| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Milademetan (DS-3032b; DS-3032) is a small molecule inhibitor of MDM2, which disrupts the binding of MDM2 to the transcriptional activation domain of TP53, thereby reactivating TP53 signaling[4].
The primary target of milademetan is MDM2 (murine double minute 2), an E3 ubiquitin ligase that negatively regulates the tumor suppressor p53. Milademetan is a potent and selective inhibitor of the MDM2-p53 protein-protein interaction . |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在野生型 TP53 神经母细胞瘤细胞中，美乐美坦 (DS-3032) 选择性诱导 CDKNA1、BAX 和 MDM2 的表达，同时稳定 TP53 [3]。美乐美坦 (DS-3032b) 治疗会增加 TP53 靶基因的表达，并导致细胞凋亡、衰老和 G1 细胞周期停滞 [3]。无论 MYCN 状态如何，美乐美坦 (DS-3032b，0-2000 nM) 治疗都会特异性抑制含有野生型 TP53 的神经母细胞瘤细胞的活力、增殖和迁移 [4]。
用Milademetan (DS-3032b)处理携带野生型TP53的神经母细胞瘤细胞系（SK-N-SH、SH-SY5Y、IMR32、IMR5、LAN5）可呈剂量和时间依赖性降低细胞活力，而TP53突变细胞系Kelly的敏感性显著较低[4]。 DS-3032b处理（48小时）以剂量依赖性方式降低了所有野生型TP53细胞系中溴脱氧尿苷的掺入[4]。 DS-3032b（250 nM，24小时）减少了所有野生型TP53细胞系（除LAN5外）的划痕愈合（迁移）能力[4]。 DS-3032b（125和250 nM，48小时）在野生型TP53细胞系中诱导G1期细胞周期阻滞并增加衰老相关的β-半乳糖苷酶活性[4]。 DS-3032b在野生型TP53细胞系中上调MDM2、CDKN1A和BAX蛋白表达，并增加TP53蛋白水平[4]。 通过膜联蛋白V/PI染色和caspase-3活性测定，DS-3032b在野生型TP53细胞系中诱导了细胞凋亡[4]。 DS-3032b同样在携带野生型TP53的原代神经母细胞瘤细胞（OHC-NB-1）中诱导了凋亡[4]。 稳定表达显性失活TP53突变体减弱了DS-3032b介导的细胞活力降低、凋亡诱导和TP53靶基因上调[4]。 CRISPR介导的MDM2敲除通过降低细胞活力模拟了DS-3032b的处理效果[4]。 微阵列分析显示，DS-3032b处理上调了SH-SY5Y和IMR5细胞中的TP53信号通路基因，并下调了细胞周期进程相关基因[4]。 Milademetan在多种癌细胞系中显示出强效的体外活性。它特异性地在TP53野生型细胞系中降低细胞活力。在梅克尔细胞癌模型中，milademetan触发快速且持续的p53反应，并显示出剂量依赖性的肿瘤细胞生长抑制作用 。临床前测试表明，在TP53野生型背景下同时存在CDKN2A纯合缺失的细胞系对milademetan高度敏感，中位IC50为79.5 nM，而在TP53突变或CDKN2A非纯合缺失的细胞系中，IC50高达10,000 nM 。该化合物对MDM2扩增、TP53野生型的实验室模型也显示出强效活性 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Milademetan（DS-3032b，50 mg/kg，口服）异种移植具有功能性 TP53 的神经母细胞瘤细胞，延缓肿瘤生长并提高存活率 [4]。
口服给予Milademetan (DS-3032b)（50 mg/kg，给药4天/停药2天的方案，持续30天）与载体对照组相比，显著抑制了裸鼠中SH-SY5Y异种移植瘤的生长[4]。 DS-3032b治疗延长了荷瘤小鼠的生存期[4]。 DS-3032b处理增加了肿瘤组织中TP53、CDKN1A和BAX的蛋白表达[4]。 免疫组织化学显示，在DS-3032b处理的小鼠肿瘤中，cleaved caspase-3（凋亡标记）增加，而Ki-67（增殖标记）减少[4]。 在体内，milademetan显示出显著的抗肿瘤活性。在梅克尔细胞癌的MKL-1异种移植模型和患者来源异种移植模型中，它表现出剂量依赖性的肿瘤生长抑制作用 。具有CDKN2A纯合缺失和野生型TP53的异种移植模型均显示出milademetan的肿瘤生长抑制作用。此外，在具有CDKN2A纯合缺失的colon-26同系模型中，milademetan与抗PD1抗体联用，与任一单药相比，肿瘤生长抑制效果显著增强 。 |
| 酶活实验 |
在所提供文献中未提供详细的实验方案。Milademetan被表征为MDM2-p53蛋白-蛋白相互作用的选择性抑制剂。该化合物通过与MDM2结合并阻止其与p53转录激活结构域的相互作用，从而抑制蛋白酶体介导的p53酶促降解 。
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| 细胞实验 |
细胞活力测定[4]
细胞类型： SK-N-SH、SH-SY5Y、IMR32、IMR5 和 LAN5 细胞系。 测试浓度：0-2000 nM。 孵化持续时间：24-72 小时。 实验结果：活力以剂量和时间依赖性方式减弱。在SK-N-SH、SH-SY5Y、IMR32、IMR5和LAN5细胞系（72小时）中，IC50值分别为21.9 nM、17.7 nM、52.63 nM、25.7 nM和44.1 nM。 细胞活力实验： 将细胞接种于96孔板中，贴壁24小时后，用0–2000 nM DS-3032b处理24、48或72小时[4]。使用XTT法评估细胞活力[4]。 增殖实验： 使用溴脱氧尿苷ELISA法测定DS-3032b处理48小时后的细胞增殖[4]。 衰老实验： 使用荧光法衰老相关的β-半乳糖苷酶活性测定试剂盒检测DS-3032b处理后的细胞衰老，并用细胞活力进行归一化[4]。 迁移实验： 进行了划痕实验[4]。细胞在低血清培养基中饥饿处理，划痕后，用0或250 nM DS-3032b处理24小时[4]。对划痕区域进行拍照和量化[4]。 细胞周期分析： 细胞用DS-3032b处理48小时，用碘化丙啶和RNase染色，并通过流式细胞仪进行分析[4]。 凋亡分析： 细胞用DS-3032b处理48小时，用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色，并通过流式细胞仪进行分析[4]。 Caspase-3活性测定： 细胞用DS-3032b处理48小时，裂解后与Ac-DEVD-AFC底物孵育[4]。通过荧光法测量caspase-3活性[4]。 Western blot分析： 细胞用DS-3032b处理48小时，裂解后通过SDS-PAGE分离蛋白，转移至膜上，并用TP53、MDM2、CDKN1A、BAX和Actin抗体进行检测[4]。 微阵列分析： 用125 nM DS-3032b处理SH-SY5Y和IMR5细胞24小时，使用Affymetrix GeneChip Human Gene 2.0 ST芯片分析基因表达[4]。 使用milademetan处理癌细胞系进行体外细胞实验，以评估细胞活力和p53通路激活情况。通过标准实验方法测量细胞活力，并通过评估下游靶基因表达或蛋白稳定性来评估p53反应。根据TP53和CDKN2A状态评估了215种癌细胞系对milademetan的敏感性，以确定IC50值 。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： SH-SY5Y 裸鼠异种移植瘤 [4]。
剂量： 50 mg/kg。给药方式：灌胃给药，连续 30 天，4 天灌胃给药后停药 2 天（4+2）。 实验结果： 小鼠组的生存期显著延长。通过激活 TP53 信号通路，神经母细胞瘤异种移植瘤的生长受到抑制。 异种移植瘤模型：将 SH-SY5Y 细胞皮下接种到雌性无胸腺 NCr (nu/nu) 小鼠的右侧腹部[4]。当肿瘤体积达到 150–250 mm³ 时，小鼠接受口服米拉地美坦 (DS-3032b)（50 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素）或载体治疗，给药方案为每日给药 4 天，停药 2 天，连续 30 天[4]。 TP53 信号通路激活研究：已建立 SH-SY5Y 异种移植瘤的小鼠接受 DS-3032b（100 mg/kg）口服治疗，共 4 次，分别在 36 小时内给药（0、12、24、36 小时）[4]。末次给药 4 小时后收集肿瘤进行分子分析[4]。 使用异种移植模型评估临床前药效。将人类肿瘤细胞系（如MKL-1）或患者来源的肿瘤组织植入免疫缺陷小鼠体内。Milademetan通常每日一次口服给药，采用多种间歇或连续给药方案。监测肿瘤生长抑制情况。在联合研究中，抗PD1抗体通过腹腔注射给药 。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
Milademetan是一种口服生物可利用的小分子。在首次人体I期研究中，进行了药代动力学分析以表征其吸收和暴露特征。推荐的II期剂量和方案（260 mg每日一次，每28天周期的第1-3天和第15-17天给药，即3/14天间歇方案）是根据PK/PD数据选择的，旨在减轻剂量限制性毒性的同时保持疗效 。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠异种移植研究中，DS-3032b治疗方案耐受性良好，未观察到体重减轻、身体状况改变或明显的毒性迹象[4]。
正在进行的针对血液系统恶性肿瘤成年患者的I期临床试验的初步结果表明，临床副作用可接受，包括骨髓抑制、肾脏和胃肠道症状[4]。 临床试验中观察到的最常见的3/4级治疗期间出现的不良事件包括血小板减少症（29.0%）、中性粒细胞减少症（15.0%）和贫血（13.1%）。采用间歇给药方案（3/14天）显著降低了这些高级别血液学异常的发生率（血小板减少症：15.0%，中性粒细胞减少症：5.0%，贫血：0%），同时保持了疗效。其他报告的不良事件包括胃肠道问题、疲劳、腹泻、白细胞减少症以及肾脏/电解质异常 。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
米拉地美坦（Milademetan）正在临床试验NCT02319369中进行研究（米拉地美坦单药及联合5-氮杂胞苷（AZA）治疗急性髓系白血病（AML）或高危骨髓增生异常综合征（MDS）的安全性、耐受性和药代动力学研究）。
米拉地美坦是一种口服有效的MDM2（鼠双微体2）拮抗剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，米拉地美坦可与MDM2蛋白结合，并阻止MDM2蛋白与肿瘤抑制蛋白p53的转录激活结构域结合。通过阻止MDM2-p53相互作用，可抑制蛋白酶体介导的p53酶促降解，从而恢复p53的转录活性。这最终导致p53信号通路的恢复，并诱导p53介导的肿瘤细胞凋亡。 MDM2 是一种锌指蛋白，也是 p53 通路的负调控因子，在癌细胞中过度表达；它与癌细胞的增殖和存活密切相关。 米拉德美坦 (DS-3032b) 是一种口服的非比例性 MDM2 抑制剂[4]。 原发性神经母细胞瘤中 MDM2 的高表达与患者生存率低和疾病侵袭性特征相关[4]。 DS-3032b 可重新激活具有野生型 TP53 的神经母细胞瘤细胞中的 TP53 信号通路，且与 MYCN 扩增状态无关[4]。 该研究支持对 DS-3032b 进行临床前评估，用于治疗高危、难治性或复发性神经母细胞瘤[4]。 Milademetan已在多项临床试验中接受评估，包括MANTRA（针对脂肪肉瘤的III期试验）、MANTRA-2（针对MDM2扩增实体瘤的II期试验）和MANTRA-4（计划与atezolizumab联用）。在一项针对MDM2扩增、TP53野生型实体瘤的II期试验中，客观缓解率为19.4%（6/31），包括一名子宫内膜间质肉瘤患者达到100%的靶病灶缩小。中位无进展生存期为3.5个月 。在去分化脂肪肉瘤中，疾病控制率为58.5%，中位PFS为7.2个月 。在髓系恶性肿瘤中，尽管耐受性相对良好，但临床疗效有限 。 |
| 分子式 |
C₃₀H₃₄CL₂FN₅O₄
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|---|---|
| 分子量 |
618.526468753815
|
| 精确质量 |
617.197
|
| 元素分析 |
C, 58.26; H, 5.54; Cl, 11.46; F, 3.07; N, 11.32; O, 10.35
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| CAS号 |
1398568-47-2
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| 相关CAS号 |
Milademetan tosylate hydrate;2095625-97-9; 1398568-47-2; 1398569-75-9
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| PubChem CID |
73297272
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
840.7±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
462.2±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±3.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.646
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| LogP |
3.54
|
| tPSA |
135
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
42
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| 分子复杂度/Complexity |
1090
|
| 定义原子立体中心数目 |
5
|
| SMILES |
CC1(CCC2(CC1)[C@@]3([C@H]([C@@H](N2)C(=O)N[C@@H]4CC[C@H](OC4)C(=O)N)C5=C(C(=NC=C5)Cl)F)C6=C(C=C(C=C6)Cl)NC3=O)C
|
| InChi Key |
RYAYYVTWKAOAJF-QISPRATLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H34Cl2FN5O4/c1-28(2)8-10-29(11-9-28)30(18-5-3-15(31)13-19(18)37-27(30)41)21(17-7-12-35-24(32)22(17)33)23(38-29)26(40)36-16-4-6-20(25(34)39)42-14-16/h3,5,7,12-13,16,20-21,23,38H,4,6,8-11,14H2,1-2H3,(H2,34,39)(H,36,40)(H,37,41)/t16-,20+,21+,23-,30-/m1/s1
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| 化学名 |
(3'R,4'S,5'R)-N-[(3R,6S)-6-carbamoyloxan-3-yl]-6''-chloro-4'-(2-chloro-3-fluoropyridin-4-yl)-4,4-dimethyl-2''-oxo-1'',2''-dihydrodispiro[cyclohexane-1,2'-pyrrolidine-3',3''-indole]-5'-carboxamide
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| 别名 |
DS-3032B; DS 3032B; Milademetan; 1398568-47-2; MDM2 inhibitor DS-3032; R3I80TLN7S; DS3032B; DS-3032; DS 3032; DS3032; Milademetan free base
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~16.67 mg/mL (~26.95 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (2.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 1.67 mg/mL (2.70 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (2.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6167 mL | 8.0837 mL | 16.1674 mL | |
| 5 mM | 0.3233 mL | 1.6167 mL | 3.2335 mL | |
| 10 mM | 0.1617 mL | 0.8084 mL | 1.6167 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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