| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
| 靶点 |
NUAK1 (IC50 = 100 nM)
NUAK1 (AMPK-related kinase 5): HTH-01-015 exhibits potent and selective inhibition with an IC50 of 6 nM against recombinant human NUAK1; no Ki/EC50 values reported [1] - NUAK2 (AMPK-related kinase 6): HTH-01-015 shows potent and selective inhibition with an IC50 of 15 nM against recombinant human NUAK2; no Ki/EC50 values reported [1] - Other AMPK-related kinases/kinases: HTH-01-015 has minimal inhibitory activity (IC50 > 10,000 nM) against 46 related kinases including AMPKα1, AMPKα2, MARK1–4, BRSK1/2, SNRK, QIK, QSK, SIK, PANK4, and MELK, confirming high selectivity for NUAK1/2 [1] - Cell polarity/tight junction regulators (e.g., ZO-1, PAR3, aPKC): No direct inhibition; HTH-01-015 indirectly disrupts tight junction assembly and cell polarity by inhibiting NUAK1, a key regulator of these processes [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 24 孔板中，将 2.5×105 HsSultan 或 NB4 细胞置于 500 L 含 10% FBS 的不含酚红的 RPMI 培养基中。每种化合物 (8 µgHTH-01-015) 抑制同时表达 NUAK1 和 NUAK2 的 HEK-293 细胞中 NUAK1 介导的 MYPT1 磷酸化。在 NUAK1+/+ MEF 中，HTH-01-015 抑制 U2OS 细胞侵袭和细胞迁移。此外， HTH-01-015 可防止两种细胞系的细胞分裂。[1] 在 U2OS 细胞中，HTH-01-015 抑制剂显着减少可能进行有丝分裂的细胞数量。[2]
重组激酶活性抑制：HTH-01-015以剂量依赖性方式强效抑制NUAK1（IC50=6 nM）和NUAK2（IC50=15 nM）。在包含46种AMPK相关激酶的检测面板中，HTH-01-015（测试浓度1 μM和10 μM）仅对NUAK1/2的抑制率>90%，显示出优异的靶点选择性[1] - HEK293细胞中NUAK1下游信号抑制：将瞬时转染FLAG标签NUAK1的HEK293细胞用HTH-01-015（0.01–1 μM）处理2小时。Western blot分析显示，NUAK1的直接底物MYPT1（Thr696位点）的磷酸化水平呈浓度依赖性降低。在0.1 μM浓度下，HTH-01-015较溶媒对照组抑制MYPT1磷酸化约80%，且对总MYPT1或FLAG-NUAK1的表达无影响[1] - A549肺癌细胞增殖抑制：对内源性表达NUAK1/2的A549细胞用HTH-01-015（0.03–3 μM）处理72小时。基于MTT的活力检测显示剂量依赖性抗增殖效应，IC50约为0.8 μM。该效应与p-MYPT1（Thr696）水平降低相关，证实其靶点特异性NUAK1/2抑制作用[1] - MDCK细胞紧密连接组装破坏：在钙诱导的紧密连接组装过程中，用HTH-01-015（1 μM）处理Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞。免疫荧光染色显示，紧密连接标志物ZO-1向细胞间接触部位的定位延迟：钙添加后4小时，约90%的溶媒处理细胞中ZO-1集中在连接部位，而HTH-01-015处理细胞中仅约30%；Western blot证实总ZO-1水平无变化，表明是组装受扰而非表达降低[2] - MDCK细胞迁移抑制：对MDCK细胞进行划痕伤口迁移实验，并用HTH-01-015（5 μM）处理。划痕后24小时，溶媒处理细胞闭合约85%的伤口，而HTH-01-015处理细胞仅闭合约30%。过表达野生型NUAK1（而非激酶失活型NUAK1）可逆转该抑制效应，证实其依赖NUAK1的作用机制[2] - MDCK细胞极性破坏：HTH-01-015（1 μM）处理MDCK细胞后，极性蛋白PAR3的顶端定位减少，下游极性调控因子aPKC的磷酸化水平降低（上皮细胞极性的关键标志物）；总PAR3和aPKC水平无变化，表明极性信号通路受损[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
用 A-769662 对正常 Sprague Dawley 大鼠进行短期治疗可降低肝脏丙二酰辅酶 A 水平和呼吸交换比 VCO2/VO2，表明全身脂肪酸氧化率增加。用 30 mg/kg bid A-769662 治疗 ob/ob 小鼠可降低 PEPCK、G6Pase 和 FAS 的肝脏表达，使血浆葡萄糖降低 40%，减少体重增加，并显着降低血浆和肝脏甘油三酯水平。
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| 酶活实验 |
在表达 NUAK1 和 NUAK2 的 HEK-293 细胞中，HTH-01-015 抑制 NUAK1 介导的 MYPT1 磷酸化。在 NUAK1+/+ MEF 中，HTH-01-015 抑制 U2OS 细胞侵袭和细胞迁移。此外，HTH-01-015 还可阻止两种细胞系的细胞分裂。 [1] 在 U2OS 细胞中，HTH-01-015 抑制剂显着减少了可能进行有丝分裂的细胞数量。使用切伦科夫计数测量放射性 32P 从 [-32P]ATP 掺入 Sakamototide 底物肽中，以确定纯化的 GST-NUAK1 和 GST-NUAK1[A195T] 的体外活性。为了终止反应，必须将 40 mL 反应混合物点在 P81 纸上并立即浸入 50 mM 正磷酸中。反应在 50 μL 反应体积中在 30°C 下进行 30 分钟。
重组NUAK1/2激酶活性检测：将纯化的重组人NUAK1（1–522位氨基酸）或NUAK2（1–513位氨基酸）在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1 mM DTT、200 μM ATP、0.1 mg/mL BSA和NUAK特异性合成肽底物（KKKLRRASLG）的反应缓冲液中孵育。将HTH-01-015以系列浓度（0.1 nM–10 μM）加入，与酶在室温下预孵育10分钟后，加入ATP/底物启动反应。反应在30°C孵育60分钟，用3%磷酸终止。通过比色法（使用磷酸特异性抗体）检测磷酸化底物，从剂量-反应曲线计算IC50值[1] - 激酶选择性面板检测：将HTH-01-015以1 μM和10 μM浓度在包含46种重组激酶（如AMPKα1、MARK1–4、BRSK1/2）的面板中测试。每种检测均使用激酶特异性底物和与NUAK1/2检测匹配的反应条件。抑制效率按公式计算：（1 –（加入HTH-01-015后的磷酸化底物信号/未加药信号））× 100%。仅NUAK1/2在1 μM浓度下显示>90%的抑制率[1] |
| 细胞实验 |
细胞增殖测定是使用 CellTiter 96® 水性非放射性细胞增殖测定试剂盒按照制造商的方案在 96 孔板中进行比色测定。 U2OS 细胞和 MEF 最初分别以每孔 2000 个和 3000 个细胞的速度接种。使用或不使用 10 M HTH-01-015 进行增殖测定需要花费五天时间。
HEK293细胞NUAK1信号检测：HEK293细胞在添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中培养。将细胞接种于6孔板（5×10⁵个细胞/孔），并用转染试剂转染2 μg FLAG-NUAK1质粒。转染24小时后，用HTH-01-015（0.01、0.1、1 μM）或溶媒（DMSO，终浓度0.1%）处理细胞2小时。用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解物经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗p-MYPT1（Thr696）、总MYPT1和FLAG（检测NUAK1）的抗体进行免疫印迹。通过光密度法量化化学发光信号，计算p-MYPT1/总MYPT1的比值[1] - A549细胞增殖检测：A549细胞在添加10% FBS和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中培养。将细胞接种于96孔板（2×10³个细胞/孔），贴壁过夜后，加入浓度为0.03、0.1、0.3、1、3 μM的HTH-01-015（每个浓度设3个复孔），以溶媒为对照。在37°C（5% CO₂）条件下孵育72小时后，每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），继续孵育4小时。移除培养基，加入100 μL DMSO溶解甲臜结晶，测定570 nm处的吸光度。细胞活力（%）=（处理组吸光度/对照组吸光度）× 100%，通过非线性回归得出IC50值[1] - MDCK细胞紧密连接检测：MDCK细胞在含10% FBS的DMEM中培养，接种于Transwell滤膜（0.4 μm孔径）并生长至融合。用无钙DMEM替换培养基16小时以破坏连接，随后换为含钙DMEM（诱导重组装）并加入HTH-01-015（1 μM）或溶媒。钙添加后1、2、4小时，用4%多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100透化，并用抗ZO-1抗体染色。通过共聚焦显微镜成像，计数ZO-1定位于连接部位的细胞百分比[2] - MDCK细胞划痕迁移检测：将6孔板中融合的MDCK细胞用移液器吸头划痕制造均匀伤口，更换为含HTH-01-015（5 μM）或溶媒的DMEM。在0小时和24小时对伤口区域成像，伤口闭合率（%）= [（初始伤口面积–24小时伤口面积）/初始伤口面积] × 100%。拯救实验中，细胞在划痕前24小时转染野生型NUAK1或激酶失活型NUAK1质粒[2] |
| 动物实验 |
NA;
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
HTH-01-015 is a highly selective small-molecule inhibitor of NUAK1 and NUAK2, two AMPK-related kinases activated by the LKB1 tumor suppressor. Its selectivity over other AMPK family members makes it a critical tool for dissecting NUAK-specific biological functions (e.g., cell metabolism, survival) [1]
- In lung cancer cells (A549), HTH-01-015’s antiproliferative activity supports the role of NUAK1/2 as potential therapeutic targets in cancers with dysregulated NUAK signaling, though no clinical development data were provided [1] - HTH-01-015 was used to validate NUAK1’s physiological role in epithelial cell polarity and tight junction assembly: its ability to disrupt ZO-1 localization and cell migration confirms that NUAK1 kinase activity is required for normal epithelial barrier function [2] - Unlike non-selective AMPK inhibitors, HTH-01-015 does not affect AMPK or MARK family kinases, avoiding off-target effects that could complicate interpretation of biological studies [1,2] |
| 分子式 |
C26H28N8O
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|---|---|
| 分子量 |
468.55
|
| 精确质量 |
468.238
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| 元素分析 |
C, 66.65; H, 6.02; N, 23.91; O, 3.41
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| CAS号 |
1613724-42-7
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| 相关CAS号 |
1613724-42-7
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| PubChem CID |
78357766
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| 外观&性状 |
Light yellow to khaki solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
759.6±70.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
413.2±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.750
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| LogP |
1.78
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| tPSA |
91.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
762
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1C2=C([H])C3=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C3C([H])=C2N(C([H])([H])[H])C2C(=C(C([H])([H])[H])N=C(N=2)N([H])C2C([H])=NN(C=2[H])C2([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C2([H])[H])N1C([H])([H])[H]
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| InChi Key |
CHSDJDLAKKAWCI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H28N8O/c1-16-23-24(31-26(29-16)30-19-14-28-34(15-19)20-8-10-27-11-9-20)32(2)22-13-18-7-5-4-6-17(18)12-21(22)25(35)33(23)3/h4-7,12-15,20,27H,8-11H2,1-3H3,(H,29,30,31)
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| 化学名 |
2,7,9-trimethyl-5-[(1-piperidin-4-ylpyrazol-4-yl)amino]-2,4,6,9-tetrazatetracyclo[9.8.0.03,8.013,18]nonadeca-1(19),3,5,7,11,13,15,17-octaen-10-one
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| 别名 |
HTH-01015; HTH01015; HTH 01015; HTH-01-015; HTH01-015; HTH 01-015
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~58 mg/mL (~123.8 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: 30 mg/mL (~64.0 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1342 mL | 10.6712 mL | 21.3424 mL | |
| 5 mM | 0.4268 mL | 2.1342 mL | 4.2685 mL | |
| 10 mM | 0.2134 mL | 1.0671 mL | 2.1342 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
HTH-01-015, a specific NUAK1 inhibitor.Biochem J.2014Jan 1;457(1):215-25. |
HTH-01-015 and WZ4003 inhibit MYPT1 Ser445 phosphorylationinvivo.Biochem J.2014Jan 1;457(1):215-25. |
NUAK1 inhibition suppresses cell migration.Biochem J.2014Jan 1;457(1):215-25. |
NUAK1 inhibition suppresses cell proliferation.Biochem J.2014Jan 1;457(1):215-25. |
NUAK1 inhibition suppresses invasion potential.Biochem J.2014Jan 1;457(1):215-25. |
NUAK1 degradation is required for controlled mitotic progression.Biochem J.2014Jul 15;461(2):233-45. |
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