HIF-PHI/hypoxia-inducible factor-prolyl-hydroxylase

在 PC12 细胞中，roxadustat（5-50 μM；6 小时）可显着减少 TBHP 诱导的细胞凋亡[2]。在 PC12 细胞中，roxadustat（50 μM；6 小时）可稳定 HIF-1α 蛋白表达[2]。 研究发现，与CoCl2或BLM组相比，roxadustat治疗后L929细胞的增殖受到抑制，I型胶原、III型胶原、脯氨酰羟化酶结构域蛋白2（PHD2）、HIF-1α、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）和p-Smad3的产生减少。[3]

---

roxadustat对L929细胞体外增殖和蛋白表达的影响[3]
用CoCl2（50nM）刺激L929细胞，以模拟缺氧下的促纤维化环境（Pardo等人，2005）。在CoCl2诱导L929细胞72小时后，使用带有TMB的EdU细胞增殖试剂盒分析细胞增殖。CoCl2刺激组的增殖率明显高于对照组。与CoCl2刺激组相比，用不同浓度的罗沙度（0.3、1、3、10μM）处理的L929细胞组显示出明显的细胞增殖抑制率（图5A）。 对于蛋白质分析，L929细胞按照增殖试验中的方法进行处理。简而言之，提取并检查了蛋白质，如图5所示。与对照细胞相比，在用CoCl2（50 nM）刺激的细胞中，I型胶原、III型胶原和α-SMA的蛋白质表达显著增加。然而，与CoCl2刺激相比，roxadustat/罗沙度他汀治疗显著抑制了I型胶原、III型胶原和α-SMA的表达（图5B，E）。与对照组相比，CoCl2刺激的促纤维化后，TGF-β1、CTGF和p-Smad3的蛋白表达显著增加，但在CoCl2刺激组中，罗沙度他汀治疗后降低（图5D，G）。特别是，CoCl2或roxadustat处理对Smad3表达没有影响（图5D和G）。[3]
在常氧条件下，HIF活性的增加会增加用于治疗贫血的内源性促红细胞生成素的产生。Roxadustat可防止HIF分解，并在常氧条件下促进HIF活性（Malyszko，2016）。在常氧和缺氧条件下，罗沙度对HIF-1α的影响不同；因此，本研究探讨了罗沙度对L929细胞在常氧和缺氧条件下HIF-1α和PHD2表达的影响。我们的结果表明，在常氧条件下，罗沙度司他增加了HIF-1α活性并降低了PHD2，而在CoCl2刺激的L929细胞中，它在缺氧条件下降低了HIF-1 a活性（图5C，F）。[3]
为了确定TGF-β1激活的机制，使用SB525334抑制TGF-β1的激活。分析L929细胞增殖情况，并在细胞与roxadustat/罗沙度他（3μM）（不含或含1μM SB525334）孵育72小时后，检测TGF-β1、CTGF、Smad3、p-Smad3、HIF-1α、PHD2、α-SMA、I型胶原和III型胶原的蛋白表达水平（图6B-G）。我们的结果显示，与CoCl2刺激组相比，Roxadustat治疗组除Smad3外，所有蛋白质的表达水平均降低（图6D和G），并且在没有或有SB525334的情况下，L929细胞增殖也降低（图6A）。此外，SB525334组显示蛋白质表达和细胞增殖减少；与SB525334组相比，SB525334+罗沙度他汀组的蛋白质表达水平或细胞增殖率没有进一步降低（图6；P > 0.05). 这些发现表明，罗沙度他通过抑制TGF-β1的激活来减轻实验性肺纤维化。 [3]
为了确定Smad3激活的机制，使用SIS3抑制Smad3激活。对L929细胞增殖进行了分析，并在用罗沙度他（3μM）孵育细胞72小时后，检测了TGF-β1、CTGF、Smad3、p-Smad3、HIF-1α、PHD2、α-SMA、I型胶原和III型胶原的蛋白表达水平，其中不含或含有0.5μM SIS3（图7B-7I）。这些结果表明，与CoCl2刺激组相比，罗沙度他汀治疗组除TGF-β1和Smad3外，所有蛋白质的表达水平均降低（图7E和I），并且在没有或有SIS3的情况下，L929细胞增殖也降低（图7A）。单独用SIS3治疗降低了蛋白质的表达和细胞增殖的程度。然而，与单独使用SIS3相比，使用SIS3+Roxadustat治疗并没有进一步降低蛋白质表达水平或细胞增殖率（P > 0.05; 图7）。这些发现表明，罗沙度他通过抑制p-Smad3表达来减轻实验性肺纤维化[3]。

改善脊髓损伤的恢复和保护运动神经元的存活是罗沙司他（50 mg/kg；腹腔注射；每天一次，持续 7 天）的两个好处[2]。

---

FG-4592/roxadustat给药还改善了小鼠模型脊髓损伤中神经元的恢复并提高了其存活率。包括特异性HIF-1α阻断剂YC-1在内的联合治疗下调了HIF-1α的表达，并部分消除了FG-4592的保护作用。综上所述，我们的研究结果表明，FG-4592在SCI恢复中的作用与HIF-1α的稳定和凋亡的抑制有关。总体而言，我们的研究表明，PHDI可能是SCI和人类中枢神经系统疾病后治疗干预的可行候选者[2]。

---

roxadustat对肺系数和肺组织组织病理学变化的影响[3]
采用半定量方法通过HE染色评估组织病理学变化。在假小鼠中观察到完整清晰的肺泡、正常间质和少量炎性细胞（图1A1）。在BLM诱导的小鼠肺组织中检测到炎症和纤维化变化，如肺泡破坏和炎性细胞浸润（图1A2）。然而，与BLM诱导的小鼠相比，经roxadustat罗沙度他汀治疗的小鼠在炎性细胞浸润和肺间质增厚方面表现出显著改善，病理评分也显著降低（图1A3）。肺系数是肺重量与体重的比值，它反映了肺纤维化的程度。在肺纤维化的发展过程中，早期肺质量的增加可归因于细胞肿胀和毛细血管充血等因素，而在后期，它主要是由胶原纤维形成引起的。在BLM诱导的小鼠中，由于疾病状态，体重在早期逐渐增加，尽管一些小鼠的体重持续下降，这直接导致了肺系数的增加。在处死前记录小鼠的体重，记录肺组织的重量并计算肺系数。与BLM诱导的小鼠相比，roxadustat/罗沙度他治疗的小鼠的肺系数降低。

---

roxadustat对肺组织胶原水平的影响[3]
采用Masson三色染色和蛋白质印迹法检测胶原蛋白沉积量。I型和III型胶原通过蛋白质印迹法定量（图2A，B），而胶原的组织化学定量采用Masson三色染色法（图2C1-C3；D）。与假手术小鼠相比，在BLM诱导的小鼠中，Masson三色染色观察到肺间质中有大量胶原蛋白沉积。然而，连续21天服用罗沙度他后，胶原蛋白含量显著降低（图2C1-C3中的蓝色胶原蛋白沉积）。HYP是一种特征性氨基酸，约占胶原蛋白总氨基酸的13%，是指示胶原蛋白积累的重要标志。与BLM诱导的小鼠相比，罗沙度司他治疗的小鼠HYP含量显著降低（图2E）。BLM组I型和III型胶原的表达高于假手术组（p<0.01）。然而，罗沙度他汀治疗组的I型和Ⅲ型胶原表达低于BLM诱导组。

---

roxadustat对体内蛋白质表达的影响[3]
通过蛋白质印迹法测定肺组织中HIF-1α、PHD2、α-SMA、TGF-β1、p-Smad3、Smad3和CTGF的蛋白表达。与假小鼠相比，BLM诱导的小鼠HIF-1α、PHD2和α-SMA的表达更高，但罗沙都司他治疗的小鼠的表达更低（图3A，C；p < 0.01). 与假小鼠相比，BLM诱导的小鼠TGF-β1、p-Smad3和CTGF的表达更高，但罗沙度他汀治疗的小鼠表达更低（图3B，D；p < 0.01). 值得注意的是，Smad3的表达在BLM诱导组和罗沙度他汀治疗组中保持不变。

细胞凋亡分析[2]
细胞类型： PC12 细胞
测试浓度： 5、20、50 μM
孵育时间：6小时
实验结果：显着抑制TBHP诱导的细胞凋亡。

---

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： PC12 细胞
测试浓度： 50 μM
孵育时间：6小时
实验结果：稳定HIF-1α蛋白表达。

动物/疾病模型： 12周龄雌性C57BL/6小鼠[2]
剂量： 50 mg/kg
给药途径： 腹腔注射；每日一次，连续7天
实验结果： 保护运动神经元存活并改善脊髓损伤后的恢复。

---

博来霉素（BLM）诱导的小鼠肺纤维化模型[3]
将40只成年雄性C57BL/6小鼠饲养于标准动物房内，温度（22 °C ± 2 °C）和湿度（60 ± 10 %）条件恒定，自由摄取食物和水。适应7天后，建立动物模型。随机选取10只小鼠作为对照组。另30只小鼠在实验的第1、4、8、11、15、18、22和25天腹腔注射博来霉素（BLM，Invitrogen，美国加利福尼亚州卡尔斯巴德），剂量为0.2 mL生理盐水（50 mg/kg）。对照组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水，不含博来霉素。小鼠在博来霉素暴露后于良好条件下饲养2周，每周记录小鼠体重。第39天，选取20只博来霉素暴露较好的小鼠，随机分为博来霉素组和博来霉素+罗沙司他组。 BLM+组小鼠灌胃给予20 mg/kg/天的罗沙司他（剂量选择基于贫血的日剂量以及先前抗BLM诱导小鼠肺纤维化的预实验数据）（Zhang et al., 2019）。对照组和BLM组小鼠灌胃给予等量的生理盐水。第60天收集肺组织，并使用以下公式计算肺系数：肺系数 = 湿肺重/体重 × 100%。随后，将组织分为两部分：左肺组织用4%多聚甲醛固定用于组织学检查，右肺组织保存在液氮中用于Western blotting分析。在正式实验开始前，我们对5组小鼠（假手术组、博来霉素组、博来霉素+罗沙司他10 mg/kg/天组、20 mg/kg/天组或40 mg/kg/天组）进行了探索性预实验，每组10只小鼠。给药方法和持续时间与正式实验相同。我们监测了小鼠的肺重、肺系数和羟脯氨酸（HYP）水平等指标。由于发现20 mg/kg/天的罗沙司他能够降低肺系数和HYP水平，因此我们在正式实验中采用了该剂量。

吸收、分布和排泄
在推荐的治疗剂量范围内，罗沙司他血浆暴露量（AUC 和 Cmax）与剂量成正比增加。每周三次给药方案下，罗沙司他血浆浓度可在 1 周内（三次给药）达到稳态，且蓄积量极小。空腹状态下，通常在给药后两小时达到最大血浆浓度 (Cmax)。与空腹状态相比，进食后服用罗沙司他可使 Cmax 降低 25%，但不会改变 AUC。
健康受试者口服放射性标记的罗沙司他后，放射性回收率平均为 96%（50% 在粪便中，46% 在尿液中）。粪便中，28% 的剂量以原形罗沙司他的形式排出。不到 2% 的剂量以原形罗沙司他的形式从尿液中回收。
罗沙司他的血药浓度与血浆浓度比为 0.6。稳态表观分布容积为 24 L。
未接受透析的慢性肾脏病患者的罗沙司他表观全身清除率 (CL/F) 为 1.1 L/h，接受透析的慢性肾脏病患者的罗沙司他表观全身清除率为 1.4 L/h。

---

代谢/代谢物
体外研究表明，罗沙司他是 CYP2C8 和 UGT1A9 酶的底物。罗沙司他主要代谢为羟基罗沙司他和罗沙司他 O-葡萄糖醛酸苷。原形罗沙司他是人血浆中的主要循环成分，人血浆中可检测到的代谢物占药物相关物质总暴露量的不到 10%。未观察到人类特异性代谢物，但在人尿样本中检测到了罗沙司他 O-葡糖醛酸苷。

---

生物半衰期
罗沙司他的平均有效半衰期在慢性肾病患者中约为 15 小时。

蛋白质结合
罗沙司他与人类血浆蛋白的结合率很高（约 99%），主要与白蛋白结合。

[1]. Roxadustat (FG-4592) Versus Epoetin Alfa for Anemia in Patients Receiving MaintenanceHemodialysis: A Phase 2, Randomized, 6- to 19-Week, Open-Label, Active-Comparator, Dose-Ranging, Safety and Exploratory Efficacy Study. Am J Kidney Dis. 2016 Jun;67(6):912-24.

[2]. Stabilization of HIF-1α by FG-4592 promotes functional recovery and neural protection in experimental spinal cord injury. Brain Res. 2016 Feb 1;1632:19-26.

[3]. Roxadustat attenuates experimental pulmonary fibrosis in vitro and in vivo. Toxicol Lett. 2020 Oct 1;331:112-121.

罗沙司他是一种N-酰基甘氨酸，由甘氨酸的氨基与4-羟基-1-甲基-7-苯氧基异喹啉-3-羧酸的羧基缩合而成。它是缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶（HIF-PH）的抑制剂。它同时也是EC 1.14.11.2（前胶原-脯氨酸双加氧酶）和EC 1.14.11.29（缺氧诱导因子-脯氨酸双加氧酶）的抑制剂。它属于异喹啉类、芳香醚类和N-酰基甘氨酸类化合物。
罗沙司他是一种首创的缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂，用于治疗慢性肾脏病相关的贫血。罗沙司他通过减少缺氧诱导因子 (HIF) 的分解发挥作用。HIF 是一种转录因子，可在低氧条件下刺激红细胞生成。罗沙司他于 2021 年 8 月首次获得欧盟委员会批准。
罗沙司他是一种口服生物利用度高的缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂 (HIF-PHI)，具有潜在的抗贫血活性。给药后，罗沙司他与 HIF-PHI 结合并抑制其活性。HIF-PHI 是一种在正常氧条件下负责降解 HIF 家族转录因子的酶。这可以防止 HIF 分解并促进 HIF 活性。HIF 活性的增强会导致内源性促红细胞生成素的产生增加，从而增强红细胞生成。它还可以降低肽类激素铁调素的表达，提高铁的利用率，并提高血红蛋白 (Hb) 水平。 HIF 调节基因表达以响应低氧水平，包括红细胞生成和铁代谢所需的基因。

---

药物适应症
罗沙司他适用于治疗与慢性肾脏病 (CKD) 相关的症状性贫血的成年患者。
依夫伦佐适用于治疗与慢性肾脏病 (CKD) 相关的症状性贫血的成年患者。
治疗慢性疾病引起的贫血

---

作用机制
贫血是慢性肾脏病的常见并发症，其病因可能包括肾脏促红细胞生成素 (EPO) 生成减少、铁调素水平升高导致的功能性铁缺乏、失血、红细胞存活时间缩短以及炎症。低氧诱导因子 (HIF) 是一种转录因子，可响应细胞环境中的低氧水平（即缺氧）诱导多种靶向氧敏感基因的表达。靶基因参与红细胞生成，例如促红细胞生成素（EPO）、EPO受体、促进铁吸收、铁转运和血红素合成的蛋白等。HIF通路激活是细胞对缺氧的重要适应性反应，可增加红细胞生成。HIF为异二聚体，包含一个氧调节的α亚基。该α亚基含有一个氧依赖性降解（ODD）结构域，在常氧细胞条件下，该结构域受HIF-脯氨酰羟化酶（HIF-PHD）的调控和羟基化。HIF-PHD酶在维持氧气供应和HIF活性之间的平衡中起着至关重要的作用。罗沙司他是一种可逆且强效的HIF-PHD酶抑制剂：抑制HIF-PHD可导致功能性HIF的积累，增加血浆内源性EPO的生成，增强红细胞生成，并间接抑制铁调素（一种铁调节蛋白，在慢性肾脏病炎症期间表达升高）。罗沙司他还能调节铁转运蛋白，并通过增加血清转铁蛋白、肠道铁吸收和释放储存铁来调节铁代谢，从而改善透析依赖型或非透析依赖型慢性肾脏病（CKD）相关贫血患者的病情。总体而言，罗沙司他可提高铁的生物利用度，增加血红蛋白生成，并增加红细胞数量。

---

药效学
罗沙司他可剂量依赖性地提高贫血患者的铁生物利用度，增加血红蛋白生成，并增加红细胞数量。在非透析依赖型CKD贫血患者中，罗沙司他可维持血红蛋白水平长达2年。其在提高血红蛋白水平方面的疗效与促红细胞生成素相当。无论是否使用他汀类药物或其他降脂药物，罗沙司他都能降低胆固醇水平。

---

罗沙司他是首个已向美国食品药品监督管理局 (FDA) 提交上市申请的口服小分子缺氧诱导因子 (HIF) 脯氨酰羟化酶抑制剂，用于治疗慢性肾脏疾病继发性贫血。其用途也被认为与肺纤维化相关；然而，其相应的治疗效果仍有待研究。本研究探讨了罗沙司他对氯化钴 (CoCl2) 刺激的 L929 小鼠成纤维细胞肺纤维化的体外作用，以及对博来霉素 (BLM；腹腔注射，50 mg/kg，每周两次，连续 4 周) 诱导的体内肺纤维化模型的作用。研究发现，与CoCl2组或博来霉素组相比，罗沙司他治疗后L929细胞增殖受到抑制，胶原蛋白I、胶原蛋白III、脯氨酰羟化酶结构域蛋白2 (PHD2)、HIF-1α、α-平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)、结缔组织生长因子 (CTGF)、转化生长因子-β1 (TGF-β1) 和磷酸化Smad3 (p-Smad3) 的表达均降低。罗沙司他通过降低病理评分和胶原沉积，以及减少胶原蛋白I、胶原蛋白III、PHD2、HIF-1α、α-SMA、CTGF、TGF-β1和p-Smad3/Smad3的表达，改善了肺纤维化。我们的累积结果表明，罗沙司他可通过抑制 TGF-β1/Smad 激活来减轻实验性肺纤维化。[3]

---

背景：罗沙司他 (FG-4592) 是一种口服缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂，可通过增加内源性促红细胞生成素、改善铁调节和降低铁调素来促进红细胞生成。研究设计：II 期、随机 (3:1)、开放标签、活性对照、安全性和有效性研究。研究对象和参与者：接受血液透析治疗且既往使用促红细胞生成素维持血红蛋白 (Hb) 水平的稳定终末期肾病患者。干预措施：第一部分：在 54 名受试者中进行为期 6 周的剂量范围研究，比较每周三次口服罗沙司他与继续静脉注射促红细胞生成素的疗效。第二部分：对 6 个队列中的 90 名个体进行 19 周的治疗，采用不同的起始剂量和调整规则（1.0-2.0mg/kg 或按体重分级），这些个体对促红细胞生成素 α 的反应各不相同。禁止静脉注射铁剂。结果：主要终点为血红蛋白水平反应，定义为治疗结束时血红蛋白水平变化（ΔHb）较基线值降低0.5 g/dL或以上（第1部分），以及治疗最后4周内平均血红蛋白水平≥11.0 g/dL（第2部分）。测量指标：铁调素、铁参数、胆固醇和血浆促红细胞生成素（后者仅在部分受试者中测量）。结果：在第1部分中，随机分配至罗沙司他组和促红细胞生成素组的受试者，基线促红细胞生成素α剂量分别为138.3±51.3（SD）和136.3±47.7 U/kg/周；在第2部分中，基线促红细胞生成素α剂量分别为152.8±80.6和173.4±83.7 U/kg/周。在第一部分研究中，罗沙司他1.5至2.0 mg/kg组的血红蛋白水平应答率为79%，而促红素α对照组为33%（P=0.03）。罗沙司他2.0 mg/kg组的铁调素水平降低幅度大于促红素α组（P<0.05）。在第二部分研究中，维持血红蛋白水平所需的罗沙司他平均剂量约为1.7 mg/kg。罗沙司他治疗组的最小二乘均值ΔHb与促红素α治疗组相当（约-0.5 g/dL），两组间ΔHb的最小二乘均值差异为-0.03 g/dL（95% CI，-0.39至0.33 g/dL）（混合效应模型-重复测量）。罗沙司他显著降低了平均总胆固醇水平，而促红细胞生成素α则未观察到此现象。未发现安全性问题。局限性：治疗持续时间短，样本量小。结论：在这项针对接受维持性血液透析治疗的终末期肾病患者的贫血治疗II期研究中，罗沙司他耐受性良好，并能有效维持血红蛋白水平。[1]

---

既往研究表明，脯氨酰羟化酶（PHD）抑制剂可稳定缺氧诱导因子1α亚基（HIF-1α），提高机体对缺氧的耐受性，并改善多种疾病的预后。然而，PHD抑制剂（PHDI）在脊髓损伤恢复中的作用仍存在争议。本研究在体内和体外均探讨了一种新型PHDI FG-4592的保护作用。FG-4592治疗可稳定PC12细胞和脊髓中的HIF1α表达。 FG-4592治疗显著抑制了叔丁基过氧化氢（TBHP）诱导的细胞凋亡，并提高了神经元PC-12细胞的存活率。在小鼠脊髓损伤模型中，FG-4592给药也改善了损伤后的恢复，并提高了神经元的存活率。联合使用特异性HIF-1α阻断剂YC-1可下调HIF-1α的表达，并部分消除FG-4592的保护作用。综上所述，我们的结果表明，FG-4592在脊髓损伤恢复中的作用与HIF-1α的稳定和细胞凋亡的抑制有关。总的来说，我们的研究提示，PHDIs可能是治疗人类脊髓损伤和中枢神经系统疾病的潜在候选药物。[2]

C19H16N2O5

352.34100

352.105

C, 64.77; H, 4.58; N, 7.95; O, 22.70

808118-40-3

Roxadustat-d5;2043026-13-5; 1537179-95-5 (potassium); 808118-40-3 (free); 1537180-01-0 (HCl); 1537179-94-4 (sodium); 1537180-03-2 (mesylate)

11256664

Light yellow to green yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

684.3±55.0 °C at 760 mmHg

199-215°C

367.6±31.5 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.674

3.9

108.75

3

6

5

26

508

0

O=C(O)CNC(C1=C(O)C2=C(C(C)=N1)C=C(OC3=CC=CC=C3)C=C2)=O

YOZBGTLTNGAVFU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H16N2O5/c1-11-15-9-13(26-12-5-3-2-4-6-12)7-8-14(15)18(24)17(21-11)19(25)20-10-16(22)23/h2-9,24H,10H2,1H3,(H,20,25)(H,22,23)

(4-hydroxy-1-methyl-7-phenoxyisoquinoline-3-carbonyl)glycine

Roxadustat; ASP1517; ASP 1517; Roxadustat (FG-4592); N-[(4-Hydroxy-1-methyl-7-phenoxy-3-isoquinolinyl)carbonyl]glycine; ASP-1517; FG-4592; FG4592; FG-4592;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~283.82 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.10 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.10 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: 5 mg/mL (14.19 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。