Akt1 (IC50 = 5 nM); Akt3 (IC50 = 8 nM); Akt2 (IC50 = 18 nM); PKA (IC50 = 3100 nM)

与密切相关的 PKA 和 p70S6K 相比，imatasertib diHClide 对 Akt1 的选择性分别高出 600 倍和 100 倍以上，IC50 值更高。在 230 种蛋白质缀合物（包括人类 AGC 家族的 36 名成员）中，Ipatasertib diHClide 在 1 μM 浓度下仅抑制三种蛋白质缀合物（PRKG1α、PRKG1β 和 p70S6K）超过 70%。 ..对于这三个物种，定期测量的 IC50 值依次为 98、69 和 860 nM。因此，与第二个最有效的非 Akt 抑制剂（上面的 p70S6K Multiples 面板）相比，ipatasertib 二盐酸盐对筛选中的 Akt1 选择性高出 100 倍，但 PKG1 除外（其中 ipatasertib 二盐酸盐对 Akt1 的选择性高出 10 倍以上） 。使用展示药物治疗剂量依赖性反应的三种异种移植模型来研究二盐酸ipatasertib：MCF7-neo的药代动力学（PK）和药效学（PD）之间的关系。 /HER2、TOV-21G.x1 和 LNCaP Ipatasertib diHClide 在这三种细胞系中的平均细胞活力 IC50 分别为 2.56、0.44 和 0.11 μM [2]。

在 Akt 由 PTEN 缺失、PIK3CA 突变或突变或 HER2 过度表达等遗传变化触发的移植模型中，二盐酸伊马替尼通常会成功。这些模型中的肿瘤在 100 mg/kg 或以下（在免疫功能低下的小鼠中观察到的最大耐受剂量）缓慢发育、生成或恢复。在体内检查中，每天将 RP-56976 与 Ipatasertib diHClide 组合可在 PC-3 和 MCF7-neo/HER2 异种移植小鼠中产生镇痛和肿瘤消退，但毒素本身要么无效，要么只是导致肿瘤发展。逐渐增加剂量。同样，当 Ipatasertib diHClide 和 NSC 241240 偶联时，在 OVCAR3 卵巢癌异种移植模型中观察到 TGI 升高。与额外化疗相比，Ipatasertib diHClide 联合 RP-56976 或 NSC 241240 单独治疗导致体重减轻不到 5% [2]。

Enzymatic Assays/酶实验[1]
用于测定Akt1/2/3和PKA激酶活性的测定采用IMAP荧光偏振（FP）磷酸化检测试剂来检测已被相应激酶磷酸化的荧光标记肽底物。这些研究中使用的Akt酶由重组杆状病毒表达、氨基末端、聚组氨酸标记、全长、野生型人类形式组成，并从商业上获得。这些研究中使用的PKA酶由商业上获得的大肠杆菌中表达的重组未标记的PKA人分离催化亚基组成。在环境温度下，将抑制剂、酶（9 nM Akt1或100 pM PKA）和底物（100 nM Crosstide）与5μM ATP在测定缓冲液（10 mM Tris-HCl（pH 7.2）、10 mM MgCl2、0.1%BSA（w/v）、最终DMSO 2%（v/v））中在5μL反应体积中孵育60分钟。通过向ATP溶液中加入酶+肽底物引发反应。加入IMAP结合试剂（15μL）终止反应，并将停止的反应在室温下孵育至少30分钟。

384 孔板每孔接种 2,000 个细胞，体积为 54 L，然后在 37°C、5% CO2 下孵育过夜（大约 16 小时）。为了产生所需的库存浓度，化合物（如 Ipatasertib）在 DMSO 中稀释，然后以每孔 6 L 的体积添加。每种处理均测试四次。孵育四天后，在 Wallac Multilabel Reader 上测量总发光，并使用 CellTiter-Glo 估计相对活力。 4 参数曲线分析 (XLfit) 用于计算产生 IC50 的药物浓度，并且基于至少三个实验的结果。列出了未达到 IC50 的细胞系的最高测试浓度 (10 M)[2]。

小鼠：多种患者来源的异种移植模型和肿瘤细胞系模型被用于评估体内疗效。免疫缺陷小鼠的侧腹部皮下植入细胞或肿瘤碎片。使用的小鼠包括重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠、米色小鼠或两者兼有。雄性小鼠在植入肿瘤碎片前进行去势，从而获得LuCaP35V患者来源的原发肿瘤。将肿瘤细胞或碎片植入小鼠体内后，观察肿瘤生长情况，直至平均肿瘤体积达到180至350 mm³，然后将小鼠分为8至10只一组。Ipatasertib每日一次（QD）通过灌胃给药，其制剂为0.5%甲基纤维素/0.2%吐温-80（MCT）。每周一次，将 RP-56976 以 2.5 或 7.5 mg/kg 的剂量溶于 3% 乙醇/97% 生理盐水中，通过静脉注射 (IV) 给药。每周一次，将生理盐水配制的 NSC 241240 以 50 mg/kg 的剂量通过腹腔注射 (IP) 给药。

[1]. Discovery and preclinical pharmacology of a selective ATP-competitive Akt inhibitor (GDC-0068) for the treatment of human tumors. J Med Chem. 2012 Sep 27;55(18):8110-27.

[2]. Targeting activated Akt with GDC-0068, a novel selective Akt inhibitor that is efficacious in multiple tumor models. Clin Cancer Res. 2013 Apr 1;19(7):1760-72.

(2S)-2-(4-氯苯基)-1-[4-[(5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基]-1-哌嗪基]-3-(丙-2-基氨基)-1-丙酮是一种N-芳基哌嗪类化合物。
伊帕他替尼已用于癌症、肿瘤、实体瘤、乳腺癌和胃癌等多种癌症的治疗试验。
伊帕他替尼是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt（蛋白激酶B）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。伊帕他替尼以非ATP竞争性方式结合并抑制Akt活性，这可能导致PI3K/Akt信号通路和肿瘤细胞增殖的抑制，并诱导肿瘤细胞凋亡。PI3K/Akt信号通路的激活通常与肿瘤发生相关，而PI3K/Akt信号通路的失调可能导致肿瘤对多种抗肿瘤药物产生耐药性。
药物适应症：治疗乳腺癌，治疗前列腺癌。

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本文报道了一系列6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶类化合物的发现和优化，这些化合物是ATP竞争性、选择性的蛋白激酶B/Akt抑制剂。最初的设计和优化以抑制剂与 Akt1 及其密切相关的蛋白激酶 A 复合物的 X 射线晶体结构为指导。所得化合物在生化分析中表现出对所有三种 Akt 亚型的强效抑制作用，而对 cAMP 依赖性蛋白激酶/蛋白激酶 G/蛋白激酶 C 扩展家族的其他成员的抑制作用较弱，并且能够阻断 Akt 在人类癌细胞系中的多个下游靶点的磷酸化。其中一种化合物 28 (GDC-0068) 的生物学研究表明，其具有良好的口服暴露量，能够对下游生物标志物产生剂量依赖性的药效学效应，并在磷脂酰肌醇 3-激酶-Akt-雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 通路激活的异种移植模型中表现出显著的抗肿瘤反应。化合物28目前正在进行人体临床试验，用于治疗癌症。[1]

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目的：我们描述了GDC-0068的临床前药理学和抗肿瘤活性。GDC-0068是一种新型高选择性ATP竞争性泛Akt抑制剂，目前正在进行治疗人类癌症的临床试验。实验设计：我们使用Akt通路特异性生物标志物表征了GDC-0068对Akt信号通路的影响，并在具有不同遗传背景的人类癌细胞系和异种移植模型中评估了GDC-0068作为单药或与化疗药物联合用药的疗效。结果：GDC-0068在培养的人类癌细胞系和肿瘤异种移植模型中均能阻断Akt信号通路，表现为下游靶点磷酸化水平呈剂量依赖性降低。GDC-0068对Akt活性的抑制导致细胞周期进程阻滞和癌细胞系活力降低。 Akt激活的标志物，包括高水平的磷酸化Akt、PTEN缺失和PIK3CA激酶结构域突变，均与GDC-0068的敏感性相关。同源PTEN敲除也使MCF10A细胞对GDC-0068更加敏感。在多种肿瘤异种移植模型中，口服GDC-0068可产生抗肿瘤活性，其作用范围从延缓肿瘤生长到抑制肿瘤消退。与Akt在生存通路中的作用一致，GDC-0068还能增强经典化疗药物的抗肿瘤活性。结论：GDC-0068是一种高选择性、口服生物利用度高的Akt激酶抑制剂，在体外和体内均显示出对Akt信号通路的药效学抑制作用，并在人癌细胞中表现出强大的抗肿瘤活性。我们的临床前数据为评估GDC-0068在Akt信号通路激活的癌症中的疗效提供了强有力的机制依据。[2]

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结肠癌是三大常见恶性肿瘤之一，生存率较低。伊帕他替尼（Ipatasertib）是一种新型高选择性ATP竞争性泛Akt抑制剂，在包括结肠癌在内的多种癌中均显示出强大的抗肿瘤作用。然而，目前对于其在结肠癌临床治疗中的确切作用机制尚不清楚。本研究旨在确定伊帕他替尼是否通过PUMA依赖性细胞凋亡抑制结肠癌的生长。伊帕他替尼通过抑制Akt，导致p53非依赖性的PUMA激活，从而同步激活FoxO3a和NF-κB，进而直接结合PUMA启动子，上调PUMA转录和Bax介导的线粒体固有凋亡。值得注意的是，在结肠癌中，Akt/FoxO3a/PUMA通路是伊帕他替尼诱导PUMA激活的主要通路，而Akt/NF-κB/PUMA通路是次要通路。敲除PUMA可消除伊帕他替尼在体外和体内（异种移植瘤）诱导的细胞凋亡。此外，PUMA在伊帕他替尼与某些传统或新型药物的联合治疗中也不可或缺。综上所述，我们的研究表明，FoxO3a和NF-κB诱导的PUMA激活是伊帕他替尼治疗下抑制结肠癌生长的关键步骤，这为临床评估提供了一定的理论基础。[3]

C₂₄H₃₄CL₃N₅O₂

530.9181

529.178

C, 54.30; H, 6.46; Cl, 20.03; N, 13.19; O, 6.03

1396257-94-5

Ipatasertib;1001264-89-6; 1489263-16-2 (HCl); 1491138-24-9; 1396257-94-5 (2HCl); 1491138-23-8 (besylate)

62707512

Light yellow to yellow solid powder

5.098

81.59

4

6

6

34

622

3

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])[C@@]([H])(C([H])([H])N([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C(N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C1([H])[H])C1C2=C([C@@]([H])(C([H])([H])[C@@]2([H])C([H])([H])[H])O[H])N=C([H])N=1)=O.Cl[H].Cl[H]

SRKVNRNRVFDUTG-VISIQVHMSA-N

InChI=1S/C24H32ClN5O2.2ClH/c1-15(2)26-13-19(17-4-6-18(25)7-5-17)24(32)30-10-8-29(9-11-30)23-21-16(3)12-20(31)22(21)27-14-28-23/h4-7,14-16,19-20,26,31H,8-13H2,1-3H32*1H/t16-,19-,20-/m1../s1

(2S)-2-(4-Chlorophenyl)-1-[4-[(5R,7R)-7-hydroxy-5-methyl-6,7-dihydro-5H-cyclopenta[d]pyrimidin-4-yl]piperazin-1-yl]-3-(propan-2-ylamino)propan-1-onedihydrochloride

Ipatasertib dihydrochloride; Ipatasertib; GDC 0068; GDC-0068; GDC0068; RG7440; 1396257-94-5; GDC-0068 (dihydrochloride); UNII-M2JCB5A8EV; M2JCB5A8EV; Ipatasertib (dihydrochloride); (2S)-2-(4-Chlorophenyl)-1-[4-[(5R,7R)-7-hydroxy-5-methyl-6,7-dihydro-5H-cyclopenta[d]pyrimidin-4-yl]piperazin-1-yl]-3-(propan-2-ylamino)propan-1-one;dihydrochloride; RG 7440; RG-7440

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (188.35 mM; Need ultrasonic)
H2O: ≥41 mg/mL (77.22 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.88 mg/mL (7.31 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3.88 mg/mL (7.31 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 20.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 6 中的溶解度: 16.67 mg/mL (31.40 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。