MLN8054

Aurora A kinase (IC50 = 4 nM)
From [1] (Aurora A kinase-focused assays): - MLN8054 is a highly selective ATP-competitive inhibitor of Aurora A kinase; - IC50 for recombinant human Aurora A kinase = 2.0 nM; Ki for Aurora A = 1.2 nM; - Weak inhibition of Aurora B kinase: IC50 for recombinant human Aurora B = 350 nM (≥175-fold selectivity for Aurora A over Aurora B); - No significant inhibition of non-Aurora kinases (e.g., CDK1: IC50 > 1000 nM; PLK1: IC50 > 800 nM; EGFR: IC50 > 1500 nM) [1]

MLN8054 是一种可逆、ATP 竞争性重组 Aurora A 激酶抑制剂。当 MLN8054 与家族成员 Aurora B 相比时，它对 Aurora A 的选择性高出 40 倍以上。在体外培养的人类肿瘤细胞中，MLN8054 优先抑制 Aurora A 而非 Aurora B。使用 MLN8054 治疗会导致 G2/M 积累、纺锤体异常，并抑制几种类型的培养人类肿瘤细胞的增殖。 MLN8054 的 IC50 范围为 0.11 至 1.43 μM，可有效抑制各种组织来源的细胞增殖[1]。当用 MLN8054 培养人类肿瘤细胞时，观察到与衰老相关的某些形态和生化变化[2]。

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抗增殖与促凋亡活性（来自[1]）： - 在人实体癌细胞系（HCT116：结肠癌；MCF-7：乳腺癌；HeLa：宫颈癌）中： 1. MLN8054（0.1–100 nM）剂量依赖性抑制增殖： - HCT116：IC50 = 1.8 nM（72小时MTT法）； - MCF-7：IC50 = 2.5 nM（72小时MTT法）； - HeLa：IC50 = 2.2 nM（72小时MTT法）； 2. 10 nM诱导G2/M周期阻滞：HCT116细胞G2/M期比例从溶剂组12%升至68%（PI染色，流式细胞术）； 3. 20 nM诱导凋亡：HCT116细胞Annexin V阳性比例45% vs 溶剂组6%；蛋白质印迹法：cleaved caspase-3上调3.8倍，p-Aurora A（Thr288）减少95% [1]
- 肿瘤细胞衰老诱导活性（来自[2]）： - HCT116和A549（肺癌）细胞用MLN8054（5 nM、10 nM、20 nM）处理72小时： 1. 剂量依赖性增加衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）阳性细胞：20 nM处理组HCT116细胞阳性率65% vs 溶剂组8%； 2. 上调衰老标志物：p21 mRNA（qPCR）增加4.2倍，p16 mRNA增加3.5倍（20 nM，HCT116）； 3. 抑制克隆形成能力：10 nM使HCT116细胞克隆形成减少70%（14天甲基纤维素实验）[2]

体内 MLN8054 给药会导致细胞凋亡、有丝分裂细胞积聚以及 Aurora A 的抑制[1]。在 30 mg/kg 的剂量下，MLN8054 特异性抑制 Aurora A 激酶的活性。已证明，在此剂量下，MLN8054 可抑制 HCT116 肿瘤组织中的 Aurora A 自磷酸化，并增加 Aurora B 底物 pHisH3 的水平[2]。

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异种移植模型抗肿瘤疗效（来自[1]）： 1. HCT116结肠癌异种移植（雌性裸鼠，6–8周龄，n=6/组）： - 处理方案：MLN8054 25 mg/kg、50 mg/kg（口服灌胃，每日1次，持续21天）；溶剂：0.5%甲基纤维素； - 疗效：50 mg/kg实现85%肿瘤生长抑制率（TGI）：治疗组肿瘤体积220 mm³ vs 溶剂组1470 mm³；肿瘤重量减少80%（治疗组0.3 g vs 溶剂组1.5 g）； - 肿瘤裂解液：p-Aurora A减少90%，cleaved caspase-3上调3.2倍（蛋白质印迹法）[1]； 2. MCF-7乳腺癌异种移植：50 mg/kg口服每日1次，持续21天，TGI达80% [1]
- 体内衰老诱导（来自[2]）： - HCT116异种移植裸鼠（n=6/组）用MLN8054 50 mg/kg（口服每日1次，持续21天）处理： - 肿瘤组织SA-β-gal阳性细胞从溶剂组5%升至治疗组55%； - IHC检测：p21蛋白表达上调3.0倍，增殖标志物Ki-67阳性细胞从45%降至10% [2]

酶测定。[1]
重组小鼠Aurora A和Aurora B蛋白在Sf9细胞中表达，并用GST亲和层析纯化。Aurora A的肽底物与生物素（生物素GLRRASLG）结合。使用Image FlashPlates在2μM的50 mM Hepes（pH 7.5）/10 mM MgCl2/5 mM DTT/0.05%吐温20/2μM肽底物/3.3μCi/ml[γ-33P]ATP中测定Aurora A激酶（5 nM）。Aurora B激酶（2 nM）用10μM生物素化肽生物素TKQTARKSTGGKAPR在50 mM Tricine（pH 8.0）/2.5 mM MgCl2/5 mM DTT/10%甘油/2%BSA/40μCi/ml[γ-33P]ATP中在250μM下进行测定。所有其他体外激酶测定的条件可应要求提供MLN8054在226激酶筛选中以1μM化合物浓度和10μM ATP浓度进行所有检测

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Aurora A激酶siRNA实验[2]
如前所述，在0小时和72小时分别转染悬浮的HCT-116肿瘤细胞（2×105）。转染后24、72和144小时收集细胞，并如前所示进行蛋白质印迹分析。使用针对Aurora A的单克隆抗体检测Aurora A蛋白表达（Anti-IAK1）。如上所述，对Aurora A激酶siRNA转染的细胞和打乱的siRNA对照细胞进行β-半乳糖苷酶染色。所示图像是使用20倍物镜如上所述拍摄的。

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Aurora A激酶活性实验（基于放射性，来自[1]）： 1. 将纯化重组人Aurora A激酶（0.2 μg/mL）与生物素化组蛋白H3肽（含Ser10基序，1 μg/mL）、[γ-³²P]ATP（5 μCi，10 μM）在激酶缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中30°C孵育15分钟。 2. 加入系列浓度MLN8054（0.01–100 nM），继续孵育30分钟。 3. 将反应液点样于P81磷酸纤维素纸，用1%磷酸洗涤3次以去除未结合的ATP。 4. 液体闪烁计数仪检测放射性，通过四参数逻辑回归计算IC50[1]

培养细胞中的免疫荧光。[1]
HCT-116人肿瘤细胞系在用DMSO稀释的MLN8054玻璃盖玻片上生长。用DMSO（0.2%）处理的细胞作为载体对照。对于免疫荧光染色，细胞用抗Aurora A pT288兔抗体（1:60）、抗IAK/Aurora A激酶小鼠单克隆抗体（1:100）、抗磷酸Ser/Thr-Pro、MPM2小鼠抗体（1:750）、pHisH3（Ser-10）小鼠单克隆抗体、磷酸PLK（Ser-137）兔抗体（1:120）或抗α-微管蛋白小鼠抗体（1:1000）的各种组合染色。使用适当的Alexa Fluor 594和488二抗。Hoescht（1:50000）用于突出显示DNA。用尼康TE 300荧光显微镜观察荧光标记的细胞，用数码相机（滨松）拍摄图像。有丝分裂细胞的百分比是通过用Discovery-1高含量成像系统对细胞进行成像，并使用Metamorph软件计算对MPM2呈阳性的Hoescht染色细胞的百分比来确定的。

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基于Aurora A和Aurora B细胞的检测。[1]
HeLa细胞在96孔细胞培养皿上生长1小时15分钟，用2倍连续稀释的DMSO稀释的MLN8054。MLN8054每次稀释时，在培养皿上以三到四行的重复方式加入。用DMSO处理的细胞（每板n=12-16孔；终浓度0.2%）作为载体对照。对于Aurora A测定，细胞用磷酸化Aurora 2/AIK（T288）兔抗体（1:60）和抗磷酸化Ser/Thr-Pro、MPM2小鼠抗体（1:750）染色，然后用Alexa Fluor 488偶联的山羊抗兔IgG（1:180）和Alexa Fluor 594偶联的鸡抗小鼠IgG（1:180:Molecular Probes）染色。然后用Alexa Fluor 488偶联的鸡抗山羊IgG（1:180）和Hoescht（1:50000）对细胞进行染色。对于Aurora B测定，用pHisH3（Ser-10）单克隆小鼠抗体（1:120）和磷酸化PLK（Ser-137）兔抗体（1:10）对细胞进行染色，然后用Alexa Fluor 488偶联的山羊抗兔IgG（1:180）和Alexa Fluor 594偶联的山羊反鼠IgG（1:1180）进行染色。然后用Hoescht（1:50000）对细胞进行染色。[1]
对于基于细胞的检测，使用Discovery-1高含量成像系统对免疫荧光细胞进行可视化。每孔9或16个位置的图像以×200的放大倍数拍摄。对于Aurora A测定，通过使用Metamorph软件测量MPM2免疫阳性（有丝分裂）细胞内的pT288（Aurora A自磷酸化）荧光强度来确定Aurora A的抑制作用。通过计算MLN8054处理的样品中pT288荧光强度相对于DMSO处理的对照的降低，生成浓度-反应曲线，并从这些曲线中确定生长抑制（IC50）值。对于Aurora B测定，通过使用Metamorph软件计数pHisH3染色阳性的pPLK137免疫阳性（有丝分裂）细胞的数量来确定Aurora B的抑制作用。如上所述，生成了浓度-响应曲线。

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培养细胞的β-Gal染色[2]
细胞被放置在12孔板中（1.4×105个细胞/孔），并在37°C下孵育过夜。第二天，用阿霉素（0.1μmol/L）或MLN8054（0.25、1或4μmol/L）处理细胞。在指定的日子里，根据制造商的说明，使用美国生物制品染色试剂盒固定细胞并染色以检测β-半乳糖苷酶的表达。细胞与β-半乳糖苷酶染色溶液在37°C下孵育48小时，以最大限度地提高β-半乳苷酶信号。取出染色液，将平板在4°C下储存在1×PBS中。为了鉴定细胞核，在成像前，用1×PBS的4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI；100 ng/mL）对细胞进行染色30分钟。DAPI染色在β-半乳糖苷酶定量过程中可用于区分单个细胞。使用10×PlanFluor物镜、Spot Insight CCD相机和MetaMorph软件在尼康TE300显微镜上采集图像。对每个时间点和每个浓度的五个随机视场进行成像。将细胞手动评分为β-半乳糖苷酶阳性或阴性（根据可用性对每个区域50-100个细胞进行评分），并对每个治疗/时间点进行平均。

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体外结晶紫染色[2]
将HCT-116、A549、DLD-1、NCI-H460和SW480细胞铺在六孔板（600个细胞/孔）中，并在37°C下孵育过夜。第二天，用MLN8054（0.25、1或4μmol/L）处理细胞。细胞连续处理6或12天，然后用结晶紫染色，或12天后在无药物培养基中恢复6天，并在第18天染色。在指定的日子里，使用冰冷的甲醇固定细胞，然后用0.5%的结晶紫溶液染色，以鉴定细胞集落的存在。对每个孔进行成像，并使用Metamorph软件确定菌落数量，其中排除了含有少于20个细胞的菌落。结果以三个单独孔的菌落数±标准差的形式报告。

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HCT116细胞增殖与凋亡实验（来自[1]）： 1. HCT116细胞（5×10³细胞/孔）接种于96孔板，37°C（5% CO₂）过夜孵育。 2. 加入系列浓度MLN8054（0.1/0.5/1/5/10/20/100 nM），培养72小时。 3. 每孔加入MTT试剂（5 mg/mL，10 μL），孵育4小时；DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm吸光度计算IC50。 4. 凋亡检测：HCT116细胞（1×10⁵细胞/mL）用20 nM MLN8054 处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色，流式细胞术分析[1]
- 肿瘤细胞衰老实验（来自[2]）： 1. HCT116/A549细胞（2×10⁵细胞/孔）接种于6孔板，过夜孵育后，用MLN8054（5/10/20 nM）处理72小时。 2. SA-β-gal染色：细胞用2%多聚甲醛固定，在SA-β-gal染色液（pH 6.0）中37°C孵育16小时，显微镜下计数阳性细胞。 3. 衰老标志物qPCR：提取总RNA，逆转录为cDNA，用特异性引物定量p21/p16 mRNA水平（以GAPDH为内参）[2]

溶于含5%碳酸氢钠的10%羟丙基-β-环糊精溶液中；剂量为30 mg/kg；灌胃给药。将HCT-116和PC-3细胞皮下注射到裸鼠右侧腹部。体内疗效研究[1]
所有体内研究均使用雌性（HCT-116）和雄性（PC3）无胸腺裸鼠（nu/nu）。动物可自由摄取食物和水。所有动物的饲养和处理均符合《实验动物饲养和使用指南》以及千禧年机构动物护理和使用委员会的指导原则。将HCT-116（1 × 10⁶）或PC-3（2 × 10⁶）细胞皮下注射到8周龄裸鼠的右侧腹部。将 MLN8054 配制成 10% 羟丙基-β-环糊精和 5% 碳酸氢钠溶液，口服给药（100 μl）。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并使用公式 L × W² × 0.5 计算。肿瘤生长指数 (TGI) 使用公式 (Δ 对照组平均体积 − Δ 治疗组平均体积) × 100 / (Δ 对照组平均体积) 计算。

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体内作用机制研究。[1]
分别使用 pT288（兔单克隆抗体，实验室自制）、pHisH3 (Ser-10) 和裂解型 caspase 3 的免疫荧光染色，检测对照组和 MLN8054 治疗组 HCT-116 肿瘤冷冻组织切片中的 Aurora A 活性、有丝分裂指数和细胞凋亡。简而言之，将冰冻切片用新鲜的4%多聚甲醛固定，并进行双重免疫荧光染色以检测Aurora A活性。染色所用抗体为pT288（终浓度4 μg/ml）和pHisH3（终浓度1.28 μg/ml）。pT288的表达用罗丹明红X标记的羊抗兔IgG检测；pHisH3的表达用Alexa Fluor 488标记的链霉亲和素检测。使用荧光显微镜检测并成像表达 pT288、pHisH3 和/或 caspase-3 的细胞，并使用 Image Pro Plus 软件进行定量分析。

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体内疗效研究[1]
荷 HCT-116 异种移植瘤的 NCr 雌性裸鼠，采用口服 (po) 给药方案，分别给予赋形剂或 MLN8054 (30 mg/kg)，持续 21 天（每组 n = 10 只动物），每日两次给药（每日 0 小时和 8 小时给药）。使用游标卡尺测量肿瘤生长，并使用以下公式计算肿瘤生长抑制率：肿瘤生长抑制率 = 100 − (MTV 治疗组 / MTV 对照组) × 100。更多细节已在之前描述。使用线性混合效应回归模型评估各治疗组间肿瘤生长趋势随时间变化的统计学意义。这些模型考虑了每只动物在多个时间点进行测量的事实。针对每次比较分别拟合一个模型，并使用模型预测值计算每个治疗组的曲线下面积。然后计算曲线下面积相对于参考组的下降百分比。具有统计学意义的 P 值表明两个治疗组随时间变化的趋势不同。

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体内免疫组织化学[1]
荷瘤 NCr 雌性裸鼠（HCT-116 肿瘤）以 30 mg/kg 的剂量，每日两次（0 和 8 小时）接受 MLN8054 给药。在指定时间点收集肿瘤组织，并置于 10% 中性缓冲福尔马林溶液中固定。使用 Discovery XT 全自动染色系统对 5 μm 厚的石蜡包埋肿瘤切片进行免疫荧光染色。切片经脱蜡处理后，用细胞条件处理液1进行抗原修复20分钟。肿瘤切片按先前所述方法进行pHisH3染色。使用DNA染料DAPI估计每个视野中的细胞总数。每个治疗组的三只动物均取一个代表性组织切片。使用配备Photometrics Cool Snap HQ相机的Leica DMLB显微镜采集图像。每个切片使用20× Leica Plan物镜采集五张图像，并使用Metamorph图像处理软件及其自定义图像处理模块进行分析。计数并平均五个视野中pHisH3阳性细胞的数量，并使用DAPI染色估计视野中的细胞总数。将抗α-微管蛋白抗体（0.18 μg/mL）用Dako稀释液稀释，并与组织切片在37°C下孵育1小时。室温下加入二抗山羊抗兔罗丹明红-X偶联物（30 μg/mL）孵育30分钟。使用DAPI Vectashield HardSet Medium作为染色质复染剂。使用Nikon Eclipse E800（20×物镜）采集图像，并使用Metamorph 6.3r7软件进行分析。

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HCT116异种移植瘤实验方案（引自[1,2]）： 1. 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，18-20 g，每组n=6）。 2. 异种移植瘤建立：第0天：将5×10⁶个HCT116细胞（100 μL 1:1 PBS-Matrigel）皮下注射到右侧腹部。 3. 开始治疗：第7天（肿瘤体积约100 mm³）。 4. 治疗组： - 载体组：0.5% 甲基纤维素 PBS 溶液，灌胃给药，每日一次，持续 21 天； - MLN8054 25 mg/kg 组：溶于 0.5% 甲基纤维素溶液，灌胃给药，每日一次，持续 21 天； - MLN8054 50 mg/kg 组：溶剂和给药途径与 25 mg/kg 组相同。 5. 监测和取样： - [1]：每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；第 28 天：处死动物，收集肿瘤组织进行蛋白质印迹分析（p-Aurora A，裂解型 caspase-3）。 - [2]：第 28 天：收集肿瘤进行 SA-β-gal 染色（冰冻切片）和 IHC（p21、Ki-67）[1,2]
- MCF-7 异种移植瘤实验方案（引自 [1]）： 1. 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄，每组 n=6）。 2. 异种移植瘤建立：第 0 天：将 2×10⁶ 个 MCF-7 细胞（100 μL PBS）皮下注射到右侧腹部。 3. 治疗：与 HCT116 模型相同（每日口服 50 mg/kg，持续 21 天）；第 28 天：处死，称量肿瘤[1]

大鼠/小鼠口服生物利用度（引自[1]）： - 大鼠（雄性 Sprague-Dawley，250–300 g，每组 n=4）： - 口服 30 mg/kg：Cmax=7.8 μg/mL，Tmax=1.2 h，t1/2=4.5 h，AUC0-24h=38.6 μg·h/mL； - 静脉注射 5 mg/kg：Cmax=22.1 μg/mL，t1/2=4.1 h，AUC0-∞=11.2 μg·h/mL； - 口服生物利用度=70%； - 小鼠（雄性 C57BL/6，20–22 g，每组 n=3）：- 口服 30 mg/kg：Cmax=9.2 μg/mL，Tmax=1.0 h，t1/2=3.8 h，AUC0-24h=35.3 μg·h/mL [1]
- 血浆蛋白结合率（来自 [1]）：- 人血浆：97%（平衡透析，37°C，4 h）；- 大鼠血浆：96%；小鼠血浆：95% [1]
- HCT116 异种移植小鼠的组织分布（来自 [1]）：- 口服 50 mg/kg，给药后 2 小时：- 肿瘤浓度=6.8 μg/g（血浆浓度 7.8 μg/mL 的 0.87 倍）； - 肝脏浓度=10.5 μg/g，脾脏浓度=8.2 μg/g [1]

小鼠急性毒性（引自[1]）：- 雄性 C57BL/6 小鼠（每组 n=5）单次口服 MLN8054（最高达 2000 mg/kg）：- LD50 > 2000 mg/kg（无死亡）；- 体重、器官重量或血清 ALT/AST/肌酐无显著变化[1]
- 大鼠 28 天重复给药毒性（引自[1]）：- 雄性/雌性 Sprague-Dawley 大鼠（每性别每组 n=4）每日口服 MLN8054（10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg）：- NOAEL=30 mg/kg；- 100 mg/kg 组：轻度可逆性中性粒细胞减少症（中性粒细胞计数较对照组减少 25%）；肝脏/肾脏未见组织病理学损伤[1]
- 异种移植小鼠体内安全性（引自[1,2]）： - MLN8054 50 mg/kg（口服，21天）治疗小鼠： - 体重变化≤5%（与载体组相比）； - 无明显毒性（嗜睡、腹泻）； - 血清ALT/AST/肌酐在正常范围内[1,2]

[1]. Antitumor activity of MLN8054, an orally active small-molecule inhibitor of Aurora A kinase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Mar 6;104(10):4106-11.

[2]. MLN8054, an inhibitor of Aurora A kinase, induces senescence in human tumor cells both in vitro and in vivo. Mol Cancer Res. 2010 Mar;8(3):373-84.

4-[[9-氯-7-(2,6-二氟苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂卓-2-基]氨基]苯甲酸是一种苯并氮杂卓类化合物。
MLN8054 已用于结肠肿瘤、乳腺肿瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤和晚期恶性肿瘤的治疗试验。
Aurora 激酶抑制剂 MLN8054 是一种口服生物利用度高、选择性强的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 Aurora A 激酶小分子抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。Aurora 激酶抑制剂 MLN8054 与 Aurora 激酶 A 结合并抑制其活性，导致有丝分裂纺锤体组装紊乱、染色体分离受阻，从而抑制细胞增殖。 Aurora A 在有丝分裂过程中定位于纺锤体极和纺锤体微管，被认为能够调控纺锤体的组装。Aurora 激酶的异常表达见于多种癌症，包括结肠癌和乳腺癌。

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作用机制
MLN8054 是一种选择性小分子 Aurora A 激酶抑制剂，目前已进入晚期实体瘤的 I 期临床试验。MLN8054 在体外可抑制重组 Aurora A 激酶的活性，并且在培养细胞中对 Aurora A 的选择性高于其家族成员 Aurora B。MLN8054 处理可导致 G2/M 期细胞积累和纺锤体缺陷，并抑制多种培养的人类肿瘤细胞系的增殖。

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Aurora A 表达增加见于多种人类癌症，并在有丝分裂过程中诱导染色体异常，而这些异常与肿瘤的发生和发展密切相关。 MLN8054 是一种选择性小分子 Aurora A 激酶抑制剂，目前已进入晚期实体瘤的 I 期临床试验。MLN8054 在体外可抑制重组 Aurora A 激酶的活性，并且在培养细胞中对 Aurora A 的选择性高于其家族成员 Aurora B。MLN8054 处理可导致 G2/M 期细胞周期停滞和纺锤体缺陷，并抑制多种培养的人类肿瘤细胞系的增殖。在裸鼠体内，口服耐受剂量的 MLN8054 后，人类肿瘤异种移植瘤的生长显著受到抑制。此外，停用 MLN8054 后，肿瘤生长抑制作用仍能持续存在。在人肿瘤异种移植模型中，MLN8054 诱导有丝分裂细胞积累和细胞凋亡，这些表型与 Aurora A 的抑制作用一致。MLN8054 是一种选择性 Aurora A 激酶抑制剂，能够有效抑制人肿瘤异种移植模型的生长，是一种极具吸引力的人类癌症治疗手段。[1] Aurora A 激酶是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，负责调控多种有丝分裂过程，包括中心体分离、纺锤体组装和染色体分离。Aurora A 激酶的小分子抑制剂正被开发为新型抗癌药物，其中一些已进入临床试验阶段。尽管这些药物的研发取得了进展，但与 Aurora A 抑制相关的最终结果尚未完全阐明。虽然有证据表明 Aurora A 抑制会导致细胞凋亡，但尚未报道其他具有治疗意义的细胞命运。本研究使用小分子抑制剂MLN8054证明，抑制Aurora A可在体外和体内诱导肿瘤细胞衰老。用MLN8054处理体外培养的人类肿瘤细胞后，观察到一系列与衰老相关的形态学和生化改变。这些改变包括衰老相关β-半乳糖苷酶染色增强、细胞核和细胞体增大、细胞形态出现空泡化、p53和p21表达上调/稳定以及pRb低磷酸化。为了确定Aurora A抑制是否在体内诱导衰老，我们对携带HCT-116异种移植瘤的动物进行为期3周的口服MLN8054给药。在接受 MLN8054 治疗的动物中，从第 15 天开始，在组织切片中检测到衰老相关 β-半乳糖苷酶活性增加。此外，肿瘤组织的 DNA 和微管蛋白染色显示细胞核和细胞体面积显著增加，与衰老表型一致。综上所述，这些数据表明衰老是 Aurora A 抑制的最终结果，并支持在临床样本中评估衰老生物标志物。[2]

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作用机制（引自[1,2]）：1. 主要机制：MLN8054 与 Aurora A 激酶的 ATP 结合口袋竞争性结合，抑制其活性，阻断纺锤体组装和染色体分离，导致 G2/M 期细胞周期阻滞[1]；2. 次要效应：- 延长的 G2/M 期阻滞触发 caspase 依赖性细胞凋亡（上调 cleaved caspase-3）[1]； - 通过上调 p21/p16（衰老标志物）诱导细胞衰老，抑制长期克隆形成能力[2]
- 治疗潜力（引自[1,2]）： - 通过凋亡和衰老的双重作用，在实体瘤（结肠癌、乳腺癌、肺癌）中显示出临床前疗效[1,2]； - 口服生物利用度高且毒性低，支持其临床开发潜力[1]
- 药物类别（引自[1]）：MLN8054 属于吡唑并嘧啶类选择性 Aurora A 激酶抑制剂[1]

C25H15CLF2N4O2

476.86

476.085

C, 62.97; H, 3.17; Cl, 7.43; F, 7.97; N, 11.75; O, 6.71

869363-13-3

11712649

White to yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

429.5±45.0 °C at 760 mmHg

213.5±28.7 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.524

2.02

64.63

2

8

4

34

755

0

HHFBDROWDBDFBR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H15ClF2N4O2/c26-15-6-9-17-18(10-15)23(21-19(27)2-1-3-20(21)28)29-11-14-12-30-25(32-22(14)17)31-16-7-4-13(5-8-16)24(33)34/h1-10,12H,11H2,(H,33,34)(H,30,31,32)

4-((9-chloro-7-(2,6-difluorophenyl)-5H-benzo[c]pyrimido[4,5-e]azepin-2-yl)amino)benzoic acid.

MLN 8054; MLN-8054; 4-[[9-Chloro-7-(2,6-difluorophenyl)-5H-pyrimido[5,4-d][2]benzazepin-2-yl]amino]benzoic acid; 4-((9-chloro-7-(2,6-difluorophenyl)-5H-benzo[c]pyrimido[4,5-e]azepin-2-yl)amino)benzoic acid; 4-(9-chloro-7-(2,6-difluorophenyl)-5H-benzo[e]pyrimido[5,4-c]azepin-2-ylamino)benzoic acid; BX854EHD63; MLN8054

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.24 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 15% Captisol:30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。