PTB-1B (IC50 = 1 μM); TC-PTP (IC50 = 224 μM)[1]
Protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) (IC~50~ ≈ 1 μmol/l)
T-cell protein tyrosine phosphatase (TCPTP) (IC~50~ ≈ 224 μmol/l)
Dopamine transporter (DAT) (97% inhibition at screening concentration, but in vivo activity negated)
Norepinephrine transporter (NET) (89% inhibition at screening concentration, but in vivo activity negated) [1]

MSI-1436对TCPTP的抑制作用弱于对PTP1B活性的抑制作用，IC50值为224 μM [1]。 MSI-1436（Trodusquemine，10 μM）可恢复 F11 神经元细胞中 mGluR1/5 激动剂 DHPG 的 ERK 磷酸化。 MSI-1436 (10 uM) 逆转 DHPG 诱导的保持电流并恢复 LMO4KO BLA 神经元中的 DSI [2]。 MSI-1436 (0.1-100 μM) 阻断 PTP1B 活性 [3]。

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Trodusquemine (10 μmol/l) 在 HepG2 细胞中显著增强胰岛素刺激的胰岛素受体β (IRβ) 酪氨酸磷酸化，与单独使用胰岛素相比增加了约三倍。单独使用 trodusquemine 对 IRβ 磷酸化没有影响。 [1]
在使用 HepG2 细胞的完整细胞磷酸酶活性测定中，与 10 μmol/l MSI-1436 孵育导致磷酸酶活性相比对照（无抑制剂）抑制了 53%。 [1]
筛选实验表明，trodusquemine 在细胞实验中抑制多巴胺摄取和去甲肾上腺素摄取，报告的 IC~50~ 值分别为 0.4 μmol/l 和 0.7 μmol/l。然而，随后的体内研究并未证实对这些转运体的功能性抑制。 [1]
Trodusquemine 对二肽基肽酶4 (DPP-4) 没有显著抑制，与大麻素 CB1、胆囊收缩素 (CCK)、促肾上腺皮质激素释放因子 (CRF)、胰岛素或瘦素受体也没有显著结合。它也不激活血清素 (5-HT~2C~) 受体。 [1]

MSI-1436（10 mg/kg，腹腔注射）导致小鼠因肥胖而体重增加，除了白色脂肪组织中的脂肪细胞大小和脂质含量外，还降低了全身脂肪量[1]。 Trodusquemine 或 MSI-1436 通过重建杏仁核中的内源性大麻素 (eCB) 通讯来减轻焦虑 [2]。 MSI-1436（5 mg/kg，腹腔注射）抑制 CD1 小鼠的食物摄入并导致体重减轻。它还对糖尿病动物表现出抗糖尿病功效[3]。葡萄糖和胰岛素耐量试验表明，腹腔注射Claramine/克拉拉明或Trodusquemine可有效恢复糖尿病小鼠的血糖控制。单次腹腔注射Claramine/克拉拉明，就像等量的Trodusquemine一样，可以抑制进食，在不增加能量消耗的情况下导致体重减轻。总之，克拉拉胺是治疗II型糖尿病的另一种更容易制造的化合物。[3]

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在喂食高脂 (45%) 或极高脂 (60%) 饮食的饮食诱导肥胖 (DIO) AKR/J 小鼠中，腹腔注射 trodusquemine（初始剂量 10 mg/kg，随后每周三次剂量为 5 mg/kg）引起了显著的、持续的体重减轻，且体重减轻幅度与治疗前体重成比例。这种体重减轻是脂肪特异性的，表现为全身总脂肪和附睾脂肪垫重量减少，而瘦体重得以保留。 [1]
Trodusquemine 治疗抑制了 DIO 小鼠的食物摄入。与体重减轻进入平台期的配对喂养对照组不同，trodusquemine 治疗的小鼠持续减轻体重，表明该化合物克服了热量限制引起的代偿性代谢反应。 [1]
与相同饮食组的盐水对照组相比，trodusquemine 治疗显著降低了 DIO 小鼠的血浆胰岛素和瘦素水平。 [1]
在 Sprague-Dawley 大鼠中，腹腔注射 trodusquemine (10 mg/kg) 增强了胰岛素刺激的下丘脑 IRβ（约增加两倍）和 STAT3（增加 5.4 倍）的酪氨酸磷酸化，表明通过抑制 PTP1B 增强了中枢胰岛素和瘦素信号传导。单独使用 trodusquemine 使下丘脑 STAT3 磷酸化增加 2.7 倍。 [1]
在大鼠体内进行的快速扫描循环伏安法和小鼠悬尾试验表明，全身给予 MSI-1436 (10 mg/kg) 不会改变伏隔核的多巴胺再摄取、运动活动或诱导抗抑郁样作用，从而有效地排除了多巴胺或去甲肾上腺素再摄取转运体作为相关的体内靶点。 [1]

磷酸酶活性的定量采用完整细胞法测定。hepg2细胞用10µmol/l MSI-1436或正钒酸钠(100µmol/l，阳性对照)在37℃下预处理10 min，然后用10 mmol/l pNPP(一种细胞可渗透水解底物)在37℃下孵育30 min。在OD405分光光度法分析上清样品中水解的pNP, pNP是磷酸酶活性的直接最终产物[1]。

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激酶分析[1]
使用KINOMEscan检测人激酶活性。简单地说，256个dna标记的激酶、配体亲和珠和MSI-1436(10µmol/l)在室温下孵育，洗涤，然后洗脱。real-time定量PCR检测洗脱液中噬菌体滴度[1]。

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蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)抑制胰岛素信号，干扰其对葡萄糖稳态和代谢的控制。PTP1B活性在肥胖和2型糖尿病中升高，是胰岛素抵抗的主要原因。Trodusquemine (MSI-1436)是一种“一流的”高选择性PTP1B抑制剂，可以穿过血脑屏障抑制进食，促进胰岛素敏感性和血糖控制。Trodusquemine是一种天然存在的胆甾，可以从角鲨(Squalus棘鲨)的肝脏中纯化出来，但也可以通过一个相当费力的过程来合成，需要几个星期的时间。在这里，我们测试了一种易于快速合成(2天)的新型多胺类固醇衍生物(Claramine)，该衍生物含有与Trodusquemine相似的精子群，具有抑制PTP1B的能力。与Trodusquemine一样，Claramine对PTP1B表现出选择性抑制作用，但对其最密切相关的磷酸酶TC-PTP没有选择性抑制作用。在培养的神经元细胞中，Claramine和Trodusquemine都激活了胰岛素信号传导的关键成分，增加了胰岛素受体-β (IRβ)、Akt和GSK3β的磷酸化。 [3]

F11神经元细胞(小鼠神经母细胞瘤细胞系N18TG-2与胚胎大鼠背根神经节神经元融合的嵌合细胞系)在培养皿上无需特殊涂层即可很容易培养。F11细胞的生长和维持如前所述。[3]

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测量了对纯化的全长 PTP1B 酶的抑制。将 PTP1B 与不同浓度的 trodusquemine (0-500 μmol/l) 在预包被了酪氨酸磷酸肽底物的孔中孵育 30 分钟。使用酶联免疫吸附测定法，在 405 nm 处测量吸光度来量化酶活性。Trodusquemine 能有效抑制 PTP1B，IC~50~ 约为 1 μmol/l。 [1]
为评估选择性，测试了对 T 细胞蛋白酪氨酸磷酸酶 (TCPTP) 的抑制。将 TCPTP 与不同浓度的 trodusquemine (0-1000 μmol/l) 与底物 DiFMUP 一起孵育。通过荧光分光光度法测量荧光产物 DiFMU 的形成。Trodusquemine 抑制 TCPTP 的 IC~50~ 约为 224 μmol/l，显示出对 PTP1B 的选择性超过 TCPTP 200 倍以上。 [1]
通过将二肽基肽酶4 (DPP-4) 与 10 μmol/l trodusquemine 预孵育，然后加入底物 Ala-Pro-AFC 来测试抑制。通过荧光分光光度法测量荧光产物 AFC 的形成。未观察到抑制。 [1]

体内伏安法[1]
\n成年Sprague-Dawley大鼠（n = 12）麻醉（100 mg/kg氯胺酮，50 mg/kg赛拉嗪），将插管置于伏隔核核心，并将刺激电极置于腹侧被盖区。恢复后，每5分钟进行一次电刺激（刺激序列：60 Hz，24脉冲，1.2 µA）以诱发多巴胺，并使用快速扫描循环伏安法进行测量。在腹腔注射MSI-1436（10 mg/kg）、诺米芬辛（7 mg/kg）或生理盐水之前记录基线多巴胺水平。给药后60分钟内记录多巴胺峰值浓度和衰减至37%所需时间（τ），并以相对于基线的百分比变化表示。对清醒和行为大鼠进行快速扫描循环伏安法，如前所述。

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\n悬尾试验[1]
\n小鼠（CD1，n = 6/组；Charles River Laboratories，Kingston，NY）分别给予 MSI-1436（5 或 10 mg/kg，腹腔注射）、去甲肾上腺素再摄取抑制剂（阳性对照）（20 mg/kg 盐酸地昔帕明溶于 0.1% DMSO，腹腔注射）或载体。 30分钟后，将小鼠尾部悬吊于感觉控制环境中，由三位对处理方式不知情的独立观察者记录6分钟内的静止时间。

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\n葡萄糖耐量试验 (GTT) 和胰岛素耐量试验 (ITT)[3]
\n3.5月龄雄性小鼠分别在GTT或ITT前24小时或48小时腹腔注射溶于生理盐水的克拉拉明或特罗杜斯奎明（5 mg/kg体重）。小鼠禁食过夜（约16小时），但在上午10:00进行GTT前可自由饮水。在小鼠接受腹腔注射葡萄糖推注（2 g/kg 体重的 20% d-葡萄糖溶液）前后，使用标准血糖仪测量小鼠隐静脉的基础血糖水平，具体方法如前所述。[3]
\n另一组小鼠在进行胰岛素耐量试验（ITT）前禁食 4 小时，试验时间为 14:00 至 17:00。将人重组胰岛素（Sigma；货号 91077C）用无菌生理盐水稀释后，以 0.75 U/kg 的剂量进行腹腔注射，并按上述方法监测血糖水平。[3]

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\n食物摄入量[3]
\n将小鼠转移至单独饲养箱中，并适应 2 天。腹腔注射生理盐水、克拉明或特罗杜斯奎明（均为 5 mg/kg 体重）后测量食物摄入量。

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\n饮食诱导肥胖 (DIO) 小鼠研究：雄性 AKR/J 小鼠自由摄食 10%、45% 或 60% 脂肪饮食约 14 周以诱导肥胖。然后将小鼠随机分为以下治疗组：特罗杜斯奎明组（腹腔注射，初始剂量 10 mg/kg，随后每周一次，每次 5 mg/kg，共三次）、载体对照组（生理盐水，10 ml/kg，每周一次，共四次）或配对喂养对照组（注射生理盐水，食物摄入量与特罗杜斯奎明组相同）。监测体重和食物摄入量。23 天后，处死小鼠并采集血液和组织。通过测量水分、脂肪（索氏提取法）、蛋白质和灰分含量分析体成分。称量附睾脂肪垫。采用ELISA/RIA法测定血浆激素（胰岛素、瘦素、皮质酮）。固定腹股沟白色脂肪组织，切片，进行H&E染色，并在显微镜下分析脂肪细胞大小。[1]
\n大鼠下丘脑组织采集用于信号通路分析：9周龄雄性Sprague-Dawley大鼠自由摄取普通饲料，腹腔注射trodusquemine（10 mg/kg）或生理盐水。禁食过夜后，大鼠腹腔注射生理盐水或胰岛素（100 U/kg）。给药30分钟后，处死动物，取出下丘脑，并在提取缓冲液中匀浆。使用匀浆液进行磷酸化和总IRβ及STAT3的免疫沉淀和Western blot分析。 [1]
\n大鼠体内伏安法：成年Sprague-Dawley大鼠麻醉后，经手术植入套管和电极。恢复后，每隔5分钟对伏隔核进行电刺激，并使用快速扫描循环伏安法测量多巴胺浓度。在腹腔注射MSI-1436（10 mg/kg）、已知再摄取抑制剂（诺尼芬辛，7 mg/kg）或生理盐水前后，记录基线多巴胺动态变化。监测多巴胺浓度和再摄取动力学60分钟。[1]
\n小鼠悬尾试验：小鼠分别腹腔注射MSI-1436（5或10 mg/kg）、阳性对照（地昔帕明，20 mg/kg）或溶剂。 30分钟后，将小鼠置于受控环境中，用绳子将小鼠尾巴吊起，由不知晓分组情况的观察者记录小鼠在6分钟内的静止时间。[1]

该研究表明，trodusquemine能够穿过血脑屏障，全身给药后，其在体内可增强胰岛素刺激的下丘脑IRβ酪氨酸磷酸化。[1]
文章中引用的先前研究表明，脑室内注射trodusquemine的减重效果比肠外给药强100至1000倍，进一步支持了其能够穿透中枢神经系统。[1]
注：所提供的文献[1]未包含trodusquemine的详细药代动力学参数，例如半衰期、清除率、分布容积或口服生物利用度。[1]

[1]. Inhibition of PTP1B by trodusquemine (MSI-1436) causes fat-specific weight loss in diet-induced obese mice. Obesity (Silver Spring). 2010 Aug;18(8):1516-1523.

[2]. Chronic stress induces anxiety via an amygdalar intracellular cascade that impairs endocannabinoid signaling. Neuron. 2015 Mar 18;85(6):1319-31.

[3]. Functional properties of Claramine: a novel PTP1B inhibitor and mimetic compound. Biochem Biophys Res Commun. 2015 Feb 27;458(1):21-7.

杏仁核内源性大麻素 (eCB) 信号传导的崩溃会导致应激诱发的焦虑，但其机制尚不明确。eCB 的产生与谷氨酸受体 mGluR5 的功能密切相关，而 mGluR5 的功能又依赖于酪氨酸磷酸化。本文中，我们发现了一条新的通路，该通路通过 mGluR5 的磷酸化来调控 eCB 对焦虑的调节。缺乏 LMO4（一种酪氨酸磷酸酶 PTP1B 的内源性抑制剂）的小鼠表现出 mGluR5 磷酸化水平降低、eCB 信号传导减弱以及严重的焦虑，而通过基因或药物抑制杏仁核 PTP1B 可以逆转这些症状。慢性应激小鼠表现出血浆皮质酮水平升高、LMO4 棕榈酰化水平降低、PTP1B 活性增强、杏仁核 eCB 水平降低以及焦虑行为，而抑制 PTP1B 或拮抗糖皮质激素受体可以恢复这些症状。皮质酮持续降低神经元细胞中LMO4的棕榈酰化水平及其对PTP1B的抑制作用。这些数据共同揭示了一条应激反应性皮质酮-LMO4-PTP1B-mGluR5级联通路，该通路会损害杏仁核内源性大麻素（eCB）信号传导，并促进焦虑的发生发展。[2]

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蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B) 抑制胰岛素信号传导，干扰其对葡萄糖稳态和代谢的调控。PTP1B活性在肥胖和2型糖尿病中升高，是胰岛素抵抗的主要原因。Trodusquemine (MSI-1436) 是一种“首创”的高选择性PTP1B抑制剂，能够穿过血脑屏障，抑制摄食，促进胰岛素敏感性和血糖控制。 Trodusquemine是一种天然存在的胆甾烷类化合物，可从角鲨（Squalus acanthias）的肝脏中提取纯化，但也可通过较为繁琐的合成方法制备，该过程需要数周时间。本研究测试了一种新型的、易于快速合成（仅需2天）的多氨基甾类衍生物（Claramine），其含有与Trodusquemine类似的亚精胺基团，并考察了其抑制PTP1B的能力。与Trodusquemine类似，Claramine对PTP1B具有选择性抑制作用，但对其最接近的磷酸酶TC-PTP无抑制作用。在培养的神经元细胞中，Claramine和Trodusquemine均能激活胰岛素信号通路的关键组分，并增加胰岛素受体β（IRβ）、Akt和GSK3β的磷酸化水平。腹腔注射Claramine或Trodusquemine可有效恢复糖尿病小鼠的血糖控制，这已通过葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验得到证实。单次腹腔注射克拉明（Claramine）与等剂量的特罗杜斯奎明（Trodusquemine）一样，可抑制摄食并导致体重减轻，且不增加能量消耗。总之，克拉明是一种更易于生产的替代化合物，可用于治疗II型糖尿病。[3]

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特罗杜斯奎明是一种氨基甾醇，最初是从鲨鱼组织中分离出来的。它可导致非恶病质性（脂肪特异性）体重减轻，这意味着它能减少脂肪组织，同时不影响瘦肌肉量。[1]
其抗肥胖和胰岛素增敏作用的主要机制是选择性地变构、非竞争性抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)，PTP1B是胰岛素和瘦素信号通路的负调控因子。这种抑制作用既发生在中枢（大脑，特别是下丘脑），也发生在外周。 [1]
通过抑制下丘脑PTP1B，trodusquemine增强中枢胰岛素和瘦素信号传导，从而减少食物摄入并实现持续的体重减轻。外周PTP1B抑制可增强肝脏等组织的胰岛素敏感性。[1]
该化合物显示出作为肥胖症和2型糖尿病治疗药物的潜力，并一直是临床试验的重点。[1]

C40H78N4O8S

775.134331226349

774.55403

C, 57.84; H, 9.50; N, 5.86; O, 23.45; S, 3.36

1309370-86-2

MSI-1436;186139-09-3;MSI-1701;390808-64-7; 1309370-85-1 (phosphate)

145708148

White to off-white solid powder

6.24

212Ų

8

12

21

53

1100

11

C(O)(C)C(=O)O.O[C@@H]1C[C@@]2([H])C[C@@H](NCCCNCCCCNCCCN)CC[C@]2(C)[C@@]2([H])CC[C@@]3([C@@]([H])([C@H](C)CC[C@H](C(C)C)OS(O)(=O)=O)CC[C@@]3([H])[C@]12[H])C

IVOWHCPDKHVRGQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C37H72N4O5S.C3H6O3/c1-26(2)34(46-47(43,44)45)13-10-27(3)30-11-12-31-35-32(15-17-37(30,31)5)36(4)16-14-29(24-28(36)25-33(35)42)41-23-9-22-40-20-7-6-19-39-21-8-18-38;1-2(4)3(5)6/h26-35,39-42H,6-25,38H2,1-5H3,(H,43,44,45);2,4H,1H3,(H,5,6)

[6-[3-[3-[4-(3-aminopropylamino)butylamino]propylamino]-7-hydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylheptan-3-yl] hydrogen sulfate;2-hydroxypropanoic acid

MSI-1436 lactate; MSI-1436lactate; 1309370-86-2; MSI-1436C; MSI1436C; MSI 1436C; Aminosterol 1436; Aminosterol1436; Aminosterol-1436

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~54 mg/mL (~53.99 mM)
0.1 M HCL : 50 mg/mL (~49.99 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (3.00 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。