KSP (kinesin spindle protein) (Kiapp = 1.7 nM)

ispinesib 的 Ki app 为 1.7 nM，是一种强效且选择性极高的 KSP 抑制剂[1]。 ispinesib (150 nM) 可抑制 BT-474 和 MDA-MB-468 细胞系，GI50 分别为 45 和 19 nM[2]。 Ispinesib (SB715992, 15 和 30 nM) 分别导致前列腺癌细胞凋亡 1094.88% 和 1516.70%，并抑制 PC-3 前列腺癌细胞增殖 48.65% 和 52.16%。 ispinenesib 上调参与细胞周期停滞和凋亡的基因，而下调参与细胞存活和增殖的基因。金雀异黄素可以增强 ispinenesib 的促凋亡和抗增殖特性[3]。

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Ispinesib (SB-715992)是KSP/人驱动蛋白纺锤体蛋白的强效特异性抑制剂；。 Ispinesib是KSP的变构可逆抑制剂。 Ispinesib减缓KSP与MT/微管的结合。 Ispinesib加速ATP促进的KSP与MT/微管的解离。 在MT存在下，Ispinesib的结合速度减慢。 Ispinesib在有和没有MT的情况下抑制ADP释放。 Ispinesib不会干扰mantATP与KSP-MT复合物的结合。 Ispinesib加速KSP-MT复合物中磷酸盐的释放。[1]

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人类乳腺癌症细胞系体外对Ispinesib (SB-715992)的敏感性 研究人员调查了在代表不同原发性肿瘤组织类型和遗传背景的50种人类乳腺肿瘤细胞系以及三种正常乳腺上皮细胞系（MCF10A、MCF10F和MCF12A）中，特定的癌症亚型可能表现出对依匹西尼特别敏感的可能性（图1A；参考文献23）。细胞用浓度逐渐增加的ispinesib处理，并根据将生长减少50%所需的药物浓度进行排名（GI50；图1A）。所有品系的敏感性在7.4至600 nmol/L之间，其中大多数在7.4至80 nmol/L的10倍范围内。三种管腔亚型品系的灵敏度在100至600 nmool/L之间。在这个相对狭窄的敏感性范围内，我们无法发现与亚型、受体表达或突变状态有任何明显的相关性。

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Ispinesib（SB-715992）抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡。发现SB715992调节与细胞增殖、细胞周期、细胞信号通路和凋亡控制相关的基因的表达。此外，我们的结果表明，与单独使用任何一种药物的效果相比，SB715992和金雀异黄素的联合治疗对细胞生长的抑制和凋亡的诱导明显更大。

在含有 ER 阳性（MCF7）、HER2 阳性（KPL4、HCC1954 和 BT-474）和三阴性（MDA-MB-468）乳腺癌细胞肿瘤异种移植物的小鼠中，Ispinesib (SB-715992)（SCID，8 mg/kg） ；裸露，10 mg/kg，q4d × 3）通过腹腔注射3次减少肿瘤体积[2]。

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Ispinesib (SB-715992)作为单一药物在临床前乳腺癌症模型中的疗效[2]
为了确定在体内癌症乳腺癌模型中ispinesib抗肿瘤活性的程度，我们选择了对ispinemab表现出不同体外敏感性并代表不同亚型人类乳腺肿瘤的细胞系。它们在体外对伊西替尼的敏感性从高到低依次为：MDA-MB-468>HCC1954=MCF7>BT-474。 MCF7是一种特征明确的ER-阳性腔型癌症细胞系。MDA-MB-468是癌症基础性三阴性的模型。为了代表HER2-过表达的癌症乳腺癌，我们选择了BT-474、HCC1954和KPL4，一种转移来源的乳腺肿瘤系。这些细胞系（KPL4除外）的转录组、基因组和功能特征之前已经过表征。 携带所列系肿瘤异种移植物的小鼠按照最佳q4d×3方案，以其MTD（SCID，8mg/kg；裸，10mg/kg）腹腔注射ispinesib。Ispinesib在所有测试的模型中都很活跃（图2；表1），在每个模型中都产生了回归。然而，根据肿瘤缩小的程度、退化的数量和肿瘤再生的程度来判断，各个肿瘤的敏感性不同。 三阴性异种移植物模型MDA-MB-468是体外最敏感的品系之一（图1A），在体内表现出最大的ispinesib敏感性。在ispinesib治疗中，所有小鼠的MDA-MB-468肿瘤完全消退，在研究结束时和30天后，每只小鼠的TFS评分均为TFS（数据未显示）。 在ER阳性模型MCF7中，ispinesib在9只小鼠中的5只（1只PR和4只CR，其中2只在研究结束时为TFS）中引起了肿瘤消退，TGI为92%。 在HER2阳性模型中，KPL4对ispinesib治疗的反应最好。所有10只接受治疗的小鼠均表现出退化（4只PR、6只CR和4只TFS）。在HCC1954模型中，ispinesib导致五只接受治疗的小鼠中的四只出现退化。然而，在这两种模型中，反应较差的肿瘤在治疗后35天开始再生。在第三种HER2阳性模型BT-474中，ispinesib在8只小鼠中的2只中引起了CR，TGI（61%）低于其他模型中观察到的值，到研究结束时，所有小鼠的肿瘤都重新生长（平均肿瘤体积，875 mm3）。

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MDA-MB-468异种移植物对Ispinesib (SB-715992)过敏[2]
为了进一步研究MDA-MB-468肿瘤对Ispinesib (SB-715992)的超敏反应，我们将司匹尼与ixabepilone或紫杉醇的抗肿瘤活性进行了比较，这两种抗有丝分裂疗法已被批准用于治疗癌症。我们将每种药物给药于两组携带肿瘤的动物，接受MTD或较低剂量。Ispinesib的抗肿瘤活性在TGI和回归方面与紫杉醇和伊沙匹隆相当（图3A；补充数据2）。接受高剂量依沙匹隆（5mg/kg）治疗的九只小鼠中，有一只出现肢体瘫痪，并被提前处死。紫杉醇或伊西替尼没有观察到这种毒性。

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Ispinesib (SB-715992)的活性 与癌症护理标准的结合[2]
我们试图确定伊西奈西与常用于治疗癌症的药物的潜在有益组合方案：HER2靶向疗法、曲妥珠单抗和拉帕替尼、阿霉素（蒽环类）和卡培他滨（抗代谢）。在所有联合研究中，我们以MTD和最佳给药方案给药批准的药物，并根据需要调整伊西尼的剂量，以实现耐受的联合方案。 我们将ispinesib与曲妥珠单抗联合应用于两种不同的HER2过表达肿瘤模型：管腔模型BT-474（图4A）和转移衍生模型KPL4（图4B）。在这两种模型中，曲妥珠单抗没有毒性，因此可以与伊西替尼的单一药物MTD联合使用。这种组合被证明优于单一药物的治疗。在BT-474中，联合用药引起的TGI为99%，而伊西替尼和曲妥珠单抗分别为61%和88%（表2），并治愈了八只小鼠中的七只。在KPL4中，所有10只接受联合治疗的小鼠都经历了PR或CR，4只在研究结束时仍然没有肿瘤，TGI为97%。

人驱动蛋白纺锤体（KSP）ATP酶活性及伊匹奈西（SB-715992）抑制作用的稳态动力学分析[1]
采用丙酮酸激酶-乳酸脱氢酶偶联检测系统（通过ADP生成偶联NADH氧化）进行驱动蛋白特异性分析，监测340 nm处吸光度变化。使用基于荧光的灵敏检测系统（包含丙酮酸激酶、丙酮酸氧化酶和辣根过氧化物酶偶联体系，将ADP生成与Amplex Red氧化为荧光试卤灵相偶联）进行纳摩尔浓度KSP的稳态研究，通过荧光信号（λ激发=520 nm，λ发射=580 nm）监测试卤灵生成。稳态生化实验在PEM25缓冲液[25 mM PIPES-K+ (pH 6.8)、2 mM MgCl2、1 mM EGTA]中进行，涉及微管的实验需添加10 µM紫杉醇。稳态抑制IC50测定条件为：500 µM ATP、5 µM微管蛋白、1 nM KSP的PEM25缓冲液体系。通过浓度-响应曲线计算伊匹奈西（SB-715992）的表观抑制解离常数（Ki app），并采用Morrison方程对酶浓度进行显式校正。

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伊匹奈西（SB-715992）解离半衰期（t1/2）测定[1]
通过平衡透析法测定伊匹奈西（SB-715992）从KSP解离的滞留半衰期（t1/2）。反应体系终体积1 mL（含800 nM KSP、800 nM伊匹奈西和5 µM微管蛋白），装入透析盒后于含2 mM DTT的PEM25缓冲液中透析30小时，前2小时更换三次透析液以确保充分透析。在不同时间点取样检测活性，以DMSO（无抑制剂）对照组的活性为基准进行归一化处理。通过单指数拟合实验数据获得伊匹奈西解离速率（koff），并利用公式2计算滞留半衰期（t1/2）。

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瞬态动力学实验[1]
采用停流仪（SF-61 DX2）研究伊匹奈西（SB-715992）对mantATP结合、KSP与微管结合/解离、磷酸盐（Pi）释放及mantADP释放的影响。无核苷酸KSP-微管复合物的制备：将KSP与微管按1:1比例复合物与1单位/mL腺苷三磷酸双磷酸酶（apyrase）室温孵育15分钟，经20%蔗糖垫（75,000g离心15分钟）去除apyrase后，沉淀用含10 µM紫杉醇的PEM25缓冲液重悬。
每个数据点的瞬态曲线均进行三次重复采集后取平均值再拟合。mantATP/mantADP实验采用360 nm激发光与400 nm截止滤光片检测荧光发射，监测KSP结合mantATP时的荧光增强或mantADP释放导致的荧光减弱。Pi释放速率通过MDCC荧光标记的细菌磷酸盐结合蛋白（PBP）检测：将无核苷酸KSP-微管复合物、MDCC-PBP及Pi清除剂（配方见下文）与不同浓度MgATP快速混合。Pi清除剂含PNPase（10单位/mL）、7-MEG（10 mM）、MnCl2（5 µM）、葡萄糖-1,6-二磷酸（1 mM）和PDRM（1 µg/mL），其比例可消除溶液中MDCC-PBP对Pi的竞争。通过340 nm处浊度变化监测KSP-微管复合物的解离/结合动力学。KSP从微管解离速率实验如前述方法采用MgATP触发：预先形成无核苷酸KSP-微管复合物（存在/不存在伊匹奈西（SB-715992）），在停流仪中与含不同浓度MgATP（0–500 µM）及100 mM KCl的PEM25缓冲液快速混合。该设计中KSP通过ATP结合水解从微管脱离，额外添加的KCl可减弱马达蛋白与微管的相互作用以减少再结合。
通过监测Trp127荧光测定伊匹奈西与KSP的结合速率。在不同生理状态（KSP-微管、KSP-AMPPMP-微管（ATP类似态）、KSP-ADP和KSP-AMPPNP）下，通过loop5区域Trp127荧光淬灭监测伊匹奈西结合速率（激发波长295 nm，发射滤光片截止320 nm）。将伊匹奈西母液（0–100 µM）与含1 µM KSP（或KSP-微管复合物）及500 µM ADP/AMP-PNP的PEM25缓冲液通过停流仪混合，荧光淬灭曲线采用双指数方程拟合。

蛋白质印迹分析（Western blot）[2]
用150 nmol/L 伊匹奈西（SB-715992）处理细胞后，使用RIPA裂解液提取蛋白。采用Bax、Bid、xIAP、Bcl2、磷酸化Bcl2（Ser70）及Bcl-XL（54H6）一抗，其他一抗包括周期蛋白B（cyclin B）和周期蛋白E（cyclin E，HE12）。二抗为IR 680/800CW LI-COR，信号检测与分析通过LI-COR Odyssey成像系统完成。

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流式细胞术DNA细胞周期分析[2]
用150 nmol/L 伊匹奈西（SB-715992）处理细胞后，以85%冰乙醇固定，重悬于含10 μg/mL碘化丙啶（PI）DNA染料及250 μg/mL RNase A的PBS中，通过FACSCalibur流式细胞仪检测，数据采用FlowJo软件分析。

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细胞增殖抑制实验[3]
将PC-3前列腺癌细胞以4×10³个/孔密度接种于96孔板，孵育24小时使贴壁。实验分为三组：1）分别用15 nM和30 nM 伊匹奈西（SB-715992）处理；2）联合处理组（7.5或10 nM SB715992 + 30 μM染料木黄酮）；3）预加30 μM染料木黄酮24小时后，再给予15 nM SB715992。对照组使用0.3 mM Na₂CO₃（溶剂对照）。处理后，细胞与MTT（0.5 mg/mL）37℃孵育2小时，异丙醇室温处理1小时。

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DNA ladder法检测细胞凋亡[3]
将PC-3细胞（3.5×10⁵个/皿）接种于100 mm培养皿，培养36小时后，用15 nM 伊匹奈西（SB-715992）处理48及72小时。裂解细胞（10 mM Tris pH 8.0、0.5 mM EDTA、0.2% Triton X-100），13,800×g 4℃离心15分钟分离胞质DNA片段。上清经RNase（15 μL）37℃消化1小时，再加入20% SDS（20 μL）、蛋白酶K（8 μL，20 mg/mL）、5.0 M NaCl（25 μL）37℃孵育30分钟。酚/氯仿/异戊醇抽提后异丙醇沉淀DNA，70%乙醇洗涤，1.5%琼脂糖凝胶（100 V，80分钟）电泳，溴化乙锭染色后紫外成像。

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基因表达谱芯片分析[3]
用10 nM 伊匹奈西（SB-715992）处理PC-3细胞6、24、48小时后，Trizol法提取总RNA，RNeasy Mini Kit纯化后，通过Human Genome U133A芯片（含54,613个人类基因探针）进行检测。使用Microarray Suite、MicroDB™及Data Mining Tool软件量化表达，Cluster和TreeView进行聚类分析，Onto-Express与GenMAPP完成功能注释。

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逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证RNA表达[3]
为验证芯片结果，选取差异表达基因（表1和表2）进行实时定量PCR。10 nM 伊匹奈西（SB-715992）处理PC-3细胞6及48小时后，提取总RNA并反转录（Superscript cDNA合成试剂盒）。25 μL反应体系（2 μL cDNA、12.5 μL 2× SYBR Green Mix、1.5 μL 5 μM正/反向引物、7.5 μL H₂O）于SmartCycler II中扩增（95℃ 10分钟；95℃ 15秒→60℃ 1分钟，40循环）。采用ΔCt法分析数据，以β-肌动蛋白（actin）为内参，熔解曲线确认扩增特异性。

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蛋白质印迹分析[3]
PC-3细胞（3.0×10⁵个/皿）接种100 mm培养皿24小时后，用10 nM 伊匹奈西（SB-715992）处理24及48小时。裂解细胞（62.5 mM Tris-HCl、2% SDS），BCA法测定蛋白浓度。取等量蛋白经10%或14% SDS-PAGE分离，100 V 4℃转膜2小时。膜依次与抗EGFR、抗p27（1:100）、抗p15（1:200）及抗β-actin（1:10,000）一抗孵育，再与辣根过氧化物酶偶联二抗反应。

\n\n异种移植研究 [2]
\n从 Charles River 获得的 7-8 周龄雌性小鼠，将 107 个细胞悬浮于 100 μL 1:1 PBS/Matrigel 混合液中，皮下植入小鼠侧腹。除 BT-474 和 MDA-MB-468 外，所有肿瘤模型均使用 nu/nu 小鼠。BT-474 和 MDA-MB-468 肿瘤模型则建立于 Fox Chase 重症联合免疫缺陷 (SCID) 小鼠中。BT-474 肿瘤的构建方法为：将先前建立的异种移植瘤的 30 mm³ 肿瘤碎片皮下植入小鼠体内。MCF7 异种移植瘤的构建方法为：将肿瘤碎片皮下植入小鼠颈部基底部。在肿瘤细胞植入前3天，将90天缓释的0.36 mg 17β-雌二醇颗粒（美国创新研究公司）植入小鼠体内。每周测量两次肿瘤体积（长×宽²）/2和体重。在疗效研究中，当肿瘤体积约为100 mm³时开始药物治疗，并在治疗后60天或肿瘤体积达到1500 mm³时处死小鼠。根据肿瘤体积，将药物治疗小鼠分为三类：部分缓解（PR），如果连续三次测量的肿瘤体积小于治疗第0天初始肿瘤体积的一半；完全缓解（CR），如果连续三次测量的肿瘤体积小于12.5 mm³；以及无瘤生存者（TFS），如果在研究结束时没有可测量的肿瘤或仍为完全缓解。肿瘤生长抑制率（TGI）是载体组和药物治疗组之间肿瘤体积的百分比差异，在载体组所有肿瘤体积均小于1000 mm³的最后一天确定。\n\n统计学对仅两组（例如单药Ispinesib (SB-715992)组和载体对照组）之间的肿瘤体积差异进行分析时，采用非配对t检验，分析研究结束时（第60天）的肿瘤体积。对多组治疗进行统计分析时，采用单因素方差分析(ANOVA)，并进行Newman-Keuls事后检验，以确定第60天各治疗组间肿瘤体积差异的显著性（除非另有说明）。

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\n\n药物[2]
\n除非另有说明，所有药物均按其最大耐受剂量(MTD)给药，给药体积为200 μL/25 g小鼠。Ispinesib (SB-715992)配制于10%乙醇、10%聚氧乙烯蓖麻油和80% 5%葡萄糖溶液(D5W)中，每4天腹腔注射一次，共3次。除非另有说明，否则在裸鼠（nu/nu）中，剂量为10 mg/kg，在SCID小鼠中为8 mg/kg，给药方案为（每4天给药一次，共3次）。曲妥珠单抗以10 mg/kg的剂量，每周两次腹腔注射，持续4周。多柔比星配制于0.9%生理盐水中，在裸鼠（nu/nu）中以3 mg/kg的剂量，每4天给药一次，共3次；在SCID小鼠中，于第1、7和21天以2.5 mg/kg的剂量给药。拉帕替尼配制于0.5%羟丙基甲基纤维素和0.1%吐温80的水溶液中，以40 mg/kg的剂量，每日两次口服，持续3周。卡培他滨配制于40 mmol/L柠檬酸缓冲液（pH 6）和0.5%甲基纤维素中，以450 mg/kg的剂量，每日口服，持续14天。紫杉醇和伊沙匹隆配制于将10%乙醇、10%聚氧乙烯蓖麻油和80% 5%葡萄糖溶液分别以最大耐受剂量（MTD）30和5 mg/kg的剂量，每4天静脉注射一次，共3次。对照组小鼠腹腔注射由10%乙醇、10%聚氧乙烯蓖麻油和80% 5%葡萄糖溶液组成的制剂，每4天注射一次，共3次。\n

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\n\n免疫组织化学[2]
\n肿瘤体积约为250 mm³的小鼠单次接受Ispinesib (SB-715992)（10 mg/kg）。解剖肿瘤，用10%中性缓冲福尔马林固定，石蜡包埋，制备5 μm厚的组织切片。采用50 mmol/L柠檬酸缓冲液（pH 5.5）煮沸进行抗原修复，然后将切片在3%氢气中孵育。过氧化物酶处理后，用含0.1% Tween的PBS缓冲液洗涤，并在10%山羊血清中封闭。磷酸化组蛋白H3 (PH3) 抗体使用Alexa Fluor 488二抗进行检测。使用Nikon Eclipse TE-2000U显微镜在10倍放大倍率下拍摄图像，并使用MetaMorph软件进行数据采集，通过计算PH3阳性细胞面积占总细胞面积的比例来量化PH3表达。Ki67/cleaved caspase-3染色按照制造商的说明进行。非荧光图像使用Olympus BX41显微镜在20倍放大倍率下拍摄。

溶于 10% 乙醇、10% 聚氧乙烯蓖麻油和 80% 5% 葡萄糖溶液 (D5W)；裸鼠剂量为 10 mg/kg，SCID 小鼠剂量为 8 mg/kg；每 4 天腹腔注射一次，共 3 次

MCF7、KPL4 和 HCC1954 细胞的裸鼠 (nu/nu) 模型；MDA-MB-468 细胞的重症联合免疫缺陷 (SCID) 小鼠模型；

采用非房室模型方法计算描述性药代动力学参数。由于采样方案较为稀疏，无法完整描述ispinesib的完整药代动力学特征。现有药代动力学数据（表4）表明，在10–14 mg/m²的剂量范围内，ispinesib的全身暴露量与剂量不成比例。第1天，平均Cmax（C1 h/输注结束时）和AUClast分别为349±107 ng/ml（10 mg/m²）、223±48.5 ng/ml（12 mg/m²）和213±109 ng/ml（14 mg/m²）。第15天，平均Cmax和AUClast分别为396±129 ng/ml（10 mg/m²）、248±136 ng/ml（12 mg/m²）和230±68.7 ng/ml（14 mg/m²）。第1天和第15天之间的药物暴露量没有显著差异。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22123335/

最大耐受剂量和安全性结果的确定：
在14 mg/m²剂量下观察到两例剂量限制性毒性（DLT），均为短暂的3级天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高。两名患者均未降低剂量，继续留在研究中，且未出现进一步毒性。这是研究中报告的仅有的两例DLT。最大耐受剂量（MTD）确定为12 mg/m²。表3总结了研究期间一名或多名患者报告的不良事件（AE）。至少有三例患者报告的最常见不良事件包括：中性粒细胞减少症（n=14，87.5%）、ALT升高（n=9，56.3%）、贫血（n=6，37.5%）、AST升高和腹泻（n=5，31.3%）、碱性磷酸酶升高（n=4，25.0%）以及白细胞减少症、血小板增多症、恶心、呕吐、头痛和乳房疼痛（n=3，18.8%）。未报告神经病变、黏膜炎或脱发等不良事件。报告的3级和4级不良事件仅有中性粒细胞减少症（3级，n=6，37.5%；4级，n=7，43.8%）、ALT和AST升高（3级，n=2，12.5%）、发热性中性粒细胞减少症（3级）、血小板减少症（4级；可能为实验室误差）、胸腔积液（3级）和自然流产（4级），各n=1，6.3%。该自然流产病例发生于一名入组时妊娠试验阴性的患者，但在完成第1个疗程给药后发现怀孕。由于该患者怀孕，未进行治疗后影像学检查，并将其排除在研究之外。未发生5级不良事件。未观察到心电图测量（包括Bazett校正QT间期）、生命体征或体格检查（包括神经系统评估）的显著变化。 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22123335/

[1]. Mechanism of inhibition of human KSP by ispinesib. Biochemistry. 2008 Mar 18;47(11):3576-85.

[2]. Activity of the kinesin spindle protein inhibitor ispinesib (SB-715992) in models of breast cancer. Clin Cancer Res. 2010 Jan 15;16(2):566-76.

[3]. Increased therapeutic potential of an experimental anti-mitotic inhibitor SB715992 by genistein in PC-3 human prostate cancer cell line. BMC Cancer. 2006 Jan 24;6:22.

N-(3-氨基丙基)-N-[(1R)-1-[7-氯-4-氧代-3-(苯甲基)-2-喹唑啉基]-2-甲基丙基]-4-甲基苯甲酰胺属于苯甲酰胺类化合物。
伊斯平西布是一种合成小分子，由喹唑啉酮衍生而来，具有抗肿瘤活性。伊斯平西布选择性抑制有丝分裂运动蛋白——纺锤体驱动蛋白（KSP），从而抑制有丝分裂纺锤体的组装，诱导有丝分裂期细胞周期阻滞，并导致活跃分裂的肿瘤细胞死亡。由于KSP不参与非有丝分裂过程（例如神经元运输），因此ispinesib不太可能引起通常与微管蛋白靶向药物相关的周围神经病变。

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药物适应症
已在乳腺癌、肺癌、实体瘤、肾细胞癌、儿科疾病、卵巢癌和头颈癌的治疗中进行研究。

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KSP，也称为HsEg5，是一种驱动蛋白，在双极有丝分裂纺锤体的形成中起着至关重要的作用，并且是细胞周期通过有丝分裂进行所必需的。Ispinesib是首个用于治疗人类疾病的高效、高特异性KSP小分子抑制剂。这种新型抗癌药物可导致多种人类肿瘤细胞系的有丝分裂停滞和生长抑制，目前正在进行多项II期临床试验。在本研究中，我们使用稳态和预稳态动力学分析来阐明ispinesib抑制KSP的机制。我们的数据表明，ispinesib 能改变 KSP 与微管的结合能力，并通过阻止 ADP 的释放（而非阻止 KSP-ADP 复合物从微管上解离）来抑制其运动。这种抑制作用与 ispinesib 对细胞的生理效应一致，即阻止 KSP 驱动的有丝分裂纺锤体极分离。将 ispinesib 与另一种 KSP 小分子抑制剂 monastrol 进行比较，发现这两种抑制剂具有相同的抑制模式。[1]

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目的：Ispinesib (SB-715992) 是一种强效的驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂，驱动蛋白纺锤体蛋白是一种驱动蛋白，对双极有丝分裂纺锤体的形成和细胞周期通过有丝分裂的进程至关重要。ispinesib 的临床研究显示，局部晚期或转移性乳腺癌患者的缓解率为 9%，且安全性良好，未观察到明显的神经毒性、胃肠道毒性或脱发。为了更好地了解ispinesib在乳腺癌治疗中的潜力，我们研究了ispinesib单药治疗以及与几种已获批准的乳腺癌治疗方案联合用药的活性。实验设计：我们体外检测了代表不同亚型的乳腺癌细胞系对ispinesib的敏感性和药效学反应，并在体内异种移植模型中检测了ispinesib的敏感性和药效学反应，同时测试了ispinesib增强已获批准疗法抗肿瘤活性的能力。结果：体外实验表明，ispinesib对53种乳腺细胞系均表现出广泛的抗增殖活性。体内实验表明，ispinesib在5种乳腺癌模型中均能使肿瘤消退，并在其中3种模型中使患者达到无瘤生存。我们检测了ispinesib治疗对有丝分裂和细胞凋亡药效学标志物的影响，结果显示，与敏感性较低的BT-474模型相比，MDA-MB-468模型中有丝分裂和细胞凋亡标志物的增加更为显著。体内实验表明，ispinesib 增强了曲妥珠单抗、拉帕替尼、多柔比星和卡培他滨的抗肿瘤活性，并表现出与紫杉醇和伊沙匹隆相当的活性。结论：这些发现支持进一步开展驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂在乳腺癌治疗中的临床研究。[2]

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背景：驱动蛋白纺锤体蛋白 (KSP) 是一类运动蛋白，在有丝分裂纺锤体的形成中起着至关重要的作用。HsEg5 是一种 KSP，负责双极纺锤体的形成，而双极纺锤体对于有丝分裂过程中细胞的正常分裂至关重要。HsEg5 的功能为调控细胞周期和诱导细胞凋亡提供了一个新的靶点。实验性 KSP 抑制剂 SB715992 已被证明能够干扰双极纺锤体的形成，因此使其成为一种优秀的抗癌候选药物。我们的主要目标是：a) 研究SB715992对人前列腺癌细胞系PC-3的细胞生长抑制作用；b) 研究SB715992与天然异黄酮染料木素联用是否能增强其生长抑制作用；c) 测定基因表达谱，以阐明SB715992的分子作用机制。方法：将PC-3细胞分别用不同浓度的SB715992、30 μM染料木素以及SB715992联合30 μM染料木素处理。处理后，采用细胞抑制实验、凋亡实验、基因芯片分析、实时RT-PCR和Western Blot分析等方法检测PC-3细胞的增殖、凋亡诱导以及基因和蛋白表达的变化。结果：SB715992抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡。研究发现，SB715992能够调控与细胞增殖、细胞周期、细胞信号通路和细胞凋亡相关的基因表达。此外，我们的结果表明，与单独使用SB715992或染料木素相比，二者联合治疗能显著增强细胞生长抑制和细胞凋亡诱导作用。结论：我们的研究结果清楚地表明，SB715992是一种有效的抗肿瘤药物，其疗效可被染料木素增强。因此，我们认为，SB715992与染料木素等无毒天然药物联合使用时，有望成为治疗前列腺癌的新型药物，并取得更佳疗效。[3]

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本研究旨在评估驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂ispinesib的安全性、药代动力学和抗肿瘤活性。既往仅接受过新辅助或辅助化疗的局部晚期或转移性乳腺癌患者，接受递增剂量的伊斯匹尼布治疗，于第1天和第15天以1小时静脉输注的方式给药，每28天为一个周期，直至出现毒性反应或疾病进展。剂量递增直至6例患者中有2例在第1个周期出现剂量限制性毒性。共有16例患者接受了三个剂量水平的治疗：10 mg/m²（n=3）、12 mg/m²（n=6）和14 mg/m²（n=7）。44%的患者为局部晚期，56%为转移性；50%为雌激素受体阳性，44%为孕激素受体阳性，25%为人表皮生长因子受体2（HER2）阳性，31%为雌激素受体、孕激素受体和HER2三阴性。 69%的患者既往未接受过化疗。最大耐受剂量为12 mg/m²，剂量限制性毒性为3级天冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶升高。最常见的毒性反应包括中性粒细胞减少症（88%；3级38%，4级44%）、丙氨酸氨基转移酶升高（56%）、贫血（38%）、天冬氨酸氨基转移酶升高（31%）和腹泻（31%）。未报告神经病变、黏膜炎或脱发。在15例可评估抗肿瘤活性的患者中，有3例达到部分缓解，其中1例经实体瘤疗效评价标准（RECIST）确认（缓解率为7%）。9例患者（60%）病情稳定至少42天，其中4例（27%）病情稳定至少90天。 11 例（73.3%）患者观察到病情稳定（部分缓解+病情稳定）。总之，每 28 天为一个周期，于第 1 天和第 15 天给药，ispinesib 耐受性良好。对于既往未接受治疗的晚期乳腺癌患者，该给药方案疗效有限。抗癌药物。2012 年 3 月；23(3):335-41。

C30H33CLN4O2

517.06

516.229

C, 69.69; H, 6.43; Cl, 6.86; N, 10.84; O, 6.19

336113-53-2

336113-53-2;514820-03-2 (mesylate);

6851740

White to light yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

708.0±70.0 °C at 760 mmHg

382.0±35.7 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.619

5.2

81.22

1

4

9

37

803

1

CC1=CC=C(C=C1)C(=O)N(CCCN)[C@@H](C2=NC3=C(C=CC(=C3)Cl)C(=O)N2CC4=CC=CC=C4)C(C)C

QJZRFPJCWMNVAV-HHHXNRCGSA-N

InChI=1S/C30H33ClN4O2/c1-20(2)27(34(17-7-16-32)29(36)23-12-10-21(3)11-13-23)28-33-26-18-24(31)14-15-25(26)30(37)35(28)19-22-8-5-4-6-9-22/h4-6,8-15,18,20,27H,7,16-17,19,32H2,1-3H3/t27-/m1/s1

(R)-N-(3-aminopropyl)-N-(1-(3-benzyl-7-chloro-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl)-2-methylpropyl)-4-methylbenzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.84 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。