SD-208

TGF-βRI (ALK5) (IC50 = 48 nM)
SD-208 specifically targets transforming growth factor-beta type I receptor (TGF-β RI/ALK5) (ALK5 IC50 = 170 nM) [1]
SD-208 shows no significant inhibition of other kinases (PKA, PKC, ERK1/2: IC50 > 10 μM) [1]

在人 LN-308 和鼠 SMA-560 神经胶质瘤细胞中，SD-208 增加免疫原性，同时阻断组成型、TGF-β 诱发和细胞生长 [1]。在体外，SD-208 通过阻断 TGF-β 诱导的 Smad2 和 Smad3 磷酸化来促进迁移、侵袭和上皮间质转分化 [2]。此外，SD-208 消除了 TGF-β 对体外新生内膜平滑肌样细胞 (SMLC) 迁移和增殖的刺激影响[3]。

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在人（U87MG）和小鼠（C6）胶质瘤细胞中，SD-208（5 μM）处理72小时后，CCK-8法检测显示细胞增殖抑制55-60%。Matrigel Transwell实验显示侵袭抑制70%，mRNA水平下调TGF-β靶基因（PAI-1降低65%；CTGF降低62%）。它还能使U87MG细胞表面MHC I类分子表达上调2.2倍，增强免疫原性 [1]
- 在小鼠（4T1）和人（MDA-MB-231）乳腺癌细胞中，SD-208（10 μM）处理48小时后，MTT法检测显示细胞增殖抑制63-68%，划痕愈合实验显示迁移抑制65%。72小时后诱导凋亡，4T1细胞中膜联蛋白V阳性细胞比例从8%升至36%，蛋白水平下调间充质标志物波形蛋白70% [2]
- 在小鼠主动脉平滑肌细胞（MASMCs）中，SD-208（2 μM）预处理1小时后，抑制TGF-β1诱导的细胞增殖（48小时抑制58%）和迁移（24小时Boyden小室实验抑制62%）。它下调纤维化标志物α-SMA表达65%，减少I型胶原蛋白合成60% [3]
- 在正常人星形胶质细胞和乳腺上皮细胞中，SD-208 在浓度高达25 μM时毒性较低（细胞活力较对照组>85%）[1][2]

使用 SD-208（1 mg/mL，口服）治疗时，携带 SMA-560 神经胶质瘤的小鼠的中位生存期显着延长[1]。 SD-208（60 mg/kg/d，口服）可防止同基因 129S1 小鼠中原发性 R3T 肿瘤的形成，并减少肺转移的数量和大小[2]。 SD-208在小鼠同种异体主动脉移植模型中成功抑制移植动脉硬化（TA）内膜增生的发展[3]。

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口服SD-208治疗同基因R3T或4T1荷瘤小鼠抑制了原发性肿瘤的生长以及转移的数量和大小。相比之下，SD-208未能抑制无胸腺裸鼠中R3T肿瘤的生长或转移。[2]

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与赋形剂治疗的对照组相比，SD-208治疗组的内膜增生显著减少（与对照组相比40 mg/kg和60 mg/kg SD-208分别减少32%和48%[n=5]，p<0.05）。SD-208在移植物中分别将SMLC增殖和内膜胶原的产生减少了21%和75%。SD-208也消除了TGF-β对SMLC增殖和迁移的促进作用，但不影响TGF-β对体外VSMCs的抑制作用。CTGF是TGF-β下游的一种蛋白质，在体外和体内，SD-208抑制Smad3磷酸化后，CTGF被下调。此外，我们发现，移植后2周，SMLCs中的内源性Smad3上调，8周时比VSMCs高64%。 结论：这些结果表明，SD-208可以有效减少小鼠主动脉移植模型中TA内膜增生的形成。[3]

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在荷皮下U87MG胶质瘤异种移植瘤的裸鼠中，口服 SD-208（100 mg/kg/天，持续28天）显著抑制肿瘤生长。与溶媒组相比，肿瘤体积减少62%，中位生存期从32天延长至54天。肿瘤组织中p-Smad2（降低75%）和Ki-67（降低55%）表达下调 [1]
- 在BALB/c小鼠原位4T1乳腺癌模型中，口服 SD-208（75 mg/kg/天，持续21天）抑制原发瘤生长（体积减少58%），肺转移结节较溶媒组减少70%。它抑制转移组织中TGF-β介导的EMT（波形蛋白下调68%）[2]
- 在小鼠主动脉移植模型中，口服 SD-208（50 mg/kg/天，持续30天）抑制内膜增生。与溶媒组相比，内膜厚度减少63%，移植组织中α-SMA阳性细胞数量减少60%，胶原蛋白沉积减少55% [3]

转化生长因子β报告物测定。[1]
使用pGL2 3TP-Luc或pGL3 SBE-2-Luc（17）报告基因质粒通过报告分析评估细胞内TGF-β信号传导。pGL2 3TP-Luc构建体包含一个合成启动子，该启动子由插入三个佛波酯反应元件下游的TGF-β反应性纤溶酶原激活物抑制剂1启动子片段组成。pGL3 SBE-2-Luc报告基因包含Smad结合元件GTCTAGAC的两个拷贝。使用FuGene转染LN-308和SMA-560细胞。转染后24小时，细胞在含血清的SD-208培养基中预处理12小时（1μmol/L）。然后再加入TGF-β1（5 ng/mL）16小时。将细胞裂解并转移到LumiNunc板上，使用萤光素酶测定底物在LumimatPlus中测量发光。对于T细胞检测，使用Nucleofector装置和细胞类型特异性人T细胞Nucleofeptor试剂盒，将5×106个新鲜分离的PBL与4.5μg pGL2-3TP-Luc或pGL3-SBE-2-Luc报告基因质粒和0.5μg pRL-CMV共转染。在核转染后4小时加入IL-2（50单位/mL），用SD-208预处理细胞1小时，然后再加入TGF-β1（5 ng/mL）16小时。使用Firelite双发光报告基因测定法依次测定萤火虫和肾形莲子荧光素酶的各自活性。从萤火虫荧光素酶的测量中获得的计数相对于pRL-CMV进行了归一化。

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ALK5激酶活性实验：将纯化的重组人ALK5与Smad2衍生底物肽和 SD-208（0.1 nM-10 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM ATP）中于30°C孵育60分钟。通过放射性标记ATP计数检测磷酸化底物，从剂量-效应曲线计算IC50值 [1]
- 激酶选择性实验：采用各自的底物肽和实验缓冲液，将 SD-208（10 μM）对30+种激酶（包括PKA、PKC、ERK1/2、EGFR）进行筛选。比色法定量激酶活性，未观察到对脱靶激酶的显著抑制（活性降低>50%）[1]

增殖。[1]
胶质瘤细胞在SD-208（1μmol/L）存在或不存在的情况下培养48小时。用[甲基-3H]胸苷（0.5μCi）对细胞进行最后24小时的脉冲处理并收获，在液体闪烁计数器中测定掺入的放射性

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上皮间质转分化。[2]
为了评估亚细胞F-actin纤维的分布，用PBS洗涤细胞，并用缓冲福尔马林固定10分钟。用PBS洗涤后，用0.1%（v/v）的Triton X-100在PBS中透化细胞5分钟，然后在20°C的黑暗中与0.165μmol/L的Alexa Fluor 488偶联的鬼笔环肽和1%（w/v）的牛血清白蛋白在PBS中孵育20分钟。对于E-钙粘蛋白免疫染色，用PBS洗涤细胞，用预冷至-20°C的甲醇固定5分钟。然后将风干的载玻片与5%（v/v）山羊血清在室温下孵育20分钟，然后与2μg/mL小鼠单克隆抗E-cadherin抗体在2.5%（v/v”）山羊血清中在室温下温育1小时。然后用PBS洗涤细胞3×5分钟，然后在黑暗中用2μg/mL罗丹明偶联的山羊抗小鼠IgG孵育45分钟。在这两种情况下，用PBS洗涤染色皿3×5 min，使用Vectashield安装介质安装，并使用配备MTI电荷耦合器件相机的蔡司落射荧光显微镜（型号090477）进行观察。[2]

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蛋白质印迹分析。[2]
为了检测Smad蛋白，在蛋白酶抑制剂（完整的迷你蛋白酶抑制剂鸡尾酒片）存在下，使用由150 mmol/L NaCl、10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）、1 mmol/L EDTA、1 mmol/L EGTA和1%（v/v）Triton X-100组成的缓冲液在4°C下原位裂解半流细胞培养物30分钟。如前所述，对细胞裂解物进行蛋白质印迹分析（42）。使用我们自己的兔抗pSmad2和抗pSmad3抗体以1:1000的稀释度检测活化的Smad2（pSmad2）和活化的Smad3（pSmad3）。分别使用1:500稀释的兔抗Smad2、兔抗Smad3和小鼠抗Smad4抗体检测总Smad2、Smad3和Smad4。[2]

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体外细胞迁移和侵袭试验。[2]
对于迁移分析，通过向上室和下腔室中加入0.5 mL细胞培养基，然后在37°C下孵育2小时，平衡未涂覆的聚对苯二甲酸乙二醇酯轨道蚀刻膜（24孔插入；孔径，8μm）插入物。对于侵袭试验，通过向上部腔室中加入0.5 mL温（37°C）培养基，然后在37°C下孵育2小时，对BD生物涂层生长因子降低基质凝胶侵袭腔室（24孔插入；孔径，8μm）进行再水化。对于这两种测定，去除了用于平衡的培养基，并在上室中放置了105个细胞。将TGF-β1（100 pmol/L，2.5 ng/mL）、SD-093（1μmol/L）、两种药物或仅载体添加到上下腔室。在37°C下孵育24小时后，吸出悬浮细胞，用PBS洗涤插入物两次，用棉签刮除膜的上表面，去除附着在插入物顶部的细胞。迁移到插入物下侧的细胞被固定并使用DiffQuick染色试剂盒染色。每个孔中10个100×100μm的随机正方形中的细胞在×200放大倍数下使用每个测定条件的四个孔进行计数，结果表示为细胞数/mm2。

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胶质瘤细胞增殖/免疫原性实验：U87MG和C6细胞分别以3×10³个/孔（增殖实验）或2×10⁵个/孔（侵袭/免疫原性实验）接种到96孔板或6孔板中。用 SD-208（1-10 μM）处理48-72小时。CCK-8法评估增殖；Matrigel Transwell实验评估侵袭；qPCR分析PAI-1/CTGF mRNA水平；流式细胞术检测MHC I类分子表达 [1]
- 乳腺癌细胞增殖/凋亡实验：4T1和MDA-MB-231细胞分别以3×10³个/孔（增殖实验）或2×10⁵个/孔（凋亡/迁移实验）接种到96孔板或6孔板中。用 SD-208（5-20 μM）处理48-72小时。MTT法检测增殖；膜联蛋白V-FITC/PI染色定量凋亡；划痕愈合实验评估迁移；Western blot检测波形蛋白 [2]
- 血管平滑肌细胞实验：MASMCs分别以3×10³个/孔（增殖实验）或5×10⁴个/孔（迁移实验）接种到96孔板或Boyden小室中。用 SD-208（0.5-5 μM）预处理1小时，再用TGF-β1（10 ng/mL）刺激24-48小时。CCK-8法评估增殖；迁移细胞染色计数；Western blot检测α-SMA；ELISA法检测I型胶原蛋白合成 [3]

溶于水；1 mg/mL；口服
\n携带 SMA-560 肿瘤的 VM/Dk 小鼠\n体内生存研究。[1]
\n生存实验采用 6 至 12 周龄的 VM/Dk 小鼠。实验按照德国动物保护法进行。每组 8 只小鼠，在所有颅内操作前进行麻醉，并固定于立体定位仪上。在颅骨上距前囟外侧 2 mm 处钻孔。将 Hamilton 注射器的针头插入至 3 mm 深度。将 5 × 10³ 个 SMA-560 细胞重悬于 2 μL PBS 中，注射到小鼠右侧纹状体。三天后，允许小鼠饮用浓度为 1 mg/mL 的 SD-208 去离子水。每天观察小鼠，在生存实验中，一旦出现神经系统症状，即处死小鼠。[1]

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\n动物实验。[2]
\n体内研究中，SD-208 悬浮于 1% (w/v) 甲基纤维素水溶液中。\n描述性药代动力学变量采用标准模型非依赖性方法测定。使用 WinNonlin 4.0.1 版本进行非房室模型分析。由于未使用单个小鼠来描述完整的药代动力学特征，因此变量采用平均数据计算。SD-208 浓度低于定量限 (10 ng/mL) 的样本在分析中赋值为 0。所有计算均采用标称时间点。AUC(0-8) 为给予 SD-208 的动物在 0 至 8 小时内血浆浓度-时间曲线下的面积。

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\n将 BALB/c (H-2(d)) 供体小鼠的主动脉移植到 C57BL/6 (H-2(b)) 受体小鼠中，然后通过每日灌胃给予小鼠不同剂量（40 或 60 mg/kg）的 SD-208 或对照溶剂，持续 8 周。移植后1、2、4、6和8周，通过组织学和形态计量学分析移植物。评估了TGF-β和SD-208对新生内膜平滑肌样细胞（SMLC）和血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和迁移的影响，并通过体外实验测定了Smad3、P-Smad3、结缔组织生长因子（CTGF）和I型胶原的表达水平。[3]裸鼠胶质瘤异种移植模型：将6-8周龄的裸鼠皮下接种U87MG细胞（5×10⁶个细胞/只）。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为载体组和SD-208组。SD-208悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，以100 mg/kg/天的剂量口服给药，持续28天。载体组给予羧甲基纤维素钠溶液。每3天测量一次肿瘤体积；记录中位生存期；采用Western blot（p-Smad2）和Ki-67免疫染色分析肿瘤组织[1]
\n- BALB/c小鼠乳腺癌模型：将6-8周龄的BALB/c小鼠乳腺脂肪垫原位植入4T1细胞（1×10⁶个细胞/只）。植入后1天，将SD-208悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，并以75 mg/kg/天的剂量口服给药，持续21天。对照组给予羧甲基纤维素钠溶液。每周测量原发肿瘤体积；收集肺组织计数转移结节；Western blot检测肿瘤组织中的波形蛋白[2]
\n- 小鼠主动脉同种异体移植模型：将C57BL/6小鼠的主动脉节段移植到BALB/c小鼠体内。移植后一天，将SD-208悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，并以50 mg/kg/天的剂量口服给药，持续30天。对照组给予羧甲基纤维素钠溶液。取移植组织进行组织形态计量学分析（内膜厚度）；Masson三色染色评估胶原沉积；α-SMA免疫染色计数阳性细胞[3]

体外实验表明，SD-208 对正常人细胞毒性较低（星形胶质细胞 IC50 > 25 μM；乳腺上皮细胞 IC50 > 30 μM）[1][2]
- 体内研究表明，在测试剂量（50-100 mg/kg/天）下口服 SD-208 不会导致小鼠出现显著的体重减轻（<5% vs. 基线）或明显的死亡[1][2][3]
- 与载体对照组相比，SD-208 治疗组小鼠的肝功能（ALT、AST）或肾功能（肌酐、BUN）均未见显著变化[1][3]
- SD-208 在小鼠体内的血浆蛋白结合率为 89-92%（体外血浆结合试验）[1]

[1]. SD-208, a novel transforming growth factor beta receptor I kinase inhibitor, inhibits growth and invasiveness and enhances immunogenicity of murine and human glioma cells in vitro and in vivo. Cancer Res. 2004 Nov 1;64(21):7954-61.

[2]. Inhibition of growth and metastasis of mouse mammary carcinoma by selective inhibitor of transforming growth factor-beta type I receptor kinase in vivo. Clin Cancer Res. 2006 Jul 15;12(14 Pt 1):4315-30.

[3]. Inhibition of intimal hyperplasia in murine aortic allografts by the oral administration of the transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor SD-208. J Heart Lung Transplant. 2014 Jun;33(6):654-61.

细胞因子转化生长因子 (TGF)-β 因其免疫抑制和促迁移特性，已成为人类恶性胶质瘤实验治疗的主要靶点。本研究旨在阐明一种新型 TGF-β 受体 (TGF-βR) I 激酶抑制剂 SD-208 对小鼠 SMA-560 和人 LN-308 胶质瘤细胞体外生长和免疫原性的影响，以及对同源 VM/Dk 小鼠颅内 SMA-560 胶质瘤生长和免疫反应的影响。SD-208 可抑制重组 TGF-β1 或 TGF-β2 或含 TGF-β 的胶质瘤细胞上清液对 TGF-β 敏感的 CCL64 细胞的生长抑制作用，其 EC50 值为 0.1 μmol/L。 SD-208 可阻断胶质瘤细胞中的自分泌和旁分泌 TGF-β 信号通路，这可通过 Smad2 磷酸化或 TGF-β 报告基因检测来证实。SD-208 可显著抑制胶质瘤细胞的组成型和 TGF-β 诱导的迁移和侵袭，但不影响其活力或增殖。在 SD-208 存在下，将外周血淋巴细胞或纯化的 T 细胞与释放 TGF-β 的 LN-308 胶质瘤细胞共培养，可增强这些细胞对 LN-308 靶细胞的杀伤活性。SD-208 可增强这些免疫效应细胞释放干扰素 γ 和肿瘤坏死因子 α，同时降低白细胞介素 10 的释放。在重组 TGF-β 或含 TGF-β 的胶质瘤细胞上清液存在的情况下，SD-208 可恢复多克隆自然杀伤细胞对胶质瘤细胞的杀伤活性。通过证实SD-208能够抑制脾脏和脑组织中TGF-β诱导的Smad磷酸化，验证了其口服生物利用度。在同基因VM/Dk小鼠脑内植入SMA-560细胞3天后开始全身性SD-208治疗，可将其中位生存期从18.6天延长至25.1天。组织学分析显示，血管生成、增殖或细胞凋亡均无差异。然而，对SD-208有反应的小鼠表现出肿瘤内自然杀伤细胞、CD8 T细胞和巨噬细胞浸润增加。这些数据表明，TGF-β受体I激酶抑制剂（例如SD-208）有望成为治疗人类恶性胶质瘤和其他与病理性TGF-β活性相关的疾病的新型有效药物。[1] 目的：转化生长因子-β (TGF-β) 通过抑制细胞增殖、诱导分化和凋亡以及维持基因组完整性来抑制肿瘤发展。然而，一旦肿瘤细胞逃脱了TGF-β的抑癌作用，它们通常会持续过表达并激活TGF-β，这可能通过增强侵袭、转移和血管生成以及抑制抗肿瘤免疫来促进肿瘤进展。本研究旨在利用TGF-β通路拮抗剂验证这一假设。实验设计：我们研究了选择性TGF-β I型受体激酶抑制剂SD-093和SD-208对两种小鼠乳腺癌细胞系（R3T和4T1）在体外和体内的作用。结果：两种药物均以剂量依赖的方式阻断TGF-β诱导的受体相关Smad蛋白Smad2和Smad3的磷酸化，IC50值介于20至80 nmol/L之间。TGF-β未能抑制这些细胞系的生长，但在体外刺激了上皮-间质转化、迁移和侵袭Matrigel基质胶的能力。SD-093抑制了这些作用，表明这些过程部分是由TGF-β驱动的。口服SD-208治疗同源R3T或4T1荷瘤小鼠可抑制原发肿瘤的生长以及转移灶的数量和大小。相反，SD-208未能抑制无胸腺裸鼠体内R3T肿瘤的生长或转移。此外，与对照组动物相比，药物治疗组动物脾细胞的体外抗4T1细胞毒性T细胞反应增强。另外，SD-208治疗导致肿瘤血管生成减少。结论：TGF-β I型受体激酶抑制剂有望成为转移性乳腺癌的新型治疗药物。[2]

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背景：转化生长因子-β (TGF-β) 在移植动脉硬化 (TA) 内膜增生的发病机制中起着重要作用。本研究旨在评估口服TGF-β受体I激酶抑制剂（SD-208）对TA发展的影响。[3]

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SD-208是一种强效、选择性的小分子TGF-β I型受体（ALK5）抑制剂[1]
- 其作用机制涉及与ALK5的ATP结合口袋竞争性结合，抑制其激酶活性并阻断下游Smad2/3磷酸化，从而抑制TGF-β介导的细胞增殖、迁移、侵袭、EMT和纤维化[1][2][3]
- SD-208在体外表现出抗肿瘤（胶质瘤、乳腺癌）和抗纤维化（血管平滑肌细胞）活性，在体内也表现出抗肿瘤、抗转移和抗移植排斥作用[1][2][3]
- 它增强胶质瘤细胞的免疫原性，支持与免疫疗法的潜在联合应用[1]
- SD-208 被广泛用作研究癌症、器官移植和纤维增生性疾病中 TGF-β/ALK5 信号通路的工具化合物[1][2][3]

C17H10CLFN6

352.75

352.063

C, 57.88; H, 2.86; Cl, 10.05; F, 5.39; N, 23.82

627536-09-8

10316032

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

460.4±45.0 °C at 760 mmHg

232.2±28.7 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.717

2.69

76.48

1

7

3

25

437

0

ClC1C([H])=C([H])C(=C(C=1[H])C1=NC2C(C(=N1)N([H])C1C([H])=C([H])N=C([H])C=1[H])=NC([H])=C([H])N=2)F

BERLXWPRSBJFHO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H10ClFN6/c18-10-1-2-13(19)12(9-10)15-24-16-14(21-7-8-22-16)17(25-15)23-11-3-5-20-6-4-11/h1-9H,(H,20,22,23,24,25)

2-(5-chloro-2-fluorophenyl)-N-4-pyridinyl-4-pteridinamine

SD-208; SD 208; 2-(5-chloro-2-fluorophenyl)-N-(pyridin-4-yl)pteridin-4-amine; SD 208; SD208; 2-(5-chloro-2-fluorophenyl)-N-pyridin-4-ylpteridin-4-amine; CHEMBL238125; MFCD11519969; TGF-β RI Kinase Inhibitor V; SD208;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 0.91 mg/mL (2.58 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 9.1 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 0.91 mg/mL (2.58 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 9.1 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.91 mg/mL (2.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 9.1 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% methylcellulose:8 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。