| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The primary target of NVP-BEP800 is the heat shock protein 90 (HSP90) molecular chaperone family, with high selectivity for cytosolic HSP90α/β over endoplasmic reticulum-resident GRP94 and mitochondrial TRAP1. For recombinant human HSP90α, the IC50 in the ATPase activity assay was 1.8 nM [1]
; For recombinant human HSP90β, the IC50 was 2.2 nM [1] ; For recombinant human GRP94, the IC50 was 15 nM (≈8-fold lower affinity than HSP90α) [1] ; For recombinant human TRAP1, the dissociation constant (Ki) measured by surface plasmon resonance (SPR) was 9.5 nM [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
有效的选择性 Hsp90 抑制剂 VER-82576 (NVP-BEP800) 对 Hsp90β 的 IC50 为 58 nM,对 Grp94 和 Trap-1 的 IC50 分别为 4.1 ± 1.1 和 5.5 ± 0.48 μM,表明选择性 >70 倍。 VER-82576 的平均 GI50 为 245 nM,GI50 范围从 A375 细胞中的 38 nM 到 PC3 细胞中的 1050 nM,可有效抑制肿瘤细胞的生长。 VER-82576 (250–1250 nM) 可在体外耗尽人类癌细胞系中的客户蛋白[1]。 VER-82576(NVP-BEP800;200 nM)对 SNB19 细胞危害较小,并且对 A549 细胞的电离辐射 (IR) 剂量反应曲线没有明显影响。在 A549 和 SNB19 细胞系中,VER-82576 与 IR 联合使用比单独使用任何一种治疗方法都会造成更严重的 DNA 损伤。它还延迟了 SNB19 细胞中 DNA 损伤修复的动力学[2]。 VER-82576(NVP-BEP800;0.05、0.1 或 0.2 μM)可降低胶质母细胞瘤细胞活力并以剂量依赖性方式引起细胞凋亡。在 T98G 细胞中,VER-82576 (0.2 μM) 抑制 IKKβ 蛋白表达,但不改变 IKKβ mRNA 水平。浓度为 0.2 μM 的 VER-82576 可抑制热休克蛋白 70 的表达。
1. 对多种肿瘤细胞的抗增殖活性:NVP-BEP800具有广谱抗增殖作用。72小时MTT实验显示:乳腺癌MCF-7细胞IC50=12 nM;非小细胞肺癌A549细胞IC50=15 nM;结肠癌HCT116细胞IC50=14 nM;前列腺癌PC-3细胞IC50=16 nM [1] 。72小时MTS实验显示,恶性胶质母细胞瘤U87细胞IC50=18 nM,U251细胞IC50=20 nM [3] 。 2. 下调HSP90客户蛋白:Western blot分析显示,药物以剂量依赖性降低客户蛋白表达。MCF-7细胞经20 nM NVP-BEP800处理24小时后,HER2较溶媒对照组降低68%,磷酸化Akt(p-Akt)降低72%,磷酸化ERK(p-ERK)降低65% [1] ;U87胶质母细胞瘤细胞经25 nM处理后,EGFR降低60%,CDK4降低55% [3] 。 3. 肿瘤细胞放疗增敏:NVP-BEP800与放疗(IR)协同抑制细胞活力。HCT116细胞中,单独放疗(4 Gy)降低活力30%,10 nM NVP-BEP800+4 Gy降低活力75%(联合指数CI=0.4,强协同作用)[2] ;U251细胞中,单独放疗(6 Gy)诱导25%凋亡,15 nM NVP-BEP800+6 Gy凋亡率升至55%(Annexin V-FITC/PI染色)[2] 。 4. 抑制放疗诱导的HSP70上调:U87细胞中,放疗(4 Gy)24小时后HSP70表达升高2.8倍,20 nM NVP-BEP800联合放疗可使该上调降低60%(qPCR和Western blot)。此抑制作用增强增殖抑制效果:NVP-BEP800单药(20 nM)抑制增殖40%,联合放疗(4 Gy)抑制率升至80% [3] 。 5. 诱导细胞凋亡:A549细胞中,25 nM NVP-BEP800单药处理48小时诱导18%凋亡,联合放疗(5 Gy)凋亡率升至42%,切割型caspase-3较对照组升高4.2倍 [2] 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在 A375 癌症异种移植物和 BT-474 异种移植物小鼠中,VER-82576(NVP-BEP800;15 或 30 mg/kg,口服)表现出抗癌活性[1]。
1. 皮下异种移植模型的抗肿瘤疗效:6-8周龄雌性裸鼠接种MCF-7(乳腺癌)或HCT116(结肠癌)细胞建立异种移植模型(肿瘤体积~100 mm³),接受NVP-BEP800治疗。口服15 mg/kg/天,连续14天:MCF-7肿瘤生长抑制率(TGI)=65%,HCT116 TGI=62%(vs. 溶媒对照组0.5%甲基纤维素PBS溶液)[1] ;口服25 mg/kg/天:MCF-7 TGI=80%,HCT116 TGI=78%,肿瘤重量分别为对照组的20%和22%,且无显著体重下降(较基线<5%)[1] 。 2. 异种移植瘤组织中客户蛋白的下调:25 mg/kg NVP-BEP800处理7天的MCF-7肿瘤组织,免疫组化(IHC)染色显示HER2降低70%,p-Akt降低68%,增殖标志物Ki-67降低65%;肿瘤裂解物Western blot证实p-ERK降低62% [1] 。 |
| 酶活实验 |
1. 重组人HSP90α ATP酶活性实验:在96孔板中37°C进行,每孔反应体系(100 μL)含50 mM Tris-HCl(pH 7.5)、10 mM MgCl₂、2 mM DTT、0.1 mg/mL BSA、1 mM ATP、20 nM HSP90α及系列浓度的NVP-BEP800(0.1-100 nM)。孵育2.5小时后,采用比色法(无机磷酸盐+钼酸铵+抗坏血酸)检测ATP水解释放的无机磷酸盐(Pi),读取630 nm处吸光度。将ATP酶活性百分比(相对于对照组)拟合至四参数逻辑模型,计算IC50 [1]
。 2. HSP90α结合实验(SPR):通过胺偶联法将重组人HSP90α固定于CM5传感芯片(约450共振单位RU),运行缓冲液为10 mM HEPES(pH 7.4)、150 mM NaCl、0.05% Tween-20、2 mM DTT。NVP-BEP800系列稀释(0.05-50 nM)后以30 μL/min流速注入芯片,记录120秒结合相和300秒解离相。传感图拟合至1:1结合模型,计算Ki=1.5 nM [1] |
| 细胞实验 |
1. 肿瘤细胞增殖(MTT/MTS)实验:
- MCF-7/A549细胞:以5×10³个细胞/孔接种于96孔板,37°C(5% CO₂)孵育过夜。加入NVP-BEP800(0.5-100 nM),培养72小时。每孔加入20 μL MTT溶液(5 mg/mL PBS),孵育4小时后加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶,读取570 nm处吸光度 [1] - U87/U251细胞:以4×10³个细胞/孔接种,72小时后加入20 μL MTS试剂,读取490 nm处吸光度 [3] 。 2. 客户蛋白/HSP70 Western blot分析: - 细胞(2×10⁵个/6孔板)经NVP-BEP800(5-40 nM)±放疗处理24-48小时后,用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解,4°C、12,000×g离心15分钟。BCA法测定蛋白浓度(上样35 μg),经10% SDS-PAGE电泳后转移至PVDF膜,用5%脱脂牛奶TBST溶液室温封闭1小时,与一抗(抗HER2、抗p-Akt、抗HSP70)4°C孵育过夜,再与HRP标记二抗室温孵育1小时,ECL显影 [1,2,3] 。 3. 凋亡检测(Annexin V-FITC/PI染色): - A549/U251细胞经NVP-BEP800(10-30 nM)±放疗处理48小时后,胰酶消化收集,冷PBS洗涤。重悬于100 μL结合缓冲液(10 mM HEPES、140 mM NaCl、2.5 mM CaCl₂ pH7.4),加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI(50 μg/mL),室温避光孵育15分钟,流式细胞仪分析凋亡 [2] 。 4. 克隆形成实验: - HCT116细胞以200个细胞/孔接种于6孔板,孵育过夜。加入NVP-BEP800(5-20 nM)±放疗(2-8 Gy),培养14天(每3天更换培养基)。4%多聚甲醛固定15分钟,0.1%结晶紫染色30分钟,计数含>50个细胞的集落,克隆形成率=(治疗组集落数/对照组集落数)×100% [2] 。 5. HSP70 mRNA qPCR检测: - U87细胞经NVP-BEP800(20 nM)±放疗(4 Gy)处理24小时后,提取总RNA并合成cDNA,用HSP70引物进行qPCR,通过2^(-ΔΔCt)法计算相对mRNA水平 [3] 。 |
| 动物实验 |
Dissolved in 0.5% methyl cellulose; 50 mg/kg; oral gavage
Female Harlan HsdNpa: Athymic Nude-nu mice injected s.c. with BT-474 or A375 cells 1. Nude mouse subcutaneous xenograft models: - MCF-7/HCT116 cells (5×10⁶/0.1 mL PBS/Matrigel 1:1) subcutaneously injected into right flank of female nude mice (6-8 weeks old, n=6/group). Tumors reached ~100 mm³: randomized into 3 groups (vehicle: 0.5% methylcellulose in PBS; NVP-BEP800 15 mg/kg; 25 mg/kg). Drug suspended in 0.5% methylcellulose, oral gavage once daily for 14 days. Tumor volume (length×width²/2) measured every 2 days; body weight weekly. Tumors excised for IHC/Western blot at study end [1] . 2. Rat pharmacokinetic (PK) study: - Male Sprague-Dawley rats (250-300 g, n=4/group) fasted 12h. Groups: IV (5 mg/kg, dissolved in 10% DMSO+90% saline, tail vein injection); PO (20 mg/kg, suspended in 0.5% methylcellulose, oral gavage). Blood samples (0.3 mL) collected from jugular vein at 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24h post-administration. Plasma separated (3,000×g, 10min, 4°C); drug concentration measured via LC-MS/MS. PK parameters (Cmax, AUC₀₋∞, t₁/₂, F) calculated via non-compartmental analysis [1] . |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. Oral bioavailability: In Sprague-Dawley rats, oral bioavailability (F) of NVP-BEP800 was 42% (20 mg/kg PO vs. 5 mg/kg IV) [1]
. 2. Plasma PK parameters: - Rats IV (5 mg/kg): Cmax=1,500 ng/mL, AUC₀₋∞=2,200 ng·h/mL, t₁/₂=4.3 hours [1] . - Rats PO (20 mg/kg): Cmax=820 ng/mL, AUC₀₋₂₄=1,350 ng·h/mL, t₁/₂=4.5 hours [1] . - Mice PO (25 mg/kg): Cmax=950 ng/mL, AUC₀₋₂₄=1,500 ng·h/mL, t₁/₂=3.9 hours [1] . 3. Tissue distribution: Mice bearing MCF-7 xenografts, 2h post-PO 25 mg/kg NVP-BEP800: tumor concentration=1,900 ng/g (2.5× plasma concentration 760 ng/mL), liver=2,100 ng/g, kidney=1,700 ng/g, brain=130 ng/g [1] . 4. In vitro metabolism: Human liver microsomes: NVP-BEP800 metabolized by CYP3A4 (68% total metabolism) and CYP2C9 (17%). Main metabolite: monohydroxylated derivative (60% detected metabolites) [1] . 5. Excretion: Rats IV (5 mg/kg): 76% dose excreted in feces (mostly metabolites) within 72h; 13% in urine (only metabolites) [1] . |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. Acute toxicity in mice: Female CD-1 mice (6-8 weeks old, n=6/dose) PO NVP-BEP800 (50, 100, 200 mg/kg). 50/100 mg/kg: no mortality/toxicity (weight loss <4%, normal ALT/AST/creatinine). 200 mg/kg: 4/6 mice died (5 days), severe liver damage (ALT 4.6× control), mild kidney injury (creatinine 2.0× control) [1]
. 2. Chronic toxicity in rats: Male Sprague-Dawley rats (n=5/group) PO NVP-BEP800 (5, 15, 30 mg/kg/day, 28 days). 5 mg/kg: no adverse effects (weight, hematology, liver/kidney function). 15 mg/kg: mild myelosuppression (WBC 22% lower than control). 30 mg/kg: severe myelosuppression (WBC 54% lower), moderate liver damage (ALT 3.3× control), renal tubular degeneration. NOAEL=5 mg/kg [1] . 3. Plasma protein binding: Equilibrium dialysis: human plasma=97.8%, rat=97.1%, mouse=97.5% [1] . 4. Drug-drug interaction: In vitro CYP inhibition: no inhibition of CYP1A2/CYP2D6/CYP2E1 (IC50>100 μM); weak inhibition of CYP3A4 (IC50=28 μM) and CYP2C9 (IC50=33 μM) [1] . |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. Chemical class & design: NVP-BEP800 is an orally available synthetic HSP90 inhibitor, optimized via structure-based design to bind the N-terminal ATP pocket of HSP90. Its scaffold enhances aqueous solubility and oral bioavailability vs. earlier ansamycin inhibitors (e.g., geldanamycin), with reduced off-target GRP94 binding [1]
. 2. Mechanism of action: - Antitumor: Binds HSP90 ATP pocket, inhibits ATPase activity, degrades client proteins (HER2, Akt, ERK) driving proliferation/survival [1] . - Radiosensitization: Attenuates IR-induced HSP70 upregulation (a prosurvival response), enhances IR-mediated apoptosis [2,3] . 3. Therapeutic potential: Effective in solid tumors (breast, lung, colon, glioblastoma) as monotherapy or with radiotherapy. Oral bioavailability (42%) and manageable toxicity support clinical development [1,2,3] . |
| 分子式 |
C21H23CL2N5O2S
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|---|---|---|
| 分子量 |
480.41
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| 精确质量 |
479.094
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| CAS号 |
847559-80-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
25210273
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.659
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| LogP |
4.29
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| tPSA |
122.34
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|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
614
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(C1=CC2C(=NC(N)=NC=2C2C(Cl)=CC(Cl)=C(OCCN3CCCC3)C=2)S1)NCC
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| InChi Key |
WJUNQSYQHHIVFX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H23Cl2N5O2S/c1-2-25-19(29)17-10-13-18(26-21(24)27-20(13)31-17)12-9-16(15(23)11-14(12)22)30-8-7-28-5-3-4-6-28/h9-11H,2-8H2,1H3,(H,25,29)(H2,24,26,27)
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| 化学名 |
2-amino-4-[2,4-dichloro-5-(2-pyrrolidin-1-ylethoxy)phenyl]-N-ethylthieno[2,3-d]pyrimidine-6-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0816 mL | 10.4078 mL | 20.8156 mL | |
| 5 mM | 0.4163 mL | 2.0816 mL | 4.1631 mL | |
| 10 mM | 0.2082 mL | 1.0408 mL | 2.0816 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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