| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 靶点 |
Pyruvate kinase (PK), including wild-type (WT) PK-R and various mutant PK-R (mtPK-R) enzymes encoded by PKLR genotypes
[1] Pyruvate kinase (PK), including wild-type (WT) PK and mutant PK enzymes[3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在健康供体红细胞中，mitapivat（0.1 nM-100 μM；16 小时）可激活 WT PK-R[1]。在红细胞中，mitapivat（0.01 nM-10 μM；16 小时）以剂量依赖性方式刺激 ATP 生成 [1]。
用 5 μM 的 Mitapivat 处理重组 WT PK-R 酶，经 PEP 刺激后，酶活性得到增强。PK-R 四聚体与 Mitapivat 形成的共晶复合物晶体结构显示，药物在变构结合口袋中存在关键相互作用，且结构中还含有 PEP 和 FBP[1] - Mitapivat 可激活多种重组 mtPK-R 酶。在 10 μM 浓度下，其对不同 mtPK-R 酶表现出不同的激活倍数和 AC₅₀ 值。例如，用 5 μM Mitapivat 预孵育重组 R532W mtPK-R 酶后，经 PEP 刺激，酶活性增强；在相同浓度（PEP = 0.05 mM）下，与 FBP 相比，Mitapivat 孵育可使该酶活性更高。此外，5 μM 的 Mitapivat 可提高 WT 或 R510Q 重组酶在 53°C 孵育后的残余活性，且对重组 R510Q 酶具有特定的解离速率（终 assay 浓度 5 μM，PEP = 2 mM）[1] - 健康供体的红细胞（RBCs）与不同浓度的 Mitapivat 过夜孵育后，WT PK-R 活性（PEP = 0.1 mM）和 ATP 水平均有所升高[1] - PK 缺乏症患者的 RBCs 经 Mitapivat 体外处理 24 小时后，大多数患者样本的 PK-R 活性（PEP = 0.5 mM）升高（平均升高 1.8 倍，范围 1.2-3.4），ATP 水平也有所增加（平均升高 1.5 倍，范围 1.0-2.2），这与对照细胞的 ATP 升高水平（平均升高 1.6 倍，范围 1.4-1.8）相近。PK 缺乏症 RBCs 中的 PK 热稳定性显著降低，但 Mitapivat 处理后，残余活性较溶媒处理组增加 1.4 至 >10 倍。在一半的患者中，该处理还与 RBC 变形能力的提高相关。然而，在 PK-R 蛋白水平极低或检测不到的患者细胞中，治疗效果微乎其微[3] - 用 Mitapivat 体外处理 β-地中海贫血患者的红系前体细胞，可增强红细胞生成、促进红系成熟并减少凋亡[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在β-地中海贫血小鼠模型中，mitapivat（50 mg/kg；口服；每天两次，持续 21 天）可改善贫血[2]。
小鼠按不同剂量水平每日两次给予 Mitapivat，连续 7 天，药物在血浆中可检测到，且每个剂量水平均计算出 AUC₀₋₁₂ 小时。检测小鼠 RBCs 中的 PK-R 活性（PEP = 0.1 mM）、ATP 水平以及全血中的 2,3-DPG 水平，并计算每个参数的 AUC₀₋₁₂ 小时（清晰展示 150 mg/kg 剂量水平的数据）[1] - 给 Hbbᵗʰ³/⁺ 小鼠（β-地中海贫血小鼠模型）口服 Mitapivat（50 mg/kg，每日两次），可改善无效红细胞生成和贫血。该药物能提高 ATP 水平，减少活性氧（ROS）产生，改善线粒体清除，从而降低线粒体功能障碍标志物。治疗还增强了对促红细胞生成素的反应性，导致可溶性红细胞生成素受体（erythroferrone）减少、肝脏 Hamp 表达增加，进而减轻肝脏铁过载。此外，Mitapivat 可能通过激活丙酮酸激酶 M2-HIF2α 轴降低十二指肠 Dmt1 表达，与 Hamp 共同调控铁吸收，预防肝脏铁过载。该治疗还能改善红细胞存活、减少溶血，并提高小鼠体内谷胱甘肽/谷胱甘肽二硫化物比率[2] |
| 酶活实验 |
将重组 PK-R 酶与不同浓度的 Mitapivat 孵育（PEP 设定为 0.065 mM），检测酶活性以评估 Mitapivat 的激活作用。进行技术重复实验，并记录平均值、标准差、范围和重复次数[1]
- 重组 WT PK-R 酶经 PEP 刺激，分为预先用 5 μM Mitapivat 孵育组和未孵育组，检测酶活性，采用 3 次技术重复的平均值进行数据分析[1] - 多种重组 mtPK-R 酶用 10 μM Mitapivat 处理（PEP 浓度见补充表格），测定激活倍数和 AC₅₀ 值，以评估 Mitapivat 对突变酶的激活效果[1] - 重组 R532W mtPK-R 酶经 PEP 刺激，分为预先用 5 μM Mitapivat 孵育组和未孵育组，检测酶活性（3 次技术重复的平均值）[1] - 重组 R532W mtPK-R 酶与不同浓度的 FBP 或 Mitapivat 孵育（PEP = 0.05 mM），检测酶活性以比较两种化合物的激活作用[1] - WT 或 R510Q 重组酶与 5 μM Mitapivat 在 53°C 孵育（PEP = 2 mM），随时间检测残余活性，以评估 Mitapivat 对酶热稳定性的影响[1] - 测定 Mitapivat 或 FBP（终 assay 浓度均为 5 μM，PEP = 2 mM）从重组 R510Q 酶上的解离速率，以评估药物与突变酶的结合动力学[1] - 采用偶联酶分光光度法检测健康供体、PK 缺乏症患者和小鼠 RBCs 中的 PK 活性（患者 B 除外，其活性通过液相色谱-串联质谱法直接测定丙酮酸生成量来评估）。在特定 PEP 浓度（如 0.1 mM、0.5 mM）下进行实验，以确定 Mitapivat 对 PK 活性的影响[1, 3] |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： RBC 细胞 测试浓度： 0.1 nM-100 µM 孵育时间： 16 小时（孵育过夜） 实验结果： PK-R 活性以剂量依赖性方式增加至 DMSO 对照的约 2.5 倍，AC50 为 62 nM。 细胞活力测定[1] 细胞类型： RBC 细胞 测试浓度： 0.01 nM-10 µM 孵育时间：16 小时（孵育过夜） 实验结果：以剂量依赖性方式持续增加 ATP 水平，比 DMSO 对照平均增加 60%，AC50 为10.9 nM。 健康供体的 RBCs 与不同浓度的 Mitapivat 过夜孵育后，检测 PK-R 活性（PEP = 0.1 mM）和 ATP 水平，以评估药物对健康 RBCs 的体外作用[1] - PK 缺乏症患者的 RBCs 与 Mitapivat 孵育 24 小时后，检测 PK-R 活性（PEP = 0.5 mM）和 ATP 水平。此外，将 PK 缺乏症患者的 RBC 裂解液与 2 mM Mitapivat 孵育（或不孵育）2 小时（37°C），随后在 53°C 下热处理不同时间（5、10、20、40、60 分钟），检测残余 PK 活性，以评估 PK 热稳定性[3] - 采用渗透扫描曲线评估 PK 缺乏症患者的 RBC 变形能力，并确定 Mitapivat 体外处理（20 mM，24 小时）对 RBC 变形能力的影响[3] - PK 缺乏症患者和健康对照的红系细胞体外培养，分为加入 2 mM Mitapivat 组和未加入组。观察增殖和分化不同阶段的细胞形态，检测细胞增殖（细胞数量百分比），并测定 PK/己糖激酶（HK）比率，以评估 Mitapivat 对红系细胞功能的影响[3] - 用 Mitapivat 体外处理 β-地中海贫血患者的红系前体细胞，评估其对红细胞生成、红系成熟和凋亡的影响[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： WT C57B6 和 Hbbth3/+ 小鼠（均为 2 月龄雌性小鼠；β-地中海贫血模型）[2]。
剂量： 50 mg/kg 给药途径： 饲喂动物饲料；每日一次，持续 3 周。 实验结果： Hbbth3/+ 小鼠红细胞和红系前体细胞中丙酮酸激酶同工酶的表达增加。Hbbth3/+ 小鼠细胞中丙酮酸激酶活性升高，红细胞中活性氧（ROS）水平显著升高。Hbbth3/+ 小鼠多染性成红细胞和正染性成红细胞中 PKM2 的表达增加。 动物/疾病模型： WT C57B6 和 Hbbth3/+ 小鼠（均为 2 月龄雌性小鼠；β-地中海贫血模型）[2]。 剂量： 50 mg/kg 给药途径： 灌胃给药，每日两次，持续 21 天。 实验结果： 改善了 Hbbth3/+ 小鼠的无效性红细胞生成和贫血，并增加了 ATP，降低了 ROS 生成，以及降低了与线粒体清除率提高相关的线粒体功能障碍标志物。 小鼠以不同剂量水平每日两次接受 Mitapivat 给药，持续 7 天。在特定时间点采集血样，以测定血浆中米他匹伐（Mitapivat）的浓度并计算AUC₀₋₁₂小时。同时采集红细胞和全血，以测定PK-R活性、ATP水平和2,3-DPG水平[1]。野生型（WT）和Hbbᵗʰ³/⁺小鼠（β-地中海贫血模型）分别接受赋形剂或米他匹伐（Mitapivat）治疗，剂量为50 mg/kg，每日两次，口服给药。治疗持续时间为21天。测量了多种参数，包括红细胞形态、血红蛋白 (Hb) 水平、平均红细胞体积 (MCV)、平均红细胞血红蛋白含量 (MCH)、网织红细胞计数、α-珠蛋白/β-珠蛋白比值、总血红蛋白和可溶性血红蛋白、活性氧 (ROS) 水平、谷胱甘肽/谷胱甘肽二硫化物比值、红细胞存活率（使用 CFSE 标记的红细胞）、血浆促红细胞生成素 (EPO) 水平、脾脏重量/小鼠体重比值、骨髓和脾脏红系细胞的流式细胞术分析、分选的成红细胞中 ATP 含量、Erfe mRNA 表达、血浆可溶性 ERFE 水平、线粒体含量（使用 MitoTracker）、线粒体基因（Atp6、Mtco1、Cytb、Pgc1a、Yme1l）的 mRNA 表达、肝脏铁染色（普鲁士蓝染色）和肝脏蛋白含量。氧化（OxyBlot）、铁调素（Hamp）和Id1的mRNA表达、肝脏蛋白（磷酸化NF-κB p65、NF-κB p65、pSTAT3、STAT3、pNRF2、NRF2）的Western blot分析、十二指肠铁染色、十二指肠蛋白（PKR、PKM2、HIF2α、pNF-κB p65、NF-κB p65）的Western blot分析以及Dmt1-IRE的mRNA表达[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收、分布和排泄
单次给药后，米他匹伐的绝对生物利用度约为73%。米他匹伐的暴露量与剂量成正比增加。每日两次口服米他匹伐，剂量分别为5 mg、20 mg和50 mg后，稳态时的平均（CV%）Cmax分别为101.2 (17%) ng/mL、389.9 (18%) ng/mL和935.2 (18%) ng/mL。平均（CV%）AUC分别为450.4 (28%) ng·h/mL、1623.8 (28%) ng·h/mL和3591.4 (28%) ng·h/mL。在每日两次、每次 5 mg 至 50 mg 的剂量范围内，稳态时的中位 Tmax 值为给药后 0.5 至 1.0 小时。在健康受试者中，高脂饮食不影响药物暴露量，但会降低米他匹伐的吸收率，与空腹给药相比，Cmax 降低 42%，Tmax 延迟 2.3 小时。米他匹伐主要通过肝脏代谢消除。健康受试者单次口服放射性标记的米他匹伐后，放射性药物的总回收率为 89.2%。约 49.6% 的放射性物质从尿液中回收，2.6% 以原形米他匹伐排出体外。约 39.6% 的放射性物质在粪便中回收，其中不到 1% 为原形药物。 稳态平均分布容积 (Vss) 为 42.5 L。 群体药代动力学推导的稳态中位清除率/粪便积 (CL/F) 分别为：每日两次 5 mg 组 11.5 L/h，每日两次 20 mg 组 12.7 L/h，每日两次 50 mg 组 14.4 L/h。 代谢/代谢物 根据体外研究，米他匹伐主要由 CYP3A4 代谢。它也是 CYP1A2、CYP2C8 和 CYP2C9 的底物。健康受试者单次口服 120 mg 放射性标记的米他匹伐后，血浆中主要的循环成分为未代谢的米他匹伐。 生物半衰期 丙酮酸激酶缺乏症患者每日两次服用 5 mg 至 20 mg 米他匹伐，米他匹伐的平均有效半衰期 (t1/2) 为 3 至 5 小时。 小鼠每日两次服用不同剂量米他匹伐，持续 7 天后，测定了血浆浓度，并计算了各剂量水平的 AUC0.5 小时[1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
蛋白质结合
米他匹伐与血浆蛋白的结合率为 97.7%，红细胞与血浆的比率为 0.37。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
药效学
米塔匹伐是一种丙酮酸激酶激活剂，可提高红细胞丙酮酸激酶的活性。红细胞丙酮酸激酶是一种负责红细胞能量产生和存活的酶。它能有效上调野生型和突变型红细胞丙酮酸激酶的活性。值得注意的是，米塔匹伐是芳香化酶（CYP19A1）的轻度至中度抑制剂。芳香化酶是一种参与雄激素前体合成雌激素的酶。芳香化酶的抑制与骨密度下降有关，因为雌激素对破骨细胞具有抑制和抗骨吸收作用，通常促进骨形成而非骨吸收。因此，雌激素水平低会增加骨转换和破骨细胞活性，导致骨净丢失和骨质量下降。米塔匹伐（mitapivat）对芳香化酶的抑制作用可能具有一定的临床意义，因为丙酮酸激酶缺乏症患者的骨质减少和骨质疏松症发生率相当高。米塔匹伐对骨矿物质密度的长期影响需要进一步研究。一项研究表明，这种脱靶效应对成人可能几乎没有临床影响，但可能对发育中的儿童具有一定的临床意义。 米塔匹伐（AG-348）是丙酮酸激酶的变构激活剂[1, 2, 3] 丙酮酸激酶缺乏症是一种罕见的遗传性疾病，会导致慢性溶血性贫血，目前尚无针对该疾病的靶向治疗方法。米他匹伐（Mitapivat）有望通过增加丙酮酸激酶（PK）酶活性来恢复PK缺乏症患者的糖酵解途径活性，从而带来临床获益[1] - β-地中海贫血的贫血与无效造血和红细胞存活率降低有关。过量的游离血红素和未配对的α-珠蛋白链的积累会对β-地中海贫血的成红细胞和红细胞造成显著的氧化应激。米他匹伐（Mitapivat）通过刺激红细胞糖酵解代谢来减少慢性溶血和无效红细胞生成[2] - 米他匹伐目前正在进行治疗丙酮酸激酶缺乏症的临床试验（ClinicalTrials.gov：NCT02476916、NCT03853798、NCT03548220、NCT03559699）[3] |
| 分子式 |
C24H26N4O3S
|
|---|---|
| 分子量 |
450.56
|
| 精确质量 |
450.173
|
| 元素分析 |
C, 63.98; H, 5.82; N, 12.44; O, 10.65; S, 7.12
|
| CAS号 |
1260075-17-9
|
| 相关CAS号 |
2151847-10-6 (sulfate hydrate);1260075-17-9 (free);2329710-91-8 (sulfate); 2559738-69-9 (HCl); 2559738-74-6
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| PubChem CID |
59634741
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
4.233
|
| tPSA |
90.99
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
750
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1CC1CN2CCN(CC2)C(=O)C3=CC=C(C=C3)NS(=O)(=O)C4=CC=CC5=C4N=CC=C5
|
| InChi Key |
XAYGBKHKBBXDAK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H26N4O3S/c29-24(28-15-13-27(14-16-28)17-18-6-7-18)20-8-10-21(11-9-20)26-32(30,31)22-5-1-3-19-4-2-12-25-23(19)22/h1-5,8-12,18,26H,6-7,13-17H2
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| 化学名 |
N-{4-[4-(cyclopropylmethyl)piperazine-1-carbonyl]phenyl}quinoline-8-sulfonamide
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| 别名 |
PKM2 activator 1020; AG348; Mitapivat; PKM2 activator; 1260075-17-9; PKR-IN-1; AG-348; 2WTV10SIKH; PKR-IN-1; AG-348; PKR-IN-1; trade name Pyrukynd
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.55 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2195 mL | 11.0973 mL | 22.1946 mL | |
| 5 mM | 0.4439 mL | 2.2195 mL | 4.4389 mL | |
| 10 mM | 0.2219 mL | 1.1097 mL | 2.2195 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
A Study to Evaluate the Efficacy and Safety of Mitapivat in Pediatric Participants With Pyruvate Kinase Deficiency (PKD) Who Are Not Regularly Transfused, Followed by a 5-Year Extension Period
CTID: NCT05175105
Phase: Phase 3 Status: Active, not recruiting
Date: 2024-11-15
PKM2-IN-12
PKM2-IN-11
ML 083
LIQ1
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