| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mitochondria-targeted superoxide dismutase mimetic
Mitochondrial superoxide anion radical (O2•−) scavenger (a mitochondria-targeted superoxide dismutase mimetic) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Mito-tempo（MT）是一种线粒体靶向的超氧化物歧化酶模拟物，通过抑制过氧亚硝酸盐的形成来保护对乙酰氨基酚（APAP）肝毒性的早期阶段。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在这两个时间点，Mito-TEMPO (MT) 均显着抑制 ALT 活性的上升并减少坏死区域，表明 Mito-TEMPO 的保护作用在 APAP 后持续至少 24 小时。在 APAP 肝毒性的后期，Mito-Tempo 可引起继发性细胞凋亡。通过阻断 RIP3，Mito-Tempo 会导致二次细胞凋亡，以响应过多的 APAP[1]。
在乙酰氨基酚过量（300 mg/kg，腹腔注射）后1.5小时，腹腔注射20 mg/kg的Mito-TEMPO进行后处理，在12小时和24小时时显著保护肝脏免受损伤，表现为血浆丙氨酸氨基转移酶活性降低以及苏木精-伊红染色肝切片中中央静脉周围坏死区域减少。[1] Mito-TEMPO处理（20 mg/kg，腹腔注射，APAP后1.5小时）显著减弱了APAP诱导的线粒体过氧亚硝酸盐形成，证据是12小时和24小时时肝脏中硝基酪氨酸蛋白加合物染色几乎消失。[1] 出乎意料的是，在减少坏死的同时，Mito-TEMPO处理（20 mg/kg，腹腔注射，APAP后1.5小时）在APAP肝毒性的晚期（24小时）诱导了部分肝细胞出现继发性凋亡表型。证据包括：肝脏caspase-3酶活性显著增加以及pro-caspase-3被切割；免疫染色显示活性caspase-3阳性细胞仅出现在中央静脉周围区域；末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记染色显示部分肝细胞呈现凋亡模式（明显的核染色）。[1] 与泛caspase抑制剂Z-VD-fmk（10 mg/kg，腹腔注射，APAP后2小时）联合处理，完全阻断了Mito-TEMPO诱导的caspase激活，并对APAP+Mito-TEMPO处理小鼠中剩余的肝损伤提供了额外的保护。[1] 当在APAP后3小时作为晚期后处理给药时，Mito-TEMPO（20 mg/kg，腹腔注射）仍能显著减轻肝损伤，但并未诱导caspase激活或凋亡形态。[1] Mito-TEMPO处理（20 mg/kg，腹腔注射，APAP后1.5小时）显著抑制了APAP诱导的24小时肝脏中受体相互作用蛋白激酶3蛋白水平的升高。[1] |
| 酶活实验 |
半胱氨酸蛋白酶活性测定和蛋白质印迹
如所述测量肝脏半胱天冬酶活性（Lawson等人，1999）。简言之，将冷冻肝组织在含有5mM EDTA、2mM DTT和0.1%CHAPS的25mM HEPES缓冲液中匀浆，然后离心得到匀浆。将荧光底物（Ac-DEVD-AFC）加入到匀浆中，并在存在或不存在泛胱天蛋白酶抑制剂（z-VAD-fmk）的情况下测量荧光。结果表示为每单位时间每毫克蛋白质浓度的RFU。使用兔抗胱天蛋白酶3抗体和兔抗β-肌动蛋白抗体以及抗RIP3抗体，如所述（Bajt等，2000）进行蛋白质印迹。使用山羊抗兔HRP缀合的抗体对蛋白质进行可视化。 测量了肝组织中的caspase-3活性。简言之，将冷冻肝组织在含有HEPES、EDTA、DTT和CHAPS的缓冲液中匀浆。匀浆液离心后，上清液与荧光底物Ac-DEVD-AFC孵育。在有或无泛caspase抑制剂z-VAD-fmk存在的情况下，测量荧光随时间的变化。活性以每分钟每毫克蛋白质的相对荧光单位表示。[1] |
| 细胞实验 |
组织学[1]
将石蜡包埋的肝组织样本切成5μm切片，用苏木精和伊红（H&E）染色，以评估凋亡与坏死（Gujral等人，2002）。如前所述（Knight等人，2002），使用兔多克隆抗硝基酪氨酸抗体和Dako LSAB过氧化物酶试剂盒进行硝基酪氨酸染色。使用切割的胱天蛋白酶-3（Asp175）抗体进行活性胱天蛋白酶3染色。按照制造商的说明，使用原位细胞死亡检测试剂盒AP对细胞死亡进行末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色。 |
| 动物实验 |
动物
8-12周龄的雄性C57BL/6J小鼠饲养于环境控制室，光照/黑暗周期为12小时。RIP3缺陷型小鼠（C57BL/6N背景）和C57BL/6N野生型小鼠在实验前适应环境，可自由摄取食物和水。 实验设计 小鼠禁食过夜（16-18小时）后，腹腔注射300 mg/kg的对乙酰氨基酚（APAP），该药物溶于温生理盐水中。在评估RIP3缺陷的影响的实验中，部分小鼠注射200 mg/kg的对乙酰氨基酚（APAP）。在注射对乙酰氨基酚（APAP）后1.5或3小时，腹腔注射20 mg/kg的Mito-Tempo，该药物溶于生理盐水中。部分小鼠在服用对乙酰氨基酚（APAP）2小时后，腹腔注射10 mg/kg Z-VD fmk（EP1013，溶于Tris缓冲盐溶液）或溶剂对照。为模拟APAP过量患者的临床治疗，部分小鼠在APAP过量后1.5或3小时腹腔注射解毒剂NAC（500 mg/kg）。部分小鼠在APAP给药后0-24小时内，于异氟烷麻醉下放血处死。另一些小鼠腹腔注射100 μg/kg马流产沙门氏菌内毒素（ET）和700 mg/kg半乳糖胺（Gal），持续6小时。用肝素化注射器抽取血液，离心后获得血浆。使用Pointe Scientific公司（密歇根州）的ALT检测试剂盒测定血浆ALT活性。将肝组织切成小块，用 10% 磷酸盐缓冲福尔马林固定用于组织学检查，或用液氮速冻后储存于 -80°C。 体内吗啉代寡核苷酸治疗 用于 RIP3 的反义序列为 5'-TAGGCCATAACTTGACAGAAGACAT-3'。所有对照吗啉代寡核苷酸治疗均使用来自 Gene Tools 的标准体内对照寡核苷酸序列。吗啉代寡核苷酸按制造商提供的方式使用，并以腹腔注射的方式（12.5 mg/kg 体重）每 24 小时一次，连续 2 天。然后在第 3 天进行对乙酰氨基酚 (APAP) 治疗。 雄性 C57BL/6J 小鼠（8-12 周龄）禁食过夜（16-18 小时）。通过腹腔注射 300 mg/kg 对乙酰氨基酚 (APAP)（溶于温生理盐水）诱导急性肝损伤。为了评估Mito-TEMPO的治疗效果，在对乙酰氨基酚（APAP）注射后1.5小时或3小时，腹腔注射溶于生理盐水的20 mg/kg Mito-TEMPO。在一些实验中，在APAP注射后2小时，腹腔注射泛半胱天冬酶抑制剂Z-VD-fmk（10 mg/kg，溶于Tris缓冲盐溶液）或其溶剂。在APAP给药后的不同时间点（例如，6、12、24小时），对麻醉状态下的小鼠实施安乐死。采集血液用于测定血浆ALT水平，并采集肝组织用于组织学分析（福尔马林固定）和生化分析（速冻）。 [1] 在涉及 RIP3 缺陷的研究中，部分小鼠在第 3 天给予对乙酰氨基酚 (APAP) 前 2 天，每 24 小时腹腔注射一次靶向 RIP3 的反义 vivo-morpholino（12.5 mg/kg 体重）。此外，还使用了 C57BL/6N 背景的 RIP3 敲除小鼠，并腹腔注射 200 或 300 mg/kg 对乙酰氨基酚。[1] 作为细胞凋亡的阳性对照，另一组小鼠腹腔注射马流产沙门氏菌内毒素 (100 µg/kg) 和 D-半乳糖胺 (700 mg/kg) 的混合物，持续 6 小时。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
该研究表明，在所用剂量（20 mg/kg，腹腔注射）下，Mito-TEMPO 治疗本身不会对对照小鼠造成显著的肝损伤，这体现在血浆 ALT 水平低和肝脏组织学正常。[1]
该研究未描述 Mito-TEMPO 的具体毒性特征，例如半数致死量 (LD50)、非 APAP 诱导的器官毒性、药物相互作用或血浆蛋白结合数据。[1] 该研究强调了一种潜在的机制性副作用：Mito-TEMPO 通过清除线粒体超氧化物并抑制过氧亚硝酸盐的形成，在 APAP 肝毒性期间，可将部分肝细胞的细胞死亡模式从坏死转变为继发性凋亡，这一过程是通过抑制 RIP3 激酶的上调实现的。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
此前有研究报道，线粒体靶向超氧化物歧化酶模拟物Mito-tempo (MT)的延迟治疗可通过抑制过氧亚硝酸盐的生成，保护小鼠免受对乙酰氨基酚(APAP)早期肝毒性的侵害。然而，这种保护作用是否能持续到毒性的后期尚不清楚。为了研究这种后期保护作用，我们用300 mg/kg APAP处理C57Bl/6J小鼠，并在1.5小时或3小时后分别给予20 mg/kg MT。结果发现，两种MT治疗均能保护小鼠免受APAP晚期肝毒性的侵害（12小时和24小时）。令人惊讶的是，MT治疗组小鼠的肝细胞凋亡显著增加，而坏死表型几乎仅见于单独使用APAP治疗的小鼠。此外，MT治疗组小鼠肝脏中caspase-3的活性和裂解也显著增加。免疫组化染色显示，活性 caspase-3 阳性染色的肝细胞仅位于小叶中心区。在对乙酰氨基酚 (APAP) 给药后 2 小时，使用泛 caspase 抑制剂 ZVD-fmk (10 mg/kg) 治疗可中和 caspase 激活，并进一步保护肝脏免受 APAP 肝毒性损伤。目前治疗 APAP 中毒的标准疗法 N-乙酰半胱氨酸 (NAC) 可起到保护作用，但不会诱导细胞凋亡表型。机制上，MT 治疗抑制了 APAP 诱导的 RIP3 激酶表达，而 RIP3 缺陷小鼠的肝细胞中也出现了与 MT 治疗类似的 caspase 激活和凋亡形态。这些数据表明，虽然坏死是 APAP 肝毒性后细胞死亡的主要原因，但抗氧化剂 MT 治疗可能在某些细胞中将细胞死亡模式转变为继发性凋亡。线粒体氧化应激和RIP3激酶表达的调节在这一转换过程中起着关键作用。[1]
Mito-TEMPO是一种线粒体靶向抗氧化剂。它对APAP肝毒性的保护作用主要归因于其清除线粒体超氧化物的能力，从而阻止高活性氧化剂过氧亚硝酸盐的形成。过氧亚硝酸盐是APAP诱导线粒体功能障碍和坏死性细胞死亡的关键介质。[1] 该研究揭示了一种新的机制，即在毒性损伤的情况下，使用Mito-TEMPO调节线粒体氧化应激可以影响细胞死亡方式（坏死或凋亡），而RIP3激酶则作为关键的分子开关发挥作用。 [1] 与Mito-TEMPO相比，在APAP给药后1.5小时使用临床解毒剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）进行后处理可提供保护作用，但不会诱导继发性细胞凋亡。[1] |
| 分子式 |
C29H36CLN2O2P
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|---|---|
| 分子量 |
511.03510761261
|
| 精确质量 |
510.22
|
| 元素分析 |
C, 68.16; H, 7.10; Cl, 6.94; N, 5.48; O, 6.26; P, 6.06
|
| CAS号 |
1334850-99-5
|
| 相关CAS号 |
MitoTEMPO hydrate;1569257-94-8
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| PubChem CID |
134828258
|
| 外观&性状 |
Light yellow to pink solid powder
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| tPSA |
52.6Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
35
|
| 分子复杂度/Complexity |
612
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
QJEOOHMMSUBNGG-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C29H35N2O2P.ClH/c1-28(2)20-23(21-29(3,4)31(28)33)30-27(32)22-34(24-14-8-5-9-15-24,25-16-10-6-11-17-25)26-18-12-7-13-19-26;/h5-19,23,33H,20-22H2,1-4H3;1H
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| 化学名 |
[2-[(1-Hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)amino]-2-oxoethyl]-triphenylphosphanium Chloride
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| 别名 |
Mito-TEMPO; 1334850-99-5; [2-[(1-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)amino]-2-oxoethyl]-triphenylphosphanium;chloride; (2-(2,2,6,6-TETRAMETHYLPIPERIDIN-1-OXYL-4-YLAMINO)-2-OXOETHYL)TRIPHENYLPHOSPHONIUM CHLORIDE; Mito-TEMPO?; DTXSID601044299; MFCD26406410;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~245.08 mM)
H2O : ~60 mg/mL (~117.64 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (4.41 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.2 mg/mL (4.4 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + + 45% Saline ≥ 2.2 mg/mL (4.4 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in saline) ≥ 2.2 mg/mL (4.4 mM) in 10% DMSO + 90% Corn oil 配方 5 中的溶解度: 50 mg/mL (98.03 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9568 mL | 9.7840 mL | 19.5679 mL | |
| 5 mM | 0.3914 mL | 1.9568 mL | 3.9136 mL | |
| 10 mM | 0.1957 mL | 0.9784 mL | 1.9568 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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