Transketolase (TK) (inhibitor)[1]

MIA PaCa-2 细胞的活力受到氧硫胺（0–40 μM，2 天）的抑制（IC50：14.95 μM）[1]。 MIA PaCa-2 细胞的增殖能力受到氧硫胺（0-500 μM，48 小时）的抑制（IC50：14.95 μM）[1]。 A549 细胞的增殖受到氧硫胺（0.1-100 μM，6-48 小时）的抑制[3]。 3 蛋白/α的表达[1]。 A549 细胞接头由氧硫胺（0.1-100 μM，24 小时）感知 [3]。氧硫胺 (0–20 μM) 可抑制 Lewis 肺癌 (LLC) 细胞最小化和迁移（IC50：8.75 μM）[4]。

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通过MTT实验测定，Oxythiamine (OT) 对人胰腺癌细胞系 MIA PaCa-2 具有细胞毒性作用，处理2天后的IC₅₀值为14.95 μM。
用不同浓度oxythiamine（5、50、500 μM，处理48小时）处理MIA PaCa-2细胞，以剂量依赖性方式改变蛋白质表达。共鉴定出18种差异蛋白，其中14种被显著抑制，4种被诱导。例如，热休克同源71 kDa蛋白（点#2）被抑制，而异质核核糖核蛋白A2/B1被诱导。
用50 μM oxythiamine 在不同时间点（0、12、48小时）处理MIA PaCa-2细胞，引起蛋白质表达的动态变化。鉴定出46种差异蛋白，并聚类为三种时间表达模式：直线下调（Cluster 1，占37%）、正“V”形（Cluster 2，占47.8%）和倒“V”形（Cluster 3，占15.2%）。例如，过氧化物还原酶6和膜联蛋白A1（Cluster 1）表达下降，而钙网蛋白（Cluster 3）在12小时表达上升，48小时恢复至基线水平。
Oxythiamine (50 μM) 随时间（0、12、48小时）显著抑制细胞磷酸化蛋白的表达。鉴定出14种磷酸化蛋白，其中大多数表达下降。
Oxythiamine (50 μM) 中断了MIA PaCa-2细胞内蛋白质的从头合成速率。膜联蛋白A1的合成速率从对照（48小时）的55%降至OT处理48小时后的37%。其他几种蛋白质（如内质网蛋白、热休克同源71 kDa蛋白）的合成速率在48小时与对照相比也有所下降。
Western blot验证证实了剂量依赖性效应：α-烯醇化酶表达增加，而14-3-3蛋白β/α表达随OT浓度（5、50、500 μM）增加而降低。时间依赖性效应也通过过氧化物还原酶6、膜联蛋白A1、钙网蛋白和异质核核糖核蛋白A2/B1得到证实。
对52种差异蛋白的通路分析表明，它们参与细胞死亡信号传导、基因表达、翻译后修饰以及与癌症在内的多种疾病相关。
通过Western blot检测，胰腺癌患者（n=7）血清样本中的膜联蛋白A1表达水平显著高于健康志愿者（n=12）。[1]

在患有艾利希腹水肿瘤的小鼠中，氧硫胺（100-500 mg/kg，腹腔注射 4 天）可减少肿瘤的形成 [2]。连续五周，通过抑制环施用氧硫胺（250 或 500 mg/kg，每天一次）。

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在艾氏腹水瘤荷瘤小鼠模型中，每日腹腔注射给予oxythiamine (OT)，连续4天，能剂量依赖性（100-500 mg/kg/天）抑制肿瘤生长。在300 mg/kg/天的剂量下，OT抑制肿瘤生长43%。在500 mg/kg/天的剂量下，抑制率达到84%。
流式细胞术分析显示，oxythiamine 能诱导剂量依赖性的G₀-G₁期细胞周期阻滞。在较高剂量下，处于G₀-G₁期的细胞比例增加约1.5倍，而处于S期和G₂-M期的细胞比例同步下降。
Oxythiamine (500 mg/kg/天) 未诱导艾氏肿瘤细胞发生凋亡性细胞死亡（通过流式细胞术和荧光显微镜评估）。所有治疗组的细胞存活率均保持在95%以上。
Oxythiamine 与另一种戊糖循环抑制剂脱氢表雄酮（DHEA）的联合治疗显示出协同抗肿瘤作用。例如，单独使用OT (400 mg/kg/天) 和DHEA (300 mg/kg/天) 分别导致约46%和约45%的抑制率，而两者联合使用则达到86.4%的抑制率。最高联合剂量（OT 500 mg/kg/天 + DHEA 400 mg/kg/天）实现了94.3%的生长抑制。
联合治疗还导致细胞周期分布发生更显著的变化，显著降低了处于G₂-M期的细胞比例。[2]

细胞活力测定[1]
细胞类型： MIA PaCa-2 细胞
测试浓度： 0-40 μM
孵育时间： 2天
实验结果：抑制细胞活力，IC50为14.95 μM。

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蛋白质印迹分析 [1]
细胞类型： MIA PaCa-2 细胞
测试浓度： 0、5、50、500 μM
孵育时间：48小时
实验结果：抑制14-3-3蛋白β/α表达并增加α-烯醇化酶。

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细胞毒性实验（MTT法）： 将处于指数生长期的MIA PaCa-2细胞以每孔1×10⁴个细胞的密度接种于96孔板中。用不同浓度的oxythiamine处理细胞2天。然后，每孔加入20 μL MTT试剂，于37°C孵育4小时。孵育后，每孔加入100 μL二甲基亚砜以溶解生成的甲臜结晶，再孵育10分钟。使用酶标仪在490 nm波长下测量各孔的吸光度。计算细胞存活率和IC₅₀值。
蛋白质组学样本制备（用于2D凝胶分析）： MIA PaCa-2细胞在剂量依赖性（0、5、50、500 μM，处理48小时）或时间依赖性（50 μM，处理0、12、48小时）条件下用oxythiamine处理。收集细胞沉淀，用预冷的PBS洗涤，然后在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解液中裂解。悬液经超声处理和离心。采用Bradford法测定蛋白质浓度。
双向凝胶电泳（2-DE）： 取500 μg蛋白质样品与重悬缓冲液混合，上样至IPG胶条（pH 3-10 NL）。使用逐步升压程序进行等电聚焦。等电聚焦后，胶条经平衡处理，置于8-16% Tris-HCl凝胶上进行第二维SDS-PAGE。凝胶用SYPRO Ruby或考马斯亮蓝染色，扫描后使用软件进行点检测、定量和匹配。选择表达量差异大于2倍且具有统计学显著性（p<0.05）的蛋白质点进行质谱分析。
磷酸化蛋白检测： 2-DE后，凝胶先用Pro-Q Diamond磷酸蛋白染料染色以可视化磷酸化蛋白，然后再进行总蛋白染色。
胶内胰蛋白酶消化及MALDI-TOF/TOF质谱分析： 切下的凝胶点经脱色、干燥后，用胰蛋白酶在37°C消化20小时。提取肽段，脱盐后与基质混合，点靶进行MALDI-TOF/TOF质谱分析。进行肽质量指纹图谱和MS/MS测序，并使用Mascot软件搜索蛋白质数据库进行鉴定。
蛋白质合成速率测定（mSILAC）： 对于时间依赖性研究，将MIA PaCa-2细胞培养在含有50% ¹⁵N标记藻类氨基酸混合物（作为示踪剂）的培养基中，添加或不添加50 μM oxythiamine，分别培养12和48小时。通过MALDI-TOF/TOF质谱分析差异表达蛋白肽段的同位素分布。基于¹⁴N标记和¹⁵N标记肽段之间的质谱位移，使用内部算法和多元线性回归分析，计算新合成蛋白质的比例和蛋白质周转率。
Western Blot分析： 蛋白质样品经SDS-PAGE分离后，转印至PVDF膜上。膜封闭后，与一抗孵育，再与辣根过氧化物酶标记的二抗孵育。使用增强化学发光试剂显影蛋白条带。利用成像软件量化条带强度，并以内参蛋白（β-肌动蛋白或β-微管蛋白）进行标准化。该方法用于验证2-DE结果以及测定人血清样本中的膜联蛋白A1水平。[1]

Animal/Disease Models: Ehrlich ascites tumor host mouse [2]
Doses: 100-500 mg/kg
Route of Administration: intraperitoneal (ip) injection, 4-day
Experimental Results: Inhibition of tumor growth was 43% at 300 mg/kg and 84% at 500 mg/kg.

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Tumor Model: Ehrlich's ascites tumor cells were maintained in C57BL/6S mice and transplanted weekly by intraperitoneal aspiration and inoculation. For experiments, 20×10⁶ tumor cells per mouse were injected intraperitoneally.
Drug Treatment: Treatment began 4 days after tumor implantation. Oxythiamine was dissolved in Dulbecco's phosphate-buffered saline to prepare a 500 mg/ml stock solution, which was then diluted to the required concentrations. The drug was administered via daily intraperitoneal injections for 4 days (or prolonged for up to 2 weeks in a toxicity study) at doses ranging from 100 to 500 mg/kg of mouse body weight per day.
Combination Therapy: For combination studies, oxythiamine and DHEA were administered together via intraperitoneal injection. DHEA was dissolved in a 60% dimethyl sulfoxide (DMSO)-Dulbecco's phosphate-buffered saline mixture.
Control: Control animals received the vehicle (maximum concentration of DMSO-Dulbecco's phosphate-buffered saline mixture) for the same duration.
Endpoint Measurements: Tumor volume and total cell number were measured post-mortem using a calibrated syringe after aspiration. Cell cycle phase distribution, viability, and apoptosis were analyzed by flow cytometry and fluorescent microscopy on fresh tumor cell samples.[2]

No direct cell toxicity was observed: tumor cell viability remained over 95% in all oxythiamine-treated groups, and no signs of apoptotic cell death were induced by the drug.
No host toxicity was observed: Treated mice showed no change in behavior, daily food/water consumption, physical activity, or signs of distress during the 4-day or prolonged (2-week) treatment periods. Body weight gain in tumor-bearing mice was less than controls, attributable to inhibited tumor growth.
Histopathological examination of vital tissues (liver, heart, kidney) from mice treated with oxythiamine (up to 400 mg/kg/day) showed no signs of toxicity compared to controls.[2]

[1]. Inhibition of transketolase by oxythiamine altered dynamics of protein signals in pancreatic cancer cells. Exp Hematol Oncol. 2013 Jul 27;2:18.

[2]. Oxythiamine and dehydroepiandrosterone induce a G1 phase cycle arrest in Ehrlich's tumor cells through inhibition of the pentose cycle. FEBS Lett. 1999 Jul 30;456(1):113-8.

[3]. A dose- and time-dependent effect of oxythiamine on cell growth inhibition in non-small cell lung cancer. Cogn Neurodyn. 2022 Jun;16(3):633-641.

[4]. The in vitro and in vivo anti-metastatic efficacy of oxythiamine and the possible mechanisms of action. Clin Exp Metastasis. 2010 May;27(5):341-9.

Oxythiamine(1+) is a 1,3-thiazolium cation that is 5-(2-hydroxyethyl)-4-methyl-1,3-thiazole alkylated at the N3 position by a (2-methyl-4-oxo-1,4-dihydropyrimidin-5-yl)methyl group. It has a role as an antimetabolite and a vitamin B1 antagonist.
Thiamine antagonist, antimetabolite.

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Oxythiamine (OT) is a thiamine antagonist and an anti-metabolite.
It inhibits transketolase (TK), a key enzyme in the non-oxidative branch of the pentose phosphate pathway. This inhibition suppresses ribose synthesis and the production of coenzymes like ATP, NAD(P)+, impacting the synthesis of RNA and DNA in cancer cells.
The study proposes that oxythiamine exerts its anti-tumor effects by altering the dynamics of protein expression and interrupting de novo protein synthesis rates in pancreatic cancer cells, leading to cell cycle arrest and apoptosis.
The dynamic proteomic approach used in this study suggests that inhibiting a single metabolic enzyme (transketolase) can alter multiple cellular signaling pathways associated with cell survival and death.[1]
Oxythiamine (OT) is a thiamine antagonist and inhibitor of the non-oxidative reactions of the pentose phosphate pathway, specifically targeting transketolase.
The study proposes that oxythiamine exerts its anti-tumor effect by limiting the synthesis of pentose phosphates (ribose), which are crucial for nucleic acid (RNA/DNA) production, thereby arresting tumor cells in the G₁ phase of the cell cycle and inhibiting proliferation.
Unlike 2-deoxyglucose, oxythiamine is suggested to selectively inhibit anabolic pathways for nucleic acid synthesis without significantly affecting glycolysis and cellular energy production, potentially reducing toxicity to normal tissues.
The G₁ phase arrest induced by oxythiamine may help synchronize cancer cells, potentially increasing the efficacy of other G₁ phase-specific chemotherapeutic agents.[2]

C12H16N3O2S+.CL-

301.79234

266.096

136-16-3

Oxythiamine chloride hydrochloride;614-05-1

8682

White to off-white solid powder

2.335

98.36

2

4

4

18

395

0

SRDGSXVLAVRBLU-UHFFFAOYSA-O

InChI=1S/C12H15N3O2S/c1-8-11(3-4-16)18-7-15(8)6-10-5-13-9(2)14-12(10)17/h5,7,16H,3-4,6H2,1-2H3/p+1

5-[[5-(2-hydroxyethyl)-4-methyl-1,3-thiazol-3-ium-3-yl]methyl]-2-methyl-1H-pyrimidin-6-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~51.67 mg/mL (~194.00 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.58 mg/mL (9.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.58 mg/mL (9.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.58 mg/mL (9.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。