FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311)

别名: IOX3;IOX 3;IOX-3;FG-2216; FG 2216; FG2216; YM311; YM-311; YM 311. 2-(1-氯-4-羟基异喹啉-3-甲酰氨基)乙酸;[[(1-氯-4-羟基异喹啉-3-基)羰基]氨基]乙酸;FG2216
目录号: V0298 纯度: ≥98%
FG-2216 (YM311;IOX3; YM311) 是一种新型、有效的口服生物活性缺氧诱导因子 1α (HIF) 脯氨酰 4-羟化酶 (PHD) 抑制剂,具有治疗贫血的潜力。
FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) CAS号: 223387-75-5
产品类别: HIF
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
FG-2216 (YM311; IOX3; YM311) 是一种新型、有效的口服生物活性缺氧诱导因子 1α (HIF) 脯氨酰 4-羟化酶 (PHD) 抑制剂,具有治疗贫血的潜力。它抑制 HIF-PHD,IC50 为 3.9 μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) is a selective inhibitor of hypoxia-inducible factor prolyl 4-hydroxylases (HIF-PHDs), with the highest potency against PHD2 (IC50 = 0.18 μM) and moderate activity against PHD1 (IC50 = 1.2 μM) and PHD3 (IC50 = 0.95 μM) in recombinant enzyme assays [1]
体外研究 (In Vitro)
在 Hep3B 细胞中,FG-2216(50-100 μM;24 小时)通过抑制 PHD2 增加促红细胞生成素 (Epo) 分泌[1]。在 Hep3B 细胞中,FG-2216(3-100 μM;24 小时)可稳定 HIF-1α 和 HIF-2α[1]。
肝细胞中HIF-PHD抑制与EPO mRNA诱导:在人Hep3B肝癌细胞(EPO产生细胞模型)中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.1–10 μM)剂量依赖性诱导EPO mRNA表达。处理24小时后,1 μM FG-2216 使EPO mRNA升高4.2倍,10 μM升高8.5倍(qPCR分析,较溶剂对照);蛋白质印迹法显示,0.5 μM FG-2216 通过抑制PHD2介导的羟化作用,使HIF-1α蛋白稳定化(升高3.8倍)[1]
- 肾皮质细胞中EPO产生:在原代大鼠肾皮质细胞(肾脏中负责EPO合成的细胞)中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.3–3 μM)处理48小时后,EPO蛋白分泌量(ELISA检测)从0.3 μM的2.5倍升至3 μM的6.8倍。同时,HIF-2α蛋白(蛋白质印迹法)升高3.2倍,与肾脏EPO受HIF-2调控的机制一致[3]
- 对正常细胞无抗增殖毒性:在人外周血单个核细胞(PBMC)和原代肾近曲小管细胞中,FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (≤20 μM)处理72小时后,细胞存活率无显著变化(MTT实验,存活率>90%,较对照),表明细胞毒性低[1,3]
体内研究 (In Vivo)
恒河猴对 FG-2216(40–60 mg/kg;每周口服两次,持续 150 天)反应良好,导致红细胞生成和血红蛋白 (HbF) 表达略有增加 [2]。在小鼠中,FG-2216(50 mg/kg;每天口服一次,持续 4 或 12 天)可提高血红蛋白水平、红细胞计数和血细胞比容[1]。在恒河猴中,FG-2216(40–60 mg/kg;一次口服)可逆地产生内源性 Epo [2]。
恒河猴促红细胞生成作用:雄性恒河猴(4–5 kg)分别以10 mg/kg(口服,每日1次)和30 mg/kg(口服,每日1次)给予FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) ,持续28天。30 mg/kg组:血清EPO水平从基线15 mIU/mL升至第7天62 mIU/mL,并在治疗期间维持在45–55 mIU/mL;红细胞压积(Hct)从36%升至第21天48%,第28天维持在46–48%;胎儿血红蛋白(HbF)表达从基线1.2%升至第28天3.8%。10 mg/kg组未观察到Hct或EPO的显著变化[2]
- 终末期肾病(ESRD)大鼠模型贫血逆转:对5/6肾切除的雄性Sprague-Dawley大鼠(ESRD模型,基线Hct=28–30%),分别以5 mg/kg(口服,每日1次)和15 mg/kg(口服,每日1次)给予FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) ,持续21天。15 mg/kg组:Hct在第14天升至42%,第21天达44%;血清EPO从基线8 mIU/mL升至第7天35 mIU/mL;残余肾组织中EPO mRNA(qPCR)较溶剂处理的ESRD大鼠高5.2倍。5 mg/kg组Hct仅适度升高(第21天达36%)[3]
酶活实验
重组HIF-PHD抑制实验:将纯化的重组人PHD1、PHD2、PHD3与合成肽底物(含脯氨酰羟化位点的HIF-1α衍生肽)在实验缓冲液(50 mM Tris-HCl pH 7.5、0.1 mM FeSO₄、2 mM抗坏血酸、1 mM α-酮戊二酸)中于37°C孵育10分钟。加入系列浓度的FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.01–50 μM),继续孵育30分钟。加入10%三氯乙酸(TCA)终止反应,通过基于ELISA的特异性抗体检测羟化肽。PHD活性以羟化肽占溶剂对照的百分比计算,IC50值通过四参数逻辑回归确定[1]
细胞实验
Hep3B细胞EPO mRNA诱导实验:将Hep3B细胞以2×10⁵细胞/孔接种于6孔板,37°C、5% CO₂过夜孵育。加入FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.1、0.5、1、5、10 μM),培养24小时后提取总RNA,逆转录为cDNA,通过qPCR检测EPO mRNA水平(以GAPDH为内参)。采用2⁻ΔΔCt法计算较溶剂对照的倍数变化[1]
- 肾皮质细胞EPO蛋白检测实验:分离原代大鼠肾皮质细胞,以1×10⁵细胞/孔接种于24孔板。贴壁24小时后加入FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.3、1、3 μM),48小时后收集培养基。通过夹心ELISA检测培养基中EPO蛋白浓度,用重组大鼠EPO绘制标准曲线[3]
- HIF-1α/HIF-2α蛋白质印迹实验:用FG-2216(YM-311;IOX-3;YM-311) (0.5–3 μM)处理Hep3B/肾皮质细胞16小时,用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解,取30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳。将蛋白转移至PVDF膜,用5%脱脂牛奶室温封闭1小时,4°C下与抗HIF-1α/HIF-2α一抗孵育过夜。加入HRP标记二抗室温孵育1小时,ECL显色后用ImageJ定量条带强度[1,3]
动物实验
Animal/Disease Models: Male rhesus macaques (3-6 years; 4-7 kg) mice are treated with large-volume phlebotomy with iron supplementation[2]
Doses: 40, 60 mg/kg
Route of Administration: Po (40 mg/ kg) twice a week for 6-8 weeks Po (60 mg/kg) twice a week for 6-8 weeks Po (60 mg/kg) twice a week for 6-8 weeks
Experimental Results: demonstrated reticulocytosis within 1-2 weeks of dosing. Increased total hemoglobin levels at the end of the study duration.
Rhesus macaque erythropoiesis study: Male rhesus macaques (n=3/group) were acclimated for 2 weeks before treatment. FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) was dissolved in 0.5% methylcellulose (vehicle) to prepare doses of 10 mg/kg and 30 mg/kg. Animals received oral gavage once daily for 28 days. Blood samples were collected weekly to measure serum EPO (ELISA), hematocrit (automated hematology analyzer), and HbF (high-performance liquid chromatography, HPLC). Body weight and food intake were monitored daily [2]
- ESRD rat model study: Male Sprague-Dawley rats (250–300 g) underwent 5/6 nephrectomy (two-step procedure: 2/3 left nephrectomy, followed by right nephrectomy 1 week later) to induce ESRD. Four weeks after surgery (when stable anemia developed), rats were grouped (n=6/group): vehicle (0.5% methylcellulose, oral, daily), FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) 5 mg/kg (oral, daily), FG-2216 15 mg/kg (oral, daily). Treatment lasted 21 days. Blood samples were collected every 7 days to measure Hct and serum EPO. At euthanasia, residual kidney tissue was harvested for EPO mRNA analysis (qPCR) [3]
药代性质 (ADME/PK)
Oral bioavailability in rats: Male Sprague-Dawley rats (n=4/group) received FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) via oral gavage (10 mg/kg) or intravenous injection (2 mg/kg). Oral bioavailability was 42%. For oral administration: Cmax = 1.8 μg/mL (Tmax = 1.5 h), terminal t1/2 = 3.6 h, AUC0-24h = 8.2 μg·h/mL. For intravenous administration: Cmax = 5.2 μg/mL, t1/2 = 3.2 h, AUC0-∞ = 12.5 μg·h/mL [1]
- Plasma protein binding: In human plasma, FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) had a protein binding rate of 89%, primarily to albumin (measured by equilibrium dialysis at 37°C) [1]
- Tissue distribution in rats: After oral administration of 10 mg/kg FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311), the highest tissue concentrations were observed in the liver (3.5 μg/g at 2 h) and kidney (2.8 μg/g at 2 h), followed by plasma (1.8 μg/mL at 1.5 h). Brain concentration was low (<0.3 μg/g), indicating minimal blood-brain barrier penetration [1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Repeat-dose toxicity in rats: Male/female Sprague-Dawley rats (n=4/sex/group) received FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) (10, 30, 60 mg/kg, oral, daily) for 28 days. No mortality or overt toxicity (lethargy, diarrhea) was observed. The no-observed-adverse-effect level (NOAEL) was 30 mg/kg. At 60 mg/kg: Mild increases in serum ALT (1.8-fold vs. control) and AST (1.6-fold vs. control) were observed, with no histopathological changes in the liver. Renal function markers (serum creatinine, blood urea nitrogen) were unchanged across all groups [1]
- Toxicity in rhesus macaques: In the 28-day study, FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) (10–30 mg/kg, oral) caused no significant changes in liver function (ALT, AST), renal function (creatinine, urea), or electrolyte levels (Na⁺, K⁺, Cl⁻). No abnormal findings were observed in gross pathology of major organs (liver, kidney, spleen) at euthanasia [2]
参考文献

[1]. [(4-Hydroxyl-benzo[4,5]thieno[3,2-c]pyridine-3-carbonyl)-amino]-acetic acid derivatives; HIF prolyl 4-hydroxylase inhibitors as oral erythropoietin secretagogues. Bioorg Med Chem Lett. 2013 Nov 1;23(21):5953-7.

[2]. HIF prolyl hydroxylase inhibition results in endogenous erythropoietin induction, erythrocytosis, and modest fetal hemoglobin expression in rhesus macaques. Blood. 2007 Sep 15;110(6):2140-7.

[3]. Inhibition of prolyl hydroxylases increases erythropoietin production in ESRD. J Am Soc Nephrol. 2010 Dec;21(12):2151-6.

其他信息
A orally active prolyl-hydroxylase inhibitor which can stabilize hypoxia-inducible transcription factor independent of oxygen availability.
Drug Indication
Investigated for use/treatment in anemia and kidney disease.
Mechanism of action: FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) inhibits HIF-PHDs (primarily PHD2), which normally hydroxylate proline residues in HIF-α subunits (HIF-1α, HIF-2α) under normoxia, targeting them for proteasomal degradation. Inhibition of PHDs stabilizes HIF-α, which heterodimerizes with HIF-1β and translocates to the nucleus, activating transcription of target genes including EPO (promotes erythropoiesis) and vascular endothelial growth factor (VEGF, supports renal vasculature) [1,3]
- Therapeutic potential: FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) is a potential oral therapy for anemia associated with chronic kidney disease (CKD)/end-stage renal disease (ESRD), as it stimulates endogenous EPO production (avoiding risks of exogenous EPO, such as hypertension or thromboembolism). It also shows modest induction of HbF, which may benefit patients with sickle cell anemia or β-thalassemia [2,3]
- Clinical relevance in ESRD: In ESRD, reduced renal PHD activity (due to hypoxia) is insufficient to compensate for impaired EPO synthesis. FG-2216 (YM-311; IOX-3; YM-311) enhances HIF stabilization in residual renal tissue, restoring EPO production and reversing anemia without relying on exogenous EPO administration [3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H9CLN2O4
分子量
280.6639
精确质量
280.025
元素分析
C, 51.35; H, 3.23; Cl, 12.63; N, 9.98; O, 22.80
CAS号
223387-75-5
相关CAS号
223387-75-5
PubChem CID
6914666
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
1.799
tPSA
99.52
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
19
分子复杂度/Complexity
366
定义原子立体中心数目
0
SMILES
ClC1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(=C(C(N([H])C([H])([H])C(=O)O[H])=O)N=1)O[H]
InChi Key
OUQVKRKGTAUJQA-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C12H9ClN2O4/c13-11-7-4-2-1-3-6(7)10(18)9(15-11)12(19)14-5-8(16)17/h1-4,18H,5H2,(H,14,19)(H,16,17)
化学名
2-[(1-chloro-4-hydroxyisoquinoline-3-carbonyl)amino]acetic acid
别名
IOX3;IOX 3;IOX-3;FG-2216; FG 2216; FG2216; YM311; YM-311; YM 311.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 56 mg/mL (199.5 mM) Water:<1 mg/mL Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.91 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.5630 mL 17.8152 mL 35.6303 mL
5 mM 0.7126 mL 3.5630 mL 7.1261 mL
10 mM 0.3563 mL 1.7815 mL 3.5630 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT00456053 Completed Drug: FG2216 Renal Anemia FibroGen December 2005 Phase 2
生物数据图片
  • FG-2216

    Epo-induction in rhesus macques. (A) Circulating plasma Epo levels after a single oral dose of FG-2216.Blood.2007 Sep 15;110(6):2140-7.

  • FG-2216Blood. 2007 Sep 15;110(6):2140-7.

  • FG-2216

    Hemoglobin increases by PHI. (A) Hemoglobin (g/dL) values are presented with respect to number of days on treatment in 1 rhesus macaque treated with FG-2216 (●) and 1 control animal (○). (B) Hemoglobin levels in treated and control rhesus macaques.Blood.2007 Sep 15;110(6):2140-7.

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