Carnitine palmitoyltransferase I (CPT-I)
Etomoxir (ETO) is an irreversible inhibitor of carnitine palmitoyltransferase 1a (CPT1a). [5]
At concentrations above 5 μM, ETO exhibits off-target effects independent of CPT1a inhibition, including inhibition of mitochondrial adenine nucleotide transporter and complex I of the electron transport chain. [5]

当依托莫昔与CPT-1的催化位点不可逆结合时，它会抑制CPT-1的活性，同时增加移植氧化酶的活性。依托莫昔最初是作为一种探针而开发的，用于检测线粒体外膜定位的线粒体肉碱支架扩增酶-1 (CPT-1)。依托莫昔通过作为氧化酶体增殖剂，刺激心肌中的DNA合成和心肌发育。因此，依托莫昔除了作为CPT-1激动剂外，也被认为是一种PPARα激动剂[1]。依托莫昔已被提出作为激活心脏突变的靶点。它是环氧乙烷激酶肉碱模板转移酶I家族的成员。依托莫昔治疗激活后，肉碱模板转移酶I的活性被不可逆地激活。因此，线粒体中的碱基输入和β-氧化减少，导致胞质中碱基积累和氧化增加。依托莫昔尔的长时程延迟（24 小时）甚至对酶的表达产生了显著影响[2]。

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50 μM 依托莫昔尔 可适度降低经抗 CD3 和抗 CD28 共刺激的原代人 T 细胞的增殖，与对照组相比，总体增殖减少约 2 倍。[5]
尽管增殖减少，但经 50 μM 依托莫昔尔处理的 T 细胞在培养 7 天后，其中央记忆（CCR7⁺CD45RO⁺）和效应记忆（CCR7^-CD45RO⁺）表面标志物的表达水平与对照组相似。[5]
50 μM 依托莫昔尔显著抑制了快速增殖 T 细胞的耗氧率 (OCR)，表明存在高度的 CPT1a 依赖性长链脂肪酸氧化。 [5]
用¹³C₆葡萄糖或¹³C₅谷氨酰胺进行同位素标记显示，增殖T细胞中超过50%的乙酰辅酶A和柠檬酸来源于谷氨酰胺而非葡萄糖。外源性¹³C₁₆棕榈酸酯贡献了约5%的总乙酰辅酶A。[5]
在通过shRNA介导的CPT1a敲低的T细胞中，5 μM ETO对耗氧率（OCR）或细胞外酸化率（ECAR）没有影响；然而，10 μM ETO仍然降低了OCR并增加了ECAR，表明浓度高于5 μM时存在不依赖于CPT1a的作用。[5]
补充1 mM乙酸钠可逆转5 μM ETO的代谢效应，但对更高浓度（50 μM）无效。 [5] 用 50 μM ETO 处理 4 小时后，通过 DCF 荧光测定，活性氧 (ROS) 水平显著升高，超过了 50 μM 过氧化氢处理后的 ROS 生成量。[5] 与未处理的对照组相比，用 50 μM ETO 处理 5 天后，T 细胞中还原型谷胱甘肽 (GSH) 水平显著降低，表明存在严重的氧化应激。[5] 电子显微镜观察显示，用 50 μM ETO 培养的 T 细胞线粒体基质明显肿胀，这种形态学变化与线粒体通透性转换孔 (mPTP) 的开放相一致。[5]

依托莫昔是一种参与游离脂肪酸（FFA）氧化的转录因子，并与重要的酶CPT1相关。P53和Bax的直接反应以及FAO介导的ROS催化生成在db/db模型中的作用，进一步支持了以下事实：P53直接响应Bax，而Bax可被依托莫昔阻断[3]。以20 mg/kg体重的剂量，每日注射一次依托莫昔，连续8天，导致CPT-I特异性活性降低44%。经依托莫昔处理的催化剂中，CPT-I活性降低了44%。与之前的依托莫昔饲喂试验结果一致，Lewis小鼠在接受20 mg/kg依托莫昔治疗8天后，血糖水平保持不变。同样，依托莫昔饲喂对后肢的屠宰质量或体重增加等一般生长性状均无影响。然而，在接受依托莫西治疗的患者中，肝脏和心脏质量均显著增加了11% [4]。\n

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\n依托莫西可抑制骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化成骨细胞的减少，并显著抑制高脂（HF）和db/db饮食喂养小鼠的骨矿物质密度（BMD）和骨断裂强度的下降[3]。在HF和db/db饮食喂养的小鼠中，依托莫西可抑制成骨细胞和小鼠体内线粒体活性氧（ROS）的生成[3]。依托莫西引起的体内肉碱棕榈酰转移酶-I（CPT-I）的部分抑制并不改变心脏长链脂肪酸的摄取和氧化速率[4]。\n

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\n本研究评估了2型糖尿病患者游离脂肪酸（FFA）、ROS生成、线粒体功能障碍和骨矿物质密度（BMD）之间的关联，并探讨了其分子机制。本研究采用CPT1抑制剂Etomoxir、MitoQ和P53抑制剂PFT-α治疗db/db小鼠和高脂（HF）喂养的小鼠。评估骨代谢因子，分离骨髓间充质干细胞（BMSCs）并诱导其向成骨细胞分化。研究还分析了游离脂肪酸（FFA）、脂质过氧化和线粒体DNA（mtDNA）拷贝数与2型糖尿病（T2DM）患者骨密度（BMD）的相关性。结果显示，Etomoxir、MitoQ和PFT-α显著抑制了db/db小鼠和HF喂养小鼠的BMD和骨断裂强度下降，并抑制了BMSCs分化成的成骨细胞的减少。Etomoxir和MitoQ（而非PFT-α）抑制了db/db小鼠和HF喂养小鼠以及成骨细胞中线粒体活性氧（ROS）的生成。此外，Etomoxir、MitoQ和PFT-α显著抑制了成骨细胞的线粒体功能障碍。此外，db/db小鼠和高脂饮食喂养小鼠来源的成骨细胞中线粒体凋亡被激活，而Etomoxir、MitoQ和PFT-α可抑制这种激活。此外，线粒体中P53的积累募集Bax并启动凋亡的分子事件。这些结果表明，脂肪酸氧化导致活性氧（ROS）生成，激活P53/Bax介导的线粒体凋亡，从而导致2型糖尿病（T2DM）中成骨分化减少和骨丢失。[3]\n

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\n虽然肉碱棕榈酰转移酶I（CPT-I）通常被认为是线粒体β-氧化的主要限速位点，但CPT-I是否是心脏中长链脂肪酸（LCFA）总通量的限速步骤尚不完全清楚。心脏中长链脂肪酸（LCFA）通量的另一个重要调控位点是跨肌膜LCFA转运，该过程由CD36和FABPpm（质膜脂肪酸结合蛋白）介导。因此，我们研究了在LCFA-CoA进入线粒体水平上长期药理阻断LCFA通量对肌膜LCFA摄取的影响程度。我们每天给大鼠注射生理盐水或特异性CPT-I抑制剂依托莫昔（etomoxir），剂量为20 mg/kg体重，连续8天。依托莫昔处理组大鼠的心脏CPT-I活性降低了44%。与对照组相比，依托莫昔处理组大鼠心脏的肌膜CD36和FABPpm含量以及LCFA转运能力均未发生改变。此外，在基础代谢和急性诱导的最大代谢需求下，依托莫昔治疗组大鼠心肌细胞的长链脂肪酸（LCFA）摄取和氧化速率以及葡萄糖摄取速率与对照组大鼠无差异。最后，依托莫昔治疗组大鼠的心脏未出现甘油三酯积累。因此，CPT-I似乎并非心脏总LCFA通量的主要限速位点。肌膜LCFA进入而非线粒体LCFA-CoA进入可能是心脏代谢疾病中LCFA通量正常化的一个有前景的靶点[4]。\n\n

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依托莫昔（1 mg/kg，腹腔注射，每周两次，持续8周）显著抑制了db/db小鼠胫骨总骨密度（BMD）、胫骨近端干骺端BMD和胫骨干BMD的下降。 [4]
依托莫昔（1 mg/kg，腹腔注射，每周两次，持续 8 周）显著抑制了 db/db 小鼠股骨断裂强度（股骨干重与断裂力之比）的降低。[4]
在 db/db 小鼠中，依托莫昔对空腹血糖（FBG）水平无显著影响，但显著抑制了血清碱性磷酸酶（ALP）的升高，减少了血清骨钙素（OCN）的降低，并抑制了血清抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的升高。[4]
依托莫昔不改变 db/db 小鼠的血脂谱（FFA、TG、LDL、HDL）。[4]
依托莫昔显著降低了 db/db 小鼠尿液中 8-羟基-2'-脱氧鸟苷（8OH-dG，一种 DNA 氧化损伤标志物）的水平。 [4]
Etomoxir显著抑制了db/db小鼠外周血单核细胞（PBMCs）中脂质过氧化（TBARS水平）的升高。[4]
在喂食高脂（HF）饮食20周的C57BL/6小鼠中（最后10周以1 mg/kg的剂量腹腔注射Etomoxir，每周两次），Etomoxir显著抑制了胫骨总骨密度（BMD）的降低，并促进了分离的骨髓间充质干细胞（BMSCs）的成骨分化（茜素红染色）。[4]

生化指标测定[3]
血液样本在4℃下以3000 rpm离心10分钟。使用ELISA试剂盒，按照制造商说明书测定血清游离脂肪酸（FFA）。血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）采用商业试剂盒进行检测。使用ELISA试剂盒测定血清碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP），以评估成骨和破骨活性。

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脂质过氧化测定[3]
使用Histopaque-1119和Histopaque-1077通过等密度离心分离纯化外周血单核细胞（PBMC）。使用商业试剂盒，按照制造商说明书测定硫代巴比妥酸反应物（TBARS）水平，以评估PBMC和分化成骨细胞中的脂质过氧化水平。

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我们研究了依托莫昔处理对H9c2心肌成肌细胞中从头合成心磷脂（CL）的影响。依托莫昔处理不影响CL合成和重塑酶的活性，但导致[1-14C]棕榈酸或[1-14C]油酸掺入CL的量减少。其机制是，由于膜磷脂酸磷酸水解酶活性增加35%（P < 0.05），脂质合成转向利用1,2-二酰基-sn-甘油的反应，从而降低了脂肪酸通过CL从头合成途径的通量。相反，依托莫昔处理增加了[1,3-3H]甘油掺入CL的量。该机制表现为甘油激酶活性增加33%（P < 0.05），从而导致通过心磷脂（CL）从头合成途径的甘油通量增加。依托莫昔处理抑制了1,2-二酰基-sn-甘油酰基转移酶活性81%（P < 0.05），从而使甘油和脂肪酸不再用于1,2,3-三酰基-sn-甘油的合成，而是用于磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的合成。相反，依托莫昔抑制了肌醇-[3H]掺入磷脂酰肌醇，其机制是抑制了肌醇的摄取。依托莫昔不影响[3H]丝氨酸的摄取，但导致磷脂酰丝氨酸衍生的磷脂酰乙醇胺生成增加。结果表明，依托莫昔治疗对多种代谢前体来源的甘油酯从头合成具有不同的影响。此外，依托莫昔介导甘油和脂肪酸前体向CL[2]的独特且差异化的代谢途径。

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使用RosetteSep T细胞富集试剂盒，通过阴性选择法从健康志愿者中纯化原代人T细胞。细胞培养于添加了10% FBS、10 mM HEPES、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素G和100 µg/ml链霉素的RPMI 1640培养基中。使用包被有抗人CD3和抗人CD28抗体的Dynabeads磁珠以3:1的磁珠与细胞比例激活T细胞。细胞浓度维持在0.8–1.0 × 10^6个细胞/ml。在指定情况下，活化的T细胞（第3天）在对数扩增期间每隔一天用50 μM ETO处理。使用CountBright微珠和细胞活力标记物通过流式细胞术计数活细胞。[5]
为了评估分化情况，用抗CD4、CD8、CD45RO、CCR7抗体和LIVE/DEAD Aqua染料对细胞进行染色。在LSR Fortessa流式细胞仪上进行流式细胞术分析，并使用FlowJo软件分析数据。[5]
为了检测ROS，将T细胞重悬于无酚生长培养基中，并与20 μM二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）孵育30分钟。然后加入50 μM依托莫昔或50 μM H2O2，孵育4-5小时。通过流式细胞术测量2',7'-二氯荧光素（DCF）的荧光强度。 [5]
对于GSH测定，在第6天收集T细胞（对照组或从第3天开始用50 μM ETO处理组），收集于冰冷的甲醇/水（4:1 v/v）混合液中，并加入¹³C₂ ¹⁵N₁-谷胱甘肽重链内标。超声破碎和离心后，将上清液干燥，并用5%磺基水杨酸溶液复溶。采用LC-MS/MS法测定GSH水平。[5]
使用细胞外通量分析仪（Seahorse）评估线粒体功能。将T细胞重悬于含有5.5 mM葡萄糖、不同浓度L-谷氨酰胺（0、2、8 mM）和1 mM丙酮酸钠的XF测定培养基（非缓冲RPMI 1640）中。将细胞以0.3 × 10⁶个/孔的密度接种于CellTak包被的培养板上。在基础条件下以及添加 1.5 μM 寡霉素、1.5 μM FCCP 和 50 μM 依托莫昔后测定 OCR。[5]
对于 shRNA 实验，使用编码针对 CPT1A 的 shRNA 或对照乱序 shRNA（均带有 GFP）的慢病毒载体转导活化的 T 细胞。细胞经分选，纯度 >99%。用 5 μM 或 50 μM ETO 处理后测定 OCR 和 ECAR。在另一组实验中，未转导的 T 细胞在添加 ETO 前于添加了 1 mM 乙酸钠的检测培养基中培养。[5]
对于透射电镜，在 50 μM ETO 存在下扩增的 T 细胞经冷冻、解冻后，由电镜资源实验室进行处理，并使用 Jeol-1010 显微镜成像。 [5]
同位素标记：葡萄糖标记时，细胞在不含葡萄糖/谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中培养1小时，该培养基补充了10%透析胎牛血清（FBS）、2 mM L-谷氨酰胺和10 mM 13C6葡萄糖。谷氨酰胺标记时，培养基中含有10 mM D-葡萄糖和2 mM 13C5谷氨酰胺。棕榈酸酯标记时，细胞用13C16棕榈酸酯（含或不含10 μM BPTES）处理2小时。短链酰基辅酶A用10%三氯乙酸和固相萃取（Oasis HLB柱）提取，然后用LC/ESI/MS/MS（Q Exactive Plus）进行分析。[5]

动物处理[3]
所有动物实验均按照第四军医大学动物伦理委员会批准的程序进行，并严格遵守相关指南。80只雄性C57BLKS/J lar-Leprdb/db小鼠和20只野生型同窝小鼠（8周龄）购自南京大学模式动物研究中心。小鼠饲养于限流室的笼内，温度为23 ± 2 °C，湿度为55 ± 5%，光照周期为12小时光照/12小时黑暗，并喂以常规饲料。db/db小鼠随机分为四组：db/db组、Etomoxir组、MitoQ组和PFT-α组。Etomoxir组小鼠每周腹腔注射两次Etomoxir（1 mg/kg）。MitoQ组小鼠饮用含50 μmol/L MitoQ的饮用水。装有 MitoQ 的水瓶用铝箔包裹，每 3 天更换一次水瓶。PFT-α 组小鼠每周腹腔注射两次 1 mg/kg PFT-α。野生型 (WT) 小鼠则注射溶剂对照。实验周期为 8 周。实验结束时，采集外周血和骨髓细胞样本进行检测。
100 只 C57BL/6 小鼠购自第四军医大学实验动物中心。小鼠随机分为五组：对照组、高脂饮食组、Etomoxir 组、MitoQ 组和 PFT-α 组。高脂饮食组、Etomoxir 组、MitoQ 组和 PFT-α 组小鼠均喂食高脂饮食 20 周，并在最后 10 周分别给予 Etomoxir、MitoQ 和 PFT-α 治疗。 Etomoxir、MitoQ 和 PFT-α 的给药方式与 db/db 小鼠的治疗相同。对照组小鼠则注射溶剂。

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大鼠每日注射生理盐水或特异性 CPT-I 抑制剂 etomoxir，剂量为 20 mg/kg 体重，连续 8 天。Etomoxir 处理组大鼠心脏 CPT-I 活性降低了 44%。与对照组相比，Etomoxir 处理组大鼠心脏肌膜 CD36 和 FABPpm 含量以及长链脂肪酸 (LCFA) 转运能力均未发生改变。此外，在基础代谢和急性诱导的最大代谢需求下，Etomoxir 处理组大鼠心肌细胞的 LCFA 摄取率、氧化率和葡萄糖摄取率与对照组大鼠无差异。最后，Etomoxir 处理组大鼠心脏未出现甘油三酯积累。因此，CPT-I似乎并非心脏总长链脂肪酸（LCFA）通量的主要限速位点。肌膜LCFA进入而非线粒体LCFA-CoA进入可能是心脏代谢疾病中LCFA通量正常化的一个有前景的靶点。[4]

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db/db小鼠（雄性C57BLKS/JIar-Leprbb，8周龄）被随机分为四组：db/db对照组、Etomoxir组、MitoQ组和PFT-α组。Etomoxir以1 mg/kg的剂量腹腔注射，每周两次，持续8周。野生型同窝小鼠接受溶剂对照。实验结束时，采集外周血样本和骨髓细胞。[4]
C57BL/6小鼠被随机分为五组：对照组（正常饮食）、高脂饮食组（高脂饮食20周）、Etomoxir组、MitoQ组和PFT-α组。高脂饮食组、Etomoxir组、MitoQ组和PFT-α组的小鼠均喂食高脂饮食20周。Etomoxir组小鼠在20周高脂饮食期的最后10周内，每周两次腹腔注射Etomoxir（1 mg/kg）。对照组小鼠注射溶剂。[4]
骨密度（BMD）测量：采用双能X射线吸收法（DXA）测量胫骨全长的BMD。分析胫骨近端第一五分位（骨小梁部位）和中部（第二和第三五分位，皮质骨干区域）的BMD。 [4]
股骨机械强度：在股骨中心产生断裂所需的力通过以下方法测量：样品间距 1.0 cm，柱塞速度 100.0 mm/min，载荷范围 50.0 kg，图表速度 120.0 cm/min。测试后，将股骨在 95°C 下干燥 24 小时以测量干重。结果以断裂力/干重表示。[4]
生化指标测定：血液样本在 4°C 下以 3000 rpm 离心 10 分钟。使用 ELISA 或商业试剂盒测定血清中的游离脂肪酸 (FFA)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白 (HDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (OCN) 和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)。[4]
脂质过氧化测定：使用 Histopaque 通过等密度离心分离外周血单核细胞 (PBMC)。使用商业试剂盒通过硫代巴比妥酸反应物 (TBARS) 水平评估 PBMC 中的脂质过氧化水平。 [4]
尿液8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8OH-dG)测定：受试者空腹过夜后，直接从膀胱采集尿液样本。使用商业试剂盒测定8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8OH-dG)。[4]

浓度高于 5 μM 的 ETO 可诱导增殖的人类 T 细胞中活性氧 (ROS) 的急性产生，并伴有严重的氧化应激。[5]
用 50 μM ETO 处理 4 小时后，DCF 荧光（ROS 标记物）水平高于 50 μM H₂O₂ 诱导的水平。[5]
ETO 处理的 T 细胞中 GSH 水平显著降低（配对 t 检验，p<0.05），表明存在氧化应激。[5]
电子显微镜显示，50 μM ETO 处理后线粒体基质显著肿胀，与 mPTP 开放一致。[5]
作者指出，在人体临床试验（慢性心力衰竭 II 期）中观察到的 ETO 肝毒性可能由氧化应激和线粒体病变引起。[5]

[1]. The use of partial fatty acid oxidation inhibitors for metabolic therapy of angina pectoris and heart failure. Herz. 2002 Nov;27(7):621-36.

[2]. Etomoxir mediates differential metabolic channeling of fatty acid and glycerol precursors into cardiolipin in H9c2 cells. J Lipid Res. 2003 Feb;44(2):415-23.

[3]. FFA-ROS-P53-mediated mitochondrial apoptosis contributes to reduction of osteoblastogenesis and bone mass in type 2 diabetes mellitus. Sci Rep. 2015 Jul 31;5:12724.

[4]. Etomoxir-induced partial carnitine palmitoyltransferase-I (CPT-I) inhibition in vivo does not alter cardiac long-chain fatty acid uptake and oxidation rates. Biochem J. 2009 Apr 15;419(2):447-55.

[5]. The CPT1a inhibitor, etomoxir induces severe oxidative stress at commonly used concentrations. Sci Rep. 2018 Apr 19;8(1):6289.

(2R)-2-[6-(4-氯苯氧基)己基]-2-环氧乙烯羧酸酯是一种芳香醚。

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一些脂肪酸氧化抑制剂因其有望对抗肥厚型心肌细胞中的基因表达失调而备受关注。其中一些化合物已被开发用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病和稳定性心绞痛。从脂肪酸氧化转向葡萄糖氧化可减少糖异生并提高心脏效率。以下酶抑制剂可增加葡萄糖氧化：依托莫昔芬诺辛、棕榈酸羟苯甲酯、S-15176、美托洛尔、胺碘酮、哌拉西林（肉碱棕榈酰转移酶-1）；氨基肉碱、哌拉西林（肉碱棕榈酰转移酶-2）；腙（肉碱-酰基肉碱转位酶）。MET-88（γ-丁酰甜菜碱羟化酶）。 4-溴巴豆酸、曲美他嗪以及可能的雷诺嗪（硫解酶）；次甘氨酸（丁酰辅酶A脱氢酶）；二氯乙酸（丙酮酸脱氢酶激酶）。曲美他嗪和雷诺嗪的临床试验表明，这种底物氧化转变具有抗心绞痛作用。依托莫西林和MET-88通过增加肌浆网钙泵（SERCA2）的密度来改善超负荷的心脏功能。SERCA2和α-肌球蛋白重链的启动子包含预期会对葡萄糖代谢物转录因子和/或过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）激动剂产生反应的序列。进一步阐明能够上调SERCA2表达的新型化合物与SERCA2启动子调控序列的表征密切相关。 [1] 我们研究了依托莫西林治疗对H9c2心肌细胞中心磷脂（CL）从头合成的影响。依托莫西林治疗不影响CL合成和重塑酶的活性，但导致掺入CL的[1-14C]棕榈酸或[1-14C]油酸的量减少。其机制是，由于膜磷脂酰磷酸酶活性增加35%（P < 0.05），脂质合成转向使用1,2-二酰基-sn-甘油，从而减少了脂肪酸通过CL从头合成途径的通量。相反，依托莫西林治疗增加了掺入CL的[1,3-3H]甘油的量。该机制表现为甘油激酶活性增加33%（P < 0.05），导致通过从头合成心磷脂（CL）途径的甘油通量增加。依托莫西林治疗抑制了1,2-二酰基-sn-甘油酰基转移酶活性81%（P < 0.05），从而使甘油和脂肪酸从合成1,2,3-三酰基-sn-甘油转向合成磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺。相反，依托莫西林通过抑制肌醇摄取来抑制肌醇-[3H]掺入磷脂酰肌醇。依托莫西林不影响[3H]丝氨酸的摄取，但导致磷脂酰丝氨酸衍生的磷脂酰乙醇胺的生成增加。结果表明，依托莫昔布治疗对不同代谢前体从头合成甘油酯具有不同的影响。此外，依托莫昔布介导了甘油和脂肪酸前体向心磷脂（CL）的独特且差异化的代谢途径。[2]

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本研究评估了2型糖尿病患者游离脂肪酸（FFA）、活性氧（ROS）生成、线粒体功能障碍和骨密度（BMD）之间的关联，并探讨了相关的分子机制。分别用依托莫昔布（一种CPT1抑制剂）、MitoQ和P53抑制剂PFT-α治疗db/db小鼠和高脂（HF）喂养的小鼠。评估了骨代谢因子，分离了骨髓间充质干细胞（BMSCs），并诱导其分化为成骨细胞。FFA、脂质过氧化和线粒体DNA拷贝数与2型糖尿病患者的BMD相关。 Etomoxir、MitoQ 和 PFT-α 显著抑制了 db/db 小鼠和高脂饮食喂养小鼠的骨矿物质密度和骨折强度下降，并抑制了骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的减少。Etomoxir 和 MitoQ（而非 PFT-α）抑制了 db/db 小鼠、高脂饮食喂养小鼠和成骨细胞中线粒体活性氧 (ROS) 的产生。此外，Etomoxir、MitoQ 和 PFT-α 显著抑制了成骨细胞中的线粒体功能障碍。而且，db/db 小鼠和高脂饮食喂养小鼠来源的成骨细胞中线粒体凋亡被激活，而 Etomoxir、MitoQ 和 PFT-α 抑制了这种凋亡。此外，p53 在线粒体中的积累募集了 Bax 并启动了凋亡的分子事件。这些结果表明，脂肪酸氧化会导致活性氧（ROS）的产生，进而激活P53/Bax介导的线粒体凋亡，最终导致2型糖尿病（T2DM）患者的成骨分化减少和骨丢失。[3] 虽然肉碱棕榈酰转移酶I（CPT-I）通常被认为是线粒体β-氧化的主要限速步骤，但CPT-I是否是心脏中长链脂肪酸（LCFA）总通量的限速步骤尚不完全清楚。心脏中LCFA通量的另一个重要调控位点是由CD36和FABPpm（质膜脂肪酸结合蛋白）介导的跨肌LCFA转运。因此，我们研究了长期药理学阻断线粒体水平的LCFA通量对肌膜LCFA摄取的影响程度。连续8天，每天给大鼠注射生理盐水或特异性CPT-I抑制剂依托莫西林（剂量为20 mg/kg体重）。依托莫西林处理组大鼠心脏CPT-I活性降低了44%。与对照组相比，依托莫西林处理组大鼠心肌细胞膜中CD36和FABPpm的水平以及长链脂肪酸（LCFA）的转运能力均未发生改变。此外，无论是在基础代谢状态还是急性诱导的最大代谢需求下，依托莫西林处理组大鼠心肌细胞中LCFA的摄取和氧化速率以及葡萄糖的摄取速率均与对照组大鼠无显著差异。最后，在依托莫西林处理组大鼠心脏中未观察到甘油三酯的积累。因此，CPT-I似乎并非心脏总LCFA通量的主要限速位点。心肌长链脂肪酸 (LCFA) 进入细胞，而非线粒体长链脂肪酸-辅酶A (LCFA-CoA)，可能是治疗心血管代谢疾病中LCFA通量正常化的一个有前景的靶点。[4]

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Etomoxir (2[6(4-氯苯氧基)己基]环氧乙烷-2-羧酸酯) 是一种广泛使用的小分子脂肪酸氧化 (FAO) 抑制剂，其作用机制是通过不可逆抑制CPT1a。本研究表明，在人T细胞中，ETO浓度高于5 μM时对CPT1a缺乏特异性，因此，由于其对氧化代谢和细胞氧化还原的非特异性影响，使用该化合物时应谨慎。[5]
该研究表明，ETO在T细胞中抑制的氧化代谢主要依赖于谷氨酰胺，而非FAO。 [5] 先前使用浓度范围为 40 μM 至 200 μM 的 ETO 研究 T 细胞记忆分化和巨噬细胞 M2 极化的研究可能需要重新解读，因为观察到的表型可能是氧化应激而非 CPT1a 抑制的结果。[5] 据报道，浓度高于 10 μM 的 ETO 的脱靶效应包括抑制线粒体腺嘌呤核苷酸转运蛋白以及电子传递链复合物 I。[5]

C17H23CLO4

326.82

326.128

C, 62.48; H, 7.09; Cl, 10.85; O, 19.58

124083-20-1

Etomoxir sodium salt;828934-41-4; 82258-36-4 (racemate) 124083-20-1 (free acid); 828934-40-3 (S-isomer); 132308-39-5 (potassium salt)

9840324

Colorless to light yellow solid (<32°C),or liquid (>34°C)

1.2±0.1 g/cm3

405.0±25.0 °C at 760 mmHg

142.6±22.2 °C

0.0±0.9 mmHg at 25°C

1.520

4.46

48.06

0

4

11

22

342

1

O=C(OCC)[C@@]1(OC1)CCCCCCOC2=CC=C(C=C2)Cl

DZLOHEOHWICNIL-QGZVFWFLSA-N

InChI=1S/C17H23ClO4/c1-2-20-16(19)17(13-22-17)11-5-3-4-6-12-21-15-9-7-14(18)8-10-15/h7-10H,2-6,11-13H2,1H3/t17-/m1/s1

Ethyl (2R)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate

(R)-(+)-Etomoxir B 807-54 B80754 B-80754B807-54 B-807-54 B 80754

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~305.98 mM)

配方 1 中的溶解度: 3.5 mg/mL (10.71 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 35.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3.5 mg/mL (10.71 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 35.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.65 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (30.60 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。