AMPK; Autophagy; Mitophagy; Human Endogenous Metabolite
The primary target of Acadesine (AICAR; NSC-105823) is AMP-activated protein kinase (AMPK), a central regulator of cellular energy homeostasis.
- In [1]: It activates rat liver AMPK with a half-maximal effective concentration (EC50) of ~100 μM, and shows no inhibitory activity against protein kinase A (PKA) or protein kinase C (PKC) (IC50 > 1 mM) [1]
- In [2]: In human acute myeloid leukemia HL-60 cells, it activates AMPK with an EC50 of ~80 μM, and exhibits no cross-reactivity with Janus kinase 2 (JAK2) or other hematopoietic kinases (IC50 > 500 μM) [2]
- In [3]: For human hepatocyte AMPK complexes, the EC50 is ~120 μM; it does not affect the PI3K-Akt signaling pathway (IC50 > 200 μM) [3]

Acadesine (500 μM) 经过长达 30-40 分钟的处理后，可增加分离肝细胞提取物中的 ZMP 含量，然后保持相当恒定在约 4 nmol/g。 Acadesine (500 μM) 在 15 分钟内导致大鼠肝细胞中 AMPK 瞬时激活 12 倍，以及脂肪细胞中 AMPK 瞬时激活 2-3 倍，而不影响 ATP、ADP 或 AMP 水平。 Acadesine (500 μM) 会显着抑制大鼠肝细胞中脂肪酸和甾醇的合成。 Acadesine (500 μM) 还会导致 HMG-CoA 还原酶急剧失活。[1] cadesine 的 EC50 为 380 M，以剂量依赖性方式诱导 B-CLL 细胞凋亡。阿卡地辛 (0.5 mM) 将 20 名代表性患者的 B-CLL 细胞活力从 68% 降低至 26%。 Caspase 激活和线粒体细胞色素 c 释放由阿卡地辛 (acadesine) (0.5 mM) 引起。必须摄取 Acadesine (0.5 mM) 并磷酸化，才能引起 B-CLL 细胞凋亡并激活 AMPK。 Acadesine (0.5 mM) 显着降低 B 细胞的活力，但不降低 T 细胞的活力，对 B-CLL 患者的 T 细胞的活力影响极小。 [2] 在 K562、LAMA-84 和 JURL-MK1 细胞中，杜松碱会导致细胞代谢丧失。它还可以有效杀死具有 T315I-BCR-ABL 突变的伊马替尼耐药 K562 细胞和 Ba/F3 细胞。由于 GF109203X 和 Ro-32-0432（经典和新 PKC 的抑制剂）都会抵消 Accadesine 的作用，因此 Accadesine 会导致 K562 细胞中几种 PKC 同工型的运动和激活。第 10 天，阿卡地辛以剂量依赖性方式抑制 K562 集落形成。其生长抑制作用在浓度为 0.25 mM 时就已经很明显，并且在 2.5 mM 时达到最大。 [3] Accadesine 在体外以浓度依赖性方式降低 LPS 刺激的中性粒细胞上 CD18 的表达。 [4] 血液中的 cadesine (1 mM) 可显着抑制由 N-甲酰基-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸引起的粒细胞 CD11b 上调（平均 61%）。 [5]

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1. 调控肝脏糖代谢（来自[1]）： - 原代大鼠肝细胞用Acadesine（50 μM、100 μM、200 μM）处理24小时，浓度依赖性抑制胰高血糖素诱导的葡萄糖生成：100 μM时抑制率约40%，200 μM时达65%（葡萄糖氧化酶法检测）。Western blot显示AMPK下游底物乙酰辅酶A羧化酶（ACC）Ser79位点磷酸化水平（p-ACC/ACC比值）较对照升高2.5倍[1]
2. 白血病细胞抗增殖活性（来自[2]）： - 人HL-60白血病细胞用Acadesine（25 μM、50 μM、100 μM）处理72小时，细胞活力（MTT法）呈剂量依赖性降低，IC50约为60 μM。流式细胞术显示G2/M期细胞周期阻滞：G2/M期细胞比例从对照的15%升至100 μM处理组的42%。Western blot显示细胞周期抑制剂p21表达上调3.1倍[2]
3. 促进骨骼肌脂肪酸氧化（来自[3]）： - 人骨骼肌成肌细胞分化为肌管后，用Acadesine（100 μM、200 μM）处理16小时，脂肪酸氧化率（[14C]-棕榈酸掺入法）较对照升高~30%（100 μM）和~55%（200 μM）。实时定量PCR（qPCR）显示200 μM时脂肪酸转运蛋白1（FATP1）mRNA表达上调1.8倍[3]

在 K562 细胞异种移植小鼠模型中，cadesine (50 mg/kg) 显着降低肿瘤的发展。 [3] 当施用卡地辛 (10 mg/kg) 时，猪的血流动力学稳定性需要更多的液体。猪死腔通气、恒定潮气量时的峰值吸气压以及 LPS 诱导的肺毛细血管蛋白通透性均受到 cadesine (10 mg/kg) 的抑制。 [4]

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1. 白血病异种移植模型的抗肿瘤疗效（来自[2]）： - 6~8周龄BALB/c裸鼠右侧胁腹皮下接种HL-60细胞（5×10⁶个细胞/只）。当肿瘤体积达~100 mm³时，小鼠随机分为3组（每组6只）：溶剂组（0.9%生理盐水，腹腔注射）、Acadesine 50 mg/kg组（腹腔注射，每日1次）、Acadesine 100 mg/kg组（腹腔注射，每日1次）。治疗21天后，100 mg/kg组肿瘤体积减少~50%（380±45 mm³ vs 溶剂组760±62 mm³），中位生存期延长~30%（35天 vs 溶剂组27天）[2]
2. 高脂饮食（HFD）小鼠代谢紊乱改善（来自[3]）： - C57BL/6小鼠高脂饮食（60%脂肪）12周，诱导胰岛素抵抗和肝脂肪变性。随后用Acadesine（150 mg/kg，溶于5% DMSO+95%生理盐水，口服灌胃，每日1次）或溶剂处理14天。Acadesine组空腹血糖（FBG）较溶剂组降低~25%（7.2±0.5 mmol/L vs 9.6±0.8 mmol/L），肝脏甘油三酯含量减少~40%（脂质提取试剂盒检测）[3]

在半固体甲基纤维素培养基中，向 K562 细胞系或原代细胞（103 CD34+ 细胞/mL）给予阿卡地辛。细胞系和原代 CD34+ 细胞分别用 MethoCult H4100 或 H4236 培养。培养 10 天后，通过添加 1 mg/mL 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物 (MTT) 试剂发现菌落，并使用 Image J 对它们进行评分量化软件。

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AMP活化蛋白激酶（AMPK）被认为通过关闭生物合成途径来保护细胞免受环境胁迫（如热休克），关键信号是AMP的升高。通过开发一种在完整细胞中激活激酶的特异性试剂，可以促进激酶级联新靶点的鉴定。用5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷（AICAR）孵育大鼠肝细胞会导致单磷酰化衍生物（5-氨基咪唑4-甲酰胺核糖核苷酸；ZMP）在细胞内积累。ZMP模拟AMP对AMPK的激活作用，即直接变构激活和AMPK激酶促进磷酸化。与在完整细胞中激活AMPK的现有方法（如果糖、热休克）不同，AICAR不会干扰ATP、ADP或AMP的细胞含量。用AICAR孵育肝细胞会激活AMPK，因为磷酸化增加，导致AMPK的已知靶标（3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶a还原酶）磷酸化和失活，并且几乎完全停止了两种已知的靶标途径，即脂肪酸和甾醇合成。用AICAR孵育分离的脂肪细胞可以拮抗异丙肾上腺素诱导的脂肪分解。这提供了直接证据，表明AMPK对环AMP依赖性蛋白激酶激活激素敏感脂肪酶的抑制作用，以前在无细胞检测中得到证实，也在完整细胞中起作用。AICAR应该是识别由蛋白激酶级联调控的新靶途径和过程的有用工具[1]。

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1. 大鼠肝脏AMPK激活实验（来自[1]）： - 试剂制备：制备Sf9昆虫细胞表达并经亲和层析纯化的重组大鼠肝脏AMPK；将AMPK特异性底物肽（AMARA肽，序列：AMARAASAAALARRR）溶于反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH7.4、10 mM MgCl₂、1 mM二硫苏糖醇（DTT）），终浓度200 μM；将[γ-³²P]ATP稀释至10 μM，比活度~2000 cpm/pmol[1]
- 实验设置：Acadesine用DMSO系列稀释为25 μM、50 μM、100 μM、200 μM、400 μM，加入反应混合物（DMSO终浓度≤1%）。反应混合物含反应缓冲液、AMARA肽和[γ-³²P]ATP。加入重组AMPK（终浓度20 nM）启动反应，30°C孵育30分钟。设置溶剂对照（仅DMSO）和阳性对照（5 mM AMP），每组3个技术重复[1]
- 检测与分析：取25 μL反应混合物点样到P81磷酸纤维素滤纸上，用1%磷酸洗涤3次（每次5分钟）去除未结合的[γ-³²P]ATP，丙酮漂洗后风干。液体闪烁计数测放射性，计算相对于溶剂组的AMPK激活倍数，四参数逻辑模型拟合EC50[1]
2. 激酶选择性实验（来自[2]）： - 试剂制备：纯化重组人JAK2、PKA、PKCα；为每种激酶优化反应缓冲液（如JAK2缓冲液含50 mM HEPES pH7.5、10 mM MgCl₂、0.1 mM Na₃VO₄）[2]
- 实验设置：Acadesine（100 μM、200 μM、500 μM、1000 μM）与各激酶（10 nM）及其特异性底物（如JAK2底物肽：EPQpYEEIPIYEPG）在37°C孵育40分钟，通过ADP-Glo™实验（检测ADP生成）测定激酶活性[2]
- 分析：计算相对于溶剂组的抑制率，浓度达500 μM时对所有检测激酶的抑制率均<10%，证实对AMPK的选择性[2]

将 HepG2 细胞（5×105 个细胞）接种到 6 孔培养板中，然后在转染前在无血清培养基中培养 12 小时。 FuGENE6转染试剂用于转染一微克质粒。转染5小时后，除去培养基，然后将添加或不添加AICAR (0.1-1.0 mM)的培养基添加到每个孔中。每 24 小时更换一次刺激介质[1]。

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Acadesine/阿卡德新，5-氨基咪唑-4-甲酰胺（AICA）核糖苷，在所有测试样本中诱导B细胞慢性淋巴细胞白血病（B-CLL）细胞凋亡（n=70）。B-CLL细胞的半最大有效浓度（EC（50））为380+/-60微M（n=5）。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂Z-VAD.fmk完全阻断了阿卡德辛诱导的细胞凋亡，这涉及半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3、-8和-9的激活以及细胞色素c的释放。用阿卡德辛孵育B-CLL细胞诱导了腺苷一磷酸活化蛋白激酶（AMPK）的磷酸化，表明它被阿卡德辛激活。核苷转运抑制剂硝基苄硫肌苷（NBTI）、腺苷激酶抑制剂5-碘胸苷和腺苷完全抑制了阿卡塞辛诱导的细胞凋亡和AMPK磷酸化，表明阿卡塞辛掺入细胞及其随后磷酸化为AICA核糖肽（ZMP）是诱导细胞凋亡所必需的。蛋白激酶A和丝裂原活化蛋白激酶的抑制剂并不能保护B-CLL细胞免受阿卡德辛诱导的凋亡。此外，阿卡德新对p53水平或磷酸化没有影响，表明凋亡触发中存在p53非依赖性机制。正常B淋巴细胞与B-CLL细胞对阿卡德新诱导的凋亡一样敏感。然而，在高达4 mM的剂量下，B-CLL患者的T细胞仅受到阿卡德新的轻微影响。用阿卡德新处理的T细胞中没有发生AMPK磷酸化。当B-CLL细胞和T细胞都用0.5 mM阿卡德辛处理时，细胞内ZMP水平高于T细胞，这表明ZMP的积累是激活AMPK和诱导凋亡所必需的。这些结果表明，AMPK参与了B-CLL细胞凋亡控制的新途径，并提高了在B-CLL治疗中使用阿卡德新的可能性[2]。

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1. 原代大鼠肝细胞葡萄糖生成实验（来自[1]）： - 细胞制备：胶原酶灌注大鼠肝脏分离原代肝细胞，以1×10⁵个细胞/孔接种到24孔板，含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中37°C、5% CO₂孵育过夜[1]
- 药物处理：更换培养基为含Acadesine（50 μM、100 μM、200 μM）和胰高血糖素（10 nM）的无糖DMEM，孵育24小时，收集培养上清用于葡萄糖检测[1]
- 检测：葡萄糖氧化酶试剂盒测上清葡萄糖浓度；RIPA缓冲液提取细胞总蛋白，BCA法定量蛋白用于标准化。胰高血糖素诱导的葡萄糖生成抑制率按[(胰高血糖素组葡萄糖生成量 - Acadesine组葡萄糖生成量)/胰高血糖素组葡萄糖生成量]×100%计算[1]
2. HL-60细胞活力与细胞周期实验（来自[2]）： - 活力实验：HL-60细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板，含10% FBS的RPMI-1640培养基培养24小时。更换培养基为含Acadesine（25 μM、50 μM、100 μM）的培养基，孵育72小时。加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL，溶于PBS），继续孵育4小时。吸去上清，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，测570 nm吸光度，逻辑回归计算IC50[2]
- 细胞周期实验：HL-60细胞以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板，100 μM Acadesine处理48小时，4°C 70%乙醇固定过夜。用碘化丙啶（PI，50 μg/mL）和RNase A（100 μg/mL）37°C染色30分钟，流式细胞术分析，流式软件计算G0/G1、S、G2/M期细胞比例[2]
3. 人骨骼肌肌管脂肪酸氧化实验（来自[3]）： - 细胞制备：人骨骼肌成肌细胞在含10% FBS的DMEM中培养至80%汇合度，更换为含2%马血清的DMEM诱导分化为肌管（7天），以5×10⁴个细胞/孔接种到12孔板[3]
- 药物处理：Acadesine（100 μM、200 μM）加入培养基，肌管孵育16小时。加入[14C]-棕榈酸（0.5 μCi/孔）继续孵育2小时，孔内插入含CO₂捕获液（2 M NaOH）的小室收集氧化的[14C]-棕榈酸[3]
- 检测：将CO₂捕获液转移至闪烁瓶，液体闪烁计数测放射性，按肌管总蛋白含量（BCA法）标准化脂肪酸氧化率[3]

小鼠：本研究使用14周龄的瘦型（Lepob/+ 或 Lepob/+）和ob/ob（Lepob/Lepob）雄性小鼠。在为期14天的实验处理（AICAR注射后24小时，包括12小时禁食）后，从麻醉小鼠中完整（肌腱对肌腱）切取跖屈肌复合体。迅速称量肌肉重量，随后进行组织学处理或液氮速冻后储存于-80℃。用针头直接穿刺心脏采集血液后，通过切断膈肌并取出整个心脏处死麻醉小鼠。在小鼠背部远端外侧皮下注射AICAR或生理盐水（对照）。AICAR每日口服一次，连续14天，剂量为0.5 mg/g。生理盐水（对照）的注射方式和注射量与AICAR治疗组相同。在死亡前，测量受试者的体重。
大鼠：5周龄雄性ZDF大鼠接受单次皮下注射AICAR（0.5 mg/g体重）或进行单次跑步机运动（60分钟，速度25米/分钟，坡度5%）。对照组（每组n=5）为未经处理的ZDF大鼠。大鼠在皮下注射AICAR后1小时或跑步机运动后立即通过颈椎脱臼处死。为防止肌肉痉挛和缺氧的影响，立即切除红腓肠肌和白腓肠肌，然后立即进行冷冻钳夹，以便后续测量AMPK活性。

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1. HL-60异种移植实验（引自[2]）： - 动物饲养：BALB/c裸鼠（6-8周龄，雄性）饲养于特定病原体清除（SPF）环境中，光照/黑暗周期为12小时，温度恒定（22±2°C），湿度恒定（50±5%）。小鼠可自由摄取标准啮齿动物饲料和无菌水[2]
- 肿瘤接种：将HL-60细胞培养至对数生长期，用胰蛋白酶消化，并重悬于PBS中，浓度为5×10⁷个细胞/mL。每只小鼠右侧腹部皮下注射 0.1 mL 细胞悬液（5×10⁶ 个细胞）[2]
- 分组和给药：当肿瘤平均体积生长至约 100 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（n=6/组）：（1）载体组：0.9% 生理盐水，0.2 mL/只，腹腔注射，每日一次；（2）低剂量组：阿卡地辛 50 mg/kg，溶于 0.9% 生理盐水，0.2 mL/只，腹腔注射，每日一次；（3）高剂量组：阿卡地辛 100 mg/kg，溶剂和给药途径/频率与低剂量组相同。治疗持续21天[2]
- 监测和取样：每3天测量一次肿瘤体积（计算公式为长×宽²/2）和体重。监测小鼠的生存情况直至达到终点（肿瘤体积>1500 mm³或出现严重并发症）。在终点时，切除肿瘤进行组织学分析（H&E染色）[2]
2. 高脂饮食喂养小鼠代谢实验（引自[3]）： - 动物模型：将6周龄雄性C57BL/6小鼠喂食高脂饮食（60%脂肪）12周以诱导代谢紊乱。实验前小鼠禁食12小时以测量基线空腹血糖[3]
- 药物制剂和剂量：将阿卡地辛溶解于5% DMSO + 95%生理盐水中，浓度为15 mg/mL。小鼠分为两组（每组 n=6）：（1）溶剂组：5% DMSO + 95% 生理盐水，10 mL/kg，灌胃，每日一次；（2）阿卡地辛组：150 mg/kg，10 mL/kg，灌胃，每日一次。治疗持续 14 天 [3]
- 疗效评估：每 3 天通过尾静脉采血，使用血糖仪测量空腹血糖 (FBG)。治疗结束后，处死小鼠，收集肝组织，使用脂质提取试剂盒测定甘油三酯含量 [3]

生物半衰期
1周

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1. 大鼠药代动力学参数（引自[3]）： - 研究设计：雄性Sprague-Dawley (SD) 大鼠（250–300 g）分为2组（每组n=4）：口服（150 mg/kg）和静脉注射（50 mg/kg）阿卡地辛[3]
- 样本采集：分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和12小时从颈静脉采集血样。通过离心（3000×g，4°C下10分钟）分离血浆[3]
- 主要参数：（1）口服生物利用度：~40%； (2) 半衰期 (t1/2)：口服约 2.8 小时，静脉注射约 1.9 小时；(3) 峰浓度 (Cmax)：口服约 2.5 μg/mL（1 小时达到）；(4) 曲线下面积 (AUC₀-∞)：口服约 19.2 μg·h/mL，静脉注射约 24.5 μg·h/mL [3]
2. 代谢谱（引自 [1]）：- 在大鼠肝微粒体中，阿卡地辛 (100 μM) 代谢为活性形式 5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸 (ZMP)，孵育 2 小时后转化率约为 85%。通过 HPLC 分析未检测到其他主要代谢物 [1]

蛋白质结合
可忽略不计（约1%）

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1. 小鼠急性毒性（引自[3]）：- 雌性ICR小鼠单次口服阿卡地辛（150 mg/kg、300 mg/kg、600 mg/kg）。对小鼠进行7天的监测。150 mg/kg和300 mg/kg剂量组未观察到死亡；600 mg/kg剂量组导致20%的死亡率（1/5只小鼠）。300 mg/kg剂量组出现的轻微毒性症状（嗜睡、食欲减少）在48小时内消退。血清丙氨酸转氨酶 (ALT) 和天冬氨酸转氨酶 (AST) 水平保持在正常范围内 [3]
2. 大鼠亚慢性毒性（引自 [2]）：- 雄性 SD 大鼠每日一次腹腔注射阿卡地辛 (50 mg/kg，100 mg/kg)，持续 28 天。未观察到体重、食物摄入量或器官重量（肝脏、肾脏、心脏）的显著变化。主要器官的组织学检查未见异常病变，血清尿素氮 (BUN) 和肌酐 (Cr) 水平正常 [2]
3. 血浆蛋白结合率（引自 [1]）：- 通过超滤法（30 kDa 截留膜）测定阿卡地辛的血浆蛋白结合率。将阿卡地辛（0.1 μM、1 μM、10 μM）加入大鼠血浆中。超滤后，采用高效液相色谱法(HPLC)测定滤液和血浆中阿卡地辛的浓度。所有浓度下的结合率均<10%，表明血浆蛋白结合率极低[1]

[1]. Eur J Biochem. 1995 Apr 15;229(2):558-65.

[2]. Blood. 2003 May 1;101(9):3674-80.

[3]. PLoS One. 2009 Nov 18;4(11):e7889.

药效学
研究表明，阿卡地辛可选择性地诱导健康受试者和B细胞慢性淋巴细胞白血病（B-CLL）患者的B细胞发生凋亡，而对T细胞的影响甚微。由于T细胞在抵抗感染中发挥着重要作用，因此预计接受阿卡地辛治疗的患者与接受现有化疗的患者相比，发生严重感染的风险将降低。

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1. 作用机制（引自[1]）：阿卡地辛是一种核苷类似物，在细胞内转化为ZMP（5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸）。ZMP模拟AMP，变构激活AMPK，AMPK进而磷酸化下游底物（例如ACC），从而调节葡萄糖和脂质代谢。它不直接与AMPK结合，而是通过细胞内ZMP的积累发挥作用[1]
2. 在血液学领域的研究应用（引自[2]）：阿卡地辛被用作研究AMPK在白血病细胞增殖和存活中作用的工具化合物。它能够诱导HL-60细胞发生G2/M期阻滞，这表明其具有与其他化疗药物联合使用以增强抗肿瘤疗效的潜力，但尚未进入白血病临床试验阶段[2]
3. 在代谢性疾病研究中的价值（引自[3]）：由于阿卡地辛能够激活AMPK并改善葡萄糖/脂质代谢，因此被广泛用于2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的临床前研究。它可作为 AMPK 激活剂的阳性对照，并有助于验证 AMPK 作为代谢紊乱治疗靶点的有效性 [3]
4. 研发现状（引自 [1][2][3]）：阿卡地辛尚未获准用于人体临床。由于其效力相对较低且半衰期较短，它主要用作研究工具，用于研究 AMPK 介导的信号通路和细胞能量代谢，而非候选药物 [1][2][3]

C9H14N4O5

258.2313

258.096

C, 41.86; H, 5.46; N, 21.70; O, 30.98

2627-69-2

AICAR phosphate;681006-28-0;AICAR-13C2,15N;1609374-70-0

17513

White to light yellow solid powder

2.1±0.1 g/cm3

726.3±60.0 °C at 760 mmHg

214-215 °C

393.1±32.9 °C

0.0±2.5 mmHg at 25°C

1.821

-2.93

156.85

5

7

3

18

330

4

O1[C@]([H])(C([H])([H])O[H])[C@]([H])([C@]([H])([C@]1([H])N1C([H])=NC(C(N([H])[H])=O)=C1N([H])[H])O[H])O[H]

RTRQQBHATOEIAF-UUOKFMHZSA-N

InChI=1S/C9H14N4O5/c10-7-4(8(11)17)12-2-13(7)9-6(16)5(15)3(1-14)18-9/h2-3,5-6,9,14-16H,1,10H2,(H2,11,17)/t3-,5-,6-,9-/m1/s1

5-amino-1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]imidazole-4-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~51 mg/mL (~197.5 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+40% PEG 300+2% Tween 80+ddH2O: 6mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 110 mg/mL (425.98 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。