(-)-JNJ-A07

别名: (-)-JNJ-A07; JNJ-A07; JNJA07; JNJ A07; (1)-JNJ-A-07; (-)-JNJ A07
目录号: V45985 纯度: ≥98%
(-)-JNJ-A07 是一种有效且特异性的登革热病毒 (DENV) 抑制剂,EC50 为 31 nM。
(-)-JNJ-A07 CAS号: 2135640-92-3
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
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产品描述
(-)-JNJ-A07 是一种有效且特异性的登革热病毒 (DENV) 抑制剂,EC50 为 31 nM。JNJ-A07是一种强效泛血清型登革病毒小分子抑制剂,通过细胞水平高通量筛选后对约2000个吲哚类衍生物结构优化得到。其作用靶点为登革病毒NS3与NS4B蛋白的相互作用界面,可阻断病毒复制复合体组装,对全部4种登革血清型及多种临床分离株均展现皮摩尔至纳摩尔级超高抗病毒活性。该药物耐药遗传屏障高,在啮齿类动物体内具备良好药代特征,在多种AG129登革感染小鼠模型中均表现强效抗病毒效果,即便在病毒血症峰值延迟给药仍可快速降毒;JNJ-A07的一款结构类似物已进入后续开发阶段[1]。
生物活性&实验参考方法
靶点
DENV NS4B protein, which mediates critical binding with viral NS3 helicase/protease to assemble replication complex;
The compound blocks de novo NS3–NS4B protein complex formation, the EC50 of disrupting wild-type NS3/NS4B interaction is 0.006 μM; mutant NS4B V91A raises this EC50 to 0.2 μM (42-fold resistance), mutant T108I raises EC50 to 0.05 μM (9-fold resistance)[1].
体外研究 (In Vitro)
1. Vero E6细胞泛登革血清型抗病毒实验:JNJ-A07对覆盖4种血清型、多种基因型的21株临床分离株均表现皮摩尔至低纳摩尔EC50;DENV-2 16681毒株在Vero细胞中EC50=0.0001 μM,CC50=13 μM,选择指数SI=130000;对寨卡、乙脑、西尼罗、黄热等黄病毒及其他RNA/DNA病毒无明显交叉抑制活性[1]
2. 多细胞系抗DENV-2活性检测:在Huh-7、表达DC-SIGN的THP-1细胞、人未成熟树突状细胞、白纹伊蚊C6/36细胞中均具备抗病毒效力;Huh7细胞EC50=0.0008 μM,未成熟树突状细胞EC50=0.002 μM,C6/36蚊细胞EC50=0.003 μM[1]
3. 药物添加时间梯度实验:感染后10 h胞内病毒RNA合成启动前加药,JNJ-A07可完全阻断DENV RNA生成;一旦病毒复制启动,药物抑制效力逐步下降[1]
4. 体外耐药诱导传代实验:需在药物压力下连续传代最长40周才能获得敏感性大幅下降的变异毒株;耐药株均携带多个NS4B突变(L94F、T108I、T216N等),且在伊蚊C6/36细胞内复制能力显著受损[1]
5. NS3-NS4B共免疫沉淀蛋白印迹实验:35 nM JNJ-A07可使共沉淀的野生型NS3蛋白降低95%;NS4B耐药突变株可规避该阻断效应;药物同时减慢NS4A-2K-NS4B前体蛋白的蛋白酶切进程[1]
6. 亚基因组复制子复制适应性实验:单个NS4B耐药突变会造成不同程度病毒复制缺陷;L94F突变带来最高约950倍耐药,同时病毒在哺乳动物细胞内复制能力不受抑制[1]
体内研究 (In Vivo)
1. AG129小鼠致死登革预防性模型(10⁶ PFU DENV-2 RL):感染前1 h开始每日两次口服1/3/10/30 mg/kg JNJ-A07,第3天血浆病毒载量呈剂量依赖性下降;30 mg/kg组病毒RNA降低3.8 log10拷贝/mL;30 mg/kg给药组小鼠存活率90%,溶媒对照组几乎全部死亡[1]
2. 非致死登革病毒动力学小鼠模型(10² PFU DENV-2 RL):每日两次口服3–30 mg/kg JNJ-A07可将血浆病毒载量压制至定量下限附近;30、10 mg/kg组病毒载量曲线下面积仅为溶媒对照组的0%[1]
3. 延迟治疗小鼠药效模型:感染第4天(病毒血症峰值)开始给药,72 h内血浆病毒被清除;即便在感染第5、6天病毒峰值启动给药,仍能立刻降低病毒载量,但第6天启动给药的曲线下面积抑制率降至52%[1]
4. 组织病毒载量检测:口服JNJ-A07可剂量依赖性降低小鼠脾脏、肾脏、肝脏内登革病毒RNA拷贝数[1]
5. 感染小鼠血浆细胞因子检测:药物治疗可恢复登革感染升高的促炎因子IL-6、IL-18、IFγ、TNF至正常水平[1]
6. 同靶点药物NITD-688头对头对比:同等口服剂量下JNJ-A07在AG129小鼠体内的病毒抑制效果显著更强[1]
酶活实验
1. NS3-NS4B结合免疫共沉淀功能实验:构建分别表达NS2B-NS3蛋白酶解旋复合物、带C端HA标签野生/突变NS4A-2K-NS4B的质粒,转染改造型Huh7-T7细胞;转染时或换液时加入待测药物;使用含蛋白酶抑制剂的温和非离子去污剂裂解缓冲液制备细胞裂解液;抗HA亲和树脂捕获结合NS4B的蛋白复合物;复合物经SDS电泳分离,蛋白印迹定量共洗脱NS3与NS4B前体条带灰度值,计算NS3/NS4B结合比例与药物抑制效力[1]
2. 体外预形成NS3-NS4B复合物稳定性实验:提取已组装完成NS3/NS4B异二聚体的细胞裂解液,加入待测药物后分别在20 ℃、37 ℃孵育2 h,再进行HA下拉与蛋白印迹检测,验证药物能否解离已成型蛋白复合物[1]
细胞实验
1. EGFP报告登革病毒致病变抑制实验:Vero、Huh7贴壁细胞与THP-1悬浮DC-SIGN细胞铺于多孔板,梯度稀释JNJ-A07加入培养体系;细胞以固定感染复数转染携带eGFP标记的DENV-2,孵育72 h;激光成像定量荧光信号反映病毒复制;平行细胞活力发光实验检测药物细胞毒性,计算EC50与CC50[1]
2. 人未成熟树突状细胞流式抗病毒实验:从人外周血分离单核细胞,白介素诱导分化为未成熟树突状细胞;梯度药物处理后感染野生DENV-2,48 h后固定细胞并标记病毒prM特异性抗体,流式统计病毒阳性细胞占比;同步活力染色测定药物细胞毒性[1]
3. 伊蚊C6/36细胞病毒产量降低实验:白纹伊蚊C6/36细胞28 ℃培养,梯度稀释药物与DENV-2 RL毒株共同孵育7天;收集细胞上清通过RT-qPCR定量病毒RNA;平行细胞核染色计数活细胞,用于CC50计算[1]
4. 登革全基因组测序筛选耐药突变:野生DENV在加药Vero细胞中每周连续传代,最长传代43周;培养上清提取病毒RNA反转录扩增后使用二代测序平台测序;设定15%变异频率阈值筛选NS4B耐药突变位点[1]
5. DENV亚基因组复制子荧光素酶实验:体外转录野生/突变登革亚基因组复制子RNA,电转导入Huh7细胞;培养基加入梯度稀释药物,孵育48–96 h后裂解细胞读取荧光素酶信号,评估病毒复制适应性与药物耐药倍数变化[1]
动物实验
1. CD-1雄性小鼠静脉药代实验:JNJ-A07溶解于PEG400与调碱水混合溶剂,配制成0.5 mg/mL溶液,单次2.5 mg/kg尾静脉注射;分别在0.12、0.33、1、2、4、7小时采集肢静脉血,24小时终点心脏取血,血浆经液质联用检测药物浓度[1]
2. CD-1雄性小鼠口服药代实验:药物溶解于同配比PEG400水溶液,单次灌胃给药1、3、10、30 mg/kg;采血时间点与静脉组一致,采用非房室模型计算暴露参数[1]
3. 大鼠口服与静脉药代实验:SD雄性大鼠分别接受2.5 mg/kg静脉注射或10 mg/kg口服药物溶液,采血、血浆定量流程与小鼠完全一致[1]
4. 致死登革预防性小鼠模型(7–11周雌性AG129小鼠):腹腔注射10⁶ PFU DENV-2 RL;感染前24 h单次注射抗黄病毒抗体模拟抗体依赖增强效应;JNJ-A07每日两次灌胃(1/3/10/30 mg/kg),给药始于攻毒前1 h,连续给药5天;每日监测小鼠体重、临床体征至第25天终点,终末采集血液与脏器用于病毒载量检测[1]
5. 延迟治疗登革小鼠模型(雌性AG129):腹腔低剂量10² PFU DENV-2 RL攻毒;每日两次30 mg/kg口服JNJ-A07分别于感染0/1/2/3/4/5/6天启动给药,固定连续给药6天;动物分为交替采血亚组,持续14天纵向检测血浆病毒RNA水平[1]
6. 啮齿类15天重复给药毒性实验:雄性大鼠每日口服最高300 mg/kg JNJ-A07,连续给药15天,给药周期全程观测动物临床不良反应[1]
药代性质 (ADME/PK)
1. 小鼠静脉给药(2.5 mg/kg)药代参数:血浆清除率CLp=4.1±0.4 mL/min/kg;
稳态分布容积Vdss=0.78±0.04 L/kg;
末端消除半衰期t1/2=3.0±0.04 h;
总血浆暴露AUC0-last=10227±903 ng·h/mL[1]
2. 小鼠口服给药参数:1–30 mg/kg剂量范围内口服生物利用度F介于37%–59%;
30 mg/kg口服组Cmax=12143±4500 ng/mL,达峰时间Tmax=2.0±1.7 h,AUC0-last=71963±8550 ng·h/mL[1]
3. 大鼠静脉(2.5 mg/kg):CLp=4.4±2.5 mL/min/kg,Vdss=1.0±0.4 L/kg,t1/2=3.1±0.3 h[1]
4. 大鼠口服(10 mg/kg):口服生物利用度>100%,Cmax=4440±322 ng/mL,Tmax=5.0±1.7 h[1]
5. 感染小鼠组织分布:口服JNJ-A07可渗透进入脾脏、肾脏、肝脏组织,在脏器内发挥局部抗登革作用[1]
6. 暴露线性特征:小鼠口服1–30 mg/kg测试剂量区间内,血浆AUC、Cmax随给药剂量升高成比例上升[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. 啮齿类重复给药毒性:大鼠每日口服最高300 mg/kg,连续15天未观察到明显毒性反应[1]
2. 体外细胞细胞毒性:对登革感染细胞选择指数极高;Vero细胞CC50=13 μM,远高于抗病毒EC50(0.0001 μM);Huh7细胞CC50>25 μM,有效抗病毒浓度下几乎无细胞损伤[1]
3. 蚊细胞毒性:JNJ-A07在C6/36伊蚊细胞CC50=18 μM,工作抗病毒浓度下无显著细胞损伤[1]
4. 脱靶病毒毒性:治疗浓度下对其他黄病毒(寨卡、乙脑、西尼罗、黄热)及无关RNA/DNA病毒无显著抑制,脱靶病毒毒性风险低[1]
5. 耐药毒株传播相关毒性:NS4B突变耐药毒株在伊蚊C6/36细胞内复制能力极差;即便人体宿主产生耐药突变,经蚊虫媒介传播的概率大幅下降[1]
参考文献

[1]. A pan-serotype dengue virus inhibitor targeting the NS3-NS4B interaction. Nature. 2021 Oct;598(7881):504-509.

[2]. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors. WO2017167951 (compound 4A).

其他信息
1. 核心作用机制:JNJ-A07仅抑制NS3–NS4B蛋白复合物新生组装,无法解离已经成型的NS3/NS4B异二聚体;药物同时减慢NS4A-2K-NS4B多聚蛋白前体的蛋白酶切,进一步阻断复制复合体形成[1]
2. 耐药屏障特性:需NS4B多个点突变同时出现才能产生高水平耐药,单一突变仅造成轻至中度敏感性下降;天然流行的临床登革分离株几乎不携带高风险NS4B耐药替换位点[1]
3. 临床转化价值:在预防性、延迟治疗两种小鼠登革模型均有效,可快速降低峰值高病毒血症,贴合人类登革患者体内病毒动力学特征,具备人体预防与治疗双重应用潜力[1]
4. 化合物研发背景:源于吲哚骨架高通量筛选,总计合成约2000个衍生物开展结构优化;合成路线记载于多篇全球专利,一款近缘结构类似物进入后续临床前评估[1]
5. 同靶点药物对比优势:与已报道NS4B抑制剂NITD-688结合模式、耐药突变谱完全不同;同等口服剂量下JNJ-A07在登革小鼠模型体内抗病毒活性显著更强[1]
6. 适应症定位:开发为口服小分子泛血清型登革预防与治疗药物,填补目前无获批口服登革抗病毒药物的临床空白[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C28H26CLF3N2O6
分子量
578.96
精确质量
578.143
元素分析
C, 58.09; H, 4.53; Cl, 6.12; F, 9.84; N, 4.84; O, 16.58
CAS号
2135640-92-3
相关CAS号
(+)-JNJ-A07;2135640-93-4
PubChem CID
131964318
外观&性状
Off-white to light yellow solid powder
LogP
6.3
tPSA
97.3
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
11
重原子数目
40
分子复杂度/Complexity
843
定义原子立体中心数目
0
SMILES
N1(CCC2=C1C=C(C=C2)OC(F)(F)F)C(C(C1=CC=C(C=C1)Cl)NC1=CC(OCCCC(O)=O)=CC(=C1)OC)=O
InChi Key
WUBVXTOLZKVNEG-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C28H26ClF3N2O6/c1-38-22-13-20(14-23(15-22)39-12-2-3-25(35)36)33-26(18-4-7-19(29)8-5-18)27(37)34-11-10-17-6-9-21(16-24(17)34)40-28(30,31)32/h4-9,13-16,26,33H,2-3,10-12H2,1H3,(H,35,36)
化学名
4-[3-[[1-(4-chlorophenyl)-2-oxo-2-[6-(trifluoromethoxy)-2,3-dihydroindol-1-yl]ethyl]amino]-5-methoxyphenoxy]butanoic acid
别名
(-)-JNJ-A07; JNJ-A07; JNJA07; JNJ A07; (1)-JNJ-A-07; (-)-JNJ A07
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~172.72 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7272 mL 8.6362 mL 17.2724 mL
5 mM 0.3454 mL 1.7272 mL 3.4545 mL
10 mM 0.1727 mL 0.8636 mL 1.7272 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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