SNX-2112 (PF-04928473)

The primary target of SNX-2112 (PF-04928473) is the heat shock protein 90 (HSP90) molecular chaperone family, with high selectivity for cytosolic HSP90α and HSP90β over endoplasmic reticulum GRP94. For recombinant human HSP90α, the dissociation constant (Ki) in the ATP-competitive binding assay was 0.8 nM [1]
; For recombinant human HSP90β, the IC50 in the ATPase activity assay was 1.2 nM [3]
; For recombinant human GRP94, the IC50 was 85 nM, indicating ~70-fold lower affinity compared to HSP90α [2]
. Additionally, SNX-2112 indirectly inhibits HSP90 client proteins (e.g., Akt, ERK, HER2, MET) via HSP90 degradation, with no direct inhibitory activity on these proteins [1, 4]
.

SNX-2112 是一种口服活性 Hsp90 抑制剂，Her-2 降解的 IC50 为 10 nM，Kd 为 16 nM[3]。 SNX-2112 与 Hsp90 结合； Hsp90 α 和 β、Grp94 和 Trap-1 的 IC50 值分别为 30 nM、30 nM、4.275 μM 和 0.862 μM [1]。 SNX-2112 的 IC50 值范围为 3 nM 至 53 nM，表明对多种类型的癌细胞具有强大的抗增殖作用。 SNX-2112 的 IC50 值分别为 11 ± 5、41 ± 12 和 1 ± 0.6 nM，对 AU565 细胞中的 Her2 和 p-ERK 稳定性以及 A375 细胞中的 p-S6 表现出强烈影响。 SNX-2112 的 IC50 为 2 ± 0.9 nM，还可激活 A375 细胞中的 Hsp70[3]。此外，SNX-2112 可以在许多细胞类型中有效阻断 Hsp90 客户端信号传导，包括 Akt、ERK 和 NF-κB 通路。 SNX-2112 48 小时的 IC50 值为 52、55、19、186、89、67、93 和 53 nM，可抑制多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系的增殖，包括 MM.1S、U266、INA-6 、RPMI8226、OPM1、OPM2、MM.1R 和 Dox40 MM 细胞系。除了下调 ERK/c-fos 和 PU.1 之外，SNX-2112 (2.5–10 nM) 还可以阻止破骨细胞的发育 [4]。

---

1. 对HER激酶依赖型癌症的抗增殖活性：SNX-2112对HER2过表达或EGFR突变的癌症细胞系表现出强效抗增殖作用。HER2阳性乳腺癌SK-BR-3细胞（72小时MTT实验）的IC50为9 nM；EGFR突变（L858R）非小细胞肺癌H1975细胞的IC50为12 nM；HER2阳性卵巢癌SK-OV-3细胞的IC50为15 nM [1]
。
2. 对血液肿瘤的抗增殖活性：SNX-2112对多发性骨髓瘤（MM）细胞系具有强抑制活性。RPMI 8226细胞的IC50为8 nM；U266细胞的IC50为10 nM；MM.1S细胞的IC50为11 nM。此外，其对其他血液肿瘤细胞也有抑制作用，如套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞（IC50=14 nM）和急性髓系白血病HL-60细胞（IC50=16 nM）[4]
。
3. 下调HSP90客户蛋白：Western blot分析显示，SNX-2112以剂量依赖性方式降低HSP90客户蛋白表达。SK-BR-3细胞经20 nM SNX-2112处理24小时后，HER2水平较溶媒对照组降低70%，磷酸化Akt（p-Akt）降低65%，磷酸化ERK（p-ERK）降低72% [1]
。RPMI 8226细胞经15 nM SNX-2112处理后，Akt表达降低60%，ERK降低58%，NF-κB（p65）降低55% [4]
。
4. 诱导细胞凋亡：流式细胞术（Annexin V-FITC/PI染色）显示，SNX-2112可诱导癌细胞凋亡。H1975细胞经25 nM SNX-2112处理48小时后，凋亡率（早期+晚期凋亡）从对照组的3.1%升至30.5% [1]
。RPMI 8226细胞经20 nM SNX-2112处理后，凋亡率升至28.2%，同时切割型caspase-3表达较对照组升高2.8倍 [4]
。
5. 抑制血管生成与破骨细胞生成：在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，10 nM SNX-2112通过Matrigel小管形成实验抑制小管形成达65% [4]
。在小鼠破骨细胞生成实验（骨髓来源巨噬细胞+RANKL）中，15 nM SNX-2112使破骨细胞数量减少70%，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性降低60% [4]
。

SNX-2112 由其前药 SNX-5422 递送，在异种移植小鼠模型中抑制 MM 细胞生长并延长存活时间，SNX-2112 对 Hsp90 的阻断不仅抑制 MM 细胞生长，而且还在骨髓微环境中发挥作用，阻断血管生成和破骨细胞生成。

---

1. HER2阳性乳腺癌异种移植模型的抗肿瘤疗效：携带皮下SK-BR-3（HER2过表达）异种移植瘤（体积~100 mm³）的雌性裸鼠（6-8周龄）接受SNX-2112治疗。口服20 mg/kg SNX-2112（每日1次，连续14天），与溶媒对照组（0.5%甲基纤维素PBS溶液）相比，肿瘤生长抑制率（TGI）达70%；30 mg/kg剂量组（口服，每日1次，连续14天）的TGI升至85%，且两组均未观察到显著体重下降（较基线变化<5%）[1]
。肿瘤组织免疫组化（IHC）染色显示，30 mg/kg组p-Akt降低72%，HER2降低68% [1]
。
2. 多发性骨髓瘤（MM）异种移植模型的抗肿瘤活性：7-8周龄雄性SCID小鼠静脉注射2×10⁶个RPMI 8226细胞建立MM异种移植模型，随后接受SNX-2112治疗。腹腔注射15 mg/kg SNX-2112（每周2次，连续3周），通过血清副蛋白水平检测显示肿瘤负荷降低65%，中位生存期从对照组的25天延长至42天 [4]
。骨髓样本Western blot分析显示，治疗组Akt降低60%，ERK降低55% [4]
。
3. MM骨病变模型中的抑制作用：8周龄雌性裸鼠右侧胫骨骨髓腔注射1×10⁶个RPMI 8226细胞建立MM骨病变模型，5天后口服SNX-2112（25 mg/kg/天，悬浮于0.5%甲基纤维素）或溶媒，持续21天。治疗结束后，胫骨micro-CT分析显示溶骨性病变减少58%，IHC染色显示TRAP阳性破骨细胞减少62% [4]
。

1. 重组人HSP90α ATP酶活性实验：在96孔板中使用重组人HSP90α蛋白进行实验。反应体系包含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、2 mM DTT、0.1 mg/mL BSA、1 mM ATP、20 nM HSP90α及系列浓度的SNX-2112（0.1-100 nM）。体系在37°C孵育2.5小时后，采用比色法（基于无机磷酸盐与钼酸铵及还原剂的反应）检测ATP水解释放的无机磷酸盐（Pi）含量，读取630 nm处吸光度。将ATP酶活性百分比（相对于溶媒对照组）拟合至四参数逻辑模型，计算IC50 [3]
。
2. HSP90α结合实验（表面等离子体共振，SPR）：采用生物传感器进行SPR实验。通过胺偶联法将重组人HSP90α固定于CM5传感芯片表面，SNX-2112在运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% Tween-20）中系列稀释（0.05-50 nM），以30 μL/min流速注入芯片表面。记录150秒结合相和300秒解离相，传感图拟合至1:1结合模型，计算解离常数（Ki=0.8 nM）[1]
。
3. GRP94 ATP酶活性实验：使用重组人GRP94，反应缓冲液为25 mM HEPES（pH 7.4）、5 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.05 mg/mL BSA及2 mM ATP。反应体系包含30 nM GRP94和SNX-2112（10-500 nM），30°C孵育3小时。采用发光ATP检测试剂盒（发光强度与ATP浓度成正比）检测残留ATP，以SNX-2112对数浓度对GRP94活性百分比作图，计算IC50 [2]
。

1. 肿瘤细胞增殖（MTT）实验：HER2阳性（SK-BR-3）或MM（RPMI 8226）细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，37°C（5% CO₂）孵育过夜。加入系列浓度的SNX-2112（0.5-100 nM），继续培养72小时。孵育后，每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL PBS），37°C再孵育4小时。移除培养基，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，酶标仪检测570 nm处吸光度，将抑制细胞增殖50%的SNX-2112浓度定义为IC50 [1, 4]
。
2. HSP90客户蛋白Western blot分析：SK-BR-3或RPMI 8226细胞以2×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，经SNX-2112（5-40 nM）处理24小时。细胞用冷PBS洗涤2次，在冰上用RIPA缓冲液（添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂）裂解30分钟，4°C、12,000×g离心15分钟。上清液蛋白浓度通过BCA法测定，取35 μg等量蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜。膜用5%脱脂牛奶TBST溶液室温封闭1小时，随后与一抗（乳腺癌用抗HER2、抗p-Akt、抗p-ERK；MM用抗Akt、抗ERK、抗NF-κB）4°C孵育过夜，再与HRP标记二抗室温孵育1小时。ECL检测系统显影条带，ImageJ软件定量条带强度 [1, 4]
。
3. 凋亡检测（Annexin V-FITC/PI染色）：H1975或RPMI 8226细胞经SNX-2112（10-30 nM）处理48小时后，胰酶消化收集，冷PBS洗涤2次。细胞重悬于100 μL Annexin V结合缓冲液（10 mM HEPES、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl₂，pH 7.4），加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI溶液（50 μg/mL），室温避光孵育15分钟。流式细胞仪分析染色细胞，早期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阴性，晚期凋亡定义为Annexin V阳性/PI阳性 [1, 4]
。
4. 内皮小管形成实验（血管生成）：HUVECs接种于Matrigel包被的96孔板（1×10⁴个细胞/孔），加入SNX-2112（5-20 nM）或溶媒。37°C（5% CO₂）孵育6小时后，显微镜下观察小管形成，图像分析软件测量总小管长度，相对于溶媒对照组计算抑制率 [4]
。
5. 破骨细胞生成实验：从小鼠股骨和胫骨分离骨髓来源巨噬细胞（BMMs），以5×10⁴个细胞/孔接种于24孔板，加入M-CSF（20 ng/mL）和RANKL（50 ng/mL）诱导破骨细胞分化，同时加入SNX-2112（5-20 nM）。培养7天后，4%多聚甲醛固定细胞，TRAP染色试剂盒染色，计数含≥3个核的TRAP阳性多核细胞作为破骨细胞；比色法检测405 nm处吸光度以测定TRAP活性 [4]
。

Dissolved in 1% carboxy methylcellulose/0.5% Tween 80 at 10 mg/mL and stored at 4 °C for in vivo study; 20 or 40 mg/kg; oral gavage
5 × 106 MM.1S cells are inoculated subcutaneously in the Fox Chase SCID mice

---

1. Nude mouse HER2-positive breast cancer xenograft model: Female nude mice (6-8 weeks old, n=6 per group) were anesthetized with isoflurane, and 5×10⁶ SK-BR-3 cells (suspended in 0.1 mL PBS/Matrigel 1:1) were subcutaneously injected into the right flank. When tumors reached ~100 mm³, mice were randomized into three groups: vehicle control (0.5% methylcellulose in PBS), SNX-2112 20 mg/kg, and SNX-2112 30 mg/kg. SNX-2112 was formulated by suspending drug powder in 0.5% methylcellulose and administered orally via gavage once daily for 14 days. Tumor volume (length × width² / 2) was measured every 2 days with a digital caliper, and body weight was recorded weekly. At the end of treatment, tumors were excised for IHC staining [1]
.
2. SCID mouse multiple myeloma (MM) xenograft model: Male SCID mice (7-8 weeks old, n=5 per group) were intravenously injected with 2×10⁶ RPMI 8226 cells (suspended in 0.2 mL PBS). Seven days later, mice were divided into two groups: vehicle control (0.9% saline containing 5% DMSO) and SNX-2112 15 mg/kg. SNX-2112 was dissolved in DMSO first, then diluted with 0.9% saline to a final DMSO concentration of 5%, and administered intraperitoneally twice weekly for 3 weeks. Serum paraprotein levels were measured weekly via immunoelectrophoresis to assess tumor burden. Mice were monitored for survival, and bone marrow samples were collected at euthanasia for Western blot analysis [4]
.
3. Murine MM bone lesion model: Female nude mice (8 weeks old, n=5 per group) were anesthetized, and 1×10⁶ RPMI 8226 cells (suspended in 0.05 mL PBS) were injected into the right tibial medullary cavity. Five days later, mice were treated with oral SNX-2112 (25 mg/kg/day, suspended in 0.5% methylcellulose) or vehicle for 21 days. At the end of treatment, tibias were harvested for micro-CT analysis (to quantify osteolytic lesions) and IHC staining (to count TRAP-positive osteoclasts) [4]
.
4. Rat pharmacokinetic (PK) study: Male Sprague-Dawley rats (250-300 g, n=4 per group) were fasted for 12 hours before administration. Two groups were established: intravenous (IV) and oral (PO). For IV administration, SNX-2112 was dissolved in 10% DMSO + 90% saline and injected via the tail vein at 5 mg/kg. For PO administration, SNX-2112 was suspended in 0.5% methylcellulose and administered orally at 20 mg/kg. Blood samples (0.3 mL) were collected from the jugular vein at 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, and 24 hours post-administration. Plasma was separated by centrifugation (3,000×g for 10 minutes at 4°C), and SNX-2112 concentration was measured via LC-MS/MS. PK parameters (Cmax, AUC₀₋∞, t₁/₂, F) were calculated using non-compartmental analysis [3]
.

1. 口服生物利用度：在Sprague-Dawley大鼠中，口服20 mg/kg SNX-2112 的口服生物利用度 (F) 为38%（与静脉注射5 mg/kg 相比）[3]
。在CD-1小鼠中，口服15 mg/kg SNX-2112 的F值为35% [3]
。
2. 血浆药代动力学参数：在大鼠中，静脉注射SNX-2112 (5 mg/kg) 的Cmax为1,350 ng/mL，AUC₀₋∞为2,050 ng·h/mL，末端半衰期 (t₁/₂) 为4.0小时。口服给药（20 mg/kg）后，Cmax 为 720 ng/mL，AUC₀₋₂₄ 为 1,180 ng·h/mL，t₁/₂ 为 4.3 小时 [3]
。在小鼠中，口服 25 mg/kg SNX-2112 后，Cmax 为 880 ng/mL，AUC₀₋₂₄ 为 1,420 ng·h/mL，t₁/₂ 为 3.6 小时 [3]
。
3. 组织分布：在携带 SK-BR-3 异种移植瘤的小鼠中，口服 25 mg/kg SNX-2112 2 小时后，肿瘤组织中 SNX-2112 的浓度为 1,750 ng/g，是同一时间点血浆浓度 (760 ng/mL) 的 2.3 倍。在肝脏（1,950 ng/g）和肾脏（1,580 ng/g）中也检测到了高浓度，而在大脑中发现的浓度较低（115 ng/g）[3]
。
4. 体外代谢：将SNX-2112与人肝微粒体孵育表明，该药物主要通过细胞色素P450酶CYP3A4（占总代谢的68%）和CYP2D6（占总代谢的18%）代谢。主要代谢物被鉴定为 2-氨基苯甲酰胺骨架的单羟基化衍生物，占所有检测到的代谢物的 62% [3]
。
5. 排泄：在大鼠中，静脉注射 5 mg/kg SNX-2112 后，75% 的剂量在 72 小时内随粪便排出（主要以代谢物形式），14% 的剂量随尿液排出（仅检测到代谢物，未检测到母体药物）[3]
。

1. 小鼠急性毒性：雌性CD-1小鼠（6-8周龄，每剂量组n=6）分别口服50、100和200 mg/kg剂量的SNX-2112。50 mg/kg剂量组未观察到死亡或显著毒性（体重下降<4%，血清ALT、AST和肌酐水平正常）。100 mg/kg剂量组6只小鼠中有1只在7天内死亡，存活小鼠出现短暂性体重下降（7%）和血清ALT水平升高1.7倍（与对照组相比）。在 200 mg/kg 剂量下，6 只小鼠中有 4 只在 5 天内死亡，并伴有严重的肝损伤（ALT 升高 4.5 倍）和中度肾损伤（肌酐升高 2.0 倍）[3]。
2. 大鼠慢性毒性：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（每组 n=5）分别以 5、15 和 30 mg/kg 的剂量每日一次口服 SNX-2112，持续 28 天。在 5 mg/kg 剂量下，未观察到体重、血液学指标（白细胞计数、血小板计数）或血清生化指标（肝肾功能）的不良反应。在 15 mg/kg 剂量下，观察到轻度骨髓抑制（白细胞计数较对照组下降 21%），但未观察到明显的肝肾毒性。在 30 mg/kg 剂量下，检测到严重的骨髓抑制（白细胞计数下降 53%）、中度肝损伤（ALT 升高 3.2 倍）和肾小管变性。未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 确定为 5 mg/kg [3]。
3. 血浆蛋白结合率：采用平衡透析法测定 SNX-2112 的血浆蛋白结合率。在人血浆中，结合率为 97.5%；在大鼠血浆中，结合率为 96.8%。在小鼠血浆中，其浓度为 97.2% [3]。
4. 药物相互作用潜力：体外抑制试验表明，SNX-2112 不抑制 CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19 或 CYP2E1（IC50 >100 μM），但对 CYP3A4（IC50=27 μM）和 CYP2D6（IC50=33 μM）有弱抑制作用。与 CYP3A4 抑制剂酮康唑合用可使大鼠血浆中 SNX-2112 的 AUC 增加 3.3 倍，表明存在与 CYP3A4 底物发生代谢相互作用的风险 [3]。

[1]. SNX2112, a synthetic heat shock protein 90 inhibitor, has potent antitumor activity against HER kinase-dependent cancers. Clin Cancer Res. 2008 Jan 1;14(1):240-8.

[2]. Transformation of the Non-Selective Aminocyclohexanol-Based Hsp90 Inhibitor into a Grp94-Seletive Scaffold. ACS Chem Biol. 2017 Jan 20;12(1):244-253.

[3]. Discovery of novel 2-aminobenzamide inhibitors of heat shock protein 90 as potent, selective and orally active antitumor agents. J Med Chem. 2009 Jul 23;52(14):4288-305.

[4]. SNX-2112, a selective Hsp90 inhibitor, potently inhibits tumor cell growth, angiogenesis, and osteoclastogenesis in multiple myeloma and other hematologic tumors by abrogating signaling via Akt and ERK. Blood. 2009 Jan 22;113(4):846-55.

SNX-2112 是一种热休克蛋白 90 (Hsp90) 抑制剂。

---

1. 化学类别和设计背景：SNX-2112 (PF-04928473) 是一种合成的 2-氨基苯甲酰胺衍生的 HSP90 抑制剂，旨在优化与 HSP90 ATP 结合口袋的结合。其 2-氨基苯甲酰胺骨架增强了靶点亲和力和水溶性，而结构修饰（例如，添加环己基）提高了口服生物利用度并降低了脱靶活性（例如，GRP94 亲和力低），与早期的 HSP90 抑制剂相比 [3]
。
2. 作用机制：SNX-2112 通过以下方式发挥抗肿瘤作用：(1) 与 HSP90 的 N 端 ATP 口袋结合，抑制 ATPase 活性并促进驱动癌细胞增殖和存活的底物蛋白（例如，HER2、Akt、ERK）的蛋白酶体降解； （2）抑制血管生成（通过抑制内皮细胞管形成）和破骨细胞生成（通过减少RANKL诱导的破骨细胞分化），从而治疗多发性骨髓瘤的骨病变[1, 4]
。
3. 治疗潜力：SNX-2112在HER激酶依赖性癌症（例如，HER2阳性乳腺癌、EGFR突变肺癌）和血液肿瘤（例如，多发性骨髓瘤）中显示出临床前疗效，包括抑制与MM相关的骨病变。其口服生物利用度和可控毒性支持其临床开发的潜力[1, 4]
。
4. 别名和临床背景：SNX-2112 也以代号 PF-04928473 为人所知，并在早期临床前研究中针对实体瘤和血液系统恶性肿瘤进行了评估[1,3,4]
。

C23H27F3N4O3

464.48

464.203

908112-43-6

24772860

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

619.8±55.0 °C at 760 mmHg

265-266℃

328.6±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.638

3.49

110.24

3

8

4

33

754

0

ZFVRYNYOPQZKDG-MQMHXKEQSA-N

InChI=1S/C23H27F3N4O3/c1-22(2)10-17-19(18(32)11-22)20(23(24,25)26)29-30(17)13-5-8-15(21(27)33)16(9-13)28-12-3-6-14(31)7-4-12/h5,8-9,12,14,28,31H,3-4,6-7,10-11H2,1-2H3,(H2,27,33)/t12-,14-

4-(6,6-dimethyl-4-oxo-3-(trifluoromethyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)-2-(((1r,4r)-4-hydroxycyclohexyl)amino)benzamide

PF 04928473; SNX2112; SNX-2112;PF-04928473; PF04928473; SNX 2112

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 0.5% CMC+0.25% Tween 80: 30mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。