| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 靶点 |
Immunomodulation; Cereblon E3 ligase
Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) inhibitor. [1] CRBN-DDB1-CUL4A-ROC1 E3 ubiquitin ligase complex (CRBN-CRL4). [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
来那度胺对 T 细胞增殖、IFN-γ 产生和 IL-2 产生有很强的影响。已证明来那度胺可增加人 PBMC 中抗炎细胞因子 IL-10 的合成，同时抑制促炎细胞因子 TNF-α、IL-1、IL-6 和 IL-12 的产生。来那度胺通过阻止骨髓基质细胞（BMSC）与多发性骨髓瘤（MM）细胞之间的接触，直接或间接减少IL-6的产生，从而增加骨髓瘤细胞的凋亡[2]。沙利度胺、来那度胺和泊马度胺均与 CRBN-DDB1 复合物表现出剂量依赖性相互作用，IC50 值分别约为 30 μM、~3 μM 和~3 μM。在 0.01 至 10 μM 的剂量反应范围内，这些 CRBN 表达减少的细胞（U266-CRBN60 和 U266-CRBN75）对来那度胺的抗增殖作用表现出比原始细胞更低的敏感性[3]。来那度胺是沙利度胺的类似物，充当人 E3 泛素连接酶 cereblon 和 CKIα 之间的分子粘合剂，导致该激酶泛素化和降解，并可能通过 p53 激活导致白血病细胞死亡[5]。
用来那度胺盐酸盐 (2 µM) 预处理大鼠原代星形胶质细胞6小时，再使用促炎介质（MRP8或LPS）刺激，能显著下调由MRP8或LPS单独刺激引起的TNF-α表达上调。[1] 用来那度胺盐酸盐 (2 µM) 预处理后，再经MRP8或LPS刺激的大鼠原代星形胶质细胞中，脑富集miRNAs (miR-124, miR-134, miR-9, miR-132) 和炎症相关miRNAs (miR-146a, miR-21, miR-181a, miR-221, miR-222) 的表达出现显著下调，而这些miRNAs的表达在单独使用MRP8或LPS刺激时是上调的。相反，被MRP8或LPS刺激下调的miR-138表达，在来那度胺盐酸盐预处理后则显著上调。[1] 来那度胺特异性抑制成熟B细胞淋巴瘤（包括多发性骨髓瘤细胞）的生长。[2] 来那度胺抑制单核细胞释放肿瘤坏死因子（TNF）。[2] 基于在多发性骨髓瘤细胞中进行的SILAC（稳定同位素氨基酸标记）定量质谱分析，来那度胺处理增加了转录因子IKZF1（Ikaros）和IKZF3（Aiolos）的泛素化水平并降低了其蛋白水平。在不同细胞系和患者样本中的验证实验证实，来那度胺（以及沙利度胺和泊马度胺）能降低内源性和异位表达的IKZF1和IKZF3的蛋白水平，但不影响Ikaros家族其他成员（IKZF2, IKZF4, IKZF5）。[2] 来那度胺与CRBN-CRL4 E3连接酶复合体中的底物衔接蛋白CRBN结合，这种结合增强了CRBN与转录因子IKZF1/IKZF3之间的相互作用。体外泛素化反应证明，在来那度胺存在下，IKZF1和IKZF3是CRBN-CRL4 E3连接酶的直接底物。[2] 使用特异性shRNA敲低IKZF1和IKZF3，或表达显性负性IKZF3突变体，可抑制多发性骨髓瘤细胞系的生长和存活，模拟了来那度胺的效果。[2] 在T细胞中，IKZF3是白细胞介素-2（IL-2）的转录抑制因子。来那度胺介导的IKZF3降解导致IL-2表达和释放增加，这解释了该药物的免疫调节活性。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
来那度胺以 15、22.5 和 45 mg/kg 剂量静脉注射、腹腔注射和口服给药的毒性。这些最高可行的来那度胺剂量受到我们 PBS 给药介质中溶解度的限制，具有良好的耐受性，但 15 mg/kg IV 剂量时有一只小鼠死亡（四只总剂量中）。值得注意的是，在 15 mg/kg (n = 3) 或 10 mg/kg (n = 45) 的 IV 剂量或通过 IV、IP 和 PO 途径的任何其他剂量水平下，研究中没有发现进一步的毒性[4 ]。
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| 酶活实验 |
荧光热熔法测定化合物与重组CRBN的结合[3]
CRBN–DDB1在邻苯二甲酰亚胺、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺存在或不存在的情况下的热稳定性是在Sypro Orange存在的微板形式下进行的，根据Pantoliano等人 μl测定缓冲液（25 mℳTris-HCl，pH 8.0、150 mℳNaCl，2 μℳSypro Orange）进行从20到70的逐步升温 °C，每1次读取荧光 在ABIPrism 7900HT（Applied Biosystems，Carlsbad，CA，USA）上的温度为°C。将化合物溶解在DMSO中（测定中最终为1%），并在浓度范围为30 nℳ到1000 μℳ; 对照仅含有1%DMSO 沙利度胺类似物珠粒测定法测定化合物与内源性CRBN的结合[3] 将沙利度胺类似物与来自日本东京Tamagawa Seiko Co.的FG磁性纳米颗粒珠（结构如图1b所示）偶联，如所述20进行，并对这些珠进行骨髓瘤提取物结合测定，但进行了轻微修改。U266、DF15或DF15R骨髓瘤细胞提取物或HEK293T提取物在NP 40裂解缓冲液（0.5%NP40，50 mℳTris-HCl（pH 8.0）），150 mℳNaCl，0.5 mℳ二硫苏糖醇，0.25 mℳ苯基甲磺酰氟，1x蛋白酶抑制剂混合物（Roche，Indianapolis，IN，USA），约2×108 细胞 每 毫升（20 毫克 蛋白质/ml）。通过离心清除细胞碎片和核酸（14 000 下午30点 最小4 °C）。竞赛实验0.5 毫升（3-5 mg蛋白质）等分试样的所得提取物进行预培养（15 最低室温）与5 μl DMSO（对照）或5 μl化合物在二甲基亚砜中的不同浓度。沙利度胺类似物偶联珠（0.3–0.5 mg）添加到蛋白质提取物中，并旋转样品（2 h、 4 °C）。珠子用0.5洗涤三次 ml NP40缓冲液，然后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS–PAGE）样品缓冲液洗脱结合蛋白。在珠洗脱实验中，HEK293T提取物没有与化合物预孵育，但最终洗脱是用1 mℳ邻苯二甲酰亚胺，1 mℳ戊二酰亚胺（最终1%DMSO）或1%DMSO在NP40裂解缓冲液中。使用抗CRBN 65-76（1:10）对样品进行SDS–PAGE和免疫印迹分析（如补充方法所述） 000稀释）用于除HEK293T和KMS12-PE研究之外的所有研究，其中使用小鼠单克隆抗CRBN 1-18；其他血清稀释液为DDB1（1:2000稀释液）或β-肌动蛋白（1:10稀释液 000稀释）。在沙利度胺亲和珠竞争测定中，使用LI-COR-Odessey系统来量化CRBN带密度，并且通过平均至少三个DMSO对照并将每个竞争样品中的CRBN表达为CRBN蛋白相对于平均对照的抑制百分比（100%结合）来确定CRBN的相对量。近似IC50值通过GraFit（Erithacus软件，英国萨里）确定。 |
| 细胞实验 |
细胞泛素化测定[3]
稳定表达FLAG-HA标记（FH）-CRBN或FH-CRBNYW/AA的HEK293T细胞处理3 在用蛋白酶体抑制剂MG132（10 μℳ）或未经治疗。如所述20制备裂解物，并与抗FLAG（M2，Sigma，St Louis，MO，USA）琼脂糖珠孵育。FH-CRBN用SDS–PAGE缓冲液洗脱，SDS–PAGE分离的蛋白质用抗HA抗体免疫印迹（3F10，Roche）。除非另有说明，否则将化合物加入细胞3 添加MG132之前的h。 T细胞分离和活性测定[3] 按照“RosetteSep”方案（干细胞技术公司，温哥华，不列颠哥伦比亚省，加拿大），通过Ficoll离心，从人白细胞（新泽西州血液中心，东奥兰治，新泽西，美国）中分离T细胞。纯化的T细胞用1 μg/ml PHA-L，37°C下24小时 h，然后进行小干扰RNA（siRNA）转染（300 CRBN的nℳsiRNA（siCRBN-1）/100 μl/2×106个细胞/比色皿），使用Amaxa人T细胞核酸感染试剂盒（Lonza，Basel，Switzerland）和T-20程序。对照低GC含量阴性siRNA也被转染。转染的细胞在含有10%胎牛血清的RPMI中培养，37 °C持续24 h.收集细胞（1×106），通过定量逆转录聚合酶链式反应测量敲除效率。将剩余的转染细胞接种在预结合的OKT3（3 μg/ml）96孔TC板在1.25×106 细胞/200 μl/孔，用二甲基亚砜或化合物在37 °C持续48 h.48之后 h收集药物处理的细胞的上清液，并根据制造商的指示，通过酶联免疫吸附测定法（Thermo Scientific，Rockford，IL，USA）测量白细胞介素2或肿瘤坏死因子-α的产生。siCRBN 1转染的T细胞在72 使用CRBN 65-76抗血清通过免疫印迹分析测定转染后h和CRBN蛋白减少。使用低GC siRNA转染的细胞作为阴性对照。 从新生Sprague-Dawley大鼠的大脑皮层分离原代星形胶质细胞。组织用胰蛋白酶和DNase消化，细胞在添加胎牛血清、L-谷氨酰胺、青霉素和链霉素的高糖DMEM中培养。细胞在37°C、5% CO2条件下培养，并通过反复胰蛋白酶消化进行纯化。通过GFAP免疫荧光染色确认星形胶质细胞纯度（>95%）。实验使用培养21天的星形胶质细胞进行。[1] 对于TNF-α抑制研究，将星形胶质细胞分组。一组用含有来那度胺盐酸盐 (2 µM) 的无血清DMEM预处理6小时，然后用含有MRP8 (0.5 µg/mL)的DMEM刺激24小时。另一组用类似方式用来那度胺盐酸盐预处理，然后用含有LPS (1000 ng/mL)的DMEM刺激24小时。对照组包括静息星形胶质细胞（无血清DMEM培养30小时）以及未用抑制剂预处理、仅用MRP8或LPS刺激的星形胶质细胞。[1] 使用Trizol试剂和氯仿提取法从星形胶质细胞中分离总RNA，随后用异丙醇沉淀并用乙醇洗涤。通过分光光度法测量RNA浓度和纯度。[1] 对于miRNA表达分析，使用特定的miRNA cDNA合成试剂盒从RNA合成cDNA。使用SYBR Green预混液和针对每个靶标miRNA (miR-124, -134, -9, -132, -138, -146a, -21, -181a, -221, -222) 的特异性引物进行定量PCR (qPCR)。U6小核RNA用作内参。使用比较CT法计算相对表达水平。[1] 对于TNF-α mRNA表达分析，使用带有 oligo dT 和随机引物的逆转录试剂盒合成cDNA。使用SYBR Green预混液和大鼠TNF-α特异性引物进行qPCR。β-Actin用作内参。使用比较CT法计算相对表达水平。[1] |
| 动物实验 |
来那度胺是沙利度胺的合成衍生物，具有多种免疫调节活性，可用于治疗多种血液系统恶性肿瘤。目前尚未发表用于转化研究和进一步临床前研究的小鼠药代动力学特征数据。本研究旨在明确小鼠静脉推注给药后的血浆药代动力学和组织分布，以及口服和腹腔给药后的生物利用度。剂量范围探索研究采用的来那度胺浓度最高分别为：静脉注射15 mg/kg、腹腔注射22.5 mg/kg和灌胃45 mg/kg。药代动力学研究评估了静脉注射0.5、1.5、5和10 mg/kg以及腹腔注射和口服0.5和10 mg/kg的剂量。采用液相色谱-串联质谱法定量分析血浆、脑、肺、肝、心、肾、脾和肌肉中的来那度胺浓度。采用非房室模型和房室模型估算药代动力学参数。静脉注射15 mg/kg、腹腔注射22.5 mg/kg和口服45 mg/kg来那度胺后，24小时内未观察到明显的毒性反应。在评估的剂量范围内，我们观察到剂量依赖性药代动力学。腹腔注射0.5 mg/kg和口服10 mg/kg后，全身生物利用度分别为90-105%和60-75%。仅在静脉注射5 mg/kg和10 mg/kg后，才能在脑组织中检测到来那度胺。在某些组织中也观察到剂量依赖性分布。小鼠口服来那度胺的高生物利用度与人体口服生物利用度一致。在脾脏和脑组织中观察到非典型的来那度胺组织分布。在转化和临床前小鼠研究中，应考虑观察到的剂量依赖性药代动力学。[4]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
盐酸来那度胺是沙利度胺的衍生物，属于免疫调节药物。与沙利度胺相比，它被认为是一种更有效的TNF-α抑制剂。[1] 研究表明，星形胶质细胞中脑特异性和炎症相关miRNA的表达变化可能与TNF-α表达的变化有关，因为预先使用TNF-α抑制剂盐酸来那度胺可以逆转这些miRNA的变化。这些miRNA可能代表中枢神经系统疾病中细胞特异性治疗干预的新靶点。[1] 来那度胺是沙利度胺的类似物，被开发为一种更有效的免疫调节药物（IMiD）。 [2]
该分子的作用机制涉及与CRBN-CRL4 E3泛素连接酶复合物结合，随后靶向淋巴转录因子IKZF1和IKZF3进行泛素化和蛋白酶体降解。在多发性骨髓瘤细胞中，IKZF1/IKZF3的降解会下调其转录靶点IRF4（干扰素调节因子4），进而下调c-MYC，最终抑制细胞生长和存活。在T细胞中，IKZF3的降解会解除对IL-2基因的抑制，刺激IL-2的产生。这种双重机制解释了其在B细胞恶性肿瘤中的抗肿瘤活性和免疫刺激作用。 [2] 母体药物沙利度胺的致畸性与其抑制 CRBN-CRL4 E3 连接酶活性有关，但导致肢体畸形的特定底物与 IKZF1/IKZF3 不同。同样，来那度胺治疗伴有 del(5q) 的骨髓增生异常综合征的疗效及其对单核细胞中 TNF-α 抑制的作用可能涉及其他未鉴定的 CRBN-CRL4 底物的降解。[2] 来那度胺作用机制的发现揭示了一种新的治疗策略：小分子“分子胶”，通过调节 E3 泛素连接酶活性来诱导特定致病蛋白的降解。[2] |
| 分子式 |
C13H14CLN3O3
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|---|---|
| 分子量 |
295.72
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| 精确质量 |
295.072
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| CAS号 |
1243329-97-6
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| 相关CAS号 |
191732-72-6; 847871-99-2 (Lenalidomide hemihydrate)
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| PubChem CID |
44234581
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| 外观&性状 |
Off-white to light grey solid
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| LogP |
1.679
|
| tPSA |
92.5
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
20
|
| 分子复杂度/Complexity |
437
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C1C2=CC=CC(N)=C2CN1C(C(N3)=O)CCC3=O.[H]Cl
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| InChi Key |
RYWZLJSDFZVVTD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H13N3O3.ClH/c14-9-3-1-2-7-8(9)6-16(13(7)19)10-4-5-11(17)15-12(10)18;/h1-3,10H,4-6,14H2,(H,15,17,18);1H
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| 化学名 |
3-(4-amino-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione hydrochloride
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| 别名 |
CC-5013; CC 5013;CC-5013 hydrochloride; CC5013; IMiD1; trade name: Revlimid.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : >100 mg/mL (~385.71 mM)
H2O : >5 mg/mL (~16.5 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3816 mL | 16.9079 mL | 33.8158 mL | |
| 5 mM | 0.6763 mL | 3.3816 mL | 6.7632 mL | |
| 10 mM | 0.3382 mL | 1.6908 mL | 3.3816 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Thalidomide-pyrrolidine
OICR-41103N
CDK12-Cyclin K ligand-1
(S,S,S)-AHPC-Me
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COA
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463611831
