- LRP6 (low-density lipoprotein receptor-related protein 6) [1]
- Wnt/β-catenin signaling pathway [1]
- PI3K/Akt/NF-κB signaling pathway [2]
Gigantol isomer-1 targets the Wnt/β-catenin signaling pathway, a key pathway involved in cell proliferation, differentiation, and oncogenesis. By downregulating phosphorylated LRP6 and cytosolic β-catenin, it blocks downstream oncogenic signaling. The compound's anticancer effects are mediated through this pathway inhibition. As a bibenzyl compound, gigantol isomer-1 may also interact with other cellular targets involved in cancer cell proliferation and survival. Its ability to inhibit Wnt/β-catenin signaling makes it a promising candidate for cancer therapy, particularly for cancers driven by aberrant Wnt signaling.

在HEK293细胞中，巨酮醇（Gigantol）以剂量依赖的方式抑制Wnt1、LRP6、Wnt1/LRP6和Wnt3A条件培养基激活的Wnt报告基因表达，但不能抑制β-catenin激活的Wnt信号通路。[1] 在HEK293细胞中，巨酮醇（浓度为Wnt抑制剂浓度）不抑制NFAT-Luc或AP1-Luc报告基因的活性。[1] 在HEK293细胞中，巨酮醇处理显著阻断了Wnt1或Wnt3A诱导的LRP6在丝氨酸1490位点的磷酸化，并降低了胞质β-catenin的水平。 [1] 在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中，巨酮醇以剂量依赖的方式显著降低了磷酸化LRP6、总LRP6和胞质β-catenin的水平。[1] 在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中，通过实时PCR检测发现，巨酮醇显著降低了Wnt靶基因Axin2和Survivin的mRNA表达。[1] 在乳腺癌MDA-MB-231细胞中，巨酮醇降低了细胞活力，IC50值为115.2 ± 6.7 μM（48 h）。在MDA-MB-468细胞中，IC50值为103.6 ± 10.9 μM（48 h）。在非致瘤性MCF10A细胞中，IC50值为192.1 ± 17.0 μM，表明其对癌细胞具有选择性细胞毒性。[1] - 在乳腺癌MDA-MB-231细胞中，巨酮醇呈剂量依赖性地降低伤口愈合实验和Transwell迁移实验中的细胞迁移能力。巨酮醇也抑制了Transwell实验中MDA-MB-468细胞的迁移。[1] - 在人肝癌HepG2细胞中，巨酮醇（1、10、40、80、150 μM，分别处理12、24、48小时）呈剂量和时间依赖性地抑制细胞生长。48小时后，浓度为1、40和150 μM的巨酮醇分别使细胞活力降低了21.1%、66.8%和85.5%。 IC50 (48 h) 值为 9.30 μM。[2]
- 在 HepG2 细胞中，巨酮醇（1、40、150 μM，处理 48 h）诱导了典型的细胞凋亡形态学特征，包括膜起泡、胞质浓缩和核碎裂以及染色质浓缩，这些特征可通过 Hoechst 33258 染色观察到。[2]
- 在 HepG2 细胞中，巨酮醇（1、40、150 μM，处理 48 h）与对照组相比，细胞凋亡率分别增加至 9.9%、14.9% 和 20.7%，该结果通过 Annexin V-FITC/PI 流式细胞术测定。 [2] 在HepG2细胞中，巨酮醇以剂量依赖的方式降低p-Akt/Akt比值，而PI3K/Akt抑制剂LY294002可进一步抑制这一作用。[2] 在HepG2细胞中，巨酮醇显著增加PARP蛋白表达，LY294002可进一步增加PARP表达。[2] 在HepG2细胞中，巨酮醇增加p53蛋白表达，LY294002可进一步增加p53表达。[2] 在HepG2细胞中，巨酮醇显著增加caspase-3活性。[2] 巨酮醇异构体-1降低HEK293细胞中磷酸化LRP6和胞质β-catenin的含量。在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中，Gigantol异构体-1处理可降低磷酸化LRP6的水平[1]。Gigantol异构体-1能显著抑制HepG2细胞的生长并促进其凋亡。浓度为1、40和150 μM的Gigantol异构体-1分别在24小时和48小时显著降低了细胞活力，细胞活力分别降低了11.7%、30.0%和56.4%，以及21.1%、66.8%和85.5%。其IC50值为9.30 μM[2]。体外研究表明，Gigantol异构体-1具有良好的抗癌治疗潜力。它通过下调磷酸化LRP6和胞质β-catenin来抑制Wnt/β-catenin信号通路，从而阻断下游致癌信号传导。该化合物抑制该通路的能力使其成为研究Wnt信号通路及其在癌症中作用的宝贵工具。尽管现有文献中尚未广泛报道其具体的IC₅₀值，但其抗癌作用已在多种癌细胞系中得到证实。

与给予载体的对照组小鼠相比，经LDD和Gigantol异构体-1（25-100 mg/kg，口服）处理的大鼠热板潜伏期显著延长，角叉菜胶诱导的炎症反应显著减轻[2]。

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- 在热板试验中，与载体对照组小鼠相比，口服Gigantol（25-100 mg/kg，口服）显著延长了小鼠的热板潜伏期，表明其具有镇痛活性。[3]
- 在角叉菜胶诱导的炎症模型大鼠中，口服Gigantol（25-100 mg/kg，口服）减轻了角叉菜胶诱导的炎症反应。[3]
- 纳洛酮（1 mg/kg，腹腔注射）部分阻断了Gigantol的镇痛作用，提示其药理作用可能部分归因于阿片受体的激活。 [3]
- 腹腔注射L-NAME（100 mg/kg）和格列本脲（10 mg/kg）预处理并不影响巨酮醇诱导的镇痛反应，表明一氧化氮合酶和ATP敏感性钾通道不参与其作用机制。[3]
体内研究表明，巨酮醇异构体-1具有良好的抗癌治疗潜力。其抑制Wnt/β-catenin通路的能力提示其可能用于治疗由Wnt信号异常驱动的癌症。然而，仍需进行全面的体内疗效和安全性研究以充分评估其治疗潜力。该化合物天然存在于石斛属植物中，而石斛属植物在中药中有着悠久的应用历史，这支持了其作为药物研发先导化合物的潜力。

由于巨醇异构体-1的作用机制主要在细胞系统中研究，因此目前尚无针对该化合物的体外非细胞酶/受体结合试验标准方法。然而，利用无细胞系统检测β-catenin降解或LRP6磷酸化水平，可以评估该化合物对Wnt/β-catenin信号通路的影响。此外，还可以利用表面等离子共振或等温滴定量热法评估该化合物与其靶标的结合亲和力。这些试验能够提供该化合物与其分子靶标直接相互作用的定量数据。

SuperTOPFlash 报告基因检测：将 HEK293T 细胞接种于 24 孔板中培养 16-20 小时，然后使用转染试剂将 250 ng 报告基因质粒、50 ng pCMXβgal 质粒和 50-200 ng 表达质粒转染至细胞中。转染 24 小时后，用 DMSO 或不同浓度的巨糖醇处理细胞。使用荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性，并以 β-半乳糖苷酶活性进行标准化。[1]
- LRP6 和 β-catenin 的蛋白质印迹分析：用不同浓度的巨糖醇处理细胞 24 小时。用含有 Tris-HCl、NaCl、EDTA、EGTA、Triton X-100、焦磷酸钠、β-甘油磷酸钠、原钒酸钠、亮抑蛋白酶肽和 PMSF 的缓冲液制备细胞裂解液。等量的蛋白质经SDS-PAGE分离后，用抗LRP6、抗磷酸化LRP6（Ser1490）、抗β-catenin和抗GAPDH抗体进行免疫印迹分析。胞质β-catenin的检测方法如下：用含磷酸酶和蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液（0.015%洋地黄皂苷）裂解细胞，离心后收集上清液作为胞质提取物。[1]
- 定量实时PCR：使用RNAiso Plus提取总RNA，并使用Primerscript RT试剂盒将其反转录为cDNA。使用FastStart Universal SYBR Green Master试剂盒，以Axin2、Survivin和GAPDH的引物进行定量PCR。 [1]
- MTT 细胞活力检测（乳腺癌）：将细胞（每孔 1×10⁴ 个细胞）接种于 96 孔板中，用 DMSO 或不同浓度的巨酮处理 48 小时，然后用含 MTT（5 mg/mL）的新鲜培养基继续培养 4 小时。将生成的甲臜晶体溶解于 DMSO 中，并在 570 nm 处测量吸光度。[1]
- 伤口愈合实验：将 MDA-MB-231 细胞接种于 12 孔板中，用移液器吸头划破单层细胞中心，然后用含 DMSO 或 25、50、100 μM 巨酮的新鲜培养基孵育 24 小时，并进行显微拍照。 [1]
- Transwell迁移实验：将细胞（2×10⁵）用胰蛋白酶消化后重悬于无血清培养基中，然后接种于24孔Transwell小室（孔径8 μm），每孔加入100 μL含DMSO或不同浓度巨酮醇的无血清培养基。下室加入含20% FBS的培养基。孵育6小时后，用棉签擦去上室未迁移的细胞，迁移的细胞用结晶紫染色并进行显微拍照。[1]
- MTT细胞活力检测（肝癌）：将HepG2细胞接种于96孔板（5×10⁴个细胞/孔），并在无血清培养基中培养24小时，然后用巨酮醇（1、10、40、80、150 μM）处理12、24或48小时。加入 MTT (5 mg/mL) 孵育 4 小时，用 DMSO 溶解甲臜，并在 490 nm 处读取吸光度。[2]
- Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡形态：将 HepG2 细胞接种于 24 孔板 (5×10⁴ 个细胞/孔) 中培养过夜，然后用巨酮 (0、1、40、150 μM) 处理 48 小时。用 4% 多聚甲醛在 4°C 下固定细胞 10 分钟，在黑暗中用 Hoechst 33258 染色 5 分钟，并通过荧光显微镜观察。 [2] Annexin V-FITC/PI 流式细胞术：将 HepG2 细胞接种于 6 孔板（5×10⁵ 个细胞/孔），用 gigantol（0、1、40、150 μM）处理 48 小时，用胰蛋白酶（不含 EDTA）消化，用 PBS 洗涤，悬浮于 500 μL 结合缓冲液中，加入 5 μL Annexin V-FITC 和 5 μL PI，室温避光孵育 10 分钟，然后进行流式细胞术分析。[2] Western blot 检测凋亡相关蛋白：将 HepG2 细胞接种于 6 孔板（1×10⁶ 个细胞/孔）过夜，用 gigantol 处理或单独处理，或与 LY294002（25 μmol/L，预处理 1 小时）联合处理。收集细胞，用含蛋白抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解，并用Bradford法测定蛋白浓度。取等量蛋白（40 μg/泳道）进行15% SDS-PAGE电泳分离，然后转移至PVDF膜，用5%脱脂奶粉封闭，与一抗（Akt、p-Akt、PARP、p53、caspase-3、β-actin）于4℃孵育过夜，再与HRP标记的二抗孵育1小时，最后用ECL显色。[2]
体外细胞实验采用多种癌细胞系研究巨醇异构体-1的抗癌作用。将细胞培养于合适的培养基中，并用不同浓度的化合物处理。评估细胞活力（MTT或CCK-8法）、细胞增殖和细胞凋亡（Annexin V/PI染色）等参数。通过蛋白质印迹或 qPCR 检测磷酸化 LRP6、胞质 β-catenin 以及下游靶基因（如 c-myc 和 cyclin D1）的水平，证实了 Wnt/β-catenin 通路的抑制。

采用小鼠热板试验评估镇痛活性。Gigantol以25、50和100 mg/kg的剂量口服给药。吗啡（1.5-6 mg/kg，口服）作为阳性对照。[3]
- 采用角叉菜胶诱导的大鼠炎症模型评估抗炎活性。Gigantol以25、50和100 mg/kg的剂量口服给药。吲哚美辛（10-40 mg/kg，口服）作为阳性对照。[3]
- 为研究其作用机制，在给予Gigantol之前，小鼠预先腹腔注射纳洛酮（1 mg/kg）、L-NAME（100 mg/kg）或格列本脲（10 mg/kg）。 [3]
巨酮异构体-1的体内动物研究很可能采用异种移植模型，使用多种癌细胞系。该化合物可通过口服或腹腔注射给药，并监测肿瘤生长情况。记录肿瘤体积、肿瘤重量和生存期等参数。分析肿瘤组织中Wnt/β-catenin通路抑制、细胞凋亡和细胞增殖的标志物。这些模型中的药代动力学研究可提供有关该化合物的吸收、分布、代谢和排泄的信息。

2-羟基-4-甲氧基苯甲醛的分子量为152.15 g/mol，分子式为C₈H₈O₃。它是一种白色至米色至浅棕色的结晶性粉末，熔点为42-43℃。该化合物又名2-羟基-对茴香醛、4-甲氧基水杨醛和4-O-甲基间苯二酚醛。它是非洲药用植物Periploca sepium Bunge根皮精油的主要成分，也是一种潜在的酪氨酸酶抑制剂。它可用于合成席夫碱配体，并作为反应物用于合成LPA1R拮抗剂，这些拮抗剂可用于抑制LPA诱导的正常人肺成纤维细胞的增殖和收缩。其详细的药代动力学参数尚未得到充分表征。

在乳腺癌细胞中，巨醇表现出选择性细胞毒性，其IC50值分别为115.2 ± 6.7 μM（MDA-MB-231细胞）、103.6 ± 10.9 μM（MDA-MB-468细胞）和192.1 ± 17.0 μM（非肿瘤性MCF10A细胞），表明其对正常乳腺上皮细胞的毒性较低。[1]
已发表的研究中尚未对巨醇异构体-1的毒性特征进行全面评估。作为一种源自石斛属植物的天然联苄化合物，巨醇通常被认为具有低至中等的毒性，而石斛属植物在传统医学中有着悠久的应用历史。该化合物抑制Wnt/β-catenin信号通路的能力表明其可能具有显著的生物学效应，需要进行仔细评估。该化合物被归类为研究试剂，未经进一步安全评估，不得用于人体治疗。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。

[1]. Gigantol inhibits Wnt/β-catenin signaling and exhibits anticancer activity in breast cancer cells. BMC Complement Altern Med. 2018 Feb 14;18(1):59.

[2]. Gigantol attenuates the proliferation of human liver cancer HepG2 cells through the PI3K/Akt/NF-κB signaling pathway. Oncol Rep. 2017 Feb;37(2):865-870.

[3]. Antinociceptive and anti-inflammatory effects of compounds isolated from Scaphyglottis livida and Maxillaria densa. J Ethnopharmacol. 2007 Nov 1;114(2):161-8.

巨型藻类，如石斛（Dendrobium nobile）以及其他一些有相关数据的生物体，已被发现含有巨型醇。
- 巨型醇是一种从多种药用兰花（石斛属）中分离得到的联苄型酚类化合物。研究表明，它具有显著的抗氧化、解痉、镇痛、抗炎、抗血小板聚集和抗癌特性。[1]
- 研究表明，巨型醇对多种癌细胞系具有显著的抗癌活性，包括肺癌、肝癌（HepG2）和乳腺癌。在肺癌细胞中，巨型醇抑制细胞增殖、迁移、上皮间质转化（EMT）以及癌症干细胞（CSC）特征。[1]
- 在乳腺癌细胞中，巨型醇通过下调磷酸化LRP6和胞质β-catenin来抑制Wnt/β-catenin信号通路。由于LRP6在人乳腺癌细胞中高表达，且是潜在的治疗靶点，因此巨叶兰酚的抗乳腺癌活性与其抑制LRP6活性有关。[1] 巨叶兰酚通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路诱导人肝癌HepG2细胞生长抑制和凋亡，增加PARP裂解、p53和caspase-3的表达，并降低p-Akt/Akt比值。[2] 巨叶兰酚异构体-1是一种联苄（二氢芪）天然产物，主要从石斛属植物（包括大叶石斛）中分离得到。它也被称为巨叶兰酚、二氢白皮杉醇-3,4′-二甲醚和巨叶兰酚。该化合物显示出良好的抗癌治疗潜力。巨酮异构体-1是一种新型Wnt/β-catenin信号通路抑制剂，它能下调磷酸化LRP6和胞质β-catenin的表达，从而阻断下游致癌信号传导，发挥抗癌作用。它是一种源自石斛的联苄化合物。尚未获准用于临床，仅供研究用途。

C16H18O4

274.3117

274.121

67884-30-4

83088-28-2

3085362

White to off-white solid powder

1.204±0.06 g/cm3

2.9

58.92

2

4

5

20

284

0

COC1=C(C=C(C=C1)CCC2=CC(=CC(=C2)OC)O)O

SDXKZPQOVUDXIY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H18O4/c1-19-14-8-12(7-13(17)10-14)4-3-11-5-6-16(20-2)15(18)9-11/h5-10,17-18H,3-4H2,1-2H3

5-[2-(3-hydroxy-5-methoxyphenyl)ethyl]-2-methoxyphenol

Gigantol isomer; Gigantol isomer-1; 67884-30-4; 5-[2-(3-hydroxy-5-methoxyphenyl)ethyl]-2-methoxyphenol; DTXSID90218112; 5-(2-(3-Hydroxy-5-methoxyphenyl)ethyl)-2-methoxyphenol;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~364.55 mM)
Ethanol : ~50 mg/mL (~182.28 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。