KOR/κ Opioid Receptor

Norbinaltorphimine 的 pA2 值为 10.2-10.4，可逆地对抗 kappa 激动剂的作用。 Venatorfimin 的 pA2 值分别为 7.4-7.6 和 7.6-7.8，使其成为 mu 和 delta 受体拮抗剂的效果明显较差[1]。

在青春期大鼠中，根据剂量和试验，去甲诺托亚明会微弱且不一致地增强和减弱味觉回避，这导致对 THC 的味觉回避反应不一致。去甲肾上腺素不影响两瓶偏好测试，仅轻微影响最终的瓶子回避。有趣的是，去甲苯宁对成年大鼠 THC 诱导的味觉回避没有影响 [2]。诺比那法明预处理对尼古丁诱导的恢复没有影响，但它显着降低了应激诱导的尼古丁-CPP引起的恢复[3]。

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目的：本研究旨在通过条件味觉回避（CTA）程序评估KOR拮抗剂对青少年和成年大鼠THC厌恶作用的影响。[2]
方法：在单次预处理注射去甲二萘酚亚胺（norBNI；15mg/kg）后，在青春期（n=84）和成年（n=83）Sprague-Dawley大鼠中评估THC（0、0.56、1.0、1.8和3.2mg/kg）诱导的CTA。[2]
结果：KOR拮抗剂norBNI对THC诱导的青春期大鼠味觉回避的影响较弱且不一致，因为norBNI根据剂量和试验减轻和加强了味觉回避。norBNI对最后一瓶避免的影响有限，对两瓶偏好测试没有影响。有趣的是，norBNI对成年大鼠THC诱导的味觉回避也没有影响。[2]
结论：norBNI对成人THC诱导的回避没有显著影响，对青少年的影响较小且不一致，这表明THC的回避作用不是由Sprague-Dawley大鼠CTA设计评估的KOR活性介导的。

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目的：在目前的研究中，我们确定了选择性KOR拮抗剂去甲二萘酚亚胺（nor-BNI）是否会阻断应激诱导的尼古丁偏好的恢复。[3]
方法：癌症研究所成年小鼠用0.5毫克/千克尼古丁调节，皮下注射（皮下注射）3天，并在尼古丁调节位置偏好（CPP）模型中进行测试。灭活3天后，在尼古丁（0.1mg/kg，皮下注射）预处理剂量前16小时给予nor-BNI（10mg/kg，皮下注射。），并在CPP模型中测试小鼠尼古丁诱导的CPP恢复情况。另一组小鼠接受了为期2天的改良强迫游泳试验（FST）范式，以在CPP灭绝3天后诱导应激。在每次FST治疗前16小时，给小鼠服用赋形剂或nor-BNI（10mg/kg，皮下注射）。[3]
结果：Nor-BNI预处理显著减弱了应激诱导的尼古丁CPP的恢复，但对尼古丁预处理的恢复没有影响。[3]
结论：选择性拮抗剂阻断KOR可减轻应激诱导的尼古丁CPP的恢复。总体而言，κ阿片系统可以作为抑制多种信号传导过程的治疗靶点，这些过程有助于维持吸烟、吸烟复发和药物滥用。[3]

阿片类拮抗剂去甲萘酚亚胺的药理学特征已在体外和体内进行了表征。在体外，去甲二萘酚亚胺可逆地拮抗κ激动剂的作用，pA2值为10.2-10.4。去甲萘多芬作为μ受体和δ受体的拮抗剂效力要小得多，pA2值分别为7.4-7.6和7.6-7.8。在所有情况下，席尔德斜坡都是统一的。在体内，去甲二萘酚亚胺仅在高剂量水平下是一种有效的拮抗剂，对μ和κ的选择性不是很高。结果表明，在体外，去甲二萘酚亚胺是一种有效的选择性kappa拮抗剂；然而，这种拮抗剂的特性在体内并未得到维持[1]。

诺宾那托芬明溶于无菌水中，浓度为15 mg/ml，并以15 mg/kg的剂量皮下注射（SC）。[2]
\n诺宾那托芬明二盐酸盐溶于生理盐水（0.9%氯化钠溶液）中，并以10 ml/kg体重的体积皮下注射（sc）。[3]

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\n\n实验1：青少年[2]
\n第一阶段：适应性训练\n采用先前发表的简化条件性味觉厌恶（CTA）程序，以维持青少年动物的正常生长速度（Hurwitz等人，2012；Wetzell等人，2014）。从出生后第22天（PND 22）开始，每天对受试者（n = 84）进行称重，使其适应实验人员的操作。在出生后第28天（PND 28），小鼠被禁水24小时，之后开始进行水适应性训练。在出生后第29天（PND 29），小鼠被转移到测试笼中，并给予45分钟的饮水时间。饮水器为50毫升的Nalgene离心管，每个离心管都配有橡胶塞和饮水管。之后，小鼠可以在各自的饲养箱中自由饮水23¼小时。这个为期2天的循环（23.25小时禁水/45分钟测试笼开放，随后24小时自由饮水）重复两次（最后一次在出生后第33天）。\n

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\n第二阶段：药物预处理[2]
\n根据所有适应性循环中的平均饮水量对动物进行排名，并分配到两个组中的一个[norbinaltorphimine (nor-BNI 或 norBNI) (n = 42) 和 Vehicle (n = 42)]，以确保各组的平均饮水量相当。在出生后第34天（大约在条件反射训练前24小时，见下文），norBNI 组的受试者注射 norBNI（15 mg/kg），Velvey 组的受试者注射等体积的 norBNI 赋形剂。 norBNI 注射时间基于 Munro 等人 (2012) 的研究，该研究表明皮下注射 norBNI 可产生持久的拮抗作用，且该作用对 KOR 具有选择性。\n

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\n第三阶段。味觉回避条件反射[2]
\n注射norbinaltorphimine（nor-BNI 或 norBNI） 或载体后，动物禁水 23¼ 小时（出生后第 34 天）。在出生后第35天（PND 35），用一种新型糖精溶液代替水，持续45分钟。糖精摄入后，立即根据糖精摄入量对各预处理组（norBNI组和Vehicle组）的动物进行排序，并分配到五个组中的一个[0 (n = 18)、0.56 (n = 16)、1.0 (n = 16)、1.8 (n = 16)、3.2 (n = 18)]，以确保各组的平均糖精摄入量相当。此过程共得到10个组：N0、N0.56、N1.0、N1.8、N3.2、V0、V0.56、V1.0、V1.8和V3.2，其中N或V代表预处理组（norBNI组或Vehicle组），数字代表条件反射训练期间给予的THC剂量。 THC剂量的选择基于其从潜在奖励到厌恶的范围（Braida等人，2004；Wakeford和Riley，2014）。在给予糖精20分钟后，受试者被注射药物或载体，并在其饲养箱中自由饮水23¼小时。这个为期2天的循环重复3次，共进行4次条件反射试验（最后一次试验在出生后第41天）。第四阶段：双瓶测试[2]在条件反射训练的最后一个为期两天的循环结束后，动物在第42天禁水24小时，然后在第43天进行条件性厌恶（CTA）双瓶测试，给予45分钟的时间接触两个Nalgene管（一个装有自来水，另一个装有糖精溶液）。瓶子的放置位置经过平衡处理，以控制位置效应对该测试的影响。完成此操作后，将动物放回各自的笼子中，并且没有进行任何注射。\n

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\n\n实验 2：成年动物 [2]
\n成年动物的实验步骤与上述步骤相同，但有以下例外：83 只成年动物在出生后第 21 天被带入实验设施，并自由摄取食物和水，直到出生后第 76 天开始每日称重，期间不进行任何操作。在出生后第 83 天（PND 83）移除水瓶，习惯化阶段从 PND 84 开始。在 PND 89 注射去甲双氢吗啡酮（nor-BNI 或 norBNI）或载体，并在 PND 90 至 96 进行四次条件性味觉厌恶（CTA）条件反射试验。最终的双瓶测试在 PND 98 进行。\n

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\n\n尼古丁启动的尼古丁条件性位置偏好（CPP）恢复[3]
\n在 CPP 范式下测试了两组各 7 至 9 只小鼠，并将它们分为 A 组和 B 组。在测试日后 1 天（第 6 天），两组小鼠重复测试日程序，并持续三天，以测量尼古丁 CPP 的消退情况。所有小鼠在这些天进入测试箱之前均接受了生理盐水皮下注射。在第 8 天的测试结束后，A 组小鼠在第 9 天测试前 16 小时接受了norbinaltorphimine（nor-BNI 或 norBNI）（10 mg/kg，皮下注射）注射，B 组小鼠接受了载体注射。在第 9 天，小鼠接受了尼古丁（0.1 mg/kg，皮下注射）注射，A 组（nor-BNI 预处理组）的部分小鼠（生理盐水组和尼古丁组各 n=4）接受了载体注射，并立即被放入测试箱中进行测试。实验时间线如图 1a 所示。\n

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\n应激诱导的尼古丁条件性位置偏好（CPP）恢复[3]
\n与尼古丁启动恢复研究类似，在 CPP 范式下测试了两组独立的小鼠，每组 6 至 8 只，即 A 组和 B 组。在经过三天的条件性位置偏好（CPP）消退训练（第8天）后，B组尼古丁条件反射小鼠接受了norbinaltorphimine（nor-BNI或norBNI）（10 mg/kg，皮下注射）注射，而A组尼古丁条件反射小鼠则接受了载体注射。生理盐水条件反射小鼠作为对照组（未受应激），并按照与强迫游泳试验（FST）小鼠相同的处理方案，在笼内分别接受载体（A组）或norbinaltorphimine（nor-BNI或norBNI）（B组）处理。在第9天，nor-BNI预处理16小时后，为了诱导应激，小鼠接受了为期两天的改良强迫游泳试验（Porsolt等人，1977；McLaughlin等人，2003）。简而言之，小鼠在装有3.5升30℃水的5升不透明烧杯中游泳。每次试验后，小鼠用毛巾擦干，放回笼中，然后再进行后续测试。在强迫游泳试验（FST）第1天（实验第9天），小鼠被放入水中进行一次15分钟的游泳试验。FST第1天结束后，小鼠在FST第2天前16小时再次接受nor-BNI或载体预处理。在FST第2天（实验第10天），小鼠被放入水中进行四次游泳试验，每次持续6分钟。每次试验之间间隔10分钟，小鼠返回笼中。游泳困难或无法保持漂浮是本研究的排除标准；然而，没有小鼠符合这些标准。第11天，小鼠再次被放入条件性位置偏好（CPP）箱中进行测试。实验时间线如图1b所示。

[1]. Norbinaltorphimine: antagonist profile at kappa opioid receptors. Eur J Pharmacol. 1987 Dec 15;144(3):405-8.

[2]. Effect of norbinaltorphimine on ∆⁹-tetrahydrocannabinol (THC)-induced taste avoidance in adolescent and adult Sprague-Dawley rats. Psychopharmacology (Berl). 2015 Sep;232(17):3193-201.

[3]. Effects of the kappa opioid receptor antagonist, norbinaltorphimine, on stress and drug-induced reinstatement of nicotine-conditioned place preference in mice. Psychopharmacology (Berl). 2013 Apr;226(4):763-8.

诺宾那托芬明是异喹啉类化合物的一员。
与之前对可卡因和乙醇的研究结果类似，nor-BNI 并未阻断尼古丁引发的尼古丁条件性位置偏好（CPP）的恢复，这表明其作用特异性地针对应激诱导的反应，并暗示应激诱导和药物诱导的药物复发机制存在差异。 κ阿片受体拮抗剂JDTic和nor-BNI对尼古丁条件性位置偏好（CPP）的表达也没有影响（Jackson等人，2010）。我们实验室的后续研究表明，当给小鼠注射不会产生显著CPP的尼古丁剂量（0.1 mg/kg，皮下注射）进行条件反射训练时，JDTic并未增强尼古丁CPP（尼古丁（0.1）=52±10 vs. JDTic（16）-（尼古丁（0.1）=75±22）），这表明κ阿片受体不参与尼古丁奖赏通路。然而，在较高剂量的厌恶性尼古丁下，nor-BNI预处理可将厌恶反应转变为位置偏好（Smith等人，2012），这进一步支持了κ阿片受体系统在介导尼古丁厌恶效应中的作用（Jackson等人）。 2010）。总之，κ阿片受体拮抗剂nor-BNI可阻断应激诱导的尼古丁条件性位置偏好（CPP）的恢复，但不能阻断尼古丁启动的尼古丁CPP的恢复。结合之前的研究，κ阿片系统可作为抑制与药物滥用维持和复发多个方面相关的信号通路的潜在治疗靶点。[3]

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尽管THC的厌恶效应似乎是由成年人的κ阿片受体活性介导的（Cheng等人，2004；Ghozland等人，2002；Zimmer等人，2001），但κ受体活性在青少年中是否参与此类效应的程度尚不清楚。鉴于青少年大鼠对κ激动剂U62-066的厌恶效应相对不敏感（Anderson等人，2014），THC的厌恶效应可能与此有关。在这个年龄组中，其作用机制可能有所不同。如前所述，norBNI 对青少年味觉回避的影响并不一致，因为 norBNI 对最低剂量 (0.56 mg/kg) 和最高剂量 (3.2 mg/kg) THC 诱导的回避行为均无影响，而在中间剂量下则产生相反的效果（1.0 mg/kg 时增强回避行为，1.8 mg/kg 时减弱回避行为）。在所有 norBNI 显著影响 THC 诱导的回避行为的案例中，其影响均较小且具有试验依赖性。在最终的单瓶回避测试中，norBNI 预处理仅在接受 1.8 mg/kg THC 条件反射的动物组中显著减弱了味觉回避行为。在双瓶评估中，未发现 norBNI 预处理的任何影响，因为载体组和 norBNI 处理组的受试者对 THC 相关糖精的回避行为均表现出相似的剂量依赖性。这些发现与最初的预测一致，即青少年……对κ受体的活性相对不敏感，THC诱导的味觉回避可能由非κ阿片受体（KOR）相关机制介导。在成年人中进行了类似的评估，主要目的是重复先前的研究，并确认在使用条件性味觉厌恶（CTA）程序评估时，THC在该人群中的厌恶效应是由κ受体介导的。有趣的是，在所有分析阶段（即习得阶段、最终单瓶回避测试或双瓶测试），norBNI对成年受试者均无影响。一个迫在眉睫的问题是，在此剂量和特定测试参数下，norBNI是否具有行为活性。如前所述，尽管norBNI在青少年受试者中没有一致的影响，但生理盐水组和norBNI组动物之间THC诱导的回避行为存在显著差异，表明norBNI具有行为活性剂量。有趣的是，一些实验室最近的研究表明，本研究中使用的norBNI能够影响药物诱导的味觉回避以及其他行为效应。具体而言，皮下注射norBNI的预处理剂量范围与本研究中使用的剂量范围相似。在实验程序开始前 24 小时给予 norBNI，可显著影响应激小鼠的乙醇诱导味觉回避行为（Anderson 等，2013）、成年小鼠的乙醇摄入量（Morales 等，2014）、给予 6 小时可卡因的大鼠的可卡因自我给药行为（Wee 等，2009）以及给予 6 小时海洛因的大鼠的海洛因自我给药行为（Schlosburg 等，2013）。尽管已有报道称 norBNI 可影响多种行为终点，但值得注意的是，也有研究者在评估 norBNI 给药对其他滥用药物行为效应中 κ 阿片受体 (KOR) 活性的影响时，发现 norBNI 给药并无明显作用（Hutsell 等，2015；Negus，2004）。[2]

C40H43N3O6

661.8

661.31518

105618-26-6

113158-34-2

5480230

Typically exists as White to off-white solid at room temperature

1.63 g/cm3

280ºC

1.834

5.303

121.65

5

8

4

49

1340

8

C1CC1CN2CC[C@]34[C@@H]5C6=C(C[C@]3([C@H]2CC7=C4C(=C(C=C7)O)O5)O)C8=C(N6)[C@H]9[C@@]12CCN([C@@H]([C@@]1(C8)O)CC1=C2C(=C(C=C1)O)O9)CC1CC1

APSUXPSYBJVPPS-YAUKWVCOSA-N

InChI=1S/C40H43N3O6/c44-25-7-5-21-13-27-39(46)15-23-24-16-40(47)28-14-22-6-8-26(45)34-30(22)38(40,10-12-43(28)18-20-3-4-20)36(49-34)32(24)41-31(23)35-37(39,29(21)33(25)48-35)9-11-42(27)17-19-1-2-19/h5-8,19-20,27-28,35-36,41,44-47H,1-4,9-18H2/t27-,28-,35+,36+,37+,38+,39-,40-/m1/s1

(1S,2S,7S,8S,12R,20R,24R,32R)-11,33-bis(cyclopropylmethyl)-19,25-dioxa-11,22,33-triazaundecacyclo[24.9.1.18,14.01,24.02,32.04,23.05,21.07,12.08,20.030,36.018,37]heptatriaconta-4(23),5(21),14(37),15,17,26,28,30(36)-octaene-2,7,17,27-tetrol

Norbinaltorphimine; nor-Binaltorphimine; 105618-26-6; Nor-bni; NorBNI; UNII-36OOQ86QM1; Nor-Binaltorphamine; 36OOQ86QM1;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。