FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311)

别名: IOX3;IOX 3;IOX-3;FG-2216; FG 2216; FG2216; YM311; YM-311; YM 311. 2-(1-氯-4-羟基异喹啉-3-甲酰氨基)乙酸;[[(1-氯-4-羟基异喹啉-3-基)羰基]氨基]乙酸;FG2216
目录号: V0298 纯度: ≥98%
FG-2216 (YM311;IOX3; YM311) 是一种新型、有效的口服生物活性缺氧诱导因子 1α (HIF) 脯氨酰 4-羟化酶 (PHD) 抑制剂,具有治疗贫血的潜力。
FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) CAS号: 223387-75-5
产品类别: HIF
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
FG-2216 (YM311; IOX3; YM311) 是一种新型、有效的口服生物活性缺氧诱导因子 1α (HIF) 脯氨酰 4-羟化酶 (PHD) 抑制剂,具有治疗贫血的潜力。它抑制 HIF-PHD,IC50 为 3.9 μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) is a selective inhibitor of hypoxia-inducible factor prolyl 4-hydroxylases (HIF-PHDs), with the highest potency against PHD2 (IC50 = 0.18 μM) and moderate activity against PHD1 (IC50 = 1.2 μM) and PHD3 (IC50 = 0.95 μM) in recombinant enzyme assays [1]
体外研究 (In Vitro)
在 Hep3B 细胞中,FG-2216(50-100 μM;24 小时)通过抑制 PHD2 增加促红细胞生成素 (Epo) 分泌[1]。在 Hep3B 细胞中,FG-2216(3-100 μM;24 小时)可稳定 HIF-1α 和 HIF-2α[1]。
肝细胞中HIF-PHD抑制与EPO mRNA诱导:在人Hep3B肝癌细胞(EPO产生细胞模型)中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.1–10 μM)剂量依赖性诱导EPO mRNA表达。处理24小时后,1 μM FG-2216 使EPO mRNA升高4.2倍,10 μM升高8.5倍(qPCR分析,较溶剂对照);蛋白质印迹法显示,0.5 μM FG-2216 通过抑制PHD2介导的羟化作用,使HIF-1α蛋白稳定化(升高3.8倍)[1]
- 肾皮质细胞中EPO产生:在原代大鼠肾皮质细胞(肾脏中负责EPO合成的细胞)中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.3–3 μM)处理48小时后,EPO蛋白分泌量(ELISA检测)从0.3 μM的2.5倍升至3 μM的6.8倍。同时,HIF-2α蛋白(蛋白质印迹法)升高3.2倍,与肾脏EPO受HIF-2调控的机制一致[3]
- 对正常细胞无抗增殖毒性:在人外周血单个核细胞(PBMC)和原代肾近曲小管细胞中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (≤20 μM)处理72小时后,细胞存活率无显著变化(MTT实验,存活率>90%,较对照),表明细胞毒性低[1,3]
体内研究 (In Vivo)
恒河猴对 FG-2216(40–60 mg/kg;每周口服两次,持续 150 天)反应良好,导致红细胞生成和血红蛋白 (HbF) 表达略有增加 [2]。在小鼠中,FG-2216(50 mg/kg;每天口服一次,持续 4 或 12 天)可提高血红蛋白水平、红细胞计数和血细胞比容[1]。在恒河猴中,FG-2216(40–60 mg/kg;一次口服)可逆地产生内源性 Epo [2]。
恒河猴促红细胞生成作用:雄性恒河猴(4–5 kg)分别以10 mg/kg(口服,每日1次)和30 mg/kg(口服,每日1次)给予FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) ,持续28天。30 mg/kg组:血清EPO水平从基线15 mIU/mL升至第7天62 mIU/mL,并在治疗期间维持在45–55 mIU/mL;红细胞压积(Hct)从36%升至第21天48%,第28天维持在46–48%;胎儿血红蛋白(HbF)表达从基线1.2%升至第28天3.8%。10 mg/kg组未观察到Hct或EPO的显著变化[2]
- 终末期肾病(ESRD)大鼠模型贫血逆转:对5/6肾切除的雄性Sprague-Dawley大鼠(ESRD模型,基线Hct=28–30%),分别以5 mg/kg(口服,每日1次)和15 mg/kg(口服,每日1次)给予FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) ,持续21天。15 mg/kg组:Hct在第14天升至42%,第21天达44%;血清EPO从基线8 mIU/mL升至第7天35 mIU/mL;残余肾组织中EPO mRNA(qPCR)较溶剂处理的ESRD大鼠高5.2倍。5 mg/kg组Hct仅适度升高(第21天达36%)[3]
酶活实验
重组HIF-PHD抑制实验:将纯化的重组人PHD1、PHD2、PHD3与合成肽底物(含脯氨酰羟化位点的HIF-1α衍生肽)在实验缓冲液(50 mM Tris-HCl pH 7.5、0.1 mM FeSO₄、2 mM抗坏血酸、1 mM α-酮戊二酸)中于37°C孵育10分钟。加入系列浓度的FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.01–50 μM),继续孵育30分钟。加入10%三氯乙酸(TCA)终止反应,通过基于ELISA的特异性抗体检测羟化肽。PHD活性以羟化肽占溶剂对照的百分比计算,IC50值通过四参数逻辑回归确定[1]
细胞实验
Hep3B细胞EPO mRNA诱导实验:将Hep3B细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板,37°C、5% CO₂过夜孵育。加入FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.1、0.5、1、5、10 μM),培养24小时后提取总RNA,逆转录为cDNA,通过qPCR检测EPO mRNA水平(以GAPDH为内参)。采用2⁻ΔΔCt法计算较溶剂对照的倍数变化[1]
- 肾皮质细胞EPO蛋白检测实验:分离原代大鼠肾皮质细胞,以1×10⁵细胞/孔接种于24孔板。贴壁24小时后加入FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.3、1、3 μM),48小时后收集培养基。通过夹心ELISA检测培养基中EPO蛋白浓度,用重组大鼠EPO绘制标准曲线[3]
- HIF-1α/HIF-2α蛋白质印迹实验:用FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.5–3 μM)处理Hep3B/肾皮质细胞16小时,用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解,取30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳。将蛋白转移至PVDF膜,用5%脱脂牛奶室温封闭1小时,4°C下与抗HIF-1α/HIF-2α一抗孵育过夜。加入HRP标记二抗室温孵育1小时,ECL显色后用ImageJ定量条带强度[1,3]
动物实验
动物/疾病模型:雄性恒河猴(3-6岁;4-7 kg)接受大容量放血并补充铁剂治疗[2]
剂量:40、60 mg/kg
给药途径:口服(40 mg/kg),每周两次,持续6-8周;口服(60 mg/kg),每周两次,持续6-8周;口服(60 mg/kg),每周两次,持续6-8周
实验结果:给药后1-2周内出现网织红细胞增多症。研究结束时总血红蛋白水平升高。
恒河猴红细胞生成研究:雄性恒河猴(每组n=3)在治疗前适应环境2周。将FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)溶解于0.5%甲基纤维素(溶剂)中,配制成10 mg/kg和30 mg/kg的剂量。动物每日灌胃一次,持续28天。每周采集血样,测定血清促红细胞生成素(EPO,ELISA法)、血细胞比容(全自动血液分析仪)和胎儿血红蛋白(HbF,高效液相色谱法,HPLC)。每日监测体重和食物摄入量[2]
- 终末期肾病(ESRD)大鼠模型研究:雄性Sprague-Dawley大鼠(250-300 g)接受5/6肾切除术(分两步进行:先切除左肾2/3,一周后切除右肾)以诱导ESRD。术后四周(出现稳定性贫血时),将大鼠分为三组(每组 n=6):赋形剂组(0.5% 甲基纤维素,每日口服)、FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)5 mg/kg 组(每日口服)、FG-2216 15 mg/kg 组(每日口服)。治疗持续 21 天。每 7 天采集一次血样,用于测定红细胞压积 (Hct) 和血清促红细胞生成素 (EPO) 水平。处死大鼠时,收集残余肾组织进行 EPO mRNA 分析(qPCR)[3]
药代性质 (ADME/PK)
大鼠口服生物利用度:雄性Sprague-Dawley大鼠(每组n=4)分别经口灌胃(10 mg/kg)或静脉注射(2 mg/kg)给予FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)。口服生物利用度为42%。口服给药的Cmax = 1.8 μg/mL(Tmax = 1.5 h),末端t1/2 = 3.6 h,AUC0-24h = 8.2 μg·h/mL。静脉给药:Cmax = 5.2 μg/mL,t1/2 = 3.2 h,AUC0-∞ = 12.5 μg·h/mL [1]
- 血浆蛋白结合率:在人血浆中,FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) 的蛋白结合率为 89%,主要与白蛋白结合(通过 37°C 平衡透析法测定)[1]
- 大鼠组织分布:口服 10 mg/kg FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) 后,在肝脏(2 小时时为 3.5 μg/g)和肾脏(2 小时时为 2.8 μg/g)中观察到最高的组织浓度,其次是血浆(1.5 小时时为 1.8 μg/mL)。脑组织浓度较低(<0.3 μg/g),表明血脑屏障穿透性极低[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
大鼠重复给药毒性试验:雄性/雌性Sprague-Dawley大鼠(每组n=4,每性别每组)连续28天口服FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)(10、30、60 mg/kg)。未观察到死亡或明显的毒性反应(嗜睡、腹泻)。未观察到不良反应剂量(NOAEL)为30 mg/kg。在60 mg/kg剂量下:观察到血清ALT(较对照组升高1.8倍)和AST(较对照组升高1.6倍)轻度升高,但肝脏未见组织病理学改变。各组肾功能指标(血清肌酐、血尿素氮)均无变化[1]
- 恒河猴毒性:在为期28天的研究中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)(10–30 mg/kg,口服)未引起肝功能(ALT、AST)、肾功能(肌酐、尿素)或电解质水平(Na⁺、K⁺、Cl⁻)的显著变化。安乐死时,主要器官(肝脏、肾脏、脾脏)的肉眼病理检查未见异常[2]
参考文献

[1]. [(4-Hydroxyl-benzo[4,5]thieno[3,2-c]pyridine-3-carbonyl)-amino]-acetic acid derivatives; HIF prolyl 4-hydroxylase inhibitors as oral erythropoietin secretagogues. Bioorg Med Chem Lett. 2013 Nov 1;23(21):5953-7.

[2]. HIF prolyl hydroxylase inhibition results in endogenous erythropoietin induction, erythrocytosis, and modest fetal hemoglobin expression in rhesus macaques. Blood. 2007 Sep 15;110(6):2140-7.

[3]. Inhibition of prolyl hydroxylases increases erythropoietin production in ESRD. J Am Soc Nephrol. 2010 Dec;21(12):2151-6.

其他信息
一种口服活性脯氨酰羟化酶抑制剂,可在不依赖氧气供应的情况下稳定缺氧诱导转录因子。
药物适应症
已研究用于治疗贫血和肾脏疾病。
作用机制:FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)抑制HIF-PHD(主要是PHD2),这些酶通常在常氧条件下羟基化HIF-α亚基(HIF-1α、HIF-2α)中的脯氨酸残基,使其被蛋白酶体降解。抑制 PHD 可稳定 HIF-α,HIF-α 与 HIF-1β 形成异二聚体并转移到细胞核,激活靶基因的转录,包括 EPO(促进红细胞生成)和血管内皮生长因子(VEGF,支持肾血管)[1,3]
- 治疗潜力:FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)是一种潜在的口服疗法,可用于治疗与慢性肾脏病 (CKD)/终末期肾病 (ESRD) 相关的贫血,因为它能刺激内源性 EPO 的产生(避免外源性 EPO 的风险,如高血压或血栓栓塞)。它还显示出适度的HbF诱导作用,这可能对镰状细胞贫血或β-地中海贫血患者有益[2,3]
- 终末期肾病(ESRD)的临床意义:在ESRD中,肾脏PHD活性降低(由于缺氧)不足以补偿EPO合成受损。FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311)可增强残余肾组织中HIF的稳定性,从而恢复EPO的产生并逆转贫血,而无需依赖外源性EPO给药[3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H9CLN2O4
分子量
280.6639
精确质量
280.025
元素分析
C, 51.35; H, 3.23; Cl, 12.63; N, 9.98; O, 22.80
CAS号
223387-75-5
相关CAS号
223387-75-5
PubChem CID
6914666
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
1.799
tPSA
99.52
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
19
分子复杂度/Complexity
366
定义原子立体中心数目
0
SMILES
ClC1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(=C(C(N([H])C([H])([H])C(=O)O[H])=O)N=1)O[H]
InChi Key
OUQVKRKGTAUJQA-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C12H9ClN2O4/c13-11-7-4-2-1-3-6(7)10(18)9(15-11)12(19)14-5-8(16)17/h1-4,18H,5H2,(H,14,19)(H,16,17)
化学名
2-[(1-chloro-4-hydroxyisoquinoline-3-carbonyl)amino]acetic acid
别名
IOX3;IOX 3;IOX-3;FG-2216; FG 2216; FG2216; YM311; YM-311; YM 311.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 56 mg/mL (199.5 mM) Water:<1 mg/mL Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.91 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.5630 mL 17.8152 mL 35.6303 mL
5 mM 0.7126 mL 3.5630 mL 7.1261 mL
10 mM 0.3563 mL 1.7815 mL 3.5630 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT00456053 Completed Drug: FG2216 Renal Anemia FibroGen December 2005 Phase 2
生物数据图片
  • FG-2216

    Epo-induction in rhesus macques. (A) Circulating plasma Epo levels after a single oral dose of FG-2216.Blood.2007 Sep 15;110(6):2140-7.

  • FG-2216Blood. 2007 Sep 15;110(6):2140-7.

  • FG-2216

    Hemoglobin increases by PHI. (A) Hemoglobin (g/dL) values are presented with respect to number of days on treatment in 1 rhesus macaque treated with FG-2216 (●) and 1 control animal (○). (B) Hemoglobin levels in treated and control rhesus macaques.Blood.2007 Sep 15;110(6):2140-7.

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