hHDAC3 (IC50 = 157 nM); hHDAC1 (IC50 = 198 nM); hHDAC11 (IC50 = 292 nM); hHDAC6 (IC50 = 315 nM); hHDAC2 (IC50 = 325 nM); hHDAC10 (IC50 = 340 nM); hHDAC7 (IC50 = 524 nM); hHDAC5 (IC50 = 532 nM); hHDAC9 (IC50 = 541 nM); hHDAC8 (IC50 = 854 nM); hHDAC4 (IC50 = 1059 nM); HD1-B (IC50 = 7.5 nM); HD1-A (IC50 = 16 nM); HD2 (IC50 = 10 nM)
Givinostat (ITF2357) effectively inhibits the production of IL-1β induced by LPS in its entirety, as opposed to ITF3056's reduction. Givinostat more than 70% decreased IL-1β secretion at 25, 50, and 100 nM. In PBMCs stimulated with TLR agonists, as well as in combination with IL-12 and IL-18, glinostat (ITF-2357) inhibits the production of IL-6. Givinostat at 50 nM causes IL-6 secretion to drop to 50%, but at 100 and 200 nM, there is no reduction[1]. Givinostat (ITF-2357) inhibits JS-1 cell proliferation in a concentration-dependent manner, as demonstrated by the CCK-8 assay. Givinostat treatment at doses greater than 500 nM is linked to a significant reduction in JS-1 cell proliferation (P<0.01). Additionally, there is a significant difference in the cell inhibition rate (P<0.05) between the group that received LPS treatment and the group that received the same concentration of Givinostat cotreated with ≥250 nM plus LPS[2].

体外活性：在 LPS 刺激的培养人外周血单核细胞 (PBMC) 中，ITF2357 减少 TNFα、IL-1α、IL-1β 和 IFNγ 的释放，IC50 分别为 10-25 nM。使用 IL-12 与 IL-18 的组合，ITF2357 减少 IFNγ 和 IL-6 的产生，IC50 为 12.5-25 nM，与 IL-1 或 TNFα 的减少无关。 ITF2357 在多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系（RPMI8226、NCI-H929、JJN3、KMS 11、KMS 12、KMS 18 和 KMS 20）和急性髓性白血病 (AML) 细胞系（HL-60、THP-1）中具有细胞毒性、U937、KASUMI、KG-1 和 TF-1），IC50 为 200 nM。 ITF2357 激活内在的细胞凋亡途径，上调 p21 并下调 Bcl-2 和 Mcl-1。 ITF2357 可抑制间充质基质细胞 (MSC) 中 IL-6、VEGF 和 IFNγ 的产生 80-95%。 ITF2357 有利于炎症条件下 β 细胞的存活。浓度为 25 和 250 nM 的 ITF2357 可增加胰岛细胞活力，增强胰岛素分泌，抑制 MIP-1α 和 MIP-2 的释放，减少 NO 产生并降低细胞凋亡率。激酶测定：加入 100 μL 底物（2×105 cpm）、40 μL 缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，750 mM NaCl，5 mM PMSF，50% 甘油）和 95 μL 蒸馏水进行测定。粗细胞提取物（5 μL）。添加 ITF2357 (50 μL) 以测试 HDAC 抑制。将混合物在室温下孵育过夜，并通过添加 50 μL 1 mL 蒸馏水中含有 259 μL 37% HCl 和 28 μL 乙酸的溶液来淬灭反应。从底物中释放的[3H]乙酰基残基通过用600μL乙酸乙酯进行有机萃取来分离，将200μL有机相添加到标准闪烁液中，并通过β计数器测量放射性。 HDAC 的抑制表示为抑制 50% 对照活性的浓度（通过将含有抑制剂的样品的放射性与仅含有细胞粗提取物的对照的放射性进行比较）。细胞测定：洗涤后，将分离的PBMC以5×106/mL重悬于含有5%FCS的RPMI中，加入到50mL锥形聚丙烯管中，并在4℃下放置过夜。第二天早上将 PBMC 重悬并添加到 96 孔平板微量滴定板中（每孔 100 μL）。然后添加 ITF2357 进行抑制研究，并将板在 37°C 下孵育 1 小时，然后用 LPS 或其他刺激剂以每孔终体积 200 μL 刺激细胞。 37℃孵育24小时后除去上清液，并冷冻在-80℃直至测定细胞因子。

---

在25–100 nM浓度下，Givinostat (ITF2357) 可抑制脂多糖 (LPS) 刺激的人外周血单核细胞 (PBMC) 产生IL-1β、TNFα和IL-6。
在25 nM浓度下，Givinostat 使LPS诱导的IL-1β分泌减少70%以上，并使细胞内IL-1α水平降低35%。
在50 nM浓度下，Givinostat 使LPS诱导的IL-1β mRNA水平降低近70%，使TNFα mRNA水平降低85%。
在浓度高于200 nM时，Givinostat 对PBMCs表现出细胞毒性，表现为LDH释放增加、细胞活力下降和诱导单核细胞凋亡。
Givinostat (25 nM) 在刺激后24小时，可使LPS刺激的PBMC裂解物中的caspase-1活性降低约50%。
Givinostat 可减少热灭活白色念珠菌刺激的PBMCs产生的细胞因子 (IL-1β, TNFα, IFNγ)。
Givinostat (浓度最高至100 nM) 可抑制抗CD3/抗CD28刺激的PBMCs分泌TNFα，但在相同条件下对IL-1β或IFNγ无显著抑制作用。
[1]

ITF2357 (1-10 mg/kg) 可使小鼠 LPS 诱导的血清 TNFα 和 IFNγ 降低 50% 以上。小鼠循环中的 PBMC 中的 ITF2357 不会抑制抗 CD3 诱导的细胞因子。在刀豆蛋白 A 诱导的肝炎中，ITF2357（1 或 5 mg/kg）可显着减轻肝损伤。 ITF2357 (10 mg/kg) 显着延长接种 AML-PS 体内传代细胞系的严重联合免疫缺陷小鼠的存活时间。在闭合性头部损伤 (CHI) 小鼠模型中，ITF2357 (10 mg/kg) 可改善神经行为恢复、减少神经元变性、缩小病变体积并诱导神经胶质细胞凋亡。

---

Con A急性肝炎模型[2]
小鼠灌胃100 μL水或Givinostat (ITF-2357) (5 mg/kg)， 1 h后静脉注射ConA 200 μg/只。对照组小鼠静脉注射生理盐水。如前所述，小鼠在24小时后放血以评估血清ALT水平（33,34）。如图15所示，经ITF2357预处理后，ALT水平降低80%以上。在另一项实验中，对口服ITF2357 1和10 mg/kg进行了比较。如图16所示，通过ALT水平测量，1 mg/kg剂量的ITF2357与10 mg/kg剂量的ITF2357在减少ConA型肝炎方面同样有效。

---

给小鼠口服Givinostat (10 mg/kg) 可减少LPS攻击后的血清TNFα水平达60%。
在内毒素血症小鼠模型中，口服Givinostat 显示出抗炎作用。
Givinostat 已成功用于治疗全身型幼年特发性关节炎儿童，口服剂量为1.5 mg/kg/天，血药浓度峰值低于100 nM。
在糖尿病动物模型中，口服Givinostat (1.5 mg/kg/天) 可保护产生胰岛素的胰岛，并降低临床糖尿病的发病率。
[1]

检测程序包括将细胞粗提取物 (5 μL) 与 100 μL 底物 (2×10⁵ cpm)、40 μL 缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，750 mM NaCl）混合、5 mM PMSF、50% 甘油）和 95 μL 蒸馏水。要检查 HDAC 抑制情况，请添加 50 μL ITF2357。混合物在室温下孵育整晚后，加入 50 μL 由 259 μL 37% HCl、28 μL 乙酸和 1 mL 蒸馏水组成的溶液以猝灭反应。有机萃取法用于分离从底物中释放的[³H]乙酰基残基。将 200 μL 有机相添加到标准闪烁液中后，使用 β 计数器测量放射性。通过测量含有抑制剂的样品和仅含有细胞粗提物的对照样品的放射性差异，可以确定抑制50%对照活性的HDAC的浓度。

---

玉米HDAC测定[2]
HD2， HD-1B和HD-1A从玉米中提取，用于评估Givinostat (ITF-2357)的组蛋白脱乙酰酶活性，如Koelle等人所述。

---

细胞粗提物对总HDAC活性和蛋白质乙酰化的测定[2]
将人外周血单个核细胞（PBMCs）（见下文）在含有1% FCS和0.05% DMSO （vol/vol）的RPMI 1640培养基中以2.5 × 106个细胞/mL的浓度加入到50 mL的圆锥体管中，并与所述浓度的测试化合物（由0.05% DMSO组成）在37℃下孵育。60 min后，加入终浓度为10 ng/mL的LPS， 37℃孵育。孵育结束后，400g离心15 min，收集上清，- 80℃保存至测定TNFα，并用冰冷的磷酸盐缓冲液洗涤细胞2次。
将微球悬浮于200 μL改性裂解缓冲液（50 mM Tris HCl, pH 7.4, 1% NP-40, 0.25% na -脱氧胆酸盐，150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 mM Na3VO4, 1 mM NaF）中，与可作为片剂的蛋白酶抑制剂混合，在4℃下悬浮30 min，得到粗提物。提取液在4℃下14000 rpm离心10 min澄清，上清液用于测定总HDAC活性和蛋白乙酰化。采用BCA蛋白测定试剂盒测定提取物的蛋白质含量。

---

总HDAC活性测定[2]
如前所述，该分析是基于从肽底物释放的氚化乙酰基残基，内在标记为[3H]乙酸。本实验中使用的合成肽是组蛋白H4的n端序列（SGRGKGGKGLGKGGAKRHRC）。采用放射性标记法：将100 μg肽加入62.5 μL [3H]乙酸钠盐（5.0 mCi/0.5 mL乙醇，比活性5.1 Ci/mol）中。然后，加入5 μL BOP溶液（0.24 M BOP和0.2 M三甲胺乙腈）。得到的溶液在室温下轻度搅拌孵育过夜，然后将放射性标记的肽溶液上传到Microcon-SCX自旋柱上，之前用500 μL的10 mM HCl在甲醇中冲洗。用50 μL HCl 3N在50%异丙醇溶液中洗脱放射性标记肽。包含放射性标记的肽的洗脱方案提交到8个周期的有机溶剂萃取乙酸乙酯(8×1毫升)分离其余自由[3 h]醋酸。得到的水溶液在室温下真空离心干燥30 min，然后悬浮在200 μL蒸馏水中，分离成等分，在- 20℃保存。

---

蛋白的乙酰化[2]
细胞粗提物的蛋白乙酰化用Western blotting测定。简单地说，将样品（200 μg/lane）通过SDS-PAGE（12.5%）分离，然后电转移到硝化纤维素膜上。膜用3%脱脂乳在磷酸盐缓冲液中饱和，并根据制造商的说明用抗乙酰赖氨酸单克隆抗体孵育。然后使用化学发光检测系统ECL Plus在x射线胶片上检测蛋白质条带。

---

合成化合物抑制HDAC活性的酶促测定[2]
在细胞粗提液（5 μL）中加入100 μL底物（20万cpm）、40 μL缓冲液（50 mM Tris-HCl、pH 8.0、750 mM NaCl、5 mM PMSF、50%甘油）和95 μL蒸馏水。加入抑制HDAC的化合物（50 μL）。室温孵育过夜，在1 mL蒸馏水中加入50 μL含259 μL 37% HCl和28 μL乙酸的溶液，使反应猝灭。通过加入600 μL乙酸乙酯有机萃取分离底物释放的[3H]乙酰基残基，在标准闪烁液中加入200 μL有机相，用β -计数器测定放射性。hdac的抑制作用表现为抑制50%对照活性的浓度（通过将含有抑制剂的样品与仅含有细胞粗提物的样品的放射性进行比较）。

---

酶法测定HDAC活性[1]
重组人HDAC酶（HDAC1-10）购自BPS。采用氟绿脱乙酰酶底物检测HDAC8活性。利用Nϵ-Trifluoroacetyl-l-lysine检测HDAC 4、5、7、9的活性。重组酶与Givinostat (ITF-2357)或ITF3056在30°C下以25 μl的体积在微滴板孔中预孵育。短暂孵育后，加入25 μl底物，添加50 μl显影剂（含2 μm曲古菌素a的Fluor de Lys显影剂）产生荧光信号。每个实验对酶的用量、孵育次数、实验缓冲液和底物浓度进行优化。酶活性阳性对照为酶加底物，不含ITF2357和ITF3056。荧光信号检测使用一个维克多multilabel板读者。

---

使用重组人HDAC酶 (HDAC1–11) 评估抑制活性。将酶与Givinostat 或对照在微孔板中预孵育。然后加入荧光脱乙酰酶底物。孵育后，加入含有曲古抑菌素A的显影液以产生荧光信号。使用酶标仪测量荧光强度。针对每种HDAC酶优化了实验条件（酶量、孵育时间、缓冲液、底物浓度）。测定了引起50%抑制的抑制剂浓度 (IC50)。[1]

在补充有 10% 胎牛血清的 DMEM 中培养 24 小时后，将含有 JS-1 细胞的 30 个孔分成两组。将 Givinostat (ITF-2357)添加到第一组的培养基中，终浓度为 0 nM、125 nM、250 nM、500 nM 和 1000 nM。在第二组中，同时添加适当浓度的 100 nM LPS 溶液和 Givinostat (ITF-2357)。对于每组，进行三次重复。在 37°C 和 5% CO₂ 下接种 24 小时后，每孔 (100 μL) 中孵育 10 μL CCK-8 溶液。将板在 37°C 下孵育一小时后，使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度[2]。

---

采用细胞计数试剂盒-8法和流式细胞术观察Givinostat (ITF-2357)处理后肝星状细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化。Western blot观察Givinostat (ITF-2357)的肝星状细胞中p21、p57、CDK4、CDK6、cyclinD1、caspase-3、caspase-9的表达变化。采用划痕法分析吉维司他对细胞迁移的影响。采用激光共聚焦显微镜观察吉维司他对JS-1细胞活性氧谱、线粒体膜电位和线粒体通透性过渡孔开度的影响。[3]

---

Caspase-1活性测定[1]
分别用LPS （10 ng/ml）刺激4和24 h。根据Givinostat (ITF-2357)和ITF3056对LPS诱导的IL-1β产生和分泌的抑制作用，选择25 nm ITF2357和1000 nm ITF3056作为最佳浓度来评估其对caspase-1活性的影响。在LPS前30分钟加入ITF2357 （25 nm）或ITF3056 （1000 nm）。清除上清后，使用含有蛋白酶抑制剂混合物的放射免疫沉淀测定缓冲液裂解细胞，并在4°C下以12,000 rpm离心20分钟。用Bio-Rad法测定上清液的蛋白质含量。用荧光底物A2452对蛋白进行caspase-1活性处理。荧光以1 μg样品/min（荧光/μg/min）产生的任意荧光单位报道。数据表示为LPS刺激的pbmc与类似物孵育的裂解物中caspase-1活性的百分比变化，LPS的裂解物仅设为100%。

---

细胞毒性测定[1]
采用三种方法比较Givinostat (ITF-2357)和ITF3056的细胞毒作用。将新鲜获得的pbmc在96平底孔板中培养24小时，LPS （10 ng/ml）存在，不含胎牛血清，如前所述，使用LDH细胞毒性测定试剂盒，在上清中测量LDH释放。乳酸脱氢酶释放百分比根据制造商的说明计算。此外，在96平底孔板中，在LPS (10 ng/ml)（40万个细胞/ml）的存在下，用添加1% FCS的RPMI培养pbmc 24小时，评估细胞活力。孵育结束时，根据制造商的说明，通过CellTiter 96®水溶液细胞增殖试验测定细胞活力。我们还评估了从人柠檬酸血中分离的灰白色被细胞PBMC的细胞活力。将从褐皮中分离的pbmc以500000个细胞/孔（96平底孔板）在含10% FCS的RPMI中播种，并使用如上所述的CellTiter法在ITF2357或ITF3056浓度增加的条件下孵育72小时。

---

Annexin V染色单核细胞凋亡[1]
通过磁分离从新鲜pbmc中分离单核细胞，并在含有10% FCS的RPMI中重悬。纯化的单核细胞以250000个细胞/孔的速度接种，在增加Givinostat (ITF-2357)或ITF3056浓度的LPS （10 ng/ml）中孵育。24小时后，按照制造商的说明，用膜联蛋白V-FLUOS 和碘化丙啶（PI）标记细胞。流式细胞术测定膜联蛋白V阳性和膜联蛋白V/ pi双阳性细胞的百分比。

---

Caspase-3/7对单核细胞凋亡的检测[1]
如上所述分离的单核细胞，在96平底孔板中以50,000个细胞/孔的速度孵育，用LPS （10 ng/ml）增加Givinostat (ITF-2357)或ITF3056的浓度，孵育24小时。然后用Apo-ONE均相caspase-3/7法测定caspase-3/7的活性，用荧光板阅读器检测荧光量。

---

从健康供体血液中分离人PBMCs，并在RPMI培养基中培养。对于LPS刺激，将细胞接种在平底96孔板中，并在存在或不存在Givinostat 的情况下，用10 ng/ml LPS刺激24小时。对于白色念珠菌或T细胞刺激，将细胞在圆底96孔板中用10%人血清培养，并用热灭活白色念珠菌或抗CD3/抗CD28抗体刺激5天。在刺激前30分钟加入Givinostat。收集上清液用于通过电化学发光 (ECL) 或ELISA分析细胞因子。制备细胞裂解物用于分析细胞内细胞因子或caspase活性。[1]
使用商业试剂盒通过测量上清液中乳酸脱氢酶 (LDH) 的释放来评估细胞毒性。也使用基于四唑鎓的细胞增殖实验测定细胞活力。[1]
在分离的单核细胞中评估细胞凋亡。将单核细胞与Givinostat 和LPS孵育24小时，然后用annexin V和碘化丙啶 (PI) 染色，随后进行流式细胞术分析。使用均质caspase检测试剂盒和荧光检测法测定单核细胞中caspase-3/7的活性。[1]
对于mRNA分析，将PBMCs在24孔板中用LPS和Givinostat 培养20小时。裂解细胞，提取总RNA，逆转录为cDNA，并对IL-1β、TNFα、IL-6和GAPDH（作为内参）进行实时荧光定量PCR。[1]

小鼠：C57BL/6小鼠在使用前至少饲养5天。本对比研究采用腹腔注射ITF3056和口服10 mg/kg剂量的Givinostat (ITF-2357)。在给药1小时后，腹腔注射鼠伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS），剂量为2.5 mg/kg。收集血清并保存于-80°C，直至进一步检测细胞因子生成。LPS处理90分钟后处死小鼠。

---

用于LPS诱导血清细胞因子的BALB/c小鼠，用于抗CD3诱导细胞因子的CD1小鼠。用于刀豆蛋白A（Con A）诱导急性肝炎的BALB/c或C57BL/6小鼠购自杰克逊实验室。小鼠经灌胃给予100 μL水或溶于水中的Givinostat (ITF-2357)，60分钟后，分别腹腔注射LPS (30 mg/kg)、静脉注射抗小鼠CD3抗体 (10 μg/只) 或尾静脉注射Con A (200 μg/只)。对照组小鼠腹腔注射或静脉注射生理盐水。LPS组小鼠在注射后90分钟和6小时用麻醉剂处死，并采集血液样本。抗小鼠CD3组小鼠在注射后90分钟用麻醉剂处死，并采集血液样本。24小时后再次采血，用于检测血清ALT水平，方法如前所述。[2] C57BL/6小鼠在使用前至少在动物房饲养5天。在对照研究中，按照先前报道的方法，口服给予小鼠10 mg/kg的Givinostat (ITF-2357)，并腹腔注射ITF3056。给药1小时后，腹腔注射鼠伤寒沙门氏菌LPS（2.5 mg/kg）。LPS处理90分钟后，处死小鼠，收集血清并保存于-80 °C，直至进行细胞因子生成分析。在腹腔注射10 mg/kg大肠杆菌(O55:B5) (Sigma-Aldrich) LPS的小鼠中，进行了ITF3056（4、8和16 mg/kg）的剂量反应研究。4小时后，收集血清用于细胞因子水平检测。另一项 ITF3056 剂量研究（1 和 5 mg/kg）在注射 ITF3056 后腹腔注射较低剂量的 LPS（2.5 mg/kg）。4 小时后，处死小鼠并采集血液。血液采集于 EDTA 抗凝管中，分离血浆用于细胞因子水平检测，或用 RPMI 培养基稀释用于全血培养，具体方法如前所述。[1]

---

本研究使用 C57BL/6 小鼠。在内毒素血症研究中，口服给予小鼠 10 mg/kg 的 Givinostat。给药 1 小时后，腹腔注射 LPS（2.5 mg/kg）。LPS 注射 90 分钟后处死小鼠，采集血液进行血清细胞因子分析。 [1]
在其他糖尿病模型研究中，Givinostat以1.5 mg/kg/天的剂量口服给药，或添加到饮用水中（计算出的每日剂量约为1 mg/kg）。[1]

吸收
吉维诺司他的绝对生物利用度尚未确定。口服吉维诺司他后，其达峰时间（Tmax）约为2-3小时，每日两次给药可在5至7天内达到稳态血药浓度。在治疗剂量范围内，全身暴露量与给药剂量成正比。与高脂餐同服可使AUC增加40%，Cmax增加23%，Tmax延迟2-3小时。
消除途径
吉维诺司他经尿液排泄量极少（<3%）。吉维诺司他的消除可能主要由代谢驱动，随后代谢产物经肾脏和胆汁排泄。
分布容积
根据群体药代动力学模型，中心室表观分布容积估计为 160 L。外周室表观分布容积估计为 483 L。
清除率
根据群体药代动力学模型，吉维诺他口服表观清除率估计为 121 L/h。吉维诺他室清除率估计为 33.8 L/h。
蛋白结合率
吉维诺他在血浆中的蛋白结合率很高（约 96%）。
代谢/代谢物
吉维诺他广泛代谢为多种代谢物，其中四种已被鉴定：ITF2374、ITF2375、ITF2440 和 ITF2563。这些代谢物不影响吉维诺他的疗效。负责吉维诺他代谢的酶尚不明确；其代谢不涉及 CYP450 或 UGT 酶。
生物半衰期
吉维诺他（Givinostat）的表观血浆消除半衰期约为 6 小时。
在一项针对健康男性的 I 期临床试验中，口服吉维诺他可降低全血培养物中促炎细胞因子的产生。[1]
在患有全身型幼年特发性关节炎的儿童中，每日口服 1.5 mg/kg 的吉维诺他，可使血药浓度峰值低于 100 nM。[1]

体外实验表明，吉维诺他（Givinostat）具有浓度依赖性细胞毒性。浓度达到 200 nM 及以上时，可导致人外周血单核细胞（PBMC）发生显著损伤，表现为乳酸脱氢酶（LDH）释放增加、增殖实验中细胞活力下降、单核细胞膜联蛋白 V/碘化丙啶（Annexin V/PI）染色增强以及 caspase-3/7 激活。[1] 浓度达到 250 nM 及以上时，吉维诺他（Givinostat）对 PBMC 具有损伤作用。浓度达到 500 nM 和 1000 nM 时，可诱导显著的细胞死亡。[1] 体外（25-100 nM）和体内（血药浓度 <100 nM）的有效抗炎浓度均低于细胞毒性阈值。 [1]

妊娠期和哺乳期用药
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于吉维诺司他用于哺乳期妇女的信息。由于其与人血浆蛋白的结合率高达96%，因此在乳汁中的含量可能非常低。如果母亲需要服用吉维诺司他，这并非停止哺乳的理由。在获得更多数据之前，哺乳期妇女应谨慎使用吉维诺司他，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。应密切观察哺乳婴儿是否出现腹泻、呕吐、瘀伤、伤口出血过多以及便血等症状。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

[1]. Specific inhibition of histone deacetylase 8 reduces gene expression and production of proinflammatory cytokines in vitro and in vivo. J Biol Chem. 2015 Jan 23;290(4):2368-78.

[2]. The histone deacetylase inhibitor ITF2357 reduces production of pro-inflammatory cytokines in vitro and systemic inflammation in vivo. Mol Med. 2005 Jan-Dec;11(1-12):1-15.

[3]. Givinostat inhibition of hepatic stellate cell proliferation and protein acetylation. World J Gastroenterol. 2015 Jul 21;21(27):8326-39.

吉维诺司他（Givinostat）属于萘类化合物，其结构为萘环上分别在2位和6位被({[4-(羟基氨基甲酰基)苯基]氨基甲酰基}氧基)甲基和(二乙氨基)甲基取代。它是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，适用于杜氏肌营养不良症患者。吉维诺司他具有多种药理活性，包括作为EC 3.5.1.98（组蛋白去乙酰化酶）抑制剂、抗炎药、血管生成抑制剂、抗肿瘤药和细胞凋亡诱导剂。它是一种氨基甲酸酯类化合物，属于萘类、叔胺类、羟肟酸类和苯类化合物。它是吉维诺司他(1+)的共轭碱。
吉维诺司他已用于治疗真性红细胞增多症、幼年特发性关节炎、杜氏肌营养不良症 (DMD)、慢性骨髓增生性肿瘤和多关节型幼年特发性关节炎的临床试验。
吉维诺司他是一种口服生物利用度高的组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 羟化物抑制剂，具有潜在的抗炎、抗血管生成和抗肿瘤活性。吉维诺司他抑制 I 类和 II 类 HDAC，导致高度乙酰化组蛋白的积累，进而诱导染色质重塑和基因表达模式的改变。在低浓度（非凋亡浓度）下，该药物可抑制促炎细胞因子（如肿瘤坏死因子-γ (TNF-α)、白细胞介素-1 (IL-1)、IL-6 和干扰素-γ）的产生。吉维诺司他已被证实可激活内在凋亡途径，诱导肝癌细胞和白血病细胞凋亡。该药物也可能具有抗血管生成活性，抑制骨髓基质细胞产生血管生成因子，例如IL-6和血管内皮生长因子（VEGF）。
另见：盐酸吉维诺司他（注释已移至）。

---

药物适应症
治疗杜氏肌营养不良症
幼年特发性关节炎。

---

ITF2357（通用名吉维诺司他）是一种口服有效的含羟肟酸的组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，具有广泛的抗炎特性，已用于治疗患有全身性幼年特发性关节炎的儿童。ITF2357抑制I类和II类HDAC，并降低人外周血单核细胞中caspase-1的活性以及IL-1β和其他细胞因子的分泌（25-100 nm）。当浓度高于 200 nM 时，ITF2357 在体外具有毒性。ITF2357 的类似物 ITF3056 仅抑制 HDAC8（IC50 为 285 nM）。本研究比较了 ITF2357 和 ITF3056 在脂多糖 (LPS)、热灭活的白色念珠菌或抗 CD3/抗 CD28 抗体刺激的外周血单核细胞中 IL-1β、IL-1α、TNFα 和 IL-6 的产生情况。ITF3056 可降低 LPS 诱导的细胞因子水平（浓度范围为 100 至 1000 nM）；在 1000 nM 时，IL-1β 的分泌减少了 76%，TNFα 的分泌减少了 88%，IL-6 的分泌减少了 61%。细胞内 IL-1α 的水平降低了 30%。在 ITF3056 浓度为 100-1000 nM 时，未观察到细胞毒性。TNFα 基因表达显著降低（80%），而 IL-6 基因表达降低 40%。尽管抗 CD3/28 抗体和念珠菌刺激引起的 IL-1β 和 TNFα 水平略有降低，但 IFNγ 的产生降低了 75%。从机制上讲，ITF3056 降低了加工后的 IL-1β 的分泌，且该过程与 caspase-1 活性的抑制无关；然而，IL-1β 前体的合成降低了 40%，而 IL-1β mRNA 水平并未显著下降。在小鼠中，ITF3056 使 LPS 诱导的血清 TNFα 水平降低了 85%，IL-1β 水平降低了 88%。这些数据表明，特异性抑制HDAC8可减轻炎症反应，且不产生细胞毒性。[1]我们研究了组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的抑制作用，HDAC可导致染色质解聚，从而促进基因表达。ITF2357是一种口服有效的合成HDAC抑制剂，我们评估了其作为抗炎剂的活性。在脂多糖（LPS）刺激的培养人外周血单核细胞（PBMC）中，ITF2357在10至22 nM浓度下可使肿瘤坏死因子-α（TNFα）的释放减少50%，在12 nM浓度下可使细胞内白细胞介素（IL）-1α的释放减少50%，在12.5至25 nM浓度下可使IL-1β的分泌减少50%，在25 nM浓度下可使干扰素-γ（IFNγ）的产生减少50%。在这些相同的培养物中，IL-8的水平没有降低。 IL-12 和 IL-18 联合使用可使 IFNγ 和 IL-6 的产生在 12.5 至 25 nM 浓度下降低 50%，且该作用与 IL-1 或 TNFα 的降低无关。在 100 nM ITF2357 处理下，LPS 刺激的 PBMC 中未观察到细胞死亡，DNA 降解、膜联蛋白 V 和 caspase-3/7 检测均证实了这一点。PBMC 的 Northern 印迹分析显示，LPS 诱导的 TNFα 和 IFNγ mRNA 稳态水平降低了 50% 至 90%，但对 IL-1β 或 IL-8 水平无影响。实时 PCR 证实了 ITF2357 可降低 TNFα RNA 水平。小鼠口服 1.0 至 10 mg/kg ITF2357 可使 LPS 诱导的血清 TNFα 和 IFNγ 水平降低 50% 以上。在体外或小鼠循环系统中，抗CD3诱导的细胞因子在PBMC中均未被ITF2357抑制。在刀豆蛋白A诱导的肝炎模型中，口服1或5 mg/kg的ITF2357可显著减轻肝损伤。因此，低浓度、非凋亡性的HDAC抑制剂ITF2357可降低体外原代细胞中促炎细胞因子的产生，并在体内表现出抗炎作用。[2] 目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂吉维诺他（givinostat）对肝星状细胞增殖调控相关蛋白的影响。方法：采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法和流式细胞术观察吉维诺他处理后肝星状细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化。采用蛋白质印迹法观察肝星状细胞暴露于吉维诺他（givinostat）后p21、p57、CDK4、CDK6、cyclin D1、caspase-3和caspase-9的表达变化。采用划痕实验分析吉维诺他（givinostat）对细胞迁移的影响。利用激光共聚焦显微镜观察吉维诺他（givinostat）对JS-1细胞活性氧谱、线粒体膜电位和线粒体通透性转换孔开放的影响。结果显示：吉维诺他（givinostat）显著抑制JS-1细胞增殖并促进细胞凋亡，导致细胞周期阻滞于G0/G1期。吉维诺他（givinostat）处理下调了CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达，而显著上调了p21和p57的表达。吉维诺他诱导的肝星状细胞凋亡主要通过p38和细胞外信号调节激酶1/2介导。吉维诺他处理可增加细胞内活性氧的产生，降低线粒体膜电位，并促进线粒体通透性转换孔的开放。超氧化物歧化酶（乙酰化K68）和核因子-κB p65（乙酰化K310）的乙酰化水平上调，但蛋白表达量未发生变化。此外，在小鼠模型中也证实了吉维诺他（Givinostat）对肝纤维化的显著有益作用。结论：吉维诺他通过调节核因子-κB和超氧化物歧化酶2的乙酰化发挥抗纤维化作用，从而抑制肝星状细胞增殖并诱导细胞凋亡。[3]

---

吉维诺他（ITF2357）是一种口服有效的含羟肟酸的组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂，具有广泛的抗炎特性。[1]
它可抑制I类和II类HDAC。[1]
它已被用于治疗患有全身性幼年特发性关节炎的儿童。[1]
它可降低caspase-1活性，并减少受刺激的人类免疫细胞分泌IL-1β和其他细胞因子。 [1]
目前正在研究其在 HIV-1 感染治疗中用于减少潜伏感染 T 细胞数量及相关炎症的潜在用途。[1]
吉维诺他（Givinostat）的泛 HDAC 抑制特性使其在高浓度下具有细胞毒性，因此促使人们开发更具特异性的 HDAC 抑制剂，例如 HDAC8 特异性类似物 ITF3056。[1]

C24H27N3O4

421.49

421.2

C, 68.39; H, 6.46; N, 9.97; O, 15.18

497833-27-9

Givinostat hydrochloride monohydrate;732302-99-7;Givinostat hydrochloride;199657-29-9

9804992

White to light yellow solid powder

1.259

5.013

90.9

3

5

9

31

575

0

O=C(OCC1=CC=C2C=C(CN(CC)CC)C=CC2=C1)NC3=CC=C(C(NO)=O)C=C3

YALNUENQHAQXEA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H27N3O4/c1-3-27(4-2)15-17-5-7-21-14-18(6-8-20(21)13-17)16-31-24(29)25-22-11-9-19(10-12-22)23(28)26-30/h5-14,30H,3-4,15-16H2,1-2H3,(H,25,29)(H,26,28)

[6-(diethylaminomethyl)naphthalen-2-yl]methyl N-[4-(hydroxycarbamoyl)phenyl]carbamate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)