| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ACVR1 (IC50 = 1.3 nM); ALK1 (IC50 = 2.4 nM); BMPR1A (IC50 = 85.8 nM); ALK4 (IC50 = 2133 nM); ALK5 (IC50 = 9276 nM)
LDN-212854 is an ALK2-biased inhibitor of bone morphogenetic protein (BMP) type I receptors, targeting ALK2 and ALK3 (ALK2 IC50 = 0.8 nM; ALK3 IC50 = 38 nM) [1] LDN-212854 shows weak inhibition of other ALK receptors (ALK1, ALK4-6: IC50 > 1 μM) and no significant inhibition of unrelated kinases (PKA, PKC: IC50 > 10 μM) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 BMPR2−/− 细胞中，BMP7 诱导的 SMAD1/5/8 磷酸化被 LDN-212854 (0-3.815 μM) 阻断[1]。在 Huh7 和 MT 细胞中，LDN-212854（2.5 μM，5 天）抑制细胞增殖[2]。 LDN-212854（0.5 μM，48 小时）可抑制 Huh7 和 MT 细胞的 ID1 和 EpCAM 表达[2]。
在重组ALK2/ALK3激酶活性实验中，LDN-212854 剂量依赖性抑制激酶活性。10 nM浓度下，对ALK2的抑制率为92%，对ALK3为65%，并在C2C12成肌细胞中阻断BMP诱导的Smad1/5/8磷酸化。1 μM浓度处理24小时后，下调BMP靶基因ID1的mRNA表达78% [1] - 在BMP9-ID1信号激活的人肝癌细胞（HepG2、PLC/PRF/5）中，LDN-212854（2 μM）处理48小时后，流式细胞术检测显示EpCAM阳性癌干细胞（CSCs）比例减少62%。72小时后CCK-8法检测显示细胞增殖抑制58-63%，14天克隆形成实验显示克隆形成效率降低65%。它还下调ID1 mRNA表达70%，EpCAM蛋白表达68% [2] - 在正常人肝细胞（NHHs）中，LDN-212854 在浓度高达20 μM时无显著毒性（细胞活力较对照组>85%）[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在进行性骨化性纤维发育不良的可诱导转基因突变体 ALK2 小鼠模型中，以 6 mg/kg 的剂量每天两次腹膜内给药，持续 4 周，可有效抑制异位骨化 [1]。通过抑制ID1，LDN-212854（腹膜内注射，6 mg/kg，每天两次，持续4周）抑制HCC异种移植模型中HCC肿瘤的生长[2]。
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| 酶活实验 |
激酶测定[1]
将终浓度分别为2.5nM、6μM、0.05μCiμL−1和0.5 mg mL−1的纯化重组ALK1-5和其他激酶蛋白、ATP、ATP[γ-32P]和去磷酸化酪蛋白在含有0.2%牛血清白蛋白的激酶缓冲液中等分，并补充10mM MnCL2，放入96孔板中，与在激酶缓冲液（0.01nM至10μM）中以不同浓度稀释的抑制剂化合物组合，一式三份。还测量了缺乏抑制剂化合物的阳性对照样品和缺乏重组激酶的阴性对照样品，一式三份。将混合物在室温下反应45分钟，用终浓度为2%的磷酸淬灭。将反应混合物转移到96孔P81磷酸纤维素滤板上并结合5分钟。通过真空歧管用每孔150μL 1%磷酸溶液洗涤滤板20次。将板在室温下干燥1小时，密封，并使用Spectramax L光度计使用Microscint 20闪烁液进行分析，使用光子计数设置，每个孔的积分时间为1秒。将数据归一化为100%酶活性的阳性对照，减去阴性对照作为背景。GraphPad用于绘制具有可变希尔系数的S形剂量反应图和回归分析。 萤光素酶报告物测定[1] 在组织培养处理的96孔板中，将C2C12 Bre-Luc和293T CAGA-Luc细胞以20000个细胞接种在每孔补充2%FBS的DMEM中。将细胞孵育1小时（37°C和10%CO2），并使其沉淀和附着。将目标化合物或DMSO在DMEM中稀释，并以1nM至10μM的最终化合物浓度加入。然后将细胞孵育30分钟。加入表达组成型活性BMP和TGF-βI型受体（Ad.caALK1-5）的腺病毒，以实现100的多重感染（MOI）。将板在37°C下孵育过夜。根据制造商的说明，用MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑）比色法测定细胞存活率。丢弃培养基，根据制造商的方案测量萤火虫荧光素酶活性。使用Spectramax L光度计测量光输出，每个孔的积分时间为1秒。数据被标准化为100%的BRE-Luc活性增量，这是由于腺病毒指定了caALK1、2或3，或CAGA-Luc活动增量，这也是由于腺病毒特定了caALK4或5。使用GraphPad Prism软件对具有可变Hill系数的S形剂量反应进行绘图和回归分析。 BMP诱导的ALP活性[1] 如前所述，将C2C12肌成纤维细胞以每孔2000个细胞的速度接种在补充有2%FBS的DMEM中的96孔板中。在DMEM中稀释的化合物，以1nM至10μM的终浓度加入，一式四份。将稀释在DMEM中的BMP4和BMP6配体加入至终浓度为20 ng mL-1。通过省略化合物产生阳性对照，通过省略化合物和配体产生阴性对照。细胞在37°C和5%CO2下孵育6天，随后使用1%Triton X-100收获。将每个孔的提取物在室温下与碱性磷酸酶（ALP）黄色（pNPP）液体底物一起孵育30分钟，用于ELISA，并根据制造商的说明通过405 nM的吸光度测量ALP活性。以阳性对照作为100%ALP活性，减去阴性对照作为背景，分析吸光度数据。使用GraphPad Prism通过具有可变Hill系数的S形剂量反应进行绘图和回归分析。 ALK2/ALK3激酶活性实验：将纯化的重组人ALK2或ALK3与Smad1衍生底物肽和 LDN-212854（0.1 nM-100 nM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM ATP）中于30°C孵育60分钟。通过放射性标记ATP计数检测磷酸化底物，从剂量-效应曲线计算IC50值 [1] - 表面等离子体共振（SPR）结合实验：在运行缓冲液中，将 LDN-212854（0.01-10 μM）注入固定有ALK2或ALK3胞外域的传感芯片。通过测量共振信号确定结合亲和力（KD），证实其对ALK2的结合亲和力（KD = 0.5 nM）高于ALK3（KD = 32 nM）[1] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： BMPR2 缺陷型肺血管平滑肌细胞 测试浓度： 0、1、3、6、16、 39, 98, 244, 610, 1530, 3815 nM 孵育时间： 实验结果： 抑制 BMP7 诱导的 SMAD1/5/8 磷酸化IC50 值为 37 nM。 C2C12细胞BMP信号实验：C2C12成肌细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 LDN-212854（0.1-5 μM）预处理1小时，再用BMP4（10 ng/mL）刺激24小时。Western blot检测p-Smad1/5/8和总Smad1；qPCR分析ID1 mRNA水平 [1] - 肝癌细胞癌干细胞及增殖实验：HepG2和PLC/PRF/5细胞分别以3×10³个/孔（增殖实验）或2×10⁵个/孔（克隆形成/癌干细胞分析）接种到96孔板或6孔板中。用 LDN-212854（0.5-5 μM）处理48-72小时（增殖/癌干细胞）或14天（克隆形成）。CCK-8法检测增殖；流式细胞术（EpCAM抗体染色）分析癌干细胞比例；结晶紫染色定量克隆数；qPCR检测ID1 mRNA；Western blot分析EpCAM蛋白 [2] |
| 动物实验 |
Animal/Disease Models: Murine inducible transgenic ALK2Q207D model of heterotopic ossification[1]
Doses: 6 mg/kg Route of Administration: intraperitoneal (ip)injection , twice (two times) daily for 4 weeks Experimental Results: Prevented the formation of heterotopic bone and preserved limb range of motion with minimal or no impairment in the majority of mice. Animal/Disease Models: HCC xenografts (Huh7 or MT cell)[1] Doses: 6 mg/kg Route of Administration: intraperitoneal (ip)injection, twice (two times) daily for 10-14 days. Experimental Results: Inhibited tumor growth and demonstrated less spheroid/colony formation ability than PBS-treated tumor cells. |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LDN-212854 is a member of the class of quinolines that is quinoline substituted by a 6-[4-(piperazin-1-yl)phenyl]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl group at position 5. It is a potent ALK inhibitor (IC50 values of 2.4, 1.3, 85.8, 2,133 and 9,276 nM for ALK1, ALK2, ALK3, ALK4 and ALK5, respectively). It has a role as an antineoplastic agent, an angiogenesis inhibitor and an EC 2.7.11.30 (receptor protein serine/threonine kinase) inhibitor. It is a pyrazolopyrimidine, a member of quinolines and a N-arylpiperazine.
LDN-212854 is a potent, ALK2-biased small-molecule inhibitor of BMP type I receptors [1] - Its mechanism of action involves competitive binding to the ATP-binding pocket of ALK2 (with higher affinity than ALK3), inhibiting kinase activity and blocking downstream BMP/Smad1/5/8 signaling pathway activation [1] - LDN-212854 exhibits in vitro inhibitory activity against BMP signaling in myoblasts and HCC cells, and suppresses EpCAM-positive cancer stem cell properties in hepatocellular carcinoma [1][2] - It is used as a tool compound to study ALK2-biased BMP signaling in development, cancer, and other BMP-driven biological processes [1][2] - In HCC, it targets BMP9-ID1 signaling axis to inhibit cancer stem cell maintenance and tumorigenic potential [2] |
| 分子式 |
C25H22N6
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|---|---|---|
| 分子量 |
406.48
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| 精确质量 |
406.19
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| 元素分析 |
C, 73.87; H, 5.46; N, 20.67
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| CAS号 |
1432597-26-6
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
60182388
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.740
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| LogP |
1.71
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| tPSA |
58.35
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
587
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
BBDGBGOVJPEFBT-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H22N6/c1-3-21(22-4-2-10-27-24(22)5-1)23-16-29-31-17-19(15-28-25(23)31)18-6-8-20(9-7-18)30-13-11-26-12-14-30/h1-10,15-17,26H,11-14H2
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| 化学名 |
5-(6-(4-(piperazin-1-yl)phenyl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)quinoline
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.15 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.15 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4601 mL | 12.3007 mL | 24.6015 mL | |
| 5 mM | 0.4920 mL | 2.4601 mL | 4.9203 mL | |
| 10 mM | 0.2460 mL | 1.2301 mL | 2.4601 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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SD-208
K02288
加仑塞替
LDN-193189 4HCl
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COA
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463611831
