KOR/κ Opioid Receptor
Norbinaltorphimine dihydrochloride selectively targets the κ-opioid receptor (KOR). It acts as a competitive antagonist, reversibly blocking KOR signaling with high potency (pA₂ 10.2–10.4). It shows substantially weaker antagonistic activity at μ- and δ-opioid receptors, making it a highly selective tool for studying KOR-mediated pathways. It blocks KOR-mediated analgesic effects and inhibits butorphanol-induced changes in κ-opioid receptor binding kinetics, desensitization and down-regulation.

诺比那托芬（norbinaltorphimine）的pA2值为10.2-10.4，可逆性地拮抗κ受体激动剂的作用。维那托芬（Venatorfimin）的pA2值分别为7.4-7.6和7.6-7.8，因此其对μ和δ受体的拮抗作用显著较弱[1]。体外实验表明，诺比那托芬可逆性地拮抗pA2值为10.2-10.4的κ受体激动剂的作用。它能阻断多种表达κ阿片受体（KOR）的细胞系中κ阿片受体介导的信号传导，包括抑制激动剂诱导的G蛋白活化、cAMP抑制以及下游信号通路。放射性配体结合实验表明，诺比那托芬能以高亲和力竞争性地置换KOR选择性激动剂，而对μ和δ阿片受体的亲和力极低。该化合物的选择性使其成为阿片类药物药理学研究中的标准参考拮抗剂。

在青春期大鼠中，诺托芬宁对味觉回避的增强和减弱作用较弱且不稳定，取决于剂量和试验次数，导致对THC的味觉回避反应不一致。诺托芬宁不影响双瓶偏好测试，仅对最终瓶子回避产生轻微影响。值得注意的是，诺托芬宁对成年大鼠THC诱导的味觉回避没有影响[2]。诺比那托芬宁预处理对尼古丁诱导的恢复没有影响，但显著降低了应激诱导的尼古丁条件性位置偏好（CPP）引起的恢复[3]。

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目的：本研究旨在利用条件性味觉回避（CTA）程序评估κ阿片受体（KOR）拮抗剂对青春期和成年大鼠THC厌恶效应的影响。 [2]
方法：在对84只青少年和83只成年Sprague-Dawley大鼠进行单次预处理注射norbinaltorphimine（norBNI；15 mg/kg）后，评估了THC（0、0.56、1.0、1.8和3.2 mg/kg）诱导的条件性味觉厌恶（CTA）。[2]
结果：κ阿片受体拮抗剂norBNI对青少年大鼠THC诱导的味觉回避行为的影响较弱且不一致，norBNI对味觉回避行为的减弱和增强作用均取决于剂量和试验次数。norBNI对最终的单瓶回避试验影响有限，对双瓶偏好试验无影响。有趣的是，norBNI对成年大鼠THC诱导的味觉回避行为也无影响。 [2]
结论：norBNI对成年小鼠THC诱导的回避行为无显著影响，且对青少年小鼠的影响较小且不稳定，这表明THC的厌恶效应并非由κ阿片受体（KOR）活性介导，该结果通过Sprague-Dawley大鼠的条件性味觉厌恶（CTA）实验得到证实。

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目的：本研究旨在确定选择性KOR拮抗剂norbinaltorphimine（nor-BNI）是否能阻断应激诱导的尼古丁偏好恢复。[3]
方法：成年癌症研究所（ICR）小鼠接受0.5 mg/kg尼古丁皮下注射（sc）3天进行条件反射训练，并在尼古丁条件性位置偏好（CPP）模型中进行测试。经过3天的消退训练后，在给予尼古丁（0.1 mg/kg，皮下注射）预处理剂量前16小时，小鼠接受nor-BNI（10 mg/kg，皮下注射）治疗，并在条件性位置偏好（CPP）模型中测试尼古丁诱导的CPP恢复情况。另一组小鼠在CPP消退训练3天后，接受为期2天的改良强迫游泳试验（FST）以诱导应激反应。小鼠在每次FST试验前16小时接受载体或nor-BNI（10 mg/kg，皮下注射）治疗。[3]
结果：nor-BNI预处理显著减弱了应激诱导的尼古丁CPP恢复，但对尼古丁预处理引起的恢复无影响。[3]
结论：选择性拮抗剂阻断κ阿片受体（KORs）可减弱应激诱导的尼古丁CPP恢复。总体而言，κ阿片系统可能成为抑制多种信号通路（这些信号通路与吸烟、吸烟复发以及药物滥用密切相关）的治疗靶点。[3]
在体内，盐酸诺宾那托芬（norbinaltorphimine dihydrochloride）被用于研究动物模型中的κ阿片受体（KOR）功能。它能减弱应激诱导的尼古丁条件性位置偏好的恢复，表明κ阿片信号通路在应激相关的复发机制中发挥作用。它对四氢大麻酚（THC）诱导的味觉回避反应的影响有限，进一步凸显了其在成瘾和行为神经科学研究中的受体特异性药理学特性。全身给药诺宾那托芬可阻断KOR介导的镇痛作用，并逆转啮齿动物中KOR激动剂诱导的行为改变。

阿片受体拮抗剂norbinaltorphimine的药理学特性已在体外和体内进行了表征。体外实验表明，norbinaltorphimine可逆性地拮抗κ受体激动剂的作用，pA2值为10.2-10.4。norbinaltorphimine对μ和δ受体的拮抗作用较弱，pA2值分别为7.4-7.6和7.6-7.8。所有情况下，Schild斜率均为1。体内实验表明，norbinaltorphimine仅在高剂量下才有效拮抗，且对μ和κ受体的选择性不高。结果表明，norbinaltorphimine在体外是一种强效的选择性κ受体拮抗剂。然而，这种拮抗剂特性在体内无法维持[1]。
诺宾那托芬明的体外酶/受体结合试验通常包括使用表达κ、μ或δ阿片受体的细胞膜制备物进行放射性配体结合研究。竞争性结合实验使用κ阿片受体选择性放射性配体，例如[³H]U69,593或[³H]布雷马唑辛，以确定结合亲和力(Ki)和选择性。功能性试验测量化合物拮抗κ阿片受体激动剂诱导的[³⁵S]GTPγS结合或cAMP抑制的能力。pA₂值（10.2–10.4）通过功能性拮抗的Schild分析确定。

诺宾那托芬的细胞活性检测采用稳定或瞬时表达阿片受体的细胞系进行。表达κ阿片受体（KOR）的CHO细胞或HEK293细胞在有或无诺宾那托芬存在的情况下，用KOR激动剂（例如U69,593）处理，并通过GTPγS结合、cAMP积累或β-arrestin募集实验来检测受体激活情况。量化化合物逆转激动剂诱导效应的能力，以确定拮抗剂的效力和选择性。IC50或pA₂值由剂量反应曲线计算得出。

诺宾那托芬明溶于无菌水中，浓度为 15 mg/ml，并以 15 mg/kg 的剂量皮下注射 (SC)。[2]
诺宾那托芬明二盐酸盐溶于生理盐水（0.9% 氯化钠溶液）中，并以 10 ml/kg 体重的体积皮下注射 (sc)。[3]

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实验 1：青少年[2]
第一阶段：适应性训练 采用先前发表的简化条件性味觉厌恶 (CTA) 程序，旨在维持青少年动物的正常生长速度（Hurwitz 等，2012；Wetzell 等，2014）。从出生后第 22 天 (PND 22) 开始，每天对受试动物（n = 84）进行称重，使其适应实验人员的操作。在出生后第 28 天 (PND 28)，在开始水适应性训练前 24 小时停止喂水。在出生后第29天（PND 29），将小鼠转移至测试笼中，并提供45分钟的饮水时间。饮水器为50毫升的Nalgene离心管，每个离心管均配有橡胶塞和饮水管。之后，小鼠可自由饮水23.25小时，回到各自的饲养箱中。这个为期两天的循环（23.25小时禁水/45分钟测试笼饮水，随后24小时自由饮水）重复两次（最后一次在出生后第33天）。

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第二阶段：药物预处理[2]
根据所有适应性循环中的平均饮水量对动物进行排名，并分配到两个组中的一个[norbinaltorphimine (nor-BNI 或 norBNI) (n = 42) 和 Vehicle (n = 42)]，以确保各组的平均饮水量相当。在出生后第34天（PND 34，约在条件反射训练前24小时，见下文），分配到norBNI组的受试者注射norBNI（15 mg/kg），分配到载体组的受试者注射等体积的norBNI载体。norBNI注射时间的选择基于Munro等人（2012）的研究，该研究表明皮下注射norBNI可产生持久的、选择性针对κ阿片受体（KOR）的拮抗作用。

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第三阶段：味觉回避条件反射[2]
注射norbinaltorphimine（nor-BNI或norBNI）或载体后，动物禁水23¼小时（PND 34）。在出生后第35天（PND 35），用一种新型糖精溶液代替水，持续45分钟。糖精摄入后，立即根据糖精摄入量对各预处理组（norBNI组和Vehicle组）的动物进行排序，并分配到五个组中的一个[0 (n = 18)、0.56 (n = 16)、1.0 (n = 16)、1.8 (n = 16)、3.2 (n = 18)]，以确保各组的平均糖精摄入量相当。此过程共得到10个组：N0、N0.56、N1.0、N1.8、N3.2、V0、V0.56、V1.0、V1.8和V3.2，其中N或V代表预处理组（norBNI组或Vehicle组），数字代表条件反射训练期间给予的THC剂量。 THC剂量的选择基于其从潜在奖励到厌恶的范围（Braida等人，2004；Wakeford和Riley，2014）。在给予糖精20分钟后，受试者被注射药物或载体，并在其饲养箱中自由饮水23¼小时。这个为期2天的循环重复3次，共进行4次条件反射试验（最后一次试验在出生后第41天）。

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第四阶段：双瓶测试[2]
在条件反射训练的最后一个为期两天的循环结束后，动物在第42天禁水24小时，然后在第43天进行条件性厌恶测试（CTA），期间给予动物45分钟的时间接触两个Nalgene管（一个装有自来水，另一个装有糖精溶液）。瓶子的放置位置经过平衡处理，以控制位置效应对该测试的影响。完成上述操作后，动物被送回各自的笼子，并且没有进行任何注射。

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实验 2：成年动物 [2]
成年动物的实验步骤与上述相同，但有以下例外：83 只动物在出生后第 21 天被带入实验设施，并自由摄取食物和水，直到出生后第 76 天开始每日称重，期间不进行任何操作。在出生后第 83 天（PND 83）移除水瓶，习惯化阶段从 PND 84 开始。在 PND 89 注射去甲双氢吗啡酮（nor-BNI 或 norBNI）或载体，并在 PND 90 至 96 进行四次条件性味觉厌恶（CTA）条件反射试验。在 PND 98 进行最终的双瓶测试。

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尼古丁启动的尼古丁条件性位置偏好（CPP）恢复[3]
在 CPP 范式下测试了两组各 7 至 9 只小鼠，并将它们分为 A 组和 B 组。在测试日后 1 天（第 6 天），两组小鼠重复测试日程序，并持续三天，以测量尼古丁 CPP 的消退情况。所有小鼠在这些天进入实验箱之前均接受了生理盐水皮下注射。在第 8 天的测试结束后，A 组小鼠在第 9 天测试前 16 小时接受了norbinaltorphimine（nor-BNI 或 norBNI）（10 mg/kg，皮下注射）注射，B 组小鼠接受了载体注射。在第 9 天，小鼠接受了尼古丁（0.1 mg/kg，皮下注射）注射，A 组（nor-BNI 预处理组）的部分小鼠（生理盐水组和尼古丁组各 n=4）接受了载体注射，并立即被放入测试箱中进行测试。实验时间线如图 1a 所示。

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应激诱导的尼古丁条件性位置偏好（CPP）恢复[3]
与尼古丁启动的恢复研究类似，在 CPP 范式下测试了两组独立的小鼠，每组 6 至 8 只，即 A 组和 B 组。在经过三天的条件性位置偏好（CPP）消退训练（第8天）后，B组尼古丁条件反射小鼠接受了norbinaltorphimine（nor-BNI或norBNI）（10 mg/kg，皮下注射）注射，而A组尼古丁条件反射小鼠则接受了载体注射。生理盐水条件反射小鼠作为对照组（未受应激），并按照与强迫游泳试验（FST）小鼠相同的处理方案，在笼内分别接受载体（A组）或norbinaltorphimine（nor-BNI或norBNI）（B组）处理。在第9天，nor-BNI预处理16小时后，为了诱导应激，小鼠接受了为期两天的改良强迫游泳试验（Porsolt等人，1977；McLaughlin等人，2003）。简而言之，小鼠在装有3.5升30℃水的5升不透明烧杯中游泳。每次试验后，小鼠用毛巾擦干，放回笼中，然后再进行后续测试。在强迫游泳试验（FST）第1天（实验第9天），小鼠被放入水中进行一次15分钟的游泳试验。FST第1天结束后，小鼠在FST第2天前16小时再次接受nor-BNI或载体预处理。在FST第2天（实验第10天），小鼠被放入水中进行四次游泳试验，每次持续6分钟。每次试验之间间隔10分钟，小鼠返回笼中。游泳困难或无法保持漂浮是本研究的排除标准；然而，没有小鼠符合这些标准。第11天，小鼠再次被放入条件性位置偏好（CPP）箱中进行测试。实验时间线如图1b所示。
在啮齿动物模型中开展了norbinaltorphimine的体内动物研究，以研究κ阿片受体（KOR）在疼痛、应激、成瘾和情绪障碍中的功能。该化合物通常通过脑室内（ICV）、皮下或腹腔注射给药。行为学检测包括条件性位置偏好实验、强迫游泳实验、甩尾实验和自我给药实验。剂量和给药途径因实验方案而异；脑室内给药可使药物直接进入中枢神经系统。

盐酸诺比那托芬的药代动力学特性尚未得到充分研究。作为一种具有复杂多环结构的肽类生物碱，其口服生物利用度有限，通常在研究中采用注射给药。该化合物的分子量为734.71 g/mol，分子式为C40H45Cl2N3O6。文献已充分证实其对κ阿片受体（KOR）具有长效拮抗作用。用于研究时，该化合物通常储存在-20°C，并配制成合适的载体用于体内给药。

公开资料中关于盐酸诺宾那托芬明的具体毒理学数据有限。作为阿片受体研究的工具，它不适用于治疗用途。在动物研究中，该化合物在研究剂量下通常耐受性良好，在标准行为学测试中未报告显著不良反应。其使用仅限于合格实验室的体外和体内研究应用。仅供研究使用，不得用于治疗或人体用途。

[1]. Norbinaltorphimine: antagonist profile at kappa opioid receptors. Eur J Pharmacol. 1987 Dec 15;144(3):405-8.

[2]. Effect of norbinaltorphimine on ∆⁹-tetrahydrocannabinol (THC)-induced taste avoidance in adolescent and adult Sprague-Dawley rats. Psychopharmacology (Berl). 2015 Sep;232(17):3193-201.

[3]. Effects of the kappa opioid receptor antagonist, norbinaltorphimine, on stress and drug-induced reinstatement of nicotine-conditioned place preference in mice. Psychopharmacology (Berl). 2013 Apr;226(4):763-8.

与先前关于可卡因和乙醇的研究结果类似，nor-BNI并未阻断尼古丁诱导的尼古丁条件性位置偏好（CPP）的恢复，这表明其作用仅限于应激诱导的反应，并暗示应激诱导和药物诱导的复吸恢复机制不同。κ-阿片受体拮抗剂JDTic和nor-BNI均未对尼古丁条件性位置偏好（CPP）的表达产生任何影响（Jackson等，2010）。我们实验室的后续研究表明，当小鼠接受皮下注射0.1 mg/kg的尼古丁进行条件性位置偏好（CPP）训练时，JDTic并未增强尼古丁CPP。该剂量的尼古丁本身并不能产生显著的CPP（尼古丁(0.1) = 52 ± 10 vs. JDTic(16) - (尼古丁(0.1) = 75 ± 22)），这表明κ-阿片受体不参与尼古丁奖赏通路。然而，在高剂量的厌恶性尼古丁刺激下，nor-BNI预处理可以将厌恶反应转化为位置偏好（Smith等人，2012），这进一步支持了κ-阿片受体系统在介导尼古丁厌恶效应中的作用（Jackson等人，2010）。总之，κ-阿片受体拮抗剂nor-BNI可阻断应激诱导的尼古丁条件性位置偏好（CPP）的恢复，但不能阻断尼古丁启动的尼古丁CPP的恢复。结合既往研究，κ-阿片系统可能成为抑制与药物滥用维持和复发多个方面相关的信号通路的潜在治疗靶点。[3]

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尽管THC的厌恶效应似乎是由成人的κ-阿片受体活性介导的（Cheng et al., 2004; Ghozland et al., 2002; Zimmer et al., 2001），但κ受体活性在青少年中参与此类效应的程度仍不清楚。鉴于青春期大鼠对κ受体激动剂U62-066的厌恶反应相对不敏感（Anderson等，2014），THC的厌恶效应可能与此有关。其作用机制可能在该年龄组中有所不同。如前所述，norBNI对青春期大鼠味觉回避行为的影响并不一致，因为norBNI对最低剂量（0.56 mg/kg）和最高剂量（3.2 mg/kg）THC诱导的回避行为均无影响，但在中等剂量下则产生相反的效果（1.0 mg/kg时增强回避行为，1.8 mg/kg时减弱回避行为）。在所有norBNI显著影响THC诱导的回避行为的情况下，这种影响都很小，且具有试验依赖性。在最终的单瓶回避测试中，norBNI预处理仅在接受1.8 mg/kg THC条件反射的组中显著减弱了味觉回避行为。在双瓶测试中，未发现norBNI预处理的影响，因为载体组和norBNI处理组的受试者均表现出相似的剂量依赖性对THC相关糖精的回避行为。这些发现与最初的预测一致，即青少年对κ受体活性相对不敏感，并且THC诱导的味觉回避可能由非κ阿片受体（KOR）相关机制介导。在成人中进行了类似的评估，主要是为了重复之前的研究，并证实当使用条件性味觉厌恶（CTA）程序评估时，THC在该人群中的厌恶效应是由κ受体介导的。有趣的是，norBNI在所有分析阶段（即学习阶段、最终的单瓶回避测试或双瓶测试）均未对成年受试者产生影响。一个亟待解决的问题是，norBNI在该剂量和特定测试参数下是否具有行为活性。如前所述，尽管norBNI在青少年受试者中未表现出一致的效应，但生理盐水组和norBNI组之间THC诱导的回避行为的显著差异表明norBNI具有行为活性剂量。有趣的是，一些实验室的最新研究表明，本研究中使用的norBNI可以影响药物诱导的味觉回避和其他行为效应。具体而言，皮下注射norBNI的预处理剂量范围与本研究中使用的剂量范围相似。在实验开始前24小时给予norBNI可显著影响应激小鼠的乙醇诱导的味觉回避行为（Anderson等，2013）、成年小鼠的乙醇摄入量（Morales等，2014）、给予可卡因6小时的大鼠的可卡因自我给药行为（Wee等，2009）以及给予海洛因6小时的大鼠的海洛因自我给药行为（Schlosburg等，2013）。尽管有报道称norBNI会影响多种行为终点，但值得注意的是，一些研究人员在评估norBNI对其他滥用行为中κ阿片受体（KOR）活性的影响时，并未发现norBNI给药的显著作用（Hutsell等人，2015；Negus，2004）。[2]
盐酸诺宾那托芬（Norbinaltorphimine dihydrochloride，CAS# 113158-34-2）是一种强效且高选择性的κ阿片受体（KOR）拮抗剂。它也被称为盐酸诺宾那托芬或盐酸诺宾那托芬（nor-Binaltorphimine dihydrochloride）。它在KOR上的pA₂值为10.2-10.4，而对μ和δ阿片受体的活性则显著较弱。该化合物广泛用于神经生物学研究，以解析KOR介导的过程，包括应激、成瘾、疼痛和情绪调节。它对 THC 引起的味觉回避作用有限，这进一步凸显了其受体特异性药理学特性。

C40H45CL2N3O6

734.707809209824

733.268

113158-34-2

105618-26-6

11957626

Light yellow to gray solid powder

122

7

8

4

51

1340

8

Cl.Cl.O1C2=C(C=CC3C[C@@H]4[C@@]5(CC6=C([C@H]1[C@@]5(C=32)CCN4CC1CC1)NC1=C6C[C@]2([C@H]3CC4C=CC(=C5C=4[C@@]2(CCN3CC2CC2)[C@H]1O5)O)O)O)O

JOJPJLHRMGPDPV-LZQROVCBSA-N

InChI=1S/C40H43N3O6.2ClH/c44-25-7-5-21-13-27-39(46)15-23-24-16-40(47)28-14-22-6-8-26(45)34-30(22)38(40,10-12-43(28)18-20-3-4-20)36(49-34)32(24)41-31(23)35-37(39,29(21)33(25)48-35)9-11-42(27)17-19-1-2-19;;/h5-8,19-20,27-28,35-36,41,44-47H,1-4,9-18H2;2*1H/t27-,28-,35+,36+,37+,38+,39-,40-;;/m1../s1

(1S,2S,7S,8S,12R,20R,24R,32R)-11,33-bis(cyclopropylmethyl)-19,25-dioxa-11,22,33-triazaundecacyclo[24.9.1.18,14.01,24.02,32.04,23.05,21.07,12.08,20.030,36.018,37]heptatriaconta-4(23),5(21),14(37),15,17,26,28,30(36)-octaene-2,7,17,27-tetrol;dihydrochloride

nor-Binaltorphimine dihydrochloride; 113158-34-2; Norbinaltorphimine dihydrochloride; Nor-bni; nor-BNI dihydrochloride; Y8WNP37PIV; NorbinaltorphimineDihydrochlorideSalt; 105618-26-6;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~136.11 mM)
H2O : ~33.33 mg/mL (~45.36 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。