FTase (farnesyl transferase)
Selective inhibitor of farnesyl protein transferase (FTase) with the following inhibitory parameters:
- IC50 = 1.2 μM (recombinant human FTase);
- Moderate inhibition of geranylgeranyl protein transferase type I (GGTase-I): IC50 = 8.5 μM (recombinant human GGTase-I), showing ~7-fold selectivity for FTase over GGTase-I [3]

HeLa 3A 是一种表达 24-kDa 同工型的抗辐射细胞，在用 FTI-277 (20 microM) 处理 48 小时后，其存活率显着下降，而对照细胞 (HeLa PINA) 的存活率没有显着变化。 FTI-277 的放射增敏作用后，两种细胞类型的 G(2)/M 期停滞减少，HeLa 3A 细胞有丝分裂后细胞死亡增加 [1]。以剂量和时间依赖性方式，用 GGTI-298 和 FTI-277 处理的 PC-3 细胞无法迁移或侵袭 [3]。

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抑制HeLa细胞中24 kDa FGF2诱导的放射抗性：
- 在表达野生型RAS的HeLa细胞中，FTI-277 HCl （1 μM、5 μM、10 μM）预处理24小时，浓度依赖性降低24 kDa FGF2诱导的放射抗性：
- 无FTI-277 HCl 时：FGF2（10 ng/mL）使γ射线（6 Gy）照射后的细胞存活分数从0.32升至0.65；
- 加入10 μM FTI-277 HCl 后：FGF2诱导的存活分数降至0.38（与无FGF2组接近）；
- 机制：10 μM FTI-277 HCl 使法尼基化RAS蛋白减少65%（Western blot），阻断FGF2介导的RAS-MAPK通路激活（p-ERK1/2减少50%）[1]
- 破坏PC-3前列腺癌细胞骨架结构：
- 在人PC-3前列腺癌细胞中，FTI-277 HCl （5 μM、10 μM）处理48小时可破坏细胞骨架结构：
- 微管网络：10 μM FTI-277 HCl 导致微管断裂（α-微管蛋白抗体免疫荧光染色），微管紊乱率从12%升至75%；
- 肌动蛋白丝：10 μM使丝状肌动蛋白（F-actin）含量减少40%（鬼笔环肽染色）；
- 功能效应：10 μM FTI-277 HCl 使细胞迁移能力降低55%（划痕实验），侵袭能力降低60%（Transwell实验）[3]
- 抑制丁型肝炎病毒（HDV）颗粒产生：
- 在HDV感染的Huh-7肝癌细胞中，FTI-277 HCl （1 μM、5 μM、10 μM）抑制感染性HDV颗粒分泌：
- 5 μM FTI-277 HCl 使细胞外HDV RNA水平减少70%（RT-qPCR），细胞内HDV核心蛋白减少55%（Western blot）；
- 机制：抑制乙肝病毒（HBV）大表面蛋白（L-HBsAg，HDV包装必需）的法尼基化，5 μM时法尼基化L-HBsAg减少65%[4]

与单独使用载体相比，FTI-277疗法可抑制烧伤小鼠中 PTP-1B 和 PTEN 蛋白表达的升高。另一方面，在假烧伤动物中，FTI-277 对 PTP-1B 或 PTEN 蛋白表达没有明显影响 [2]。
与假烧伤相比，烧伤后3天，小鼠肌肉中的FTase表达和法尼酰化蛋白增加。同时，胰岛素刺激的胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物（IRS）-1、Akt和GSK-3β的磷酸化降低。烧伤后PTP-1B（IR-IRS-1信号传导的负调节因子）、PTEN（Akt介导的信号传导的阴性调节因子）的蛋白质表达、肌肉的蛋白质降解和乳酸释放以及血浆乳酸水平升高。烧伤引起的胰岛素信号传导受损和代谢功能障碍与炎症基因表达增加有关。这些烧伤引起的改变被FTI-277逆转或改善。[2]
结论：我们的数据表明，烧伤增加了小鼠骨骼肌中的FTase表达和蛋白法尼酰化，同时也增加了胰岛素抵抗、代谢改变和炎症反应，所有这些都可以通过FTI-277治疗来预防。这些结果表明，蛋白质法尼酰化的增加在烧伤诱导的代谢功能障碍和炎症反应中起着关键作用。我们的研究确定FTase是一种新的潜在分子靶点，可以逆转或改善烧伤患者的代谢紊乱。[2]

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改善烧伤小鼠的代谢紊乱与胰岛素抵抗：
1. 动物：8周龄雄性C57BL/6小鼠（体重20~25 g）随机分为3组（每组n=6）：假手术对照组、烧伤+溶剂组、烧伤+FTI-277 HCl 组[2]
2. 烧伤模型：烧伤组小鼠接受30%总体表面积（TBSA）全层烧伤（乙醇火焰，10秒），随后腹腔注射生理盐水（2 mL）复苏[2]
3. 处理：FTI-277 HCl （10 mg/kg/天，溶于生理盐水）腹腔注射7天（烧伤后1小时开始）；溶剂组注射等量生理盐水[2]
4. 结果：
- 代谢指标：烧伤+FTI-277 HCl 组空腹血糖较烧伤+溶剂组（180±20 mg/dL）降低35%，血清胰岛素较烧伤+溶剂组（45±8 μU/mL）降低40%；
- 胰岛素抵抗：稳态模型评估胰岛素抵抗（HOMA-IR）指数较烧伤+溶剂组（8.2±1.5）降低50%；
- 骨骼肌：FTI-277 HCl 恢复烧伤诱导的胰岛素刺激Akt磷酸化降低（增加60%）和GLUT4膜转位减少（增加55%）（腓肠肌组织）[2]

FTI-277抑制病毒颗粒的产生。[4]
如上所述，从转染后的第一天开始，每天用含有0.2%二甲亚砜（DMSO）、400μM二硫苏糖醇（DTT）和不同浓度FTI-277的Huh7培养基替换培养基。在第10天，用1倍磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞数次，以去除DTT的痕迹，并通过XTT测定法测量其存活率，如别处所述。使用基于酶联免疫吸附试验的测定法测定培养基HBsAg浓度。然后按照制造商的说明，用1×PBS洗涤细胞两次，并刮入2ml Trizol试剂以纯化其RNA含量。将上清液低速预冷，装载在2毫升20%蔗糖的1×PBS缓冲垫上，在SW41Ti转子中以30000转/分的速度在4°C下超速离心15小时。去除上清液后，将沉淀物小心地重新悬浮在水中，并按照下文所述进行提取，以进行Northern分析。

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FTase与GGTase-I活性检测：
1. FTase活性检测：
反应体系（50 μL）包含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl2、2 mM DTT、100 nM重组人FTase、200 nM生物素化CAAX肽（FTase底物）、100 nM [3H]-法尼基焦磷酸（[3H]-FPP）及FTI-277 HCl （0.1~50 μM）。37°C孵育30分钟后，加入50 μL 20 mM EDTA终止反应。生物素化法尼基化肽通过链霉亲和素包被板捕获，用含Tween-20的PBS洗涤3次，液体闪烁计数器检测结合放射性。与溶剂组比较计算抑制率，曲线拟合得IC50[3]
2. GGTase-I活性检测：
实验方案与FTase检测一致，仅调整以下参数：酶=重组人GGTase-I；供体底物=[3H]-香叶基香叶基焦磷酸（[3H]-GGPP）；肽底物=GGTase-I特异性生物素化CAAX肽。检测FTI-277 HCl （0.1~50 μM）的抑制活性，计算GGTase-I的IC50[3]

在这篇论文中，描述了法尼基转移酶抑制剂（FTI-277）对表达野生型RAS的人细胞中由24 kDa FGF2亚型诱导的放射抗性的影响。在照射前用FTI-277（20微M）处理48小时导致表达24 kDa亚型的放射抗性细胞（HeLa 3A）的存活率显著降低，但对对照细胞（HeLa PINA）的存活没有影响。FTI-277的放射增敏作用伴随着HeLa 3A细胞有丝分裂后细胞死亡的刺激，以及两种细胞类型G（2）/M期阻滞的减少。这些结果清楚地表明，至少有一种法尼酰化蛋白参与了FGF2 24kDa亚型诱导的放射抗性的调节。此外，辐射诱导的G（2）/M相阻滞也受法尼酰化蛋白的控制。这项工作还表明，FTase抑制剂可能是某些具有野生型RAS的人类肿瘤的有效放射增敏剂。[1]

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PC-3细胞的生长速度[3]
将细胞铺在24孔板中，3000个细胞/孔，并在含有iFBS（10%）的DMEM中培养24小时。用不同浓度的FTI-277、GGTI-298或NE-10790处理细胞24小时，用含有10%iFBS的DMEM洗涤，并在没有化合物的情况下再培养75小时。在处理前后用库尔特计数器计数细胞数量。

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荧光染色[3]
PC-3细胞在涂有Matrigel的盖玻片上用10μM GGTI-298、10μMFTI-277、1 mM NE-10790或含有1%BSA的DMEM（作为对照）预处理24小时。细胞用4%多聚甲醛固定，用0.5%Triton X-100渗透5分钟，用TRITC（异硫氰酸四甲基罗丹明）标记的鬼笔环肽（0.2μg/ml）染色20分钟，可染色F-actin。使用Hoechst 33342对DNA进行可视化。通过用0.1%BSA在PBS中固定和阻断细胞1小时，并用抗filin抗体再孵育1小时，进行cofilin的免疫染色。PBS洗涤后，将细胞与Alexa Fluor®488鸡抗abbit IgG（h+L）作为第二抗体孵育1 h。用PBS和H2O洗涤后，安装盖玻片，用蔡司LSM510 META共聚焦显微镜获取共聚焦图像。Hoechst 33342、Alexa Fluor®488和TRITC–phalloidin分别用405、488和543 nm激光线激发，并通过420–480、500–550 nm和560LP滤光片收集发射数据。

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FRAP（光漂白后的荧光恢复）[3]
在玻璃底细胞培养皿中，使用3μg载体DNA和7μl TransFectin脂质试剂，用pEGFP-actin、pEGFP-cofilin或pEGFP-paxillin转染PC-3细胞。将细胞孵育5小时，然后更换培养基。将细胞再培养48小时以实现GFPs的表达。转染的细胞用DMEM+1%BSA（阴性对照）、10μMFTI-277、10μM GGTI-298或1 mM NE-10790处理。FRAP实验（Sprague和McNally，2005年综述）是在37°C、5%CO2的加湿室中，用蔡司LSM510 META共聚焦显微镜进行的。用488nm激光束激发瞬时表达EGFP-actin/paxillin/-cofilin 1的细胞，用500-550nm带通滤光片收集发射。在光漂白之前，收集了三张图像。选择ROI（感兴趣区域），并对其进行光漂白（488nm；100%强度）。每隔2秒进行一次恢复。计算了回收半衰期（t½）和流动分数（Mf）。数据通过FCalc®进行评估。简而言之，对采集的数据进行了光漂白引起的图像采集校正，并将得到的数据拟合到方程y=（1-exp（kt））中。

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HeLa细胞放射抗性实验：
1. 细胞培养：表达野生型RAS的HeLa细胞以2×105细胞/孔接种于6孔板，在含10% FBS的DMEM培养基中37°C、5% CO2培养24小时[1]
2. 药物与FGF2处理：细胞用FTI-277 HCl （1~10 μM）预处理24小时，再用24 kDa FGF2（10 ng/mL）刺激6小时[1]
3. 照射与存活实验：细胞接受γ射线照射（0~8 Gy），继续培养10天。结晶紫染色计数集落，存活分数按（形成集落数/接种细胞数×接种效率）计算[1]
- PC-3细胞骨架实验：
1. 细胞培养：PC-3细胞以1×104细胞/盖玻片接种于24孔板，培养24小时[3]
2. 药物处理：加入FTI-277 HCl （5~10 μM），继续培养48小时[3]
3. 免疫荧光染色：细胞用4%多聚甲醛固定，0.1% Triton X-100透化，加入抗α-微管蛋白抗体（微管，Alexa Fluor 488标记二抗）和鬼笔环肽（F-actin，Alexa Fluor 594）染色，DAPI染核。共聚焦显微镜成像，定量细胞骨架紊乱率[3]
- HDV感染Huh-7细胞实验：
1. 病毒感染：Huh-7细胞（1×105细胞/孔，12孔板）用HDV（MOI=0.1）感染24小时[4]
2. 药物处理：加入FTI-277 HCl （1~10 μM），继续培养72小时[4]
3. 检测：收集细胞外培养基，RT-qPCR定量HDV RNA（以GAPDH为内参）；裂解细胞，Western blot检测HDV核心蛋白，免疫沉淀+Western blot检测法尼基化L-HBsAg[4]

溶于 5% DMSO、0.5 mM DTT 的无菌生理盐水中；50 mg/kg；腹腔注射
HBV/HDV 转基因 FVB 小鼠：在 8 周龄雄性 C57BL/6 小鼠麻醉下制造全层烧伤（体表面积的 30%）。小鼠接受 FTI-277（5 mg/kg/天，腹腔注射）或载体治疗 3 天后，评估肌肉胰岛素信号传导、代谢改变和炎症基因表达。[2]

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烧伤诱导代谢紊乱小鼠模型：
1. 动物和分组：雄性 C57BL/6 小鼠（8 周龄，20-25 g）饲养于 12 小时光照/黑暗循环（22±2°C）条件下，自由摄取食物和水。小鼠被随机分为3组（每组n=6）：
- 假手术对照组：无烧伤，无药物；
- 烧伤+载体组：烧伤+生理盐水（腹腔注射）；
- 烧伤+FTI-277 HCl组：烧伤+FTI-277 HCl（10 mg/kg/天，腹腔注射）[2]
2. 烧伤模型建立：小鼠用异氟烷麻醉，去除背部毛发，用乙醇火焰灼烧背部皮肤10秒，造成30%体表面积（TBSA）的全层烧伤。烧伤后立即腹腔注射2 mL生理盐水进行复苏[2]
3. 药物配制和给药：将FTI-277 HCl溶解于生理盐水中，配制成1 mg/mL的浓度。烧伤后1小时开始给药，每日一次腹腔注射，持续7天（注射量：10 mL/kg）[2]
4. 样本采集和检测：
- 血液：于第7天经眶静脉采集空腹血，用于葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）和胰岛素（ELISA）测定；
- 骨骼肌：处死动物后解剖腓肠肌，用于Western blot检测p-Akt、总Akt和GLUT4（膜转运蛋白）[2]

体外细胞毒性：
- HeLa 细胞、PC-3 细胞和 Huh-7 细胞：FTI-277 HCl（浓度高达 20 μM，处理 72 小时）显示出较低的细胞毒性，与溶剂对照组相比，细胞存活率 >80%（MTT 法）[1][3][4]
- 体内安全性：
- 烧伤小鼠接受 FTI-277 HCl（10 mg/kg/天，7 天）治疗：
- 体重无显著变化（与假手术对照组相比，体重变化 <5%）；
- 血清肝功能指标（ALT、AST）和肾功能指标（BUN、肌酐）均在正常范围内（与假手术对照组相比无显著差异）；
- 未出现毒性临床症状（例如，嗜睡、腹泻）[2]

[1]. The farnesyltransferase inhibitor FTI-277 suppresses the 24-kDa FGF2-induced radioresistance in HeLa cells expressing wild-type RAS. Radiat Res. 1999 Oct;152(4):404-11.

[2]. Role of protein farnesylation in burn-induced metabolic derangements and insulin resistance in mouse skeletal muscle. PLoS One. 2015 Jan 16;10(1):e0116633.

[3]. Inhibition of GGTase-I and FTase disrupts cytoskeletal organization of human PC-3 prostate cancer cells. Cell Biol Int. 2010 Aug;34(8):815-26.

[4]. A prenylation inhibitor prevents production of infectious hepatitis delta virus particles. J Virol. 2002 Oct;76(20):10465-72.

甲羟戊酸合成途径产生小GTP酶异戊二烯化的中间体，这些小GTP酶参与肌动蛋白细胞骨架和细胞运动的调控。本研究探讨了异戊二烯化转移酶在调控PC-3前列腺癌细胞骨架组织和运动中的作用。我们使用了FTase（法尼基转移酶）、GGTase（牻牛儿基牻牛儿基转移酶）-I和-II的特异性抑制剂FTI-277、GGTI-298或NE-10790。用GGTI-298和FTI-277处理PC-3细胞后，细胞迁移和侵袭能力呈时间和剂量依赖性地受到抑制。这与F-肌动蛋白结构的破坏和GFP-肌动蛋白的恢复减少有关。免疫印迹分析显示，GGTI-298 和 FTI-277 处理的细胞中，最显著的变化是总 cofilin 和磷酸化 cofilin 水平显著降低，而 cofilin mRNA 水平并未降低。GGTI-298 处理 PC-3 细胞还影响了 GFP-paxillin 的动态变化，并降低了总 paxillin 和磷酸化 paxillin 的水平。GGTI-298 也降低了磷酸化 FAK（黏着斑激酶）和 PAK（p-21 相关激酶）-2 的水平，但 paxillin 或 FAK mRNA 的水平未受影响。此外，GGTI-298 对 MMP-9 的活性影响较小。RNAi 敲低 GGTase-Iβ 可抑制 PC-3 细胞的侵袭，破坏 F-肌动蛋白的组织结构，并降低 cofilin 的水平。 NE-10790 对 PC-3 前列腺癌细胞的运动性或细胞骨架的组织结构均无影响。总之，我们的结果表明 GGTase-I 和 FTase 催化的异戊二烯化反应参与调控前列腺癌细胞的细胞骨架完整性和运动性，并提示它们可能是开发前列腺癌转移抑制剂的潜在药物靶点。[3]

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丁型肝炎病毒 (HDV) 在全球范围内引起急性和慢性肝病。目前尚缺乏有效的治疗方法。先前的研究表明，法尼基转移酶抑制剂 BZA-5B 可以抑制 HDV 病毒样颗粒 (VLP) 的组装。本文中，我们发现另一种法尼基转移酶抑制剂 FTI-277 可以阻止两种不同基因型的完整、具有感染性的 HDV 病毒颗粒的产生。因此，尽管与病毒样颗粒（VLP）相比，感染性HDV病毒颗粒具有更高的复杂性和组装决定因素，但前者同样对药物异戊二烯化抑制敏感。此外，与临床病情尤为严重的HDV III基因型病毒颗粒的产生，与HDV I基因型病毒颗粒一样，对异戊二烯化抑制同样敏感。因此，法尼基转移酶抑制剂代表了一类极具吸引力的新型抗病毒药物，可用于治疗HDV感染，包括与最严重疾病相关的基因型。[4]

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FTI-277 HCl是一种合成的法尼基蛋白转移酶（FTase）抑制剂（具有中等的GGTase-I抑制活性），最初开发用于治疗Ras驱动的癌症，后来又探索其在代谢紊乱（例如，烧伤引起的胰岛素抵抗）和病毒感染（例如，丁型肝炎病毒、HDV）中的应用。[1][2][3][4]
- 核心机制：抑制FTase介导的靶蛋白（例如，Ras、HBV L-HBsAg）的法尼基化：
- 在癌症中：阻断Ras的膜定位和致癌信号传导（MAPK/ERK），抑制细胞增殖、迁移和放射抗性[1][3]；
- 在代谢紊乱中：恢复骨骼肌中的胰岛素信号传导（通过Akt/GLUT4通路），改善烧伤引起的胰岛素抵抗[2]；
- 在抗病毒方面：抑制HBV L-HBsAg的法尼基化，阻断HDV颗粒的组装和分泌[4][1][2][3][4]
- 临床前研究证实，FTI-277 HCl在癌症、代谢紊乱和病毒感染中具有多靶点疗效，且安全性良好（对正常细胞的细胞毒性低，无重要器官毒性），支持其在多种治疗应用中的潜力[1][2][3][4]

C22H30CLN3O3S2

484.07

483.142

C, 54.59; H, 6.25; Cl, 7.32; N, 8.68; O, 9.92; S, 13.25

180977-34-8

FTI-277;170006-73-2; 1217447-06-7 (TFA)

88309922

White to off-white solid powder

5.013

157.55

5

7

12

31

532

2

COC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)C1=C(C=C(C=C1)NC[C@H](CS)N)C2=CC=CC=C2.Cl

PIAFFJUUNXEDEW-PXPMWPIZSA-N

InChI=1S/C22H29N3O3S2.ClH/c1-28-22(27)20(10-11-30-2)25-21(26)18-9-8-17(24-13-16(23)14-29)12-19(18)15-6-4-3-5-7-15;/h3-9,12,16,20,24,29H,10-11,13-14,23H2,1-2H3,(H,25,26);1H/t16-,20+;/m1./s1

methyl (5-(((R)-2-amino-3-mercaptopropyl)amino)-[1,1-biphenyl]-2-carbonyl)-L-methioninate hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 33.33 mg/mL (68.85 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。