| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Akt1 (IC50 = 5 nM); Akt3 (IC50 = 8 nM); Akt2 (IC50 = 18 nM); PKA (IC50 = 3100 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
与密切相关的 PKA 和 p70S6K 相比，imatasertib diHClide 对 Akt1 的选择性分别高出 600 倍和 100 倍以上，IC50 值更高。在 230 种蛋白质缀合物（包括人类 AGC 家族的 36 名成员）中，Ipatasertib diHClide 在 1 μM 浓度下仅抑制三种蛋白质缀合物（PRKG1α、PRKG1β 和 p70S6K）超过 70%。 ..对于这三个物种，定期测量的 IC50 值依次为 98、69 和 860 nM。因此，与第二个最有效的非 Akt 抑制剂（上面的 p70S6K Multiples 面板）相比，ipatasertib 二盐酸盐对筛选中的 Akt1 选择性高出 100 倍，但 PKG1 除外（其中 ipatasertib 二盐酸盐对 Akt1 的选择性高出 10 倍以上） 。使用展示药物治疗剂量依赖性反应的三种异种移植模型来研究二盐酸ipatasertib：MCF7-neo的药代动力学（PK）和药效学（PD）之间的关系。 /HER2、TOV-21G.x1 和 LNCaP Ipatasertib diHClide 在这三种细胞系中的平均细胞活力 IC50 分别为 2.56、0.44 和 0.11 μM [2]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在 Akt 由 PTEN 缺失、PIK3CA 突变或突变或 HER2 过度表达等遗传变化触发的移植模型中，二盐酸伊马替尼通常会成功。这些模型中的肿瘤在 100 mg/kg 或以下（在免疫功能低下的小鼠中观察到的最大耐受剂量）缓慢发育、生成或恢复。在体内检查中，每天将 RP-56976 与 Ipatasertib diHClide 组合可在 PC-3 和 MCF7-neo/HER2 异种移植小鼠中产生镇痛和肿瘤消退，但毒素本身要么无效，要么只是导致肿瘤发展。逐渐增加剂量。同样，当 Ipatasertib diHClide 和 NSC 241240 偶联时，在 OVCAR3 卵巢癌异种移植模型中观察到 TGI 升高。与额外化疗相比，Ipatasertib diHClide 联合 RP-56976 或 NSC 241240 单独治疗导致体重减轻不到 5% [2]。
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| 酶活实验 |
Enzymatic Assays/酶实验[1]
用于测定Akt1/2/3和PKA激酶活性的测定采用IMAP荧光偏振（FP）磷酸化检测试剂来检测已被相应激酶磷酸化的荧光标记肽底物。这些研究中使用的Akt酶由重组杆状病毒表达、氨基末端、聚组氨酸标记、全长、野生型人类形式组成，并从商业上获得。这些研究中使用的PKA酶由商业上获得的大肠杆菌中表达的重组未标记的PKA人分离催化亚基组成。在环境温度下，将抑制剂、酶（9 nM Akt1或100 pM PKA）和底物（100 nM Crosstide）与5μM ATP在测定缓冲液（10 mM Tris-HCl（pH 7.2）、10 mM MgCl2、0.1%BSA（w/v）、最终DMSO 2%（v/v））中在5μL反应体积中孵育60分钟。通过向ATP溶液中加入酶+肽底物引发反应。加入IMAP结合试剂（15μL）终止反应，并将停止的反应在室温下孵育至少30分钟。 |
| 细胞实验 |
在以5000个细胞/孔的密度镀在黑色透明底96孔板上的LNCaP细胞中测量细胞存活率的抑制，随后在37°C和5%CO2下用0-10μM 28（ipatasertib）处理72小时。细胞增殖的程度是通过使用560nm的激发波长和590nm的发射波长测量制造商方案中所述的刃天青还原为再硫酸镁来确定的。使用四参数逻辑斯蒂模型生成剂量-反应曲线，并根据这些曲线拟合确定50%抑制浓度（IC50）值。[1]
简而言之，在ipatasertib处理后，HCT116 WT或p53-/-用1%甲醛固定，并在温SDS裂解缓冲液中裂解。获得基因组DNA，并通过在冰上超声处理将其剪切至200-1000bp。样品用蛋白A-琼脂糖/鲑鱼精子DNA（50%浆液）在4°C下搅拌预清洗1小时。然后加入抗FoxO3a抗体或抗p65抗体，在4°C的摇床上孵育过夜。正常兔IgG用作阴性对照。然后加入蛋白质琼脂糖/鲑鱼精子DNA（50%浆液）珠，以沉淀抗体/蛋白质/DNA复合物。用连续洗涤缓冲液洗涤后，用洗脱缓冲液（1%SDS，0.1 M NaHCO3）从珠粒中洗脱DNA-蛋白质免疫复合物30分钟。最后，通过在65°C下与0.2 M NaCl孵育4小时，逆转蛋白质-DNA交联以释放DNA[3]。 |
| 动物实验 |
携带 LNCaP、PC3、KPL-4 或 MCF7 肿瘤异种移植的雌性裸鼠
\n~100 mg/kg/天 \n口服 \n\n在体内肿瘤异种移植研究中，将悬浮于 Hank's 平衡盐溶液 (HBSS) 中的 PC3 细胞皮下接种于雌性 nu/nu（裸鼠）右后侧。当肿瘤平均体积达到 150 mm³ 时，将动物按大小进行匹配，并随机分配到各治疗组，每组 10 只动物。肿瘤体积计算如下：肿瘤大小 (mm³) = (较长测量值 × (较短测量值)²) × 0.5。数据分析后，使用 JMP 统计软件 7.0 版（SAS Institute）进行 Dunnett's t 检验，确定 p 值。使用 Adventura Pro AV812 电子秤（Ohaus 公司）每周记录两次小鼠体重。根据IACUC方案指南[1]，当肿瘤体积超过2000 mm³或体重下降≥初始体重的20%时，立即对小鼠实施安乐死。 \n\n在PK/PD研究中，从荷瘤PC3小鼠单次注射ipatasertib后1、3、8和24小时采集血液和肿瘤样本。在预定的样本采集时间，通过心脏穿刺从每只动物采集约800 μL血液样本，置于含有K2EDTA抗凝剂的试管中，并在1500–2000 g下离心以分离血浆。使用未经验证的LC/MS/MS方法，在基因泰克公司DMPK生物分析部门测定每个血浆样本中ipatasertib的浓度。该方法的定量下限（LLOQ）为0.005 μM。将肿瘤样本在含有 150 mM NaCl、20 mM Tris (pH 7.5)、1 mM EDTA、1 mM EGTA 和 1% Triton X-100 的 Tris 裂解缓冲液中进行解离。使用 BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。采用人酶联免疫吸附试验 (ELISA) 试剂盒测定总 PRAS40 和 Thr246 位点磷酸化 PRAS40 (p-PRAS40) 的水平。该检测方法基于吸光度测量来定量蛋白水平。显色产物的强度与样本中 p-PRAS40 和 tPRAS40 的浓度成正比。使用 Meso Scale Discovery 多点生物标志物检测系统测定总 S6RP 和 Ser235/236 位点磷酸化 S6RP (pS6RP) 的水平。这些检测方法基于电化学发光强度测量来定量蛋白水平。在接受ipatasertib治疗的肿瘤中，磷酸化蛋白水平以总蛋白水平进行标准化，并与载体对照组进行比较。[1] \n\n在多种肿瘤细胞系和患者来源的异种移植模型中评估了体内疗效。将细胞或肿瘤碎片皮下植入免疫缺陷小鼠的侧腹部。使用雌性或雄性裸鼠（nu/nu）或严重联合免疫缺陷小鼠（SCID）/米色小鼠。对于MCF7-neo/HER2模型，在细胞接种前，将17β-雌二醇缓释片（0.36 mg/片，60天释放，货号SE-121）植入小鼠背部肩部。雄性小鼠在植入肿瘤碎片前进行去势。将肿瘤细胞或碎片植入小鼠体内后，监测肿瘤直至平均肿瘤体积达到 180 至 350 mm³，然后将其分为 8 至 10 只/组。ipatasertib/GDC-0068 配制于 0.5% 甲基纤维素/0.2% Tween-80 (MCT) 溶液中，每日一次 (QD) 通过灌胃法给药。[2] \n\n收集 HCT116 WT 和 PUMA−/− 细胞，将 1 × 10⁶ 个细胞悬浮于 0.2 ml 培养基中，皮下注射到无胸腺裸鼠背部。5 周龄雌性裸鼠饲养于无菌微隔离笼中，可自由摄取水和饲料。小鼠在接受为期7天的治疗后，每日灌胃给予40 mg/kg的ipatasertib/GDC-0068，持续21天。使用游标卡尺监测肿瘤生长情况，肿瘤体积按公式0.5 × 长 × 宽²计算。当肿瘤体积达到约1.0 cm³时，对小鼠实施安乐死。取出肿瘤，用10%福尔马林固定，并进行石蜡包埋。[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
结肠癌是三大常见恶性肿瘤之一，生存率较低。伊帕他替尼（Ipatasertib）是一种新型高选择性ATP竞争性泛Akt抑制剂，在包括结肠癌在内的多种癌中均显示出显著的抗肿瘤作用。然而，目前对于其在结肠癌临床治疗中的确切作用机制尚不清楚。本研究旨在探究伊帕他替尼是否通过PUMA依赖性细胞凋亡抑制结肠癌的生长。伊帕他替尼通过抑制Akt，导致p53非依赖性的PUMA激活，进而同步激活FoxO3a和NF-κB，FoxO3a和NF-κB可直接结合PUMA启动子，上调PUMA转录，并诱导Bax介导的线粒体内源性细胞凋亡。值得注意的是，Akt/FoxO3a/PUMA通路是伊帕他替尼在结肠癌中诱导PUMA激活的主要通路，而Akt/NF-κB/PUMA通路是次要通路。敲除PUMA基因可消除ipatasertib诱导的细胞凋亡，无论是在体外还是体内（异种移植模型）。此外，PUMA在ipatasertib与某些传统或新型药物的联合治疗中也必不可少。我们的研究共同表明，FoxO3a 和 NF-κB 诱导的 PUMA 表达是 ipatasertib 治疗下抑制结肠癌生长的关键步骤，这为临床评估提供了一定的理论基础。[3]
目的：我们描述了 GDC-0068 的临床前药理学和抗肿瘤活性。GDC-0068 是一种新型高选择性 ATP 竞争性泛 Akt 抑制剂，目前正在进行治疗人类癌症的临床试验。实验设计：我们使用 Akt 通路的特异性生物标志物表征了 GDC-0068 对 Akt 信号通路的影响，并在具有不同遗传背景的人类癌细胞系和异种移植模型中评估了 GDC-0068 的疗效，包括单药治疗和与化疗药物联合治疗。结果：GDC-0068 可阻断培养的人类癌细胞系和肿瘤异种移植模型中的 Akt 信号通路，表现为下游靶点磷酸化水平的剂量依赖性降低。 GDC-0068 对 Akt 活性的抑制导致细胞周期进程阻滞，并降低了癌细胞系的活力。Akt 激活的标志物，包括高水平的磷酸化 Akt、PTEN 缺失和 PIK3CA 激酶结构域突变，均与 GDC-0068 的敏感性相关。同源 PTEN 敲除也使 MCF10A 细胞对 GDC-0068 更加敏感。在多种肿瘤异种移植模型中，口服 GDC-0068 可产生抗肿瘤活性，包括肿瘤生长延迟和肿瘤消退。与 Akt 在细胞生存通路中的作用一致，GDC-0068 还增强了经典化疗药物的抗肿瘤活性。结论：GDC-0068 是一种高选择性、口服生物利用度高的 Akt 激酶抑制剂，在体外和体内均显示出对 Akt 信号通路的药效学抑制作用，并对人癌细胞具有显著的抗肿瘤活性。我们的临床前数据为评估GDC-0068在Akt信号通路激活的癌症中的疗效提供了强有力的机制依据。[2] 本文报道了一系列6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶类化合物的发现和优化，这些化合物是ATP竞争性、选择性的蛋白激酶B/Akt抑制剂。最初的设计和优化是基于抑制剂与Akt1及其密切相关的蛋白激酶A复合物的X射线晶体结构。生化分析表明，这些化合物对所有三种Akt亚型均具有强效抑制作用，而对cAMP依赖性蛋白激酶/蛋白激酶G/蛋白激酶C扩展家族的其他成员抑制作用较弱，并且能够阻断人癌细胞系中Akt多个下游靶点的磷酸化。其中一种化合物 28 (GDC-0068) 的生物学研究表明，其口服暴露量良好，可对下游生物标志物产生剂量依赖性的药效学效应，并在磷脂酰肌醇 3-激酶-Akt-雷帕霉素靶蛋白通路被激活的异种移植模型中表现出强大的抗肿瘤反应。化合物 28 目前正在进行人体临床试验，用于治疗癌症。[1] |
| 分子式 |
C24H33CL2N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
494.45712351799
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| 精确质量 |
493.201
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| CAS号 |
1489263-16-2
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| 相关CAS号 |
1001264-89-6;1489263-16-2 (HCl);1396257-94-5 (2HCl);1491138-23-8 (besylate); 1491138-24-9;
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| PubChem CID |
72188570
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| tPSA |
81.6Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
622
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
C[C@@H]1C[C@H](C2=C1C(=NC=N2)N3CCN(CC3)C(=O)[C@H](CNC(C)C)C4=CC=C(C=C4)Cl)O.Cl
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| InChi Key |
DGGYVQQEWGRNDH-GJYOXNSLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H32ClN5O2.ClH/c1-15(2)26-13-19(17-4-6-18(25)7-5-17)24(32)30-10-8-29(9-11-30)23-21-16(3)12-20(31)22(21)27-14-28-23/h4-7,14-16,19-20,26,31H,8-13H2,1-3H31H/t16-,19-,20-/m1./s1
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| 化学名 |
(S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(4-((5R,7R)-7-hydroxy-5-methyl-6,7-dihydro-5H-cyclopenta[d]pyrimidin-4-yl)piperazin-1-yl)-3-(isopropylamino)propan-1-one
hydrochloride.
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| 别名 |
GDC0068; GDC-0068; GDC 0068; RG7440; Ipatasertib HCl; 1489263-16-2; Ipatasertib hydrochloride; Ipatasertib monohydrochloride; M94BW9PF2L; Ipatasertib hydrochloride [JAN]; (2S)-2-(4-chlorophenyl)-1-[4-[(5R,7R)-7-hydroxy-5-methyl-6,7-dihydro-5H-cyclopenta[d]pyrimidin-4-yl]piperazin-1-yl]-3-(propan-2-ylamino)propan-1-one;hydrochloride; Ipatasertib hydrochloride (JAN); RG-7440; RG 7440
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0224 mL | 10.1120 mL | 20.2241 mL | |
| 5 mM | 0.4045 mL | 2.0224 mL | 4.0448 mL | |
| 10 mM | 0.2022 mL | 1.0112 mL | 2.0224 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
奈莫雷生盐酸盐
E55888 HCL
FITC-Dextran (MW 110000)
FITC-Dextran (MW 2000000)
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