| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PPARα
GW6471 is a specific antagonist of peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα). [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在基于细胞的基因报告基因测试中，GW6471 显着降低 GW409544 诱导的 PPARα 激活，IC50 为 0.24 μM [1]。使用 MTT 测定，评估 PPARα 对肾细胞癌 (RCC) 细胞活力的功能影响。在 72 小时的持续时间内，使用特定 PPARα 选择性拮抗剂 GW6471 或特定 PPARα 激动剂 WY14,643 以 12.5 剂量范围内的剂量对 Caki-1（VHL 野生型）和 786-O（VHL 突变型）细胞进行无菌处理。至 100 μM。然后评估细胞的活力。 WY14,643 不会影响细胞活力或导致细胞活力逐渐增加，但 GW6471 以足依赖性方式显着降低两种细胞系的细胞活力，高达近 80% [2]。
用浓度为12.5至100 μM的GW6471处理肾细胞癌（RCC）细胞系（Caki-1和786-O）72小时，在MTT实验中能显著且剂量依赖性地抑制细胞活力（抑制率最高达~80%）。PPARα激动剂WY14,643则不抑制或轻微增加细胞活力。[2] 用GW6471（25 μM，24小时）处理可诱导Caki-1和786-O细胞周期停滞在G0/G1期，这通过流式细胞术确定。[2] GW6471（25 μM，24小时）能诱导两种RCC细胞系凋亡，证据是膜联蛋白V阳性细胞增加以及免疫印迹中PARP的切割。[2] GW6471诱导的细胞周期停滞和凋亡与细胞周期调节蛋白c-Myc、Cyclin D1和CDK4水平的降低相关，这通过免疫印迹证实。[2] 通过siRNA敲低PPARα证实了GW6471的效果是特异性的，该操作重现了细胞周期停滞（G0/G1）、凋亡诱导以及c-Myc、Cyclin D1和CDK4蛋白水平的下降。[2] 使用糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG，5 mM）或在无葡萄糖培养基中培养细胞，能协同增强GW6471（25 μM）在RCC细胞系中的细胞毒性。这种协同效应在PPARα激动剂WY14,643中未观察到。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
使用肿瘤皮下异种移植模型评估 PPARα 拮抗剂的体内抗活性。裸鼠（Nu/Nu）皮下注射 Caki-1 细胞。药物 GW6471 每天腹腔注射，持续四个星期，剂量为 20 毫克/千克小鼠体重，在体内剂量反应研究中发现，一旦肿瘤块生长到直径，该药物是有效的，并在此得到验证大约5毫米。用GW6471治疗的动物和用媒介物治疗的动物的肿瘤生长存在显着差异。动物体重表明GW6471剂量没有毒性，肝肾功能测试等实验室结果也没有显示负面影响。通过评估肿瘤中的 c-Myc 水平来说明 GW6471 的抑制作用，结果表明接受 GW6471 治疗的动物的肿瘤显着减少 [3]。
在使用 Caki-1 RCC 细胞的皮下异种移植小鼠模型中，腹腔注射 GW6471（20 mg/kg，隔日一次，持续4周）可显著抑制肿瘤生长，效果与舒尼替尼（40 mg/kg，口服，每周5天）相当。[3] GW6471 与舒尼替尼联合治疗未显示协同抗肿瘤效应。[3] GW6471 治疗可降低肿瘤组织中 c-Myc 蛋白水平，证实其在体内具有靶向 PPARα 的抑制作用。[3] |
| 酶活实验 |
结合测定[1]
使用Packard BioScience30的AlphaScreen技术，通过化学介导的荧光能量转移测定测定GW6471对共激活肽和共抑制肽与PPARα相互作用的影响。实验用5 含有单个基序的生物素化肽的nM PPARαLBD（图3a），按照制造商关于六组氨酸检测试剂盒的说明，在含有50 mM MOPS，pH 7.4，50 mM NaF，0.05 mM CHAPS，0.1 毫克 ml-1牛血清白蛋白和10 mM二硫苏糖醇（DTT）。随着GW6471浓度的增加，检测到结合信号，并将四个重复实验的结果标准化为不存在GW6471时结合的百分比。 GW6471对SMRT或N-CoR肽与纯化的PPARαLBD的亲和力的影响通过在含有10 mM HEPES，pH 7.4，0.15 M NaCl，3 mM EDTA，0.005%聚山梨醇酯-20，5 mM DTT和2.5%DMSO。在存在或不存在40的情况下PPARαLBD的不同浓度 µM GW6471在室温下与10 nM的N-CoR2或SMRT2的荧光素标记的肽（图第3a段）。使用具有485的BMG PolarStar Galaxy荧光读取器测定每种受体浓度的荧光偏振值 nm激发和520 nm发射滤光片。表观离解常数（Kd）值由结合曲线确定，结合曲线源自简单1:1相互作用的数据的非线性最小二乘拟合 SMRT共阻遏物基序与PPARα和TRβLBD相互作用的突变分析也通过荧光偏振进行。为了确定SMRT基序中每个氨基酸与核受体结合的重要性，添加在每个位置具有丙氨酸取代的SMRT肽以抑制1 µM TRβLBD或2 µM PPARα与荧光N-CoR2肽结合。对于PPARα实验，我们添加了10 µM GW6471。构建抑制曲线，并通过数据与简单1:1相互作用的非线性最小二乘拟合来确定IC50值。 |
| 细胞实验 |
如前所述，使用（UAS）5-tk-SPAP报告子和人PPARα-GAL4嵌合体在CV-1细胞中进行GW6471作为拮抗剂的基于细胞的测定11。我们使用lipofectamine和β-半乳糖苷酶载体进行转染，作为标准化对照。哺乳动物的两种杂交测定是根据已公布的程序29进行的。包括8种转染混合物 ng（UAS）5-tk-CAT报告质粒，8 ng VP16人PPARα表达质粒，2 GAL4–N-CoR或GAL4–SMRT表达质粒的ng，25 ngβ-半乳糖苷酶表达质粒作为内部对照，和35 ng载体质粒。GW6471和GW409544的合成将在别处描述。
肾细胞癌（RCC）是美国第六常见的癌症。虽然肾细胞癌具有高度转移性，但转移性肾细胞癌患者几乎没有治疗选择，即使使用最新的靶向治疗方法，患者的无进展生存期也只有两年。因此，迫切需要针对这种疾病的新的治疗靶点。基于我们之前的代谢组学研究，显示在RCC患者和异种移植物小鼠材料中过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）相关事件的改变，本研究在RCC环境中进一步检查了这一途径。PPARα是一种核受体蛋白，作为基因的转录因子发挥作用，包括编码参与能量代谢的酶的基因；虽然PPARα已被报道在几种癌症中调节肿瘤生长，但尚未在RCC中进行评估。特异性PPARα拮抗剂GW6471在VHL（+）和VHL（-）RCC细胞系（786-O和Caki-1）中诱导细胞凋亡和G0/G1细胞周期停滞，与细胞周期调节蛋白c-Myc、细胞周期蛋白D1和CDK4的减弱有关；通过siRNA方法证实该数据对PPARα拮抗具有特异性。有趣的是，当糖酵解被几种方法阻断时，GW6471的细胞毒性协同增加，这表明糖酵解转变为脂肪酸氧化，并为RCC提供了一种全新的治疗方法。 对于细胞活力（MTT）实验，将细胞接种于96孔板，用指定剂量的GW6471（或DMSO/激动剂）处理72小时。向培养基中加入MTT溶液，孵育后，将形成的甲臜晶体溶解于DMSO中。在540 nm波长下测定吸光度。[2] 对于细胞周期分析，用GW6471或DMSO处理24小时的细胞被收集、洗涤，并用碘化丙啶（PI）染色。通过流式细胞术分析DNA含量以确定细胞在不同细胞周期阶段的分布。[2] 对于凋亡实验，用GW6471或DMSO处理24小时的细胞用膜联蛋白V和死细胞染料（7-AAD）染色，通过流式细胞术定量死细胞、晚期凋亡细胞、早期凋亡细胞和活细胞的群体。[2] 对于免疫印迹，用GW6471或DMSO处理的细胞被裂解，蛋白质通过凝胶电泳分离，转移到膜上，封闭后，用针对PARP、c-Myc、Cyclin D1、CDK4、PPARα或β-肌动蛋白（上样对照）的抗体进行检测。使用化学发光法检测信号。[2] 对于siRNA转染，使用脂质体转染试剂在低血清培养基中将PPARα特异性siRNA或乱序对照siRNA（终浓度100 nM）转染进细胞。24小时后，更换为新鲜培养基，继续培养48小时，然后收集细胞进行免疫印迹、细胞周期或凋亡分析。[2] |
| 动物实验 |
所有动物实验均符合加州大学动物护理和使用委员会的规定。雄性无胸腺Nu/Nu小鼠（8周龄，体重约25 g）皮下注射1 × 10⁵个Caki-1细胞（DMEM-Matrigel 3:1混合液）于侧腹部。每周使用游标卡尺测量肿瘤体积，并根据以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积（mm³）=（长度 × 宽度²）/2。当肿瘤体积达到约80–100 mm³时，将动物随机分为四组并开始治疗（第1天）。对照组腹腔注射DMSO（4% PBS溶液），并灌胃给予植物油。PPARα组每隔一天腹腔注射GW6471（20 mg/kg体重；小鼠剂量反应已在其他文献中报道）。舒尼替尼组小鼠每周5天经口灌胃给予溶于植物油的舒尼替尼（40 mg/kg体重）。另一组小鼠接受如上所述的GW6471+舒尼替尼治疗。为确定治疗的潜在毒性，测量动物体重并监测不良反应症状。第28天，处死小鼠并测定肿瘤体积。肿瘤生长率计算如下：第x天肿瘤体积/第1天肿瘤体积。实验结束时采集小鼠血清样本，在加州大学戴维斯分校临床诊断实验室使用罗氏cobas c501分析仪（6000系列）和小动物化学2检测板进行分析。实验结束时，还收集了冷冻肿瘤组织，并在 T-PER 中匀浆和提取，通过蛋白质印迹法对 c-Myc 进行定量。[3]
将 1×10^5 Caki-1 细胞与 Matrigel 混合后皮下注射到雄性无胸腺 Nu/Nu 小鼠（8 周龄，~25 克）的侧腹部。当肿瘤体积达到约 80–100 mm³ 时，将小鼠随机分为治疗组。[3] GW6471 溶于 4% DMSO 的 PBS 溶液中，以 20 mg/kg 体重每隔一天腹腔注射一次，持续 4 周。[3] 舒尼替尼溶于植物油中，以 40 mg/kg 体重每周口服 5 天。[3] 对照组接受赋形剂（腹腔注射 4% DMSO 的 PBS 溶液，口服植物油）。[3] 每周使用游标卡尺测量肿瘤体积。小鼠于第 28 天处死，并收集肿瘤进行分析。[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
对兔子实验的简要提及指出，单次静脉注射 4 mg/kg 的 GW6471 后，与对照组相比，5 小时后未观察到明显的肾脏变化或尿量改变。[2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
对人肾细胞癌 (RCC) 组织样本的免疫组织化学分析显示，高级别（Fuhrman 4 级）肿瘤中 PPARα 蛋白表达高于低级别（1 级）肿瘤，这为在晚期 RCC 中靶向 PPARα 提供了理论依据。[2]
该研究提出了一种新的 RCC 联合治疗策略：抑制 PPARα（例如使用 GW6471）并联合抑制糖酵解。其原理是 PPARα 拮抗作用会减弱脂肪酸氧化，使癌细胞更加依赖糖酵解供能。同时阻断糖酵解则会导致协同细胞死亡。[2] 观察到的 GW6471 的作用（细胞周期阻滞和凋亡）在机制上与癌蛋白 c-Myc 及其下游靶点 Cyclin D1 和 CDK4 的下调有关。[2] |
| 分子式 |
C35H36F3N3O4
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|---|---|
| 分子量 |
619.6733
|
| 精确质量 |
619.265
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| 元素分析 |
C, 67.84; H, 5.86; F, 9.20; N, 6.78; O, 10.33
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| CAS号 |
880635-03-0
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| PubChem CID |
446738
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.556
|
| LogP |
7.24
|
| tPSA |
96.95
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
14
|
| 重原子数目 |
45
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| 分子复杂度/Complexity |
954
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C(C1=C(C)OC(C2C=CC=CC=2)=N1)COC1C=CC(C[C@@H](CNC(=O)CC)N/C(/C)=C\C(C2C=CC(C(F)(F)F)=CC=2)=O)=CC=1
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| InChi Key |
TYEFSRMOUXWTDN-DYQICHDWSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C35H36F3N3O4/c1-4-33(43)39-22-29(40-23(2)20-32(42)26-12-14-28(15-13-26)35(36,37)38)21-25-10-16-30(17-11-25)44-19-18-31-24(3)45-34(41-31)27-8-6-5-7-9-27/h5-17,20,29,40H,4,18-19,21-22H2,1-3H3,(H,39,43)/b23-20-/t29-/m0/s1
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| 化学名 |
(S,Z)-N-(3-(4-(2-(5-methyl-2-phenyloxazol-4-yl)ethoxy)phenyl)-2-((4-oxo-4-(4-(trifluoromethyl)phenyl)but-2-en-2-yl)amino)propyl)propionamide
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| 别名 |
GW6471; GW-6471; GW 6471
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~83.33 mg/mL (~134.47 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.36 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6138 mL | 8.0688 mL | 16.1376 mL | |
| 5 mM | 0.3228 mL | 1.6138 mL | 3.2275 mL | |
| 10 mM | 0.1614 mL | 0.8069 mL | 1.6138 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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COA
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463611831
