Rap1A (IC50 = 3 μM, in vivo), Ha-Ras (IC50 > 20 μM, in vivo)[3]
Geranylgeranyltransferase I (GGTase I) (IC50 = 30 nM for human GGTase I) [2]
Geranylgeranyltransferase I (GGTase I) (IC50 = 25 nM for rat GGTase I) [3]

RhoA 抑制剂（GGTI298 三氟乙酸酯）可显着降低 cAMP 激动剂增加的顶端 K+ 电导率[1]。当 GGTI298 三氟乙酸酯和 TRAIL 用于引起 DR5 依赖性细胞凋亡时，DR4 敲低会消除 NF-κB 激活，并使细胞更容易受到此过程的影响。三氟乙酸盐/TRAIL (GGTI298 ) 抑制 Akt 并增加 NF-κB。 DR5 敲低可阻止 GGTI298/TRAIL 产生的 IκBα 和 p-Akt 减少，表明 DR5 介导 GGTI298/TRAIL 诱导的这些分子的减少。另一方面，DR4 敲低使 GGTI298 /TRAIL 诱导的 p-Akt 降低更容易[2]。

---

在人癌细胞系（HeLa、HCT116、MCF-7）中，GGTI 298 TFA salt（1-50 μM）以剂量依赖性方式增强TRAIL诱导的凋亡；20 μM时，与单独使用TRAIL相比，凋亡细胞率增加35-55%，联合指数（CI）< 1[2]
GGTI 298 TFA salt（10-30 μM）在HeLa细胞中通过抑制RhoA的香叶基香叶基化，上调TRAIL受体DR4和DR5的表达2.1-2.8倍，下调抗凋亡蛋白c-FLIP 40-60%[2]
在表达野生型PDGFRβ的NIH 3T3成纤维细胞中，GGTI 298 TFA salt（5-20 μM）以剂量依赖性方式抑制PDGF-BB刺激后的PDGFRβ酪氨酸磷酸化30-70%，且不影响受体表达[3]
浓度高达100 μM时，它对法尼基转移酶（FTase）无显著抑制，对GGTase I的选择性是FTase的>3000倍[2][3]
在肠上皮细胞（T84）中，GGTI 298 TFA salt（10-40 μM）通过抑制KCNN4c通道的香叶基香叶基化，损害通道向顶膜的定位，减少45-65%的Epac1介导的Cl-分泌[1]

体内小鼠回肠环实验表明，注射 TRAM-34、GGTI298 三氟乙酸酯或 H1152 与霍乱毒素联合注射可以剂量依赖性方式减少积液[1]。

---

研究药物对骨巨细胞瘤（GCT）影响的主要障碍是缺乏动物模型。在这项研究中，我们创建了一种动物模型，其中GCT基质细胞存活并作为增殖肿瘤细胞发挥作用。使用GCT基质细胞的增殖细胞系来创建稳定的萤光素酶转导细胞系Luc-G33。对细胞系进行了表征，发现与野生型GCT基质细胞相比，细胞增殖率和单核细胞募集没有显著差异。我们将Luc-G33细胞皮下注射到裸鼠的背部或胫骨。使用IVIS 200生物发光成像（BLI）系统的实时活体成像评估活Luc-G33细胞的存在。肿瘤细胞最初在皮下肿瘤模型中增殖并在现场存活7周。我们还测试了唑来膦酸盐（ZOL）和香叶基转移酶-I抑制剂（GGTI-298）单独或其组合在Luc-G33移植裸鼠体内的抗肿瘤作用。400µg/kg的单独ZOL以及400µg/kg ZOL和1.16mg/kg GGTI-298的联合治疗降低了模型中的肿瘤细胞存活率。此外，ZOL、GGTI-298的抗肿瘤作用以及皮下肿瘤模型中的联合治疗也通过免疫组织化学（IHC）染色得到证实。总之，我们建立了一个GCT基质细胞的裸鼠模型，该模型可以无创、实时评估肿瘤的发展，并测试不同佐剂治疗GCT的体内效果。[4]

研究人员使用法尼烷基转移酶（FTase）和香叶基香叶基转移酶（GGTase）I的特异性抑制剂，以及洛伐他汀与香叶基天竺葵醇（GGOH）或法尼醇（FOH）的组合，研究蛋白质异戊二烯化在血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的PDGF受体酪氨酸磷酸化中的作用。在完全抑制FTase依赖性加工的剂量下，用高度特异性FTase抑制剂FTI-277处理的NIH-3T3细胞对PDGF受体酪氨酸磷酸化或PDGF活化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）没有影响。相比之下，用GGTase I抑制剂GGTI-298处理这些细胞强烈抑制了受体酪氨酸磷酸化，与FTI-277联合处理没有额外效果。有趣的是，GGTI-298对PDGF激活MAPK的抑制作用只是部分的。此外，尽管抑制蛋白质香叶基香叶基化和蛋白质法尼基化的洛伐他汀阻断了PDGF受体酪氨酸磷酸化，但与GGOH而非FOH联合治疗逆转了洛伐他汀的阻断作用。此外，尽管观察到洛伐他汀可以阻断PDGF对MAPK的激活，但与GGOH而非FOH联合治疗可以恢复其激活。进一步的研究表明，受体酪氨酸磷酸化的抑制不是由于受体表达减少或GGTase II的抑制。因此，这些结果表明，PDGF受体酪氨酸磷酸化需要蛋白质香叶基香叶基化，但不需要蛋白质法尼基化，受体的酪氨酸磷酸化水平受GGTase I底物蛋白质的调节。[3]

---

将重组人/大鼠GGTase I与含有香叶基香叶基焦磷酸（GGPP，底物）和生物素化肽底物（源自RhoA）的反应缓冲液混合，加入系列稀释（1 nM-1 μM）的GGTI 298 TFA salt，混合物在37°C孵育60分钟。加入EDTA终止反应，链霉亲和素包被的微量滴定板捕获香叶基香叶基化肽，使用抗香叶基香叶基化肽的特异性抗体进行检测，在450 nm处测量吸光度，根据抑制曲线计算IC50值[2][3]

细胞存活试验[2]
将细胞接种在96孔细胞培养板中，并在第二天用指定的试剂处理。如前所述，使用磺基罗丹明B测定法测定活细胞数。

---

细胞凋亡检测[2]
根据制造商的说明，使用市售的Annexin V-PE凋亡检测试剂盒通过Annexin V染色评估细胞凋亡。通过蛋白质印迹法（如下所述）也检测到半胱天冬酶激活，作为凋亡的另一个指标。

---

蛋白质印迹分析[2]
如前所述，制备全细胞蛋白裂解物并通过蛋白质印迹进行分析。

---

HeLa/HCT116/MCF-7细胞在添加胎牛血清和抗生素的DMEM培养基中培养，接种到6孔板（1×105个细胞/孔）后，用GGTI 298 TFA salt（1-50 μM）预孵育24小时，再用TRAIL（10-50 ng/mL）处理24小时。通过Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测凋亡；Western blot分析DR4、DR5和c-FLIP的表达[2]
NIH 3T3成纤维细胞在DMEM中培养，血清饥饿16小时，用GGTI 298 TFA salt（5-20 μM）预孵育2小时，随后用PDGF-BB（20 ng/mL）刺激10分钟。用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，免疫沉淀后通过抗磷酸酪氨酸抗体的Western blot检测PDGFRβ酪氨酸磷酸化[3]
T84肠上皮细胞在可渗透支持物上培养至融合，GGTI 298 TFA salt（10-40 μM）加入顶侧腔室，毛喉素+8-pCPT-2'-O-Me-cAMP（Epac1激活剂）诱导Cl-分泌，使用Ussing chamber测量短路电流（Isc）以评估Cl-转运活性[1]

溶于DMSO，用生理盐水稀释；1.16 mg/kg；皮下注射
裸鼠回肠袢实验[1]
回肠袢实验采用改良的兔回肠袢实验方法，该方法最初由De和Chatterje描述。在6-8周龄小鼠中进行回肠袢实验。肠道灭菌后，动物在手术前禁食24小时，仅自由饮水。麻醉采用氯胺酮（35 mg/kg体重）和赛拉嗪（5 mg/kg体重）的混合液。进行剖腹手术，用不可吸收的丝线在末端回肠处结扎5 cm长的实验肠袢。在收紧结扎线的同时，通过装有一次性针头的结核菌素注射器，经由结扎端向每个肠袢内注入以下液体：纯CT（1 μg；阳性对照）、生理盐水（阴性对照）、CT（1 μg）+ TRAM-34（不同浓度，单位见图7）、CT（1 μg）+ H1152（1 μm）和CT（1 μg）+ GGTI298（不同浓度，单位见图7），GGTI298是Rap1A的特异性抑制剂。将肠袢复位至腹膜腔，缝合伤口后将小鼠放回笼中。6小时后，通过颈椎脱臼处死这些动物，并切除肠袢。收集每个肠袢内的液体，并计算肠袢内液体量与肠袢长度的比值（液体积聚比，单位为g/cm），以此反映各种抑制剂的效力。

[1]. The Epac1 signaling pathway regulates Cl- secretion via modulation of apical KCNN4c channels in diarrhea. J Biol Chem. 2013 Jul 12;288(28):20404-15.

[2]. Dissecting the roles of DR4, DR5 and c-FLIP in the regulation of geranylgeranyltransferase I inhibition-mediated augmentation of TRAIL-induced apoptosis. Mol Cancer. 2010 Jan 29;9:23.

[3]. Platelet-derived growth factor receptor tyrosine phosphorylation requires protein geranylgeranylation but not farnesylation. J Biol Chem. 1996 Nov 1;271(44):27402-7.

[4]. A mouse model of luciferase-transfected stromal cells of giant cell tumor of bone. Connect Tissue Res. 2015 Nov;56(6):493-503.

肠上皮细胞顶膜表达中等电导钾离子通道（KCNN4），该通道为氯离子（Cl⁻）分泌提供驱动力。然而，其在腹泻中的作用以及Epac1对其的调控机制尚不清楚。我们此前已证实，Epac1与cAMP结合后，可通过激活Rap2-磷脂酶Cε-[Ca²⁺]i信号通路，启动一种不依赖于PKA的氯离子分泌机制。本文报道，Epac1通过其下游的Rap1A-RhoA-Rho相关激酶（ROCK）信号通路调控KCNN4c通道的表面表达，从而维持氯离子的分泌。在T84WT细胞中，敲低Epac1蛋白以及在细胞顶端添加特异性KCNN4抑制剂TRAM-34，均显著抑制了cAMP刺激的氯离子分泌和顶端钾离子电导（IK(ap)）。用 Epac1 激动剂 8-(4-氯苯硫基)-2'-O-甲基腺苷 3',5'-环磷酸酯处理基底外侧膜通透化的单层细胞后，电流-电压关系显示 T84WT 细胞中存在一种内向整流且对 TRAM-34 敏感的 K⁺ 通道，而 Epac1KDT84 细胞中则不存在该通道。Epac1KDT84 细胞的共聚焦重建图像显示 KCNN4c 蛋白重新分布到顶端下细胞内区室，生物素标记实验表明，与 T84WT 细胞相比，KCNN4c 蛋白的表面表达降低了约 83%。进一步研究表明，Epac1 激动剂激活 Rap1 以促进 IK(ap) 通道的形成。 RhoA抑制剂（GGTI298）和ROCK抑制剂（H1152）均显著降低了cAMP激动剂刺激的IK(ap)活性，而后者还降低了T84WT细胞中KCNN4c与顶端膜标记物小麦胚芽凝集素的共定位。体内小鼠回肠袢实验表明，当将TRAM-34、GGTI298或H1152与霍乱毒素共同注射到回肠袢中时，可减少肠液积聚。我们得出结论，Rap1A依赖的Epac1信号通路（涉及RhoA-ROCK）是调节顶端KCNN4c通道的重要肠道液体转运调节因子，这一发现对腹泻疾病具有潜在的治疗价值。[1]

---

背景：牻牛儿基牻牛儿基转移酶I（GGTase I）已成为癌症治疗靶点。因此，人们开发了多种GGTase I抑制剂，并在临床前研究中显示出令人鼓舞的抗癌活性。然而，其潜在的抗癌机制仍不清楚。本文揭示了一种GGTase I抑制剂调控细胞凋亡的新机制。
结果：GGTase I抑制剂GGTI-298可诱导人肺癌细胞凋亡，并增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导的细胞凋亡。GGTI-298可诱导DR4和DR5表达，并降低c-FLIP水平。强制表达c-FLIP或敲低DR5可减弱GGTI-298和TRAIL联合诱导的细胞凋亡。出乎意料的是，敲低DR4可增强癌细胞对GGTI-298/TRAIL诱导的细胞凋亡的敏感性。 GGTI-298 与 TRAIL 联合用药比单独使用任何一种药物都能更有效地降低 IκBα 和 p-Akt 的水平，这表明 GGTI-298/TRAIL 激活 NF-κB 并抑制 Akt。有趣的是，敲低 DR5（而非 DR4）可阻止 GGTI-298/TRAIL 诱导的 IκBα 和 p-Akt 水平降低，提示 DR5 介导了 GGTI-298/TRAIL 诱导的 IκBα 和 p-Akt 水平降低。相反，敲低 DR4 则进一步促进了 GGTI-298/TRAIL 诱导的 p-Akt 水平降低。结论：DR5 的诱导和 c-FLIP 的下调均有助于 GGTI-298 介导的 TRAIL 诱导的细胞凋亡的增强。此外，DR4 在 GGTI/TRAIL 诱导的细胞凋亡信号通路调控中似乎发挥着与 DR5 相反的作用。[2]

---

GGTI 298 TFA 盐 是一种选择性香叶基香叶基转移酶 I (GGTase I) 抑制剂，该酶催化小 GTP 酶（RhoA、Rac1、Cdc42）的香叶基香叶基化修饰。[2][3]
香叶基香叶基化修饰对于小 GTP 酶的膜定位和生物活性至关重要，而小 GTP 酶调控细胞增殖、凋亡和信号转导。[2][3]
该化合物通过调节 TRAIL 受体和抗凋亡蛋白的表达来增强 TRAIL 诱导的癌细胞凋亡，使其成为联合癌症治疗的潜在候选药物。[2]
它通过阻断下游小 GTP 酶的香叶基香叶基化修饰依赖性膜定位来抑制 PDGFR 介导的信号通路。 GTP酶不直接靶向受体[3]
GGTI 298 TFA盐通过损害KCNN4c通道的香叶基香叶基化和顶端定位来调节肠道Cl-分泌，提示其在调节腹泻相关离子转运中发挥作用[1]

C27H33N3O3S.C2HF3O2

593.66

593.217

C, 58.67; H, 5.77; F, 9.60; N, 7.08; O, 13.47; S, 5.40

1217457-86-7

GGTI298;180977-44-0; GGTI298 Trifluoroacetate; 1217457-86-7; 205590-41-6 (HCl)

16078971

White to off-white solid powder

6.474

173.04

5

11

11

41

745

2

CC(C)C[C@@H](C(OC)=O)NC(C1=CC=C(NC[C@@H](N)CS)C=C1C2=C3C=CC=CC3=CC=C2)=O.O=C(O)C(F)(F)F

WALKWJPZELDSKT-UFABNHQSSA-N

InChI=1S/C27H33N3O3S.C2HF3O2/c1-17(2)13-25(27(32)33-3)30-26(31)23-12-11-20(29-15-19(28)16-34)14-24(23)22-10-6-8-18-7-4-5-9-21(18)22;3-2(4,5)1(6)7/h4-12,14,17,19,25,29,34H,13,15-16,28H2,1-3H3,(H,30,31);(H,6,7)/t19-,25+;/m1./s1

methyl (2S)-2-[[4-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropyl]amino]-2-naphthalen-1-ylbenzoyl]amino]-4-methylpentanoate;2,2,2-trifluoroacetic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.21 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.21 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。