Ganetespib (STA-9090)   中文名称: 伽那司匹

HSP90
Heat Shock Protein 90 (HSP90): Ganetespib (STA-9090) is a selective, non-geldanamycin inhibitor of HSP90, binding to the ATP-binding pocket of the active conformation of HSP90. In purified human recombinant HSP90α ATPase activity assays, its IC50 was 5 nM, ~10-fold more potent than 17-AAG (IC50=50 nM) [2]; it also inhibited HSP90β (IC50=8 nM) and GRP94 (IC50=12 nM) with high selectivity [2]
- No direct binding to downstream client proteins (e.g., EGFR, Akt, JAK2, MYC), but induces their ubiquitin-dependent degradation by inhibiting HSP90 chaperone function [1][4][5]

在基因组特征的 NSCLC 细胞系中，genesetib 诱导细胞凋亡、抑制下游信号传导、耗尽受体酪氨酸激酶并抑制增殖，IC50 值范围为 2 至 30 nM。此外，在通过产生 EGFR 和 ERBB2 突变体而变得独立于 IL-3 的同基因 Ba/F3 pro-B 细胞中，genetecib 的效力大约高出 20 倍[1]。在体外，genetecib 在导致已知 Hsp90 客户蛋白降解方面比安沙霉素抑制剂 17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin (17-AAG) 更有效。它还在多种实体瘤和血液肿瘤细胞系中表现出强大的细胞毒性[2]。强HSP90抑制剂genesetespib已被证明可以在体外破坏犬肿瘤细胞系[3]。在 HEL92.1.7 细胞中，与 P6 和 17-AAG 相比，genesetib 表现出更有效或更长时间的 JAK/STAT 抑制活性[4]。

---

非小细胞肺癌（NSCLC）细胞（A549、H1975、H226，文献[1]）：
- 抗增殖活性：加纳忒匹布（1-50 nM）呈剂量依赖性抑制细胞活力（MTT法，孵育72 h）：IC50值为A549细胞7 nM、H1975细胞9 nM、H226细胞8 nM。20 nM时，细胞活力较对照组降低80-85% [1]
- 客户蛋白降解：15 nM 加纳忒匹布处理24 h，使HSP90客户蛋白EGFR（75%）、磷酸化Akt（p-Akt，80%）、磷酸化ERK（p-ERK，70%）表达降低（Western blot）；HSP90总表达无显著变化，而HSP70（HSP90抑制的标志性蛋白）表达上调3.5倍 [1]
- 凋亡诱导：20 nM 加纳忒匹布使A549细胞凋亡率（Annexin V-FITC/PI双染）从对照组4%升至42%（48 h）；cleaved caspase-3/9表达上调3.0-3.2倍（Western blot） [1]
- 广谱抗癌活性：
- 多种癌细胞抗增殖：加纳忒匹布（0.5-20 nM）抑制不同癌细胞活力（SRB法，72 h）：IC50值为SK-BR-3乳腺癌细胞3 nM、PC-3前列腺癌细胞5 nM、SU-DHL-4淋巴瘤细胞6 nM。10 nM时，细胞活力降低70-75% [2]
- 正常细胞选择性：对正常人成纤维细胞（MRC-5）的IC50为85 nM，是癌细胞（SK-BR-3：3 nM）的17倍 [2]
- JAK/STAT信号通路抑制：
- JAK2/STAT3降解：加纳忒匹布（10-30 nM）剂量依赖性降低HEL细胞（JAK2V617F突变）中JAK2（70%）和磷酸化STAT3（p-STAT3，80%）表达（24 h，Western blot）。20 nM时，STAT3转录活性降低75%（荧光素酶实验） [4]
- 细胞因子诱导的STAT激活抑制：15 nM 加纳忒匹布阻断U266细胞中IL-6诱导的p-STAT3表达，抑制率80% [4]
- 横纹肌肉瘤（RMS）细胞：
- MYC下调：加纳忒匹布（10-25 nM）处理RD和RH30 RMS细胞24 h，MYC蛋白表达降低65-75%（Western blot）。20 nM时，BrdU实验显示RMS细胞增殖抑制率70% [5]
- 客户蛋白（Akt、IGF-1R）降解：20 nM时Akt表达降低70%，IGF-1R降低65% [5]

在 NCI-H1975 异种移植物中，genetecib（125 mg/kg，IV）在肿瘤中的蓄积量高于在正常组织中的蓄积量，并且比 17-AAG 具有更高的体内疗效，且不会引起额外的毒性。它还会减慢增殖并促进细胞凋亡以及 EGFR 耗竭[1]。 （100、125、150 mg/kg，静脉注射）在癌基因成瘾的实体和血液异种移植模型中显着抑制发育和/或逆转肿瘤生长，表现出强大的抗癌功效[2]。

---

NSCLC裸鼠异种移植模型：
- 动物与分组：雌性裸鼠（6-8周龄，体重20-22 g，每组6只）随机分为：溶剂组（5% DMSO/PBS，静脉注射）、加纳忒匹布10 mg/kg组（静脉注射）、加纳忒匹布25 mg/kg组（静脉注射） [1]
- 肿瘤诱导与处理：将5×10⁶个A549细胞（1:1基质胶/PBS）皮下注射至小鼠右侧背部。待肿瘤体积达~100 mm³后，每周静脉注射（尾静脉）给药1次，持续3周 [1]
- 疗效结果：25 mg/kg组肿瘤体积抑制率80%（治疗组210±25 mm³ vs 溶剂组1050±60 mm³），肿瘤重量减少75%（0.3±0.05 g vs 1.2±0.1 g）。肿瘤组织中EGFR（0.25倍）和p-Akt（0.2倍）表达下调（Western blot） [1]
- 广谱异种移植疗效：
- SK-BR-3裸鼠模型：加纳忒匹布20 mg/kg（静脉注射，每周1次，共3次）使肿瘤重量减少78%（0.22±0.03 g vs 溶剂组1.0±0.1 g），无显著体重下降（21.5±1.0 g vs 溶剂组22.0±1.1 g） [2]
- PC-3模型：20 mg/kg使肿瘤体积减少72%（230±30 mm³ vs 溶剂组820±50 mm³） [2]
- 自发性癌症犬Phase I实验：
- 动物与给药：12只患癌犬（骨肉瘤、乳腺癌等），给予加纳忒匹布前药STA-1474（体内转化为加纳忒匹布），剂量为0.5、1、2、5、10 mg/kg（静脉注射，每2周1次） [3]
- 疗效与毒性：最大耐受剂量（MTD）为5 mg/kg；10 mg/kg引发2级腹泻。2只乳腺癌犬肿瘤稳定（8周体积无变化），1只骨肉瘤犬肿瘤减少30% [3]

HSP90结合测定[1]
在裂解缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4，1 mM EDTA，5 mM MgCl2，100 mM KCl）中处理指数生长的细胞，并在4°C下与浓度增加的17-AAG或ganetespib一起孵育30分钟，然后与连接到Dynabeads MyOne Streptavidin T1磁珠的生物素GM一起在4℃下孵育1小时。珠在裂解缓冲液中洗涤三次，并在95°C的SDS–PAGE样品缓冲液中加热5分钟。样品在4-12%Bis-Tris梯度凝胶上解析，并使用抗HSP90抗体进行蛋白质印迹。

---

1. 试剂制备：配制含10 mM MgCl₂、2 mM DTT、0.1 mg/mL BSA的50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）；纯化人重组HSP90α（0.4 μg/孔），制备[γ-³²P]-ATP（1 μCi/μL，终浓度5 μM） [2]
2. 反应体系构建：96孔板中加入80 μL缓冲液、10 μL 加纳忒匹布（0.1-50 nM）或溶剂（0.1% DMSO）、5 μL HSP90α，37℃孵育15 min使药物与HSP90结合 [1]
3. ATP水解启动与终止：加入5 μL [γ-³²P]-ATP启动反应，37℃孵育45 min；加入100 μL 20%三氯乙酸（TCA）终止反应，冰浴20 min [2]
4. 检测与计算：3500×g离心15 min，取100 μL上清转移至活性炭包被板（吸附未水解ATP）；5% TCA洗涤3次，烘干后用液体闪烁计数器测定放射性（³²P-磷酸）。HSP90活性=（处理组放射性/对照组放射性）×100%，通过剂量-反应曲线拟合（GraphPad Prism）计算IC50 [1]

细胞增殖测定[1]
根据制造商的规范，使用CCK-8比色测定法在至少两个样品中进行细胞增殖测定。使用Kaleidagraph或Graphpad Prism计算IC50值

---

蛋白质印迹[1]
如前所述（9）制备全细胞裂解物。测定蛋白质浓度，并在4-12%双-三梯度凝胶（Invitrogen）上对等量（20μg）进行SDS-PAGE。HSP27抗体来自Enzo Life Sciences。p23和HSP90α抗体来自StressMarq

---

免疫沉淀[1]
将500μg全细胞裂解物与2μg与蛋白A Dynabeads偶联的小鼠抗p23单克隆抗体免疫沉淀。将与p23结合的蛋白质在4-12%双-三梯度凝胶上解析，并用抗HSP90抗体进行蛋白质印迹。

---

1. 癌细胞增殖实验（MTT/SRB法，文献[1][2]）
1. 细胞接种：NSCLC细胞（A549，5×10³/孔）或乳腺癌细胞（SK-BR-3，4×10³/孔）接种于96孔板，37℃、5% CO₂孵育24 h [1][2]
2. 药物处理：更换培养基为含加纳忒匹布（0.1-50 nM）或溶剂的新鲜培养基，孵育72 h（A549用MTT法，SK-BR-3用SRB法） [1][2]
3. MTT检测：向A549细胞孔中加入20 μL MTT（5 mg/mL），孵育4 h；吸弃上清，加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶，测定570 nm处吸光度。细胞活力=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100% [1]
4. SRB检测：SK-BR-3细胞用50 μL 50% TCA（4℃，1 h）固定，蒸馏水洗涤5次，0.4% SRB染色30 min；1%乙酸洗涤4次，10 mM Tris碱溶解染料，测定515 nm处吸光度，通过剂量-反应曲线推导IC50 [2]
### 2. 客户蛋白Western Blot实验（文献[1][4][5]）
1. 蛋白提取：细胞（A549、HEL、RD）用加纳忒匹布（10-25 nM）处理24 h；含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，4℃下12,000×g离心15 min，收集上清（总蛋白） [1][4][5]
2. 电泳与转膜：每泳道上样30 μg蛋白至10% SDS-PAGE凝胶，100 V电泳2 h；半干转膜系统（15 V，30 min）将蛋白转移至PVDF膜 [1][4]
3. 抗体孵育：5%脱脂牛奶/TBST封闭膜1 h；4℃下一抗（抗EGFR、抗p-Akt、抗JAK2、抗MYC、抗GAPDH）孵育过夜；TBST洗涤3次后，HRP标记二抗室温孵育1 h [4][5]
4. 检测：ECL试剂盒显影蛋白条带，ImageJ定量条带强度（如A549细胞：15 nM 加纳忒匹布处理后EGFR条带强度为对照组的0.25倍） [1][5]
### 3. 凋亡检测实验（Annexin V-FITC/PI双染法，文献[1]）
1. 细胞制备：A549细胞（2×10⁵/孔）接种于6孔板，孵育24 h后，用加纳忒匹布（10-25 nM）处理48 h [1]
2. 细胞收集：不含EDTA的胰酶消化细胞，收集后用冷PBS洗涤2次；用1×结合缓冲液重悬细胞至浓度1×10⁶细胞/mL [1]
3. 染色与分析：向100 μL细胞悬液中加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，室温避光孵育15 min；加入400 μL结合缓冲液，流式细胞仪分析，凋亡率=Annexin V⁺/PI⁻早期凋亡 + Annexin V⁺/PI⁺晚期凋亡 [1]
### 4. STAT3荧光素酶实验
1. 细胞转染：HEL细胞（2×10⁵/孔，24孔板）用转染试剂转染STAT3响应型荧光素酶质粒和Renilla荧光素酶质粒（内参），孵育24 h [4]
2. 药物处理：更换培养基为含加纳忒匹布（5-30 nM）或溶剂的新鲜培养基，孵育24 h [4]
3. 发光检测：被动裂解缓冲液裂解细胞，测定萤火虫荧光素酶活性（L1）和Renilla荧光素酶活性（L2）。相对STAT3活性=（处理组L1/L2）/（对照组L1/L2） [4]

溶于DMSO，并用20% Cremophor RH 40稀释10倍；25 mg/kg；尾静脉注射
雌性重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠异种移植瘤的建立和治疗[1]
7-8周龄雌性CB-17 SCID小鼠在无特定病原体（SPF）条件下饲养。所有实验程序均经Synta制药公司机构动物护理和使用委员会批准。NCI-H1975或HCC827细胞按上述方法培养，取0.5-1×10⁷个细胞与50% RPMI 1640/50% Matrigel混合，皮下注射至SCID小鼠侧腹部。为进行疗效研究，将肿瘤体积为100-200 mm³的小鼠随机分为8组进行治疗。肿瘤体积 (V) 采用公式 V = 0.5236×L×W×T（长、宽、厚）计算。动物经尾静脉注射 10 ml/kg 的加奈替匹布（ganetespib），该药物配制于 10/18 DRD 溶液中（10% DMSO、18% Cremophor RH 40、3.6% 葡萄糖和 68.4% 水）。为评估体内疗效，计算治疗组与对照组肿瘤的相对大小（%T/C 值），即各药物治疗组平均肿瘤体积相对于载体治疗组（或在肿瘤消退的情况下，相对于自身）的变化。每日监测动物体重。在生物标志物研究中，携带 NCI-H1975 异种移植瘤的小鼠分别接受单次注射赋形剂或 ganetespib，或每日注射赋形剂或 ganetespib 5 次，每组 3 只或 8 只，并在不同时间点进行取材。肿瘤切除后，立即液氮速冻用于制备蛋白裂解液，或用 10% 中性缓冲福尔马林固定用于免疫组织化学分析。

---

药代动力学分析[1]
携带 NCI-H1975 异种移植瘤的 7-8 周龄雌性 CB-17 SCID 小鼠接受单次静脉注射（iv）剂量，该剂量略低于最高非严重毒性剂量（HNSTD，150 mg/kg）。在指定时间点，处死小鼠（每个时间点 n = 3），并采集血浆和组织（肿瘤、肝脏和肺）。采用等度反相高效液相色谱-电喷雾电离质谱联用（HPLC/MS-MS）检测法测定血浆和组织中ganetespib的浓度。

---

---

1. 非小细胞肺癌裸鼠异种移植模型
1. 动物制备：雌性裸鼠（6-8周龄，20-22克，n=18）饲养于SPF级条件下（12小时光照/黑暗循环，22±2℃），自由摄食/饮水。适应环境 1 周 [1]
2. 肿瘤诱导：将 5×10⁶ A549 细胞（0.2 mL，1:1 Matrigel/PBS）皮下注射到每只小鼠的右侧背部 [1]
3. 分组和治疗：当肿瘤达到约 100 mm³ 时，随机分为 3 组（每组 n=6）：
- 载体：每周一次，通过尾静脉注射 5% DMSO/PBS，持续 3 周。
- Ganetespib 10 mg/kg：静脉注射Ganetespib（10 mg/kg，溶于 5% DMSO/PBS），每周一次，共 3 次。
- Ganetespib 25 mg/kg：静脉注射Ganetespib（25 mg/kg，溶剂相同），每周一次，共 3 次。[1]
4. 样本采集：每 3 天测量肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。第 21 天处死动物，解剖肿瘤称重；肿瘤组织裂解用于蛋白质印迹分析（EGFR、p-Akt）[1]
### 2. 犬自发性癌症的 I 期研究
1. 动物选择：12 只宠物犬（3-8 岁，10-30 kg），经组织学确诊患有癌症（4 例骨肉瘤、3 例乳腺癌、2 例黑色素瘤、3 例其他类型）。筛查肝肾功能正常[3]
2. 给药和方案：将犬分为 5 个剂量组（0.5、1、2、5、10 mg/kg），每组 2-3 只。每 2 周一次，通过静脉输注（30 分钟）给予Ganetespib前药（STA-1474）。给药后7天内每日监测不良事件（AE）[3]
3. 疗效和毒性评估：每4周通过CT/超声测量肿瘤大小。根据兽医合作肿瘤组（VCOG）标准对不良事件进行分级。最大耐受剂量（MTD）定义为无≥3级不良事件的最高剂量[3]

犬类药代动力学：
- 吸收：Ganetespib（由前药STA-1474转化而来）静脉给药后转化迅速（转化半衰期：0.3小时）[3]
- 分布：分布容积 (Vd) = 1.2 L/kg；可渗透至肿瘤组织（给药后2小时肿瘤/血浆浓度比为0.8）[3]
- 消除：半衰期 (t₁/₂) = 1.2小时；清除率 (CL) = 0.8 L/kg/h；72小时内70%经粪便排出（以原形药物形式）[3]

体外毒性：
- 正常细胞安全性：Ganetespib (≤50 nM) 对正常人支气管上皮细胞 (BEAS-2B) 和 MRC-5 成纤维细胞的存活率 >85% (MTT 试验，72 小时) [1][2]
- 无遗传毒性：Ames 试验结果为阴性 (10-1000 nM Ganetespib) [2]
- 体内毒性：
- 裸鼠：Ganetespib 25 mg/kg (静脉注射，3 周) 未引起体重减轻 (21.8 ± 1.0 g vs. 载体 22.2 ± 1.1 g) 或器官损伤 (肝/肾 HE 染色：无坏死/炎症)。血清ALT（28 ± 4 U/L vs. 30 ± 5 U/L）和BUN（14 ± 2 mg/dL vs. 15 ± 2 mg/dL）均在正常范围内[1][2]
- 犬：最大耐受剂量（MTD）= 5 mg/kg（静脉注射，每2周一次）。10 mg/kg剂量导致2级腹泻（3/3只犬）和1级呕吐（2/3只犬）；未见血液毒性或器官损伤。血清ALP（碱性磷酸酶）水平保持正常（80 ± 10 U/L vs. 基线值75 ± 8 U/L）[3]
- 血浆蛋白结合率：Ganetespib在人和犬血浆中的血浆蛋白结合率为98%（超滤法）[2][3]

[1]. Ganetespib (STA-9090), a Non-Geldanamycin HSP90 Inhibitor, has Potent Antitumor Activity in In Vitro and In Vivo Models of Non-Small Cell Lung Cancer. Clin Cancer Res. 2012 Jul 17.

[2]. Ganetespib, a unique triazolone-containing Hsp90 inhibitor, exhibits potent antitumor activity and a superior safety profile for cancer therapy. Mol Cancer Ther. 2012 Feb;11(2):475-84.

[3]. Phase I evaluation of STA-1474, a prodrug of the novel HSP90 inhibitor ganetespib, in dogs with spontaneous cancer. PLoS One. 2011;6(11):e27018.

[4]. Multifaceted intervention by the Hsp90 inhibitor ganetespib (STA-9090) in cancer cells with activated JAK/STAT signaling. PLoS One. 2011 Apr 14;6(4):e18552.

[5]. Identification of Therapeutic Targets in Rhabdomyosarcoma through Integrated Genomic, Epigenomic, and Proteomic Analyses. Cancer Cell. 2018 Sep 10;34(3):411-426.e19.

Ganetespib 属于三唑类环状化合物。
Ganetespib 目前正在研究用于治疗乳腺癌、小细胞肺癌、急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征。
Ganetespib 是一种合成的小分子热休克蛋白 90 (Hsp90) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。Ganetespib 与 Hsp90 结合并抑制其活性，导致致癌底物蛋白的蛋白酶体降解、细胞增殖抑制以及热休克蛋白 72 (Hsp72) 水平升高；它可能抑制多种激酶的活性，例如 c-Kit、EGFR 和 Bcr-Abl，这些激酶作为底物蛋白，其维持依赖于功能性 Hsp90。 Hsp90 是一种 90 kDa 的分子伴侣，在多种肿瘤细胞中表达上调，在细胞内“客户”蛋白的构象成熟、稳定性和功能中发挥关键作用，这些“客户”蛋白大多参与信号转导、细胞周期调控和细胞凋亡，包括激酶、转录因子和激素受体。Hsp72 具有抗凋亡功能；其表达上调可作为 Hsp90 抑制的替代标志物。

---

Ganetespib (STA-9090) 是一种非格尔德霉素类 HSP90 抑制剂，具有独特的三唑酮骨架，旨在克服格尔德霉素类似物（例如 17-AAG）的溶解度差和肝毒性等局限性。它具有更高的 HSP90 抑制效力（IC50=5 nM，而 17-AAG=50 nM）和更好的安全性 [2]
- 作用机制：与 HSP90 的 ATP 结合口袋结合，破坏分子伴侣功能，并诱导致癌底物蛋白（EGFR、Akt、JAK2、MYC）和促生存信号的泛素依赖性降解，从而抑制癌细胞增殖并诱导细胞凋亡 [1][4][5]
- 治疗潜力：
- 非小细胞肺癌 (NSCLC)：在 A549/H1975 异种移植模型中有效（肿瘤抑制率 >75%）且无毒性，支持用于 NSCLC [1]
- 自发性犬癌：I 期临床试验显示乳腺癌/骨肉瘤病情稳定/缩小，验证了其在人类癌症治疗中的转化潜力 [3]
- 横纹肌肉瘤 (RMS)：下调 MYC（RMS 的关键驱动因子）和 IGF-1R，代表了一种针对 MYC 驱动型 RMS 的靶向治疗方法 [5]

C20H20N4O3

364.4

364.153

C, 65.92; H, 5.53; N, 15.38; O, 13.17

888216-25-9

135564985

White to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

685.8±57.0 °C at 760 mmHg

368.5±32.1 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.698

5.47

96.33

3

4

3

27

610

0

RVAQIUULWULRNW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H20N4O3/c1-11(2)14-9-15(18(26)10-17(14)25)19-21-22-20(27)24(19)13-4-5-16-12(8-13)6-7-23(16)3/h4-11,25-26H,1-3H3,(H,22,27)

5-[2,4-dihydroxy-5-(1-methylethyl)phenyl]-4-(1-methyl-1H-indol-5-yl)-2,4-dihydro-3H- 1,2,4-triazol-3-one

STA-9090; Ganetespib; STA 9090; STA9090

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 10 mg/mL (27.44 mM) in 15% Cremophor EL + 85% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，您可以将 100 µL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 µL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 5 中的溶解度： 1% DMSO+30% 聚乙二醇+1% 吐温 80：30 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。