Picropodophyllin (Picropodophyllotoxin, AXL-1717 or PPP)   中文名称: 苦鬼臼毒素

IGF-1R (IC50 = 1 nM)

体外活性：在完整细胞中，PPP 有效抑制 IGF-1 刺激的 IGF-1R、Akt (Ser 473) 和 Erk1/2 磷酸化。鬼臼苦素特异性抑制细胞生长，并诱导培养的 IGF-1R 阳性肿瘤细胞凋亡。 Picropodophyllin 通过进一步降低细胞活力和增强细胞凋亡，协同增效 HMCL、原代人 MM 和鼠 5T33MM 细胞对 ABT-737 和 ABT-199 的敏感性。鬼臼苦素和索拉非尼协同抑制肝细胞癌细胞的增殖和运动。激酶测定：使用96孔板酪氨酸激酶测定试剂盒对IGF-1R催化的pTG底物磷酸化进行测定。我们使用重组表皮生长因子受体、来自 HEPG2 的免疫沉淀 IR、来自 P6 细胞的免疫沉淀 IGF-1R 和来自 P6 的 IGF-1R 免疫耗竭上清液（代表“非 IGF-1R 酪氨酸激酶”）。用激酶缓冲液 [50 mM HEPES 缓冲液 (pH 7.4)、20 mM MgCl2、0.1 MnCl2 和 0.2 Na3VO4] 中的所需化合物处理受体 30 分钟后，通过添加 ATP 激活激酶反应。使用与辣根过氧化物酶（克隆 PT-66）缀合的磷酸酪氨酸特异性单克隆抗体探测磷酸化聚合物底物。使用辣根过氧化物酶显色底物邻苯二胺二盐酸盐显色，并通过分光光度法（ELISA 读数器）进行定量。通过夹心 ELISA 测定法分析 IGF-1R 酪氨酸自磷酸化。简而言之，96 孔板在 4°C 下用 1 μg/孔的 IGF-1R β-亚基抗体包被过夜。将板用 PBS Tween 中的 1% BSA 封闭 1 小时，然后添加 80 μg/孔的 P6 细胞系总蛋白裂解物。作为阴性对照，我们使用 R 细胞系的总蛋白裂解物。将所研究的化合物在室温下添加到不含 ATP 的酪氨酸激酶缓冲液中 30 分钟，然后用 ATP 激活激酶。使用 Sigma 试剂盒进行激酶测定（见上文）。分光光度法后，使用 Statistica 程序的 REGRESSION 功能确定抑制剂的 IC50 值。细胞测定：使用细胞增殖试剂盒 II 进行测定，该试剂盒基于黄色四唑鎓盐 2,3-双[2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基]-2H-四唑鎓-5-的比色变化橙色甲臜染料中的甲酰苯胺内盐通过活细胞的呼吸链。所有标准和实验均一式三份进行。 细胞：黑色素瘤细胞（FM 55、SK-MEL-28、SK-MEL-5、C8161、DFB、DFW 和 AA）、肉瘤细胞 (RD-ES)、乳腺癌细胞 (MCF 7)、前列腺癌细胞 (PC3)、肝癌细胞 (HepG2) 和胚胎小鼠成纤维细胞（P6 和 R-）

在异种移植人 ES-1、BE 和 PC3 的 SCID 小鼠中，鬼臼苦素（20 mg/kg/12 小时，腹腔注射）可导致肿瘤完全消退。在 5T33MM 小鼠模型中，鬼臼苦素还显示出显着的抗肿瘤活性，并导致存活率显着增加。

使用 96 孔板酪氨酸激酶检测试剂盒检测 IGF-1R 催化底物对 pTG 的磷酸化。为了代表“非 IGF-1R 酪氨酸激酶”，我们使用重组表皮生长因子受体、来自 HEPG2 的免疫沉淀 IR、来自 P6 细胞的免疫沉淀 IGF-1R 和来自 P6 的 IGF-1R 免疫耗竭上清液。用激酶缓冲液（20 mM HEPES 缓冲液（pH 7.4）、0.1 MnCl₂、0.2 Na 中的所需化合物处理受体 30 分钟后，通过添加 ATP 来触发激酶反应₃VO₄ 和 20 mM MgCl₂）。与辣根过氧化物酶缀合的磷酸酪氨酸特异性单克隆抗体（克隆 PT-66）用于探测磷酸化聚合物底物。邻苯二胺二盐酸盐是辣根过氧化物酶的显色底物，用于显色，分光光度法（ELISA 读数器）可实现定量。 ELISA 夹心测试用于测量 IGF-1R 酪氨酸自磷酸化。将 IGF-1R β 亚基抗体（1 μg/孔）包被到 96 孔板上，并在 4°C 下静置过夜。将板用含 1% BSA 的 PBS Tween 封闭一小时后，添加 80 μg/孔的 P6 细胞系总蛋白裂解物。总 R 细胞系蛋白裂解物用作阴性对照。在用 ATP 激活激酶之前，将评估的化合物添加到室温下的酪氨酸激酶缓冲液中，并静置 30 分钟。使用 Sigma 试剂盒（见上文）进行激酶测定。

结果使用细胞增殖试剂盒 II 得出，该试剂盒基于活细胞的呼吸链，对黄色四唑盐 2,3-双[2-甲氧基-4-硝基-5-磺基苯基]-2H 进行比色变化橙色甲臜染料中的-四唑-5-甲酰苯胺内盐。每个实验和标准都经过三次。

In a sterile setting, plastic isolators are used to house four to five-week-old pathogen-free SCID mice. In a 0.2 mL volume of sterile saline solution, ES-1, BE, and PC3 cells (all of which have been shown to express IGF-1R), or R-v-src (IGF-1R negative) and P12 (overexpressing IGF-1 and IGF-1R), are injected subcutaneously at a density of 10⁷ cells/mice. 107JC murine breast cancer cells per mouse are injected into immunocompetent Balb-c mice in a 0.15 mL volume of sterile saline solution. Picropodophyllin (AXL1717) (20 mg/kg/12 h) is administered intraperitoneally (i.p.) once a day in a volume of 10 μL of DMSO: vegetable oil (10:1 (v/v)). Only the vehicle is used to treat the control mice. Each group receives treatment for three animals. Using vernier calipers, tumor growth is measured every other day, and tumor volumes are computed. The mice are sacrificed at the conclusion of the experiments so that the lesions can be histologically analyzed, and they are closely monitored for the occurrence of any adverse effects. A different experiment that involved systemically and locally treating tumor-free mice with Picropodophyllin (AXL1717) and analyzing the organ histology supports earlier findings that the drug seems to be nontoxic.

[1]. Cancer Res . 2004 Jan 1;64(1):236-42.

[2]. Blood . 2006 Jan 15;107(2):655-60.

[3]. Oncotarget . 2014 Nov 30;5(22):11193-208.

[4]. Oncol Lett . 2014 Nov;8(5):2023-2026.

C22H22O8

414.41

414.13

C, 63.76; H, 5.35; O, 30.89

477-47-4

Picropodophyllin-d6

white solid powder

COC1=CC(=CC(=C1OC)OC)[C@H]2[C@H]3[C@H](COC3=O)[C@H](C4=CC5=C(C=C24)OCO5)O

YJGVMLPVUAXIQN-HAEOHBJNSA-N

InChI=1S/C22H22O8/c1-25-16-4-10(5-17(26-2)21(16)27-3)18-11-6-14-15(30-9-29-14)7-12(11)20(23)13-8-28-22(24)19(13)18/h4-7,13,18-20,23H,8-9H2,1-3H3/t13-,18+,19+,20-/m0/s1

(5R,5aR,8aS,9R)-5-hydroxy-9-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-5a,6,8a,9-tetrahydro-5H-[2]benzofuro[5,6-f][1,3]benzodioxol-8-one

Picropodophyllotoxin, AXL1717; PPP; AXL-1717; AXL 1717; PPP; picropodophyllin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: 2 mg/mL (4.83 mM) in 15% Cremophor EL + 85% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 1% CMC Na: 30 mg/mL

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配方 4 中的溶解度: 3 mg/mL (7.24 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声助溶 (<60°C).
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。