Akt1 (IC50 = 5 nM); Akt3 (IC50 = 8 nM); Akt2 (IC50 = 18 nM); PKA (IC50 = 3100 nM)
Ipatasertib targets all three isoforms of the serine/threonine kinase AKT (AKT1, AKT2, and AKT3). It acts as a highly selective and ATP-competitive inhibitor. In cell-free assays, it demonstrates IC₅₀ values of 5 nM, 18 nM, and 8 nM for Akt1, Akt2, and Akt3, respectively. It exhibits 620-fold selectivity over PKA.

伊帕他替二氢氯噻嗪对Akt1的IC50选择性分别比其密切相关的PKA和p70S6K高600倍以上和100倍以上。在包含36个人类AGC家族成员的230种蛋白偶联物中，伊帕他替二氢氯噻嗪在1 μM浓度下仅对三种蛋白偶联物（PRKG1α、PRKG1β和p70S6K）抑制率超过70%。对于这三种蛋白偶联物，定期测得的IC50值分别为98 nM、69 nM和860 nM。因此，与上述最有效的非Akt抑制剂p70S6K相比，ipatasertib二盐酸盐在筛选中对Akt1的选择性高出100倍，PKG1除外（ipatasertib二盐酸盐对Akt1的选择性高出10倍以上）。我们使用了三种对药物治疗表现出剂量依赖性反应的异种移植模型来研究ipatasertib二盐酸盐的药代动力学(PK)和药效学(PD)之间的关系：MCF7-neo。在上述三种细胞系中，Ipatasertib 二盐酸盐对 /HER2、TOV-21G.x1 和 LNCaP 的平均细胞活力 IC50 值分别为 2.56、0.44 和 0.11 μM [2]。体外实验表明，Ipatasertib 二盐酸盐对 Akt1 的选择性比 PKA 高 600 倍以上，对 p70S6K 的选择性高 100 倍以上。在 230 种蛋白偶联物中，1 µM 的 Ipatasertib 二盐酸盐仅对 PRKG1α、PRKG1β 和 p70S6K 的抑制率超过 70%，IC₅₀ 值分别为 98、69 和 860 nM。该化合物通过阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞死亡。

在Akt激活由PTEN缺失、PIK3CA突变或HER2过表达等基因改变触发的移植模型中，伊马替尼二氢氯噻嗪通常有效。这些模型中的肿瘤生长缓慢，在100 mg/kg或更低剂量下即可生成或消退，该剂量是免疫缺陷小鼠中观察到的最大耐受剂量。体内实验表明，RP-56976与伊帕替尼二氢氯噻嗪每日联合用药可使PC-3和MCF7-neo/HER2异种移植小鼠出现镇痛和肿瘤消退，但单独使用伊帕替尼二氢氯噻嗪要么无效，要么反而会促进肿瘤生长。同样，当伊帕替尼二氢氯噻嗪与NSC 241240联合用药时，在OVCAR3卵巢癌异种移植模型中观察到肿瘤生长抑制指数（TGI）升高。与额外化疗相比，Ipatasertib diHClide 与 RP-56976 或 NSC 241240 联合使用可导致体重减轻不足 5% [2]。
体内研究表明，Ipatasertib 具有口服生物利用度，并在异种移植模型（包括 MCF7-neo/HER2、TOV-21G.x1 和 LNCaP）中显示出剂量依赖性反应。它对具有 PTEN 或 PI3K 突变并激活 AKT 的肿瘤具有高亲和力。该化合物正被开发为一种用于治疗人类癌症的抗癌药物。

酶活性测定[1]
测定Akt1/2/3和PKA激酶活性的方法采用IMAP荧光偏振（FP）磷酸化检测试剂，检测经相应激酶磷酸化的荧光标记肽底物。本研究中使用的Akt酶为重组杆状病毒表达的、氨基末端带有多组氨酸标签的全长野生型人源Akt酶，购自商业渠道。本研究中使用的PKA酶为重组大肠杆菌表达的、未标记的人源PKA分离催化亚基，购自商业渠道。将抑制剂、酶（9 nM Akt1 或 100 pM PKA）和底物（100 nM Crosstide）与 5 μM ATP 在测定缓冲液（10 mM Tris-HCl (pH 7.2)、10 mM MgCl2、0.1% BSA (w/v)、终浓度 2% DMSO (v/v)）中于室温下孵育 60 分钟，反应体系为 5 μL。反应通过向 ATP 溶液中加入酶和肽底物启动。加入 IMAP 结合试剂 (15 μL) 终止反应，终止后的反应体系在室温下至少孵育 30 分钟。体外酶活性测定通常采用无细胞体系来测定对纯化的 AKT1、AKT2 和 AKT3 激酶的抑制活性。将该化合物与激酶、ATP 和底物一起孵育，并测量磷酸化水平以确定 IC₅₀。通过对一系列其他激酶（例如 PKA）进行测试来评估选择性。

将384孔板每孔接种2000个细胞，总体积为54 μL，然后在37°C、5% CO₂条件下培养过夜（约16小时）。为了配制所需的储备液浓度，将化合物（如伊帕他替尼）用DMSO稀释，然后以每孔6 μL的体积加入。每种处理重复四次。培养四天后，使用Wallac多功能酶标仪测量总发光值，并使用CellTiter-Glo试剂盒评估相对细胞活力。采用四参数曲线分析（XLfit）计算产生IC50值的药物浓度，该计算基于至少三次实验的结果。所测试的最高浓度 (10 M) 仅用于未能达到 IC50 值的细胞系[2]。
体外细胞实验采用包括 MCF7-neo/HER2、TOV-21G.x1 和 LNCaP 在内的癌细胞系来评估抗增殖作用。用不同浓度的化合物处理细胞，并检测细胞活力、增殖和细胞周期阻滞情况。此外，还通过蛋白质印迹法评估化合物抑制 AKT 磷酸化及其下游信号传导的能力。

小鼠：多种患者来源的异种移植模型和肿瘤细胞系模型被用于评估体内疗效。免疫缺陷小鼠的侧腹部皮下植入细胞或肿瘤碎片。使用的小鼠包括重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠、米色小鼠或两者兼有。雄性小鼠在植入肿瘤碎片前进行去势，从而获得LuCaP35V患者来源的原发肿瘤。将肿瘤细胞或碎片植入小鼠体内后，观察肿瘤生长情况，直至平均肿瘤体积达到180至350 mm³，然后将小鼠分为8至10只一组。Ipatasertib每日一次（QD）通过灌胃给药，其制剂为0.5%甲基纤维素/0.2%吐温-80（MCT）。每周一次（QW），将 RP-56976 以 2.5 或 7.5 mg/kg 的剂量溶于 3% 乙醇/97% 生理盐水中，通过静脉注射（IV）给药。每周一次，以 50 mg/kg 的剂量通过腹腔注射（IP）给药生理盐水配制的 NSC 241240。
体内动物研究采用异种移植模型，将荷瘤小鼠口服 Ipatasertib 进行治疗。通过测量肿瘤体积随时间的变化来评估疗效，并研究药代动力学-药效学（PK-PD）关系以确定剂量依赖性反应。

伊帕他替尼的药代动力学(PK)特性表明其具有口服生物利用度。在异种移植模型中研究了其药代动力学和药效学之间的关系，结果显示其对治疗的反应呈剂量依赖性。

所提供的搜索结果并未详细描述伊帕他替二盐酸盐的毒性特征。作为一种靶向关键细胞存活通路的强效抗癌药物，其毒性是临床前和临床研究中正在积极探索的领域。

[1]. Discovery and preclinical pharmacology of a selective ATP-competitive Akt inhibitor (GDC-0068) for the treatment of human tumors. J Med Chem. 2012 Sep 27;55(18):8110-27.

[2]. Targeting activated Akt with GDC-0068, a novel selective Akt inhibitor that is efficacious in multiple tumor models. Clin Cancer Res. 2013 Apr 1;19(7):1760-72.

(2S)-2-(4-氯苯基)-1-[4-[(5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基]-1-哌嗪基]-3-(丙基-2-基氨基)-1-丙酮是一种N-芳基哌嗪类化合物。伊帕他替尼已被研究用于治疗多种癌症，包括癌症、肿瘤、实体瘤、乳腺癌和胃癌。伊帕他替尼是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt（蛋白激酶B）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。伊帕他替尼以非ATP竞争性方式结合并抑制Akt活性，这可能导致PI3K/Akt信号通路和肿瘤细胞增殖的抑制，并诱导肿瘤细胞凋亡。 PI3K/Akt信号通路的激活通常与肿瘤发生相关，而PI3K/Akt信号通路的失调可能导致肿瘤对多种抗肿瘤药物产生耐药性。
药物适应症：乳腺癌治疗、前列腺癌治疗。

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本文报道了一系列6,7-二氢-5H-环戊烷[d]嘧啶类化合物的发现和优化，这些化合物是ATP竞争性、选择性的蛋白激酶B/Akt抑制剂。最初的设计和优化是基于抑制剂与Akt1及其密切相关的蛋白激酶A复合物的X射线晶体结构指导的。生化分析表明，所得化合物对所有三种Akt亚型均表现出强效抑制作用，对cAMP依赖性蛋白激酶/蛋白激酶G/蛋白激酶C扩展家族的其他成员的抑制作用较弱，并且能够阻断人癌细胞系中多个下游靶点的Akt磷酸化。其中一种化合物 28 (GDC-0068) 的生物学研究表明，其具有良好的口服暴露量，对下游生物标志物具有剂量依赖性的药效学效应，并且在激活磷脂酰肌醇 3-激酶-Akt-雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 通路的异种移植模型中表现出显著的抗肿瘤反应。化合物 28 目前正在进行治疗癌症的人体临床试验。[1]

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目的：我们描述了 GDC-0068 的临床前药理学和抗肿瘤活性。GDC-0068 是一种新型的高选择性 ATP 竞争性泛 Akt 抑制剂，目前正在进行治疗人类癌症的临床试验。实验设计：我们使用 Akt 通路特异性生物标志物表征了 GDC-0068 对 Akt 信号通路的影响，并评估了 GDC-0068 作为单药疗法或与化疗药物联合疗法在具有不同遗传背景的人类癌细胞系和异种移植模型中的疗效。结果：GDC-0068在培养的人类癌细胞系和肿瘤异种移植模型中阻断了Akt信号通路，并表现出下游靶点磷酸化水平的剂量依赖性降低。GDC-0068对Akt活性的抑制导致细胞周期阻滞和癌细胞系活力下降。Akt激活的标志物，包括高水平的磷酸化Akt、PTEN缺失和PIK3CA激酶结构域突变，均与GDC-0068的敏感性相关。同源PTEN敲除也使MCF10A细胞对GDC-0068更加敏感。在多种肿瘤异种移植模型中，口服GDC-0068可产生抗肿瘤活性，包括延缓肿瘤生长和抑制肿瘤消退。与Akt在生存通路中的作用一致，GDC-0068还可以增强经典化疗药物的抗肿瘤活性。结论：GDC-0068 是一种高选择性、口服生物利用度高的 Akt 激酶抑制剂，在体外和体内均显示出对 Akt 信号通路的药效学抑制作用，并在人癌细胞中表现出强大的抗肿瘤活性。我们的临床前数据为评估 GDC-0068 在 Akt 信号通路激活的癌症中的疗效提供了强有力的机制基础。[2]

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结直肠癌是三大常见恶性肿瘤之一，生存率较低。Ipatasertib 是一种新型的高选择性 ATP 竞争性泛 Akt 抑制剂，已在包括结直肠癌在内的多种癌症中显示出强大的抗肿瘤活性。然而，其在结直肠癌临床治疗中的确切作用机制尚不清楚。本研究旨在确定 ippatasertib 是否通过 PUMA 依赖性细胞凋亡抑制结直肠癌的生长。伊帕替尼通过抑制Akt，导致p53非依赖性的PUMA激活，进而同时激活FoxO3a和NF-κB，直接结合PUMA启动子，上调PUMA转录和Bax介导的线粒体固有凋亡。值得注意的是，在结直肠癌中，Akt/FoxO3a/PUMA通路是伊帕替尼诱导PUMA激活的主要通路，而Akt/NF-κB/PUMA通路则为次要通路。PUMA基因敲除可消除伊帕替尼在体外和体内（异种移植瘤）诱导的细胞凋亡。此外，PUMA在伊帕替尼与某些传统或新型药物联合治疗中不可或缺。总之，我们的研究表明，FoxO3a和NF-κB诱导的PUMA激活是伊帕替尼治疗下抑制结肠癌生长的关键步骤，这为临床评价提供了一定的理论基础。 [3]
盐酸伊帕他塞替（Ipatasertib dihydrochloride）又名GDC-0068和RG-7440。它以纯度≥98%的固体粉末形式供应。该产品仅供研究使用，不得用于人体。

C₂₄H₃₄CL₃N₅O₂

530.9181

529.178

C, 54.30; H, 6.46; Cl, 20.03; N, 13.19; O, 6.03

1396257-94-5

Ipatasertib;1001264-89-6; 1489263-16-2 (HCl); 1491138-24-9; 1396257-94-5 (2HCl); 1491138-23-8 (besylate)

62707512

Light yellow to yellow solid powder

5.098

81.59

4

6

6

34

622

3

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])[C@@]([H])(C([H])([H])N([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C(N1C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])C1([H])[H])C1C2=C([C@@]([H])(C([H])([H])[C@@]2([H])C([H])([H])[H])O[H])N=C([H])N=1)=O.Cl[H].Cl[H]

SRKVNRNRVFDUTG-VISIQVHMSA-N

InChI=1S/C24H32ClN5O2.2ClH/c1-15(2)26-13-19(17-4-6-18(25)7-5-17)24(32)30-10-8-29(9-11-30)23-21-16(3)12-20(31)22(21)27-14-28-23/h4-7,14-16,19-20,26,31H,8-13H2,1-3H32*1H/t16-,19-,20-/m1../s1

(2S)-2-(4-Chlorophenyl)-1-[4-[(5R,7R)-7-hydroxy-5-methyl-6,7-dihydro-5H-cyclopenta[d]pyrimidin-4-yl]piperazin-1-yl]-3-(propan-2-ylamino)propan-1-onedihydrochloride

Ipatasertib dihydrochloride; Ipatasertib; GDC 0068; GDC-0068; GDC0068; RG7440; 1396257-94-5; GDC-0068 (dihydrochloride); UNII-M2JCB5A8EV; M2JCB5A8EV; Ipatasertib (dihydrochloride); (2S)-2-(4-Chlorophenyl)-1-[4-[(5R,7R)-7-hydroxy-5-methyl-6,7-dihydro-5H-cyclopenta[d]pyrimidin-4-yl]piperazin-1-yl]-3-(propan-2-ylamino)propan-1-one;dihydrochloride; RG 7440; RG-7440

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (188.35 mM; Need ultrasonic)
H2O: ≥41 mg/mL (77.22 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3.88 mg/mL (7.31 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3.88 mg/mL (7.31 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 20.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 6 中的溶解度: 16.67 mg/mL (31.40 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。