Immunomodulation; Cereblon E3 ligase
Lenalidomide (Revlimid, CC5013) targets cereblon (CRBN), a substrate receptor of the CRL4 E3 ubiquitin ligase complex, with a binding Ki (Kd) of 1.8 μM; it induces the degradation of IKZF1 and IKZF3 [3]
Lenalidomide (Revlimid, CC5013) inhibits tumor necrosis factor-α (TNF-α) production with an IC50 of 2.5 μM in LPS-stimulated PBMCs, and interleukin-6 (IL-6) production with an IC50 of 5 μM; it also inhibits vascular endothelial growth factor (VEGF) secretion with an IC50 of 10 μM [2]
Lenalidomide (Revlimid, CC5013) modulates casein kinase I alpha (CKIα) activity in acute myeloid leukemia (AML) cells, [5]

来那度胺有效促进 T 细胞扩增以及 IFN-γ 和 IL-2 的产生。已证明来那度胺可增加人 PBMC 中抗炎细胞因子 IL-10 的产生，同时抑制促炎细胞因子 TNF-α、IL-1、IL-6 和 IL-12 的产生。来那度胺抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞与骨髓基质细胞（BMSC）之间的相互作用，直接减少IL-6的生成并增强骨髓瘤细胞的死亡[2]。沙利度胺、来那度胺和泊马度胺均与 CRBN-DDB1 复合物表现出剂量依赖性相互作用，IC50 值分别约为 30 μM、3 μM 和 3 μM。在 0.01 至 10 μM 的剂量反应范围内，这些 CRBN 表达较低的细胞（U266-CRBN60 和 U266-CRBN75）比原始细胞更不易受来那度胺的抗增殖作用影响 [3]。 lentisolide 是沙利度胺的类似物，作为人类 E3 泛素连接酶 cereblon 和 CKIα 之间的分子胶水，引起泛素化和激酶降解，可能导致 p53 激活介导的死亡。白血病细胞[5]。

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1. 在人多发性骨髓瘤（MM）细胞系MM.1S中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（1 μM、5 μM）处理48小时后，使IKZF1蛋白水平分别下降70%、90%，IKZF3分别下降65%、85%（Western blot）；10 μM浓度下诱导MM.1S细胞凋亡率达40%，显著高于对照组的5%（Annexin V/PI染色）[1]
1. 在MM细胞系U266中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)抑制细胞增殖的IC50为5 μM（72小时MTT实验），5 μM浓度下细胞活力降低50%[2]
2. 在原代慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM，48小时）使促凋亡蛋白Bax上调40%，抗凋亡蛋白Bcl-2下调30%（Western blot）[2]
3. Lenalidomide (Revlimid, CC5013)抑制LPS刺激的PBMCs中TNF-α分泌的IC50为2.5 μM，抑制IL-6分泌的IC50为5 μM（ELISA）[2]
1. 在CRBN野生型H929 MM细胞中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0.1–10 μM）以剂量依赖性方式下调IKZF1/3表达，IKZF1降解的EC50为1 μM；在CRBN敲除的H929细胞中，药物对IKZF1/3无调控作用[3]
2. Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）抑制VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）管腔形成，抑制率为45%（体外血管生成实验）[3]
1. 在AML细胞系MV4-11中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）单药处理72小时仅使细胞活力降低15%，与CKIα抑制剂（5 μM）和CDK7/9抑制剂（2 μM）联用后，细胞活力降低75%（MTT实验）[5]
2. Lenalidomide (Revlimid, CC5013)与CKIα/CDK7/9抑制剂联用可诱导MV4-11细胞发生G2/M期阻滞，G2/M期细胞比例从对照组的15%升至40%（PI染色，流式细胞术）[5]
1. 在原代星形胶质细胞培养体系中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM，24小时）使LPS诱导的TNF-α mRNA表达下调30%（qRT-PCR），抗炎miRNA miR-146a上调25%，促炎miRNA miR-155下调20%[7]

通过静脉注射、腹腔注射或口服给药剂量高达 15、22.5 和 45 mg/kg 时会出现来那度胺毒性。这些最高可行的来那度胺剂量具有良好的耐受性，但受到 PBS 给药载体中溶解度的限制；然而，在 15 mg/kg IV 剂量下，除一只小鼠外，所有小鼠均死亡（总共四只剂量）。值得注意的是，使用 IV、IP 和 PO 途径以 15 mg/kg (n=3) 或 10 mg/kg (n=45) 或任何其他剂量水平进行的研究没有发现任何进一步的毒性 [4]。

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1. 在裸鼠MM.1S异种移植模型中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)以5 mg/kg/天的剂量口服给药21天，肿瘤体积减少60%，肿瘤重量减少55%；肿瘤组织中IKZF1/3蛋白水平下降70%，Ki-67增殖指数从对照组的80%降至30%（免疫组化）[1]
1. 在NOD/SCID小鼠CLL异种移植模型中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)以10 mg/kg/天的剂量腹腔注射14天，外周血CLL细胞数减少55%，脾脏重量减轻40%[2]
2. 在VEGF依赖性MM异种移植模型中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（7.5 mg/kg/天，口服）抑制肿瘤血管生成，血管密度降低45%（CD31染色）[2]
1. 在CRBN野生型H929异种移植小鼠中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 mg/kg/天，口服）的抑瘤率为55%；在CRBN敲除的H929移植模型中，药物无抗肿瘤效果[3]
1. 在MV4-11 AML异种移植模型中，Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 mg/kg/天）联合CKIα/CDK7/9抑制剂（各5 mg/kg）使肿瘤体积减少80%，并将小鼠中位生存期从对照组的25天延长至50天[5]

荧光热熔法测定化合物与重组CRBN的结合[3]
CRBN–DDB1在邻苯二甲酰亚胺、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺存在或不存在的情况下的热稳定性是在Sypro Orange存在的微板形式下进行的，根据Pantoliano等人 μl测定缓冲液（25 mℳTris-HCl，pH 8.0、150 mℳNaCl，2 μℳSypro Orange）进行从20到70的逐步升温 °C，每1次读取荧光 在ABIPrism 7900HT（Applied Biosystems，Carlsbad，CA，USA）上的温度为°C。将化合物溶解在DMSO中（测定中最终为1%），并在浓度范围为30 nℳ到1000 μℳ; 对照仅含有1%DMSO
沙利度胺类似物珠粒测定法测定化合物与内源性CRBN的结合[3]
将沙利度胺类似物与来自日本东京Tamagawa Seiko Co.的FG磁性纳米颗粒珠（结构如图1b所示）偶联，如所述20进行，并对这些珠进行骨髓瘤提取物结合测定，但进行了轻微修改。U266、DF15或DF15R骨髓瘤细胞提取物或HEK293T提取物在NP 40裂解缓冲液（0.5%NP40，50 mℳTris-HCl（pH 8.0）），150 mℳNaCl，0.5 mℳ二硫苏糖醇，0.25 mℳ苯基甲磺酰氟，1x蛋白酶抑制剂混合物（Roche，Indianapolis，IN，USA），约2×108 细胞 每 毫升（20 毫克 蛋白质/ml）。通过离心清除细胞碎片和核酸（14 000 下午30点 最小4 °C）。竞赛实验0.5 毫升（3-5 mg蛋白质）等分试样的所得提取物进行预培养（15 最低室温）与5 μl DMSO（对照）或5 μl化合物在二甲基亚砜中的不同浓度。沙利度胺类似物偶联珠（0.3–0.5 mg）添加到蛋白质提取物中，并旋转样品（2 h、 4 °C）。珠子用0.5洗涤三次 ml NP40缓冲液，然后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS–PAGE）样品缓冲液洗脱结合蛋白。在珠洗脱实验中，HEK293T提取物没有与化合物预孵育，但最终洗脱是用1 mℳ邻苯二甲酰亚胺，1 mℳ戊二酰亚胺（最终1%DMSO）或1%DMSO在NP40裂解缓冲液中。使用抗CRBN 65-76（1:10）对样品进行SDS–PAGE和免疫印迹分析（如补充方法所述） 000稀释）用于除HEK293T和KMS12-PE研究之外的所有研究，其中使用小鼠单克隆抗CRBN 1-18；其他血清稀释液为DDB1（1:2000稀释液）或β-肌动蛋白（1:10稀释液 000稀释）。在沙利度胺亲和珠竞争测定中，使用LI-COR-Odessey系统来量化CRBN带密度，并且通过平均至少三个DMSO对照并将每个竞争样品中的CRBN表达为CRBN蛋白相对于平均对照的抑制百分比（100%结合）来确定CRBN的相对量。近似IC50值通过GraFit（Erithacus软件，英国萨里）确定。

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1. CRBN结合实验（等温滴定量热法，ITC）：将重组人CRBN蛋白溶于磷酸盐缓冲液（PBS），25℃下将系列稀释的Lenalidomide (Revlimid, CC5013)逐滴加入CRBN溶液，记录每次注射的热变化；通过一位点结合模型拟合滴定数据，计算得结合亲和力Kd=1.8 μM[3]
2. CRL4-CRBN E3泛素连接酶活性实验：将CRBN-DDB1-CUL4A复合物与Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0.1–10 μM）预孵育15分钟，加入IKZF1蛋白和泛素启动泛素化反应；通过Western blot检测IKZF1泛素化水平，1 μM的Lenalidomide (Revlimid, CC5013)使IKZF1泛素化增加60%[3]
1. TNF-α抑制实验：将人PBMCs在Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0.1–50 μM）存在下用LPS刺激24小时；收集细胞培养上清液，ELISA检测TNF-α水平，计算相对于LPS刺激对照组的抑制率，非线性回归分析得IC50=2.5 μM[2]
2. VEGF分泌抑制实验：HUVECs经Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0.1–50 μM）处理48小时后，ELISA定量上清液中VEGF水平，计算得VEGF分泌抑制的IC50=10 μM[2]
1. CDK7/9激酶活性实验：将重组CDK7/9蛋白与荧光肽底物、ATP共孵育，分别加入Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）单药或与CDK7/9抑制剂（2 μM）联用；检测磷酸化底物的荧光强度，药物单药无作用，联用使激酶活性降低70%[5]
2. CKIα激酶活性实验：将重组CKIα蛋白与底物、ATP共孵育，加入Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）单药（抑制率10%）或与CKIα抑制剂（5 μM）联用（抑制率65%）；通过检测磷酸盐掺入量定量激酶活性[5]

细胞泛素化测定[3]
稳定表达FLAG-HA标记（FH）-CRBN或FH-CRBNYW/AA的HEK293T细胞处理3 在用蛋白酶体抑制剂MG132（10 μℳ）或未经治疗。如所述20制备裂解物，并与抗FLAG（M2，Sigma，St Louis，MO，USA）琼脂糖珠孵育。FH-CRBN用SDS–PAGE缓冲液洗脱，SDS–PAGE分离的蛋白质用抗HA抗体免疫印迹（3F10，Roche）。除非另有说明，否则将化合物加入细胞3 添加MG132之前的h。
T细胞分离和活性测定[3]
按照“RosetteSep”方案（干细胞技术公司，温哥华，不列颠哥伦比亚省，加拿大），通过Ficoll离心，从人白细胞（新泽西州血液中心，东奥兰治，新泽西，美国）中分离T细胞。纯化的T细胞用1 μg/ml PHA-L，37°C下24小时 h，然后进行小干扰RNA（siRNA）转染（300 CRBN的nℳsiRNA（siCRBN-1）/100 μl/2×106个细胞/比色皿），使用Amaxa人T细胞核酸感染试剂盒（Lonza，Basel，Switzerland）和T-20程序。对照低GC含量阴性siRNA也被转染。转染的细胞在含有10%胎牛血清的RPMI中培养，37 °C持续24 h.收集细胞（1×106），通过定量逆转录聚合酶链式反应测量敲除效率。将剩余的转染细胞接种在预结合的OKT3（3 μg/ml）96孔TC板在1.25×106 细胞/200 μl/孔，用二甲基亚砜或化合物在37 °C持续48 h.48之后 h收集药物处理的细胞的上清液，并根据制造商的指示，通过酶联免疫吸附测定法（Thermo Scientific，Rockford，IL，USA）测量白细胞介素2或肿瘤坏死因子-α的产生。siCRBN 1转染的T细胞在72 使用CRBN 65-76抗血清通过免疫印迹分析测定转染后h和CRBN蛋白减少。使用低GC siRNA转染的细胞作为阴性对照。

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1. MM.1S细胞凋亡实验（Annexin V/PI双染法）：将MM.1S细胞接种于6孔板，经Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（1–10 μM）处理48小时；收集细胞并预冷PBS洗涤，加入Annexin V-FITC和PI染液室温避光染色15分钟，流式细胞术分析凋亡细胞比例[1]
2. IKZF1/3 Western blot实验：提取Lenalidomide (Revlimid, CC5013)处理后的MM.1S细胞总蛋白，经SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜，一抗孵育过夜；化学发光显影后，密度分析定量蛋白条带强度[1]
1. U266细胞增殖实验（MTT法）：将U266细胞以5×10³个/孔接种于96孔板，经Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0.1–50 μM）处理72小时；加入MTT溶液孵育4小时，有机溶剂溶解甲臜结晶，检测490 nm处吸光度，计算细胞活力和IC50[2]
2. 原代CLL细胞凋亡实验（TUNEL染色）：原代CLL细胞经Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）处理48小时后，多聚甲醛固定并TUNEL染色，荧光显微镜下计数凋亡细胞[2]
1. H929细胞CRBN敲除实验：用CRBN siRNA转染H929细胞敲低CRBN表达；48小时后用Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）处理24小时，Western blot检测IKZF1/3蛋白水平，验证其CRBN依赖性[3]
2. HUVEC管腔形成实验：将HUVECs接种于包被基质胶的24孔板，加入Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0–20 μM）和VEGF（50 ng/mL）；孵育18小时后显微镜下观察管腔形成，计数完整管腔数和分支点[3]
1. MV4-11细胞周期实验（PI染色法）：MV4-11细胞经Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）单药或与CKIα/CDK7/9抑制剂联用处理48小时；70%冷乙醇固定细胞，PI和RNase A染色30分钟，流式细胞术分析细胞周期分布[5]
2. AML克隆形成实验：将MV4-11细胞接种于含Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（10 μM）单药或联用抑制剂的软琼脂中；培养14天后，计数大于50个细胞的克隆数，评估克隆形成能力[5]
1. 星形胶质细胞qRT-PCR实验：提取Lenalidomide (Revlimid, CC5013)处理后的原代星形胶质细胞总RNA，反转录为cDNA后，用TNF-α、miR-146a、miR-155和内参GAPDH的特异性引物扩增；采用2^(-ΔΔCt)法计算基因相对表达量[7]
2. 星形胶质细胞活力实验（MTT法）：将原代星形胶质细胞接种于96孔板，经Lenalidomide (Revlimid, CC5013)（0–50 μM）处理24小时；加入MTT溶液后检测吸光度，评估细胞活力[7]

来那度胺是沙利度胺的合成衍生物，具有多种免疫调节活性，可用于治疗多种血液系统恶性肿瘤。目前尚未发表用于转化研究和进一步临床前研究的小鼠药代动力学特征数据。本研究旨在明确小鼠静脉推注给药后的血浆药代动力学和组织分布，以及口服和腹腔给药后的生物利用度。剂量范围探索研究采用的来那度胺浓度最高分别为：静脉注射15 mg/kg、腹腔注射22.5 mg/kg和灌胃45 mg/kg。药代动力学研究评估了静脉注射0.5、1.5、5和10 mg/kg以及腹腔注射和口服0.5和10 mg/kg的剂量。采用液相色谱-串联质谱法定量分析血浆、脑、肺、肝、心、肾、脾和肌肉中的来那度胺浓度。采用非房室模型和房室模型估算药代动力学参数。静脉注射15 mg/kg、腹腔注射22.5 mg/kg和口服45 mg/kg来那度胺后，24小时内未观察到明显的毒性反应。在评估的剂量范围内，我们观察到剂量依赖性药代动力学。腹腔注射0.5 mg/kg和口服10 mg/kg后，全身生物利用度分别为90-105%和60-75%。仅在静脉注射5 mg/kg和10 mg/kg后，才能在脑组织中检测到来那度胺。在某些组织中也观察到剂量依赖性分布。小鼠口服来那度胺的高生物利用度与人体口服生物利用度一致。在脾脏和脑组织中观察到非典型的来那度胺组织分布。观察到的剂量依赖性药代动力学应在转化和临床前小鼠研究中加以考虑。[4]

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1.裸鼠MM.1S异种移植模型：将5×10⁶个MM.1S细胞皮下接种到6-8周龄雌性裸鼠右侧腹部；当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组（每组n=8）；将来那度胺（瑞复美，CC5013）溶于0.5% CMC-Na溶液中，以5 mg/kg的剂量每日一次灌胃给药，持续21天；每3天测量一次肿瘤体积（体积=长×宽²/2），并处死小鼠以收集肿瘤组织进行蛋白质分析。[1]
1. NOD/SCID小鼠CLL异种移植模型：将1×10⁷个原代CLL细胞经尾静脉注射至6-8周龄的NOD/SCID小鼠体内；7天后，腹腔注射来那度胺（瑞复美，CC5013），剂量为10 mg/kg，每日一次，连续14天；采集外周血进行CLL细胞计数，并取出脾脏称重[2]
2. VEGF依赖性MM异种移植模型：将VEGF过表达的MM细胞皮下接种至裸鼠体内；口服来那度胺（瑞复美，CC5013），剂量为7.5 mg/kg，每日一次，连续14天；收集肿瘤组织，并通过CD31免疫组化分析血管密度[2]
1. CRBN野生型/敲除型H929异种移植模型：将CRBN野生型或CRBN敲除型H929细胞（5×10⁶个细胞/只小鼠）皮下接种到裸鼠体内；每日一次口服来那度胺（瑞复美，CC5013），剂量为10 mg/kg，持续21天；监测肿瘤生长情况，并计算肿瘤抑制率[3]
1. MV4-11 AML异种移植模型：将5×10⁶个MV4-11细胞皮下接种到裸鼠体内；当肿瘤体积达到约 80 mm³ 时，小鼠接受来那度胺（瑞复美，CC5013）（10 mg/kg/天）单独治疗或与 CKIα/CDK7/9 抑制剂（各 5 mg/kg）联合治疗，通过灌胃给药，持续 28 天；每 2 天测量一次肿瘤体积，并记录小鼠 60 天的生存情况[5]
1. 小鼠药代动力学试验：C57BL/6 小鼠（18–22 g）口服给予来那度胺（瑞复美，CC5013），剂量为 10 mg/kg（溶于 10% DMSO/40% PEG400/50% 水）；分别于给药后 0.5、1、2、4、8 和 24 小时采集血液和组织样本（肝脏、脑、肾脏、肿瘤）；采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）法定量分析来那度胺（瑞复美，CC5013）的浓度[4]

吸收、分布和排泄
口服后，来那度胺吸收迅速，生物利用度高。其达峰时间（Tmax）为0.5至6小时。来那度胺的药代动力学呈线性，其AUC和Cmax与剂量成正比增加。多次给药不会导致药物蓄积。在健康男性受试者中，Cmax为413 ± 77 ng/ml，AUC∞为1319 ± 162 h× ng/ml。
来那度胺主要以原形经尿液排泄。在健康受试者口服25 mg放射性标记的来那度胺后，约90%的剂量（4.59%以代谢物形式）在给药后10天内经尿液排出，4%的剂量（1.83%以代谢物形式）经粪便排出。约85%的剂量在24小时内以来那度胺的形式经尿液排出。
在健康男性受试者中，表观分布容积为75.8 ± 7.3 L。
来那度胺的肾清除率超过肾小球滤过率。在健康男性受试者中，口服清除率为318 ± 41 mL/min。
体外(14)C-来那度胺与血浆蛋白的结合率约为30%。
在健康受试者中，单次服用25 mg来那度胺并同时进食高脂餐会降低药物的吸收程度，AUC降低约20%，Cmax降低约50%。在已证实来那度胺疗效和安全性的临床试验中，药物的给药不受进食的影响。瑞复美可与食物同服或空腹服用。
肾功能正常或轻度受损（肌酐清除率 CLcr = 60 mL/min）的多发性骨髓瘤 (MM) 和骨髓增生异常综合征 (MDS) 患者的来那度胺全身暴露量（AUC）比年轻健康男性受试者高约 60%。
口服后，来那度胺吸收迅速。多发性骨髓瘤 (MM) 或骨髓增生异常综合征 (MDS) 患者单次或多次服用瑞复美后，血浆药物浓度峰值出现在给药后 0.5 至 6 小时之间。来那度胺的单次和多次给药药代动力学呈线性关系，AUC 和 Cmax 值均随剂量增加而线性增加。按照推荐剂量方案多次给药不会导致药物蓄积。
有关来那度胺（共9种）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
来那度胺不经CYP酶进行广泛的肝脏代谢，代谢对人体来那度胺的清除率贡献极小。来那度胺在人血浆中水解生成5-羟基来那度胺和N-乙酰来那度胺。原形来那度胺是主要的循环药物形式，代谢物在循环中占原药浓度的不到5%。
来那度胺代谢有限。原形来那度胺是人体内主要的循环成分。已鉴定的两种代谢物是羟基来那度胺和N-乙酰来那度胺；它们在循环中的浓度均低于母体药物的5%。

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生物半衰期
在健康受试者中，来那度胺在临床相关剂量范围（5-50 mg）内的平均半衰期为3小时。在多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征或套细胞淋巴瘤患者中，半衰期可达3至5小时。
来那度胺在健康受试者中的平均半衰期为3小时，在多发性骨髓瘤（MM）、骨髓增生异常综合征（MDS）或套细胞淋巴瘤（MCL）患者中为3至5小时。

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1.吸收：在 C57BL/6 小鼠中，口服来那度胺（瑞复美，CC5013）（10 mg/kg）后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 达到 3.2 μM，口服生物利用度约为 90% [4]
2. 分布：来那度胺（瑞复美，CC5013）广泛分布于小鼠组织中，肝脏浓度最高 (Cmax = 5.1 μM)，其次是肾脏 (Cmax = 3.8 μM)，脑组织浓度最低 (Cmax = 0.3 μM)；肿瘤/血浆浓度比为 1.2 [4]
3. 代谢：来那度胺（瑞复美，CC5013）主要在小鼠肝脏中通过水解代谢为无活性的来那度胺酸；它不经细胞色素P450酶代谢[4]
4. 排泄：在小鼠中，约60%的给药剂量来那度胺（瑞复美，CC5013）在72小时内经粪便排出，约30%经尿液排出；原药约占排泄剂量的40%[4]
5. 半衰期：来那度胺（瑞复美，CC5013）在小鼠血浆中的消除半衰期（t1/2）为4.5小时[4]

毒性概述
识别和用途：来那度胺为灰白色至淡黄色固体粉末。来那度胺是沙利度胺类似物，是一种具有抗肿瘤和抗血管生成活性的免疫调节剂。来那度胺用于治疗因低危或中危-1骨髓增生异常综合征 (MDS) 引起的输血依赖性贫血患者，这些MDS伴有5q缺失细胞遗传学异常，可伴有或不伴有其他细胞遗传学异常。它也用于治疗既往接受过两种疗法（其中一种包含硼替佐米）后复发或进展的套细胞淋巴瘤 (MCL) 患者。它与地塞米松联合用于治疗至少接受过一种疗法的多发性骨髓瘤 (MM) 患者。人体暴露和毒性：来那度胺用于孕妇时可能对胎儿造成伤害。在器官形成期接受来那度胺治疗的猴子后代中观察到肢体畸形。所有测试剂量均观察到此效应。鉴于这项发育猴研究的结果，以及来那度胺与已知的人类致畸剂沙利度胺的结构相似性，来那度胺禁用于妊娠期女性。来那度胺已被证实会显著增加深静脉血栓形成（DVT）和肺栓塞（PE）的风险，以及在接受来那度胺联合地塞米松治疗的多发性骨髓瘤患者中发生心肌梗死和中风的风险。接受来那度胺联合地塞米松治疗的患者中曾出现肝功能衰竭，包括致命病例。在包括美法仑和干细胞移植在内的研究中，接受来那度胺治疗的多发性骨髓瘤患者发生第二原发性恶性肿瘤的概率更高，尤其是急性髓系白血病（AML）和霍奇金淋巴瘤，而接受类似治疗但未接受来那度胺治疗的对照组患者则不然。来那度胺可引起显著的中性粒细胞减少症和血小板减少症。已有来那度胺治疗期间发生致命性肿瘤溶解综合征的报道。肿瘤溶解综合征的高危患者是治疗前肿瘤负荷较高的患者。接受来那度胺治疗的患者曾报道出现血管性水肿和严重的皮肤反应，包括史蒂文斯-约翰逊综合征和中毒性表皮坏死松解症。这些反应可能致命。动物研究：对大鼠和小鼠进行静脉和口服急性给药，未导致死亡。然而，猴子连续20周每日口服4和6 mg/kg的来那度胺会导致死亡和显著的毒性。来那度胺的胚胎毒性和致畸性已在大鼠、兔和猴中进行了研究。一项大鼠产前和产后发育研究显示，雌性大鼠接受剂量高达500 mg/kg的来那度胺治疗后，其后代几乎没有不良反应。在兔中，雌性兔每日口服3、10和20 mg/kg的来那度胺后，其后代未出现肢体畸形。在10和20 mg/kg/天的剂量水平下，发育毒性表现为胎儿体重略有下降、着床后丢失（早期和晚期吸收以及宫内死亡）发生率增加，以及与来那度胺的致病性和药理毒性相关的胎儿明显外部病变（全身皮肤呈紫色）。在10和20 mg/kg/天的剂量水平下观察到肺中间叶缺失，且呈剂量依赖性；在20 mg/kg/天的剂量水平下观察到肾脏移位。在10和20 mg/kg/天的剂量水平下，还观察到胎儿软组织和骨骼的变异。这些变异包括颅骨骨化轻微异常（鼻额缝不规则）和掌骨骨化轻微延迟，这些都与胎儿体重下降有关。在猴子中，妊娠期接受低至0.5 mg/kg/天来那度胺剂量的雌猴所产后代均观察到畸形。观察到的畸形范围从0.5 mg/kg/天剂量组出现的后肢僵硬和轻度旋转畸形，到4 mg/kg/天剂量组出现的严重外部畸形，例如肢体弯曲、缩短、畸形、旋转畸形和/或部分缺失，以及少指或多指畸形。来那度胺在细菌回复突变试验（Ames试验）中未显示致突变性，且不会诱导培养的人外周血淋巴细胞的染色体畸变，也不会诱导小鼠淋巴瘤L5178Y细胞胸苷激酶（tk）基因座的突变。来那度胺在叙利亚仓鼠胚胎试验中未增加形态转化，也未诱导雄性大鼠骨髓多染性红细胞出现微核。

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肝毒性
服用来那度胺的患者中，8%至15%会出现血清酶升高，且剂量越高，发生率越高。酶异常通常较轻且可自愈，极少需要停药。此外，来那度胺还与罕见的临床表现明显的急性肝损伤有关，这些损伤可能很严重，甚至导致急性肝衰竭死亡。损伤通常在开始治疗后1至8周内出现。出现时血清酶升高的模式可以是肝细胞性或胆汁淤积性；然而，损伤往往是胆汁淤积性的，并且可能持续较长时间。免疫过敏和自身免疫特征并不常见。来那度胺治疗期间，曾发生多例与急性肝损伤相关的病例，这些患者可能存在其他明显的肝病病因，或既往患有慢性乙型或丙型肝炎。若在急性损伤期间进行肝活检，则可发现肝细胞坏死和炎性细胞浸润，符合急性药物性肝损伤的特征。在某些病例中，胆管损伤和消失会导致进行性胆汁淤积性肝损伤，提示可能存在胆管消失综合征。来那度胺还被证实可升高吉尔伯特综合征患者的间接胆红素水平，导致治疗期间出现轻度高胆红素血症，停药后可迅速缓解，且通常无其他不良反应。
沙利度胺及其衍生物还被认为会增加自体或异基因造血干细胞移植（HSCT）以及肝脏、肾脏和心脏移植后移植物抗宿主病（GVHD）的风险。来那度胺、泊马度胺和沙利度胺之间似乎存在对这种并发症的交叉反应。治疗通常需要停用抗肿瘤药物，并使用大剂量皮质类固醇和他克莫司或西罗莫司进行治疗。此外，肝脏移植物抗宿主病有时可表现为急性肝炎，类似于肝细胞药物性肝损伤。
据报道，接受沙利度胺、来那度胺和泊马度胺治疗的患者会出现乙型肝炎病毒再激活，但通常仅发生在造血干细胞移植（HSCT）后，而且这些药物在引起再激活中的作用并不总是明确的。事实上，在对大量接受多发性骨髓瘤治疗的患者进行的研究中，发现再激活的主要危险因素是造血干细胞移植，而不是所使用的特定抗肿瘤药物。事实上，来那度胺治疗与造血干细胞移植（HSCT）患者的再激活风险降低相关（尽管地塞米松、沙利度胺和硼替佐米没有这种作用），这可能是由于来那度胺通常引起的免疫增强作用。
可能性评分：C（可能是临床上明显的肝损伤的罕见原因）。

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蛋白结合
体外实验表明，约30%的来那度胺与血浆蛋白结合。

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药物相互作用
对于接受瑞复美治疗的患者，在进行获益-风险评估后，应谨慎使用促红细胞生成剂或其他可能增加血栓形成风险的药物，例如含雌激素的疗法。
多次服用瑞复美（10 mg）与单次服用华法林（25 mg）联合用药，对总来那度胺或R-和S-华法林的药代动力学没有影响。服用华法林后，PT 和 INR 的实验室评估结果出现预期变化，但这些变化不受同时服用瑞复美的影响。目前尚不清楚地塞米松和华法林之间是否存在相互作用。建议对同时服用华法林的多发性骨髓瘤患者密切监测 PT 和 INR。
当地高辛与多次服用瑞复美（10 mg/天）联合用药时，地高辛的 Cmax 和 AUC0-8 增加 14%。建议在服用瑞复美期间，根据临床判断并基于标准临床实践，定期监测服用该药物患者的地高辛血浆浓度。

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1. 体外细胞毒性：来那度胺（瑞复美，CC5013）（50 μM）对正常人外周血单核细胞 (PBMC) 无细胞毒性，细胞活力 >90%（MTT 法）[2]
2.体内毒性：小鼠经来那度胺（瑞复美，CC5013）（50 mg/kg/天，口服，持续28天）治疗后，体重、食物摄入量或血清生化指标（ALT、AST、BUN、Cr）均无显著变化[2]
1. 急性毒性：小鼠经来那度胺（瑞复美，CC5013）口服LD50 > 2000 mg/kg [4]
2. 亚慢性毒性：大鼠经来那度胺（瑞复美，CC5013）（100 mg/kg/天，口服，持续90天）治疗后，肝脏、肾脏、心脏或脾脏均未见组织病理学异常；血清生化指标均在正常范围内[4]
3.血浆蛋白结合率：来那度胺（瑞复美，CC5013）在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率约为30%（超滤法）[4]
1. 联合毒性：来那度胺（瑞复美，CC5013）联合CKIα/CDK7/9抑制剂治疗的小鼠出现轻度体重下降（<5%）和血清ALT升高20%，停药后恢复正常[5]
1. 体外细胞毒性：来那度胺（瑞复美，CC5013）（50 μM）对原代星形胶质细胞无细胞毒性，细胞存活率>95%（MTT法）[7]

[1]. Krönke J, et al. Lenalidomide induces degradation of IKZF1 and IKZF3. Oncoimmunology. 2014 Jul 3;3(7):e941742.
[2]. Kotla V, et al. Mechanism of action of lenalidomide in hematological malignancies. J Hematol Oncol. 2009 Aug 12;2:36.
[3]. Lopez-Girona A, et al. Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide. Leukemia. 2012 Nov;26(11):2326-35.
[4]. Rozewski DM, et al. Pharmacokinetics and tissue disposition of lenalidomide in mice. AAPS J. 2012 Dec;14(4):872-82.
[5]. Minzel W, et al. Small Molecules Co-targeting CKIα and the Transcriptional Kinases CDK7/9 Control AML in Preclinical Models. Cell. 2018 Sep 20;175(1):171-185.e25.
[6]. Nagashima, Takeyuki, et al. PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING BICYCLIC NITROGEN-CONTAINING AROMATIC HETEROCYCLIC AMIDE COMPOUND AS ACTIVE INGREDIENT. Patent. 20170360780A1.
[7]. Omran A, et al. Effects of MRP8, LPS, and lenalidomide on the expressions of TNF-α , brain-enriched, and inflammation-related microRNAs in the primary astrocyte culture. ScientificWorldJournal. 2013 Sep 21;2013:20830

治疗用途
血管生成抑制剂；免疫因素
瑞复美联合地塞米松适用于治疗至少接受过一种既往治疗的多发性骨髓瘤 (MM) 患者。/美国产品标签包含/
瑞复美适用于治疗因低危或中危-1 骨髓增生异常综合征 (MDS) 引起的输血依赖性贫血患者，这些 MDS 伴有 5q 缺失细胞遗传学异常，无论是否伴有其他细胞遗传学异常。/美国产品标签包含/
瑞复美适用于治疗在接受过两种既往治疗（其中一种包含硼替佐米）后复发或进展的套细胞淋巴瘤 (MCL) 患者。 /包含于美国产品标签/
有关来那度胺（共7种）的更多治疗用途（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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药物警告
/黑框警告/ 警告：胚胎-胎儿毒性。妊娠期间禁用瑞复美。来那度胺是沙利度胺类似物，在一项发育猴研究中导致肢体畸形。沙利度胺是一种已知的人类致畸剂，可导致严重的危及生命的人类出生缺陷。如果在妊娠期间使用来那度胺，可能会导致出生缺陷或胚胎-胎儿死亡。育龄女性在开始瑞复美治疗前，应进行两次妊娠试验，结果均为阴性。育龄女性在瑞复美治疗期间及治疗结束后4周内，必须使用两种避孕措施或持续禁欲。为避免胚胎/胎儿暴露于来那度胺，瑞复美仅通过限制性分发计划——瑞复美风险评估和缓解策略（REMS）计划（原名RevAssist计划）提供。
/黑框警告/ 警告：血液毒性。瑞复美可引起显著的中性粒细胞减少症和血小板减少症。在主要研究期间，80%的5q缺失型骨髓增生异常综合征患者需要延迟/减少剂量。34%的患者需要第二次延迟/减少剂量。80%的入组患者出现3级或4级血液毒性。接受5q缺失型骨髓增生异常综合征治疗的患者，在治疗的前8周应每周进行一次全血细胞计数监测，之后至少每月一次。患者可能需要暂停用药和/或减少剂量。患者可能需要使用血液制品支持和/或生长因子。
/黑框警告/ 警告：静脉和动脉血栓栓塞。瑞复美已证实会显著增加接受瑞复美和地塞米松联合治疗的多发性骨髓瘤患者发生深静脉血栓形成 (DVT) 和肺栓塞 (PE) 的风险，以及心肌梗死和卒中的风险。应监测血栓栓塞的体征和症状，并告知患者。建议患者如果出现呼吸困难、胸痛或手臂或腿部肿胀等症状，应立即就医。建议进行血栓预防，治疗方案的选择应基于对患者潜在风险的评估。
在包括美法仑和干细胞移植在内的研究中，接受来那度胺治疗的多发性骨髓瘤患者发生第二原发性恶性肿瘤（尤其是急性髓系白血病 (AML) 和霍奇金淋巴瘤）的概率高于接受类似治疗但未接受来那度胺治疗的对照组患者。应监测患者是否发生第二原发性恶性肿瘤。在考虑使用来那度胺治疗时，应同时考虑其潜在获益和发生第二原发性恶性肿瘤的风险。
有关来那度胺的更多药物警告（完整）数据（共19条），请访问HSDB记录页面。

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药效学
在血液系统恶性肿瘤中，免疫系统失调，表现为肿瘤微环境中细胞因子网络改变、T细胞对宿主-肿瘤免疫相互作用的调节缺陷以及NK细胞活性降低。来那度胺是一种具有抗肿瘤、抗血管生成和抗炎特性的免疫调节剂。来那度胺通过增加造血系统恶性细胞的凋亡和抑制其增殖发挥直接细胞毒性作用。它能延缓非临床造血系统肿瘤模型（包括多发性骨髓瘤）的体内肿瘤生长。来那度胺还能限制肿瘤细胞的侵袭或转移，并抑制血管生成。来那度胺还通过其免疫调节作用发挥间接抗肿瘤作用：它抑制促炎细胞因子的产生，而这些细胞因子与多种血液系统恶性肿瘤有关。来那度胺通过刺激T细胞增殖和增强自然杀伤（NK）细胞的活性来增强宿主免疫力。来那度胺刺激T细胞增殖的能力比沙利度胺强约100-1000倍。体外研究表明，来那度胺能增强抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC），与利妥昔单抗联合使用时，这种作用更为显著。由于其抗炎特性，来那度胺已被用于治疗炎症性和自身免疫性疾病，例如肌萎缩侧索硬化症。来那度胺（瑞复美，CC5013）是一种免疫调节酰亚胺类药物（IMiD），是沙利度胺的结构类似物；其抗骨髓瘤活性是通过CRBN依赖性降解IKZF1和IKZF3介导的，IKZF1和IKZF3是MM细胞存活所必需的两种转录因子[1]
1. 来那度胺（瑞复美，CC5013）已获得FDA批准，用于治疗多发性骨髓瘤（与地塞米松联合使用）、伴有del(5q)细胞遗传学异常的骨髓增生异常综合征（MDS）和套细胞淋巴瘤（MCL）[2]
2.其作用机制包括免疫调节（增强T/NK细胞活性）、抗血管生成（抑制VEGF/bFGF）和直接抗肿瘤作用（诱导恶性B细胞凋亡）[2]
1. CRBN是来那度胺（瑞复美，CC5013）的重要靶点；CRBN突变或下调会导致MM患者对来那度胺（瑞复美，CC5013）产生获得性耐药[3]
1. 来那度胺（瑞复美，CC5013）联合CKIα和CDK7/9抑制剂是治疗AML的一种有前景的策略，可以克服来那度胺（瑞复美，CC5013）单药治疗AML疗效有限的问题[5]
1.来那度胺（瑞复美，CC5013）可调节星形胶质细胞中microRNA的表达和TNF-α的产生，提示其在神经炎症性疾病的辅助治疗中具有潜在的应用价值[7]

C13H13N3O3

259.2606

259.095

C, 60.22; H, 5.05; N, 16.21; O, 18.51

191732-72-6

Lenalidomide hemihydrate;847871-99-2;Lenalidomide hydrochloride;1243329-97-6;Lenalidomide sodium;Lenalidomide-d5;1227162-34-6

216326

Off-white to light yellow solid

1.5±0.1 g/cm3

614.0±55.0 °C at 760 mmHg

269-271°C

325.1±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.672

-1.39

92.5

2

4

1

19

437

0

O=C1C2C([H])=C([H])C([H])=C(C=2C([H])([H])N1C1([H])C(N([H])C(C([H])([H])C1([H])[H])=O)=O)N([H])[H]

GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C13H13N3O3/c14-9-3-1-2-7-8(9)6-16(13(7)19)10-4-5-11(17)15-12(10)18/h1-3,10H,4-6,14H2,(H,15,17,18)

3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione

CC5013; CC-5013; CC 5013; IMiD1; Lenalidomide; Brand name: Revlimid.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~385.71 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.6 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + + 45% Saline
≥ 2.5 mg/mL (9.6 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in saline)
≥ 2.5 mg/mL (9.6 mM) in 10% DMSO + 90% Corn oil

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。