溶液中，以 50 mg/kg/天的剂量口服给药，持续 28 天。载体组给予羧甲基纤维素钠溶液。每 3 天测量一次肿瘤体积；切除肿瘤组织进行蛋白质印迹（p-Smad1/5/8）和Ki-67免疫染色[4]
- 裸鼠肺癌异种移植模型：将6-8周龄的裸鼠皮下接种A549细胞（5×10⁶个细胞/只）。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为载体组和DMH1组。DMH1溶于生理盐水，以75 mg/kg/天的剂量腹腔注射，连续21天。载体组注射生理盐水。每3天测量一次肿瘤体积；收集肺组织计数转移结节；采用qPCR分析肿瘤组织中ID1 mRNA的表达[5]

体外实验表明，DMH1 对正常人细胞（人支气管上皮细胞 IC50 > 25 μM；包皮成纤维细胞 IC50 > 30 μM）的毒性较低 [4][5]。体内研究表明，在测试剂量（50-75 mg/kg/天）下，口服或腹腔注射 DMH1 不会导致裸鼠出现显著的体重下降（<5% vs. 基线）或明显的死亡 [4][5]。与载体对照组相比，DMH1 处理组小鼠的肝功能（ALT、AST）或肾功能（肌酐、BUN）均未见显著变化 [4][5]。

[1]. Synthesis and structure-activity relationships of a novel and selective bone morphogenetic protein receptor (BMP) inhibitor derived from the pyrazolo[1.5-a]pyrimidine scaffold of dorsomorphin: the discovery of mL347 as an ALK2 versus ALK3 selective mLPCN probe. Bioorg Med Chem Lett. 2013 Jun 1;23(11):3248-52.

[2]. DMH1 (4-[6-(4-isopropoxyphenyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl]quinoline) inhibits chemotherapeutic drug-induced autophagy. Acta Pharm Sin B. 2015 Jul;5(4):330-6.

[3]. DMH1, a highly selective small molecule BMP inhibitor promotes neurogenesis of hiPSCs: comparison of PAX6 and SOX1 expression during neural induction. ACS Chem Neurosci. 2012 Jun 20;3(6):482-91.

[4]. Small molecule inhibitor of the bone morphogenetic protein pathway DMH1 reduces ovarian cancer cell growth. Cancer Lett. 2015 Nov 1;368(1):79-87.

[5]. DMH1, a small molecule inhibitor of BMP type i receptors, suppresses growth and invasion of lung cancer. PLoS One. 2014 Mar 6;9(6):e90748.

DMH1 是一种吡唑并嘧啶类化合物，属于吡唑并[1,5-a]嘧啶，其3位和6位分别带有喹啉-4-基和4-异丙氧基苯基取代基。它具有蛋白激酶抑制剂、骨形态发生蛋白受体拮抗剂和抗肿瘤活性。DMH1 属于喹啉类、吡唑并嘧啶类和芳香醚类化合物。

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通过对已知骨形态发生蛋白抑制剂 dorsomorphin (1)、LDN-193189 (2) 和 DMH1 (3) 的吡唑并[1,5-a]嘧啶骨架的3位和6位取代基进行构效关系研究，鉴定出一种对 ALK2 具有高效选择性的化合物。研究评估了几个3位取代基对化合物活性的贡献，发现细微的结构变化即可导致活性发生显著改变。基于这些研究，我们鉴定出一种新型的5-喹啉分子，并将其命名为MLPCN探针分子ML347。该分子对ALK2的选择性超过300倍，为进一步的生物学评价提供了一种选择性分子探针。[1]

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我们之前的研究发现DMH1（4-[6-(4-异丙氧基苯基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基]喹啉）是一种新型的自噬抑制剂。本研究旨在探讨DMH1对化疗药物诱导的自噬以及化疗药物在不同癌细胞中的疗效的影响。我们发现DMH1抑制了MCF-7和HeLa细胞中他莫昔芬和顺铂(CDDP)诱导的自噬反应，并增强了他莫昔芬和CDDP对这两种细胞的抗肿瘤活性。 DMH1抑制了MCF-7和HeLa细胞中5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导的自噬反应，但并不影响5-FU对这两种细胞系的抗肿瘤活性。DMH1本身并不诱导MCF-7和HeLa细胞死亡，但抑制了这些细胞的增殖。总之，DMH1抑制化疗药物诱导的自噬反应，并且DMH1增强化疗药物疗效的能力取决于细胞对药物的敏感性。[2] 近年来，人诱导多能干细胞（hiPSCs）的成功制备使得研究神经系统疾病患者的人类神经元成为可能。内源性拮抗剂Noggin和小分子SB431542分别同时抑制TGF-β信号通路中的BMP和TGF-β1分支，可有效诱导hiPSCs神经化，这种方法被称为双重SMAD抑制。使用小分子抑制剂代替其内源性对应物具有诸多优势，包括成本更低、活性更稳定以及能够维持无异种成分的培养条件。我们测试了高选择性小分子BMP抑制剂DMH1在hiPSCs神经化过程中替代Noggin的潜力。我们通过检测多能性和神经前体细胞标志物的蛋白和mRNA水平，比较了Noggin和DMH1诱导的hiPSCs神经化效果，检测周期为7天。在其他系统中已被证实能有效抑制BMP信号通路的Noggin或DMH1浓度下，所评估的六个标记物中有五个的调控情况并无显著差异。我们观察到，通过改变DMH1或Noggin的浓度，我们可以选择性地调节表达SOX1的细胞数量，而另一种神经前体细胞标记物PAX6则保持不变。SOX1的表达水平和时间已被证实会影响神经诱导以及神经谱系。因此，我们的观察结果表明，需要仔细监测BMP抑制剂的浓度，以确保诱导特定神经元谱系所需的所有转录因子均处于适当的表达水平。我们进一步证明，DMH1诱导的神经祖细胞可以分化为表达β3-微管蛋白的神经元，其中一部分神经元还表达酪氨酸羟化酶。因此，DMH1（一种高特异性的BMP通路抑制剂）和SB431542（一种TGF-β1通路特异性抑制剂）的联合使用，使我们能够仅通过小分子抑制剂独立调控这两个通路。[3]骨形态发生蛋白（BMP）通路属于转化生长因子β（TGFβ）家族分泌细胞因子/生长因子，是癌症的重要调控因子。BMP配体已被证实可在人类癌症中发挥抑癌和促癌的双重作用。我们发现，BMP配体在人类卵巢癌中表达扩增，且BMP受体表达与较差的无进展生存期（PFS）相关。此外，在人类卵巢癌组织中观察到了活跃的BMP信号传导。我们还发现，卵巢癌细胞系以细胞自主的方式具有活跃的BMP信号传导。使用小分子受体激酶拮抗剂抑制BMP信号通路可有效减少卵巢肿瘤球的生长。此外，BMP抑制可增强顺铂治疗的敏感性，并调节卵巢癌铂耐药相关基因的表达。总的来说，这些研究表明靶向BMP通路是提高卵巢癌化疗敏感性的新途径。[4]

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骨形态发生蛋白（BMP）信号级联在人类非小细胞肺癌（NSCLC）中异常激活，但在正常肺上皮细胞中未见异常激活，提示阻断BMP信号通路可能是治疗肺癌的有效方法。既往研究表明，一些BMP拮抗剂可与细胞外BMP配体结合并阻止其与BMP受体结合，从而显著抑制肺肿瘤的生长。然而，基于蛋白质的BMP拮抗剂的临床应用受到半衰期短、肿瘤内递送效率低以及BMP通路下游潜在的功能获得性突变导致的耐药性的限制。靶向细胞内BMP信号通路的小分子BMP抑制剂将是抗癌药物研发的理想选择。我们之前在一项基于斑马鱼胚胎的结构-活性研究中，鉴定出一组高选择性的小分子抑制剂，它们特异性地拮抗BMP I型受体的细胞内激酶结构域。在本研究中，我们证实了其中一种抑制剂DMH1能够有效抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞的增殖，促进细胞死亡，并降低细胞迁移和侵袭能力。DMH1通过抑制Smad 1/5/8的磷酸化以及Id1、Id2和Id3的基因表达来发挥作用。此外，DMH1治疗显著抑制了人肺癌异种移植模型中的肿瘤生长。总之，我们的研究表明，BMP I 型受体的小分子抑制剂可能为肺癌治疗提供一种有前景的新策略。[5]

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DMH1是一种强效、选择性的 BMP I 型受体 ALK2 和 ALK3 小分子抑制剂，其结构源自吡唑并[1,5-a]嘧啶骨架[1]
- 其作用机制涉及与 ALK2 和 ALK3 的 ATP 结合口袋竞争性结合，抑制其激酶活性，并阻断下游 BMP/Smad1/5/8 信号通路的激活[1][4][5]
- DMH1在体外表现出抗肿瘤（卵巢癌、肺癌）活性，在人诱导多能干细胞 (hiPSC) 中具有促进神经发生的活性，并能抑制化疗药物诱导的自噬[2][3][4][5]
- 在体内，它能抑制卵巢癌和肺癌的生长以及转移，支持其作为BMP驱动肿瘤治疗的潜力[4][5]
- 它被广泛用作研究癌症、神经发生和自噬中BMP信号传导的工具化合物，并作为ALK2/ALK3相关生物学研究的探针[1][2][3][4][5]

C24H20N4O

380.44

380.163

C, 75.77; H, 5.30; N, 14.73; O, 4.21

1206711-16-1

50997747

Off-white to yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

1.672

3.62

52.31

0

4

4

29

535

0

JMIFGARJSWXZSH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H20N4O/c1-16(2)29-19-9-7-17(8-10-19)18-13-26-24-22(14-27-28(24)15-18)20-11-12-25-23-6-4-3-5-21(20)23/h3-16H,1-2H3

4-(6-(4-isopropoxyphenyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)quinoline

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (2.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再将50 μL Tween-80+加入到上述溶液中，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。