| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AMPK; pan-AMPK
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| 体外研究 (In Vitro) |
MK-8722 比 AMP 更强大、更显着地激活 pAMPK 复合物。 MK-8722 会导致原代小鼠肝细胞、HepG2 细胞或原代人肌细胞中许多其他已知的 pAMPK 靶标磷酸化。 MK-8722 最有效的脱靶活性是针对血清素 5-HT2A 受体。 [1]
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| 体内研究 (In Vivo) |
除了减少胰岛素抵抗和高血糖之外，MK-8722 药理学泛 AMPK 激活还可改善长期可持续的葡萄糖稳态。 MK-8722（30 mpk）急性治疗可显着降低血糖和胰岛素水平。小鼠长期服用 MK-8722 也会提高肌肉中 Glut4 蛋白的水平。随着心肌糖原和骨骼肌糖原的增加，MK8722 会导致恒河猴心脏肥大。 [1]
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| 酶活实验 |
AMPK活性测定和活化剂EC50值的测定[1]
酶促反应分三个阶段进行。在阶段1中，将感兴趣的AMPK复合物在含有20mM HEPES、pH 7.3、10mM MgCl2、6mM DTT、0.01%Brij 35、200mM ATP的AMPK反应缓冲液中适当稀释（至最终酶反应中所需浓度的两倍），然后通过添加GST标记的截短CaMKK2（最终约20nM）进行磷酸化/活化（30），并在室温下孵育30分钟，得到pAMPK。对于含有γ3的AMPK酶，使用的缓冲液为100mM Tris-HCl、pH 7.5、100mM KCl、10mM MgCl2、6mM DTT、0.02%BSA和200uM ATP。在第二阶段，通过向含有pAMPK的反应缓冲液（每孔15mL；384孔板）中加入适当稀释的DMSO（共1.2mL）中的AMPK激活剂（例如，MK-8722或AMP）来预孵育化合物和pAMPK，将板短暂涡旋，然后在室温下孵育30分钟。最后，通过在缺乏ATP的AMPK反应缓冲液中加入荧光素标记的SAMS肽5-FAM-HMRSAMSGLFKRR-COOH（15mL；1.5mM终浓度肽底物）来启动pAMPK反应阶段3。将板密封并在室温下孵育60分钟，此时通过加入由100 mM HEPES、pH 7.3、0.015%Brij 35和40 mM EDTA组成的淬灭缓冲液来停止反应。将反应板离心（2000 rpm，4分钟），使用以下参数在LabChip EZ读数器上读取上清液：-550下游电压、-2250上游电压、-1.5 psi压力、40 s样品后取样时间和110 s最终延迟。通过取底物和产物峰高的比率并乘以100来计算形成的产物百分比。使用4参数逻辑斯谛曲线拟合分析，根据%产物与活化剂浓度图计算EC50和%活化参数。Eurofins在广泛的药理学相关靶点（120项Panlabs检测，包括各种酶、受体、离子通道和转运蛋白）中评估了MK-8722的选择性。 MK-8722和AMP对AMPK活性的协同作用[1] 在这项研究中，pAMPK活性是通过使用ADP-Glo激酶检测试剂盒测量激酶反应中ADP的形成速率来确定的。pAMPK12（2 nM；使用CAMKK2生成）在室温下与饱和水平的活化剂、25 mM的AMP和/或195 nM的MK-8722在含有100 mM Tris-HCl、pH 7.5、10 mM MgCl2、100 mM KCl、I mM DTT、0.015%Brij 35和0.02%BSA的反应缓冲液中预孵育30分钟。然后通过加入100mM ATP和10mM肽底物（序列：HMRSAMSGLH）引发反应。根据孵育时间终止反应，并按照制造商的说明使用ADP-Glo™试剂测定ADP的形成。使用SpectraMax M5微孔板读数器测量发光。数据来自两项独立研究。 MK-8722血浆蛋白结合[1] 使用96孔RED平衡透析板测定与C57BL/6小鼠、Wistar汉族大鼠、恒河猴和人血浆的血浆蛋白结合。用等渗磷酸盐缓冲液（PBS）对掺有MK-8722（10mM）的血浆进行平衡透析。由于MK-8722高度结合蛋白质，因此还包括稀释（10%）血浆，以估计MK-8722在未稀释（100%）血浆中的结合。在透析结束时（4-6小时），通过LC-MS/MS分析血浆和磷酸盐缓冲液的等分试样，以在使用乙腈进行蛋白质沉淀后定量每个隔室中的MK-8722（见下文）。 |
| 细胞实验 |
AMPK激活剂对细胞pACC和pAMPK的影响[1]
将HepG2肝癌细胞和Hela细胞（每孔50000个细胞）加入96孔板中，在含有10%胎牛血清、青霉素/链霉素和非必需氨基酸的DMEM中在37℃、5%CO2气氛下培养过夜。将新鲜分离的小鼠和大鼠原代肝细胞（每孔25000个细胞）加入到含有10%胎牛血清、青霉素/链霉素的IHAMC培养基中的I型胶原包被的96孔板中，并在37℃、5%CO2气氛中培养过夜。第二天早上，将培养基换成不含血清的DMEM（每孔99 mL），再培养2小时。在检查化合物C效果的研究中，在添加AMPK激活剂之前，将细胞与或不与指定终浓度的化合物C预孵育1小时。然后加入单独的DMSO或DMSO（1mL，1%DMSO终浓度）中的AMPK激活剂（MK-8722、AICAR或离子霉素），以达到所需的终浓度，并使用MK-8722和AICAR继续培养1小时，或使用离子霉素继续培养5分钟。对照研究表明，DMSO控制结果在5至60分钟的孵育时间内没有变化。在适当的孵育后，通过抽吸轻轻取出培养基，并加入60微升含有PhosStop磷酸酶抑制剂和完整蛋白酶的冷冻细胞裂解缓冲液。。。 MK-8722和胰岛素对人骨骼肌细胞2-脱氧-D-葡萄糖摄取的影响[1] 使用原代人骨骼肌细胞和培养基。将未分化的肌肉细胞以30000个细胞的密度接种在96孔胶原涂层白色/不透明板上的100 mL生长培养基中。在37℃和5%CO2气氛下培养4-6小时后，将培养基换成基础培养基+0.1%牛血清白蛋白。加入终浓度为30mM的DMSO（含或不含化合物C）并孵育培养物1小时。此时，添加终浓度为3或10mM的DMSO，含或不带MK-8722，并继续孵育过夜（终浓度为2%）。第二天，加入Humulin至终浓度为100nM，然后孵育1小时。然后用PBS洗涤该板两次，然后加入含有100 mM 2-脱氧-D-葡萄糖和0.5 mCi/mL[14C]-2-脱氧-D葡萄糖的PBS/Ca+2/Mg+2/0.1%BSA。孵育10分钟后，将平板置于冰上，取出培养基，然后用冰冷的PBS洗涤孔三次。剩余的细胞在室温下用50 mL细胞裂解缓冲液裂解1小时，加入150 mL Microscint 40，并使用微孔板闪烁和发光计数器测定放射性。 MK-8722对细胞ATP的影响[1] 小鼠3T3-L1成纤维细胞（传代#2-11）和大鼠肝癌H4IIE细胞在单层中生长。在BioCoat T-150培养瓶中接种后5-7天，3T3-L1成纤维细胞开始分化。细胞与分化培养基一起孵育8-12天（2天加IBMX，2天加胰岛素，4-8天加胎牛血清）。将完全分化的3T3-L1脂肪细胞胰蛋白酶化，并以每孔约6-8x104个细胞的密度重新接种在胶原涂层的96孔板上。细胞用饥饿培养基（DMEM加25 mM D-葡萄糖、0.1μM地塞米松和1μM胰岛素）饥饿60分钟，然后用DMSO（1%终浓度）处理60分钟，可加或不加MK-8722。H4IIE细胞生长至约90%融合，用DMSO（1%终浓度）加或不含MK-8722处理3小时。 MK-8722细胞通透性[1] 在24孔透孔培养板中培养的LLC-PK1细胞中测定MK-8722的细胞通透性。在含有10mM HEPES、pH7.4的Hank's平衡盐溶液中，以0.1、0.5或1μM的终浓度制备含有[3H]-MK-8722的溶液。将这些溶液分别添加到培养板的顶端（A）或基底外侧（B）隔室中，并将缓冲液添加到与含有化合物的隔室相对的隔室中。在t=3小时时，从两侧取出样品（50毫升）并计数放射性。 |
| 动物实验 |
小鼠：饲养方式 本研究采用10至12周龄的C57BL/6 eDIO小鼠和C57BL/6小鼠，以及7周龄的db/db小鼠。所有动物均可自由摄食饮水，饲养温度恒定在22°C，光照周期为12/12小时。通常情况下，一个笼子饲养四只瘦型C57BL/6小鼠。eDIO小鼠单独饲养。一个较大的啮齿动物笼子饲养八只db/db小鼠。在接受化合物处理前，C57BL/6小鼠和db/db小鼠饲喂常规啮齿动物饲料7012（5%膳食脂肪；3.75 kcal/g）。eDIO小鼠则饲喂高脂肪（60 kcal%）饲料。口服MK8722时，剂量为10 mL/kg体重，可使用标准溶剂或单独使用溶剂。通过将 MK8722 的效果与接受载体治疗的动物的效果进行对比，可以确定各种代谢参数[1]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
5'-腺苷单磷酸活化蛋白激酶 (AMPK) 是真核生物能量稳态的关键调节因子。尽管经过三十年的研究，AMPK 的生物学功能及其作为药物靶点的潜力仍未完全阐明，这主要是由于缺乏优化的药理学工具。我们开发了 MK-8722，一种强效、直接的变构激活剂，可激活所有 12 种哺乳动物 AMPK 复合物。在啮齿动物和恒河猴中，MK-8722 介导的骨骼肌 AMPK 激活可诱导强劲、持久且不依赖于胰岛素的葡萄糖摄取和糖原合成，从而改善血糖水平，且未观察到低血糖现象。这些效应在不同物种间均有体现，包括患有糖尿病的恒河猴，但伴随出现心脏肥大和心肌糖原增加，而未观察到明显的功能性后遗症。[1]
我们的研究结果表明，MK-8722 系统性地激活泛 AMPK 可导致葡萄糖稳态的长期持续改善，包括改善胰岛素抵抗和高血糖。在所有使用 MK-8722 的研究中，包括对血糖正常的大鼠和恒河猴进行的为期 6 至 8 个月的高剂量研究，均未发现低血糖的证据。这些效应似乎主要由不依赖胰岛素的骨骼肌葡萄糖摄取介导。无需增加胰岛素水平即可降低血糖，这应能减少胰腺 β 细胞对胰岛素的需求，从而可能延长降血糖作用的持续时间。这种特性对于 2 型糖尿病患者而言既独特又极具吸引力，与目前所有可用的治疗药物均不相同。另一方面，MK-8722 治疗诱导了可逆性心脏肥大，在研究的时间范围内未观察到明显的功能性后遗症或心电图异常。我们的数据表明，这种肥大并非由观察到的心肌糖原积累所致。相反，这种效应类似于精英运动员中观察到的生理性心脏肥大。运动可以激活心脏 AMPK 已得到充分证实 (29)。然而，这种效应对于具有代谢综合征、肥胖和显性糖尿病病理生理特征的人类是否耐受，仍有待确定。在本文稿即将完成审稿期间，Cokorinos 等人报道，MK-8722 的近缘类似物 (PF-739) 能够激活骨骼肌 AMPK 并降低临床前动物的血糖水平，且该作用独立于肝脏 AMPK 的激活。[1] |
| 分子式 |
C24H20CLN3O4
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|---|---|
| 分子量 |
449.886304855347
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| 精确质量 |
449.114
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| 元素分析 |
C, 64.07; H, 4.48; Cl, 7.88; N, 9.34; O, 14.22
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| CAS号 |
1394371-71-1
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| 相关CAS号 |
1394371-71-1
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| PubChem CID |
89558344
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.8
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| tPSA |
89.5
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
645
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
C1[C@H]([C@@H]2[C@H](O1)[C@@H](CO2)OC3=NC4=NC(=C(C=C4N3)Cl)C5=CC=C(C=C5)C6=CC=CC=C6)O
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| InChi Key |
XQMNBTZLYOOAGA-UGESXGAOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H20ClN3O4/c25-19-16(15-8-6-14(7-9-15)13-4-2-1-3-5-13)10-26-23-20(19)27-24(28-23)32-18-12-31-21-17(29)11-30-22(18)21/h1-10,17-18,21-22,29H,11-12H2,(H,26,27,28)/t17-,18-,21-,22-/m1/s1
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| 化学名 |
(3R,3aR,6R,6aR)-6-[[6-chloro-5-(4-phenylphenyl)-1H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl]oxy]-2,3,3a,5,6,6a-hexahydrofuro[3,2-b]furan-3-ol
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| 别名 |
MK8722; MK 8722; 1394371-71-1; CHEMBL4167177; (3R,3aR,6R,6aR)-6-[[6-chloro-5-(4-phenylphenyl)-1H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl]oxy]-2,3,3a,5,6,6a-hexahydrofuro[3,2-b]furan-3-ol; 1,4:3,6-Dianhydro-2-O-(5-[1,1'-biphenyl]-4-yl-6-chloro-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)-D-mannitol; (3R,3aR,6R,6aR)-6-[(5-{[1,1'-biphenyl]-4-yl}-6-chloro-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)oxy]-hexahydrofuro[3,2-b]furan-3-ol; RW3ZG69SHT; MK-8722
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~90 mg/mL (~115.1 mM)
Ethanol: ~2 mg/mL (~4.5 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.62 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2228 mL | 11.1138 mL | 22.2277 mL | |
| 5 mM | 0.4446 mL | 2.2228 mL | 4.4455 mL | |
| 10 mM | 0.2223 mL | 1.1114 mL | 2.2228 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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