Bromodomain (BRD)

Birabresib (OTX-015) (500 nM) 暴露会导致 BRD2、BRD4 和 c-MYC 显着减少，HEXIM1 蛋白增加，而 BRD3 表达未改变。然而，c-MYC、BRD2、BRD3、BRD4 和 HEXIM1 mRNA 水平确实与暴露于 Birabresib (OTX-015) 后的活力相关[2]。 Birabresib (OTX-015) (0.1, 1, 5 μM) 给药可促进接受抑制性抗逆转录病毒治疗 (ART) 的感染患者的静息 CD4+ T 细胞中的 HIV-1 全长转录物和病毒生长，同时对 T 细胞产生低毒性和影响细胞激活。 Birabresib 介导的 HIV-1 激活涉及 CDK9 占用率和 RNAP II C 末端结构域 (CTD) 磷酸化的增加[3]。

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Birabresib（OTX-015）是BRD2、BRD3和BRD4的强效抑制剂，EC50值为10至19 nM。以浓度依赖的方式添加OTX015可抑制OTX015与BRD2、BRD3和BRD4的结合，表明存在竞争性抑制。OTX015抑制了BRD2、BRD3和BRD4与AcH4的结合，IC50值为92至112 nM。OTX015抑制多种人癌症细胞系的生长；对于大多数测试的血液系统恶性肿瘤，GI50值范围为60至200 nM。[1]

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暴露于Birabresib（OTX-015）会导致急性白血病细胞系和患者来源的白血病细胞在亚摩尔浓度下出现细胞生长抑制、细胞周期阻滞和凋亡，如典型的JQ1 BET抑制剂所述。JQ1和OTX15治疗在敏感细胞系中诱导了相似的基因表达谱，包括c-MYC减少和HEXIM1增加。OTX015暴露还诱导了BRD2、BRD4和c-MYC的显著降低以及HEXIM1蛋白的增加，而BRD3的表达没有变化。然而，c-MYC、BRD2、BRD3、BRD4和HEXIM1 mRNA水平与暴露于OTX015后的存活率无关。OTX015与其他表观遗传修饰药物帕诺司他和阿扎胞苷的顺序组合对KASUMI细胞系的生长具有协同作用。我们的结果表明，OTX015和JQ1在白血病细胞中具有相似的生物学效应，支持在复发/难治性白血病患者的Ib期试验中对OTX015进行评估。[2]

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Birabresib（OTX-015）在三种人TNBC衍生细胞系HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468中进行了检测，72小时后均显示出抗增殖活性（GI50=75-650nM）。这伴随着细胞周期阻滞和癌症干细胞标志物的表达降低。然而，c-MYC蛋白和mRNA水平仅在MDA-MB-468细胞中下调。基因集富集分析显示，参与转录、染色质和细胞周期表观遗传控制的基因受到调控，而与干性相关的基因则受到下调。在体外，与依维莫司的组合在HCC1937和MDA-MB-231细胞中是相加的，但在MDA-MB-468细胞中是拮抗的[4]。

与给予赋形剂的小鼠相比，Birabresib (OTX-015) (50 mg/kg) 显着 (p<0.05) 降低了 MDA-MB-231 小鼠异种移植物的肿瘤负荷。 Birabresib (OTX-015) 与 2 mg/kg RAD001 联合使用比单独使用 Birabresib 更有效[4]。

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MDA-MB-231异种移植物的体内实验[4]
基于体外联合研究，选择MDA-MB-231细胞系生成小鼠异种移植物，以评估单独使用和与依维莫司联合使用比拉布雷西布（OTX-015）的体内效果。与对照组相比，OTX015治疗的小鼠在治疗开始后7天肿瘤质量显著减少（p<0.05）（图5B）。第23天记录的最佳T/C值为41.3%（表2）。另一方面，与对照组相比，单独使用依维莫司对肿瘤生长没有实质性影响。 在这种实验环境中，Birabresib（OTX-015）/依维莫司组合是最有效的方法，从治疗开始后第4天开始，与赋形剂治疗的动物相比，肿瘤质量显著减少（p<0.05）（图5B），第23天的最佳T/C为20.7%（表2）。此外，在整个治疗期间，从第7天和第21天开始，OTX015/依维莫司联合组的平均肿瘤重量分别显著低于依维莫司和OTX015单药组（p<0.05）。更重要的是，治疗结束后，用联合药物治疗的小鼠的肿瘤仍然明显小于用单一药物治疗的动物的肿瘤（p<0.05）（图5B）。值得注意的是，依维莫司治疗组的所有小鼠都有明显的毒性迹象，如平均体重下降所示（图5C）。因此，从治疗开始后的第14天开始，将依维莫司方案修改为单药和联合方案的每周一次。

紫杉醇在临床上广泛用于治疗TNBC，在一项单独的实验中进行了评估，提供了一个临床基准（补充图S2）。该药物在第23天显示出最佳T/C为28.9%的活性（表2）。根据三个参数（T/C%、AGD和LCK）比较Birabresib（OTX-015）、依维莫司、OTX015/依维莫司联合用药和紫杉醇的药理学疗效，清楚地表明OTX015/-依维莫司组合是最有效的治疗方法（表2）。

在治疗期结束时，在最后一次给药后4小时处死Birabresib（OTX-015）组的一半动物，以确定血液和组织中的药物水平。肿瘤和血浆中的OTX015浓度相当，明显高于瘤周组织中观察到的水平（p<0.05）（图5D）。这些药物浓度约为2μM（在血浆和肿瘤组织中），表明在肿瘤环境中可以实现体外使用的浓度，这与Gaudio等人最近在淋巴瘤模型中的一份报告是一致的。对于剩余的动物，如上所述，再监测肿瘤和体重20天。

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c-MYC、BETs和CSC标志物在MDA-MB-231异种移植物中的表达[4]
评估治疗开始4周后处死的异种移植物小鼠的肿瘤组织中关键基因的变化（图5E）。与载体处理的动物相比，所有实验组均未显示出c-MYC、BRD2/3 mRNA表达的变化。然而，与赋形剂对照组相比，用Birabresib（OTX-015）/依维莫司联合治疗的小鼠BRD4 mRNA水平显著降低（p<0.05）。同样，与体外情况一样，OTX015诱导CD24 mRNA水平显著升高，同时CD44表达降低（p<0.05）。然而，OTX015/依维莫司联合用药仅导致CD24显著增加（p<0.05），而不影响CD44表达。另一方面，依维莫司诱导CD24表达显著降低（p<0.05），对CD44没有影响。OTX015和联合治疗均下调了EpCAM、NANOG和OCT4干性标志物的mRNA水平（p<0.05）。相比之下，依维莫司没有改变EpCAM和OCT4的表达，但显著上调了NANOG mRNA水平（p<0.05）。

为了评估OTX015与BRD2、BRD3和BRD4的结合，将表达BRD的CHO细胞裂解物（来自转染了Flag标记的BRD2、BR D3或BRD4表达质粒或单独载体的CHO细胞）、铕偶联的抗Flag抗体、XL-665偶联的链霉抗生物素蛋白和生物素化的OTX015在室温下孵育0.2至2小时。使用EnVision 2103多标签阅读器通过TR-FRET测量荧光，并使用PRISM 5.02版通过非线性回归计算结合的EC50。使用类似的系统，通过孵育生物素偶联的-AcH4、表达BRD的CHO细胞裂解物、铕偶联的抗Flag抗体和XL-665偶联的链霉抗生物素蛋白，评估了OTX015对BRD2、BRD3和BRD4与乙酰化组蛋白H4（AcH4）结合的影响。使用EnVision 2103多标记阅读器通过TR-FRET测量荧光，并通过将不含生物素偶联物dAcH4的样品的值定义为0%，将不含OTX015的样品定义为100%来计算结合百分比。使用PRISM 5.02版通过非线性回归计算IC50值。OTX015对癌症细胞增殖的影响通过在OTX015浓度增加的情况下孵育人肿瘤细胞72小时并使用基于四唑盐（WST-8）的比色测定法评估增殖来评估[1]。

MTT法、凋亡评估和细胞周期分析[2]
对于MTT分析，将细胞以每孔1×106的密度接种在24孔板中，用浓度为0.01nM-10μM的Birabresib（OTX-015）处理72小时。将细胞转移到96孔板中并在37°C的黑暗中用0.5mg/mL的3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑孵育4小时。然后用25%十二烷基硫酸钠（SDS）裂解缓冲液裂解细胞，使用Promega Microplate Reader在570nm处读取吸光度。对每种细胞系进行三次独立实验，未经处理的细胞用作阴性对照。使用Prism®v6软件计算半最大抑制浓度（IC50）值。
对于细胞周期分析，将1×106个细胞用25-500nM浓度的Birabresib（OTX-015）处理48小时，然后收获，在PBS中洗涤，并在70%冰冷的乙醇中固定。细胞与100μg/mL RNA酶一起孵育，并在37°C下用25μg/mL碘化丙啶（PI；Becton Dickinson）染色30分钟。
为了进行凋亡分析，将1×106个来自患者或细胞系的细胞重新悬浮在1ml培养基中，用Birabresib（OTX-015）处理72小时。使用FACSCalibur流式细胞仪检测凋亡细胞。根据制造商的说明，在室温下用5μg/mL PI和Annexin-V-FITC对细胞染色15分钟。凋亡细胞被定义为有或没有PI摄取的膜联蛋白V+。

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MOLT-4/CCR5生长测定[3]
纯化的静息CD4+T细胞（5×106）用PMA加离子霉素或比拉布雷西（OTX-015）处理18小时，并用1ml无菌PBS洗涤以去除残留药物。然后将静止的CD4+T细胞与MOLT-4/CCR5细胞在8ml RPMI1640培养基中培养，并在六孔培养板的单个孔中加入10%FBS。在培养4天和7天后，将孔重新悬浮并以1:2的比例分开，将培养基体积调节至每孔8ml。培养14天后，使用HIV-1 p24抗原ELISA试剂盒评估病毒生长。

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细胞活力的测量和T细胞活化标志物和HIV-1受体/共受体的检测[3]
将健康个体的PBMC置于96孔板中，与Birabresib（OTX-015）一起孵育48小时。使用所述的细胞计数试剂盒-8测量细胞存活率72。为了测量细胞活化状态和HIV-1受体/共受体存在的变化，将从健康供体分离的CD4+淋巴细胞与前列素、OTX015或OTX015/前列素一起孵育48小时 h，在4°C下用抗CD25、抗CD69、抗HLA-DR、抗CD4、抗CCR5或抗CXCR4抗体免疫染色20分钟。将细胞固定在1%PFA中，并通过流式细胞术进行分析。

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药物组合研究[4]
将细胞以20000个细胞/ml的密度接种在96孔板（100μl/孔）中，24小时后用不同浓度的比拉布雷西（OTX-015）或依维莫司或两种药物的组合处理72小时。然后将细胞与0.8 mg/ml MTT（3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四氮唑）孵育2-4小时。将细胞沉淀重新悬浮在0.05ml DMSO中，使用Infinte 200微孔板读数在560nm处测量吸光度。如前所述，使用Prism 5.00软件确定OTX015和依维莫司EC50值。在至少三个独立实验中进行了三次检测。根据Chou-Talalay算法，使用Compuscyn软件对结果进行了进一步分析。根据计算的组合指数值，<0.90表示协同作用，0.9至≤1.10表示加性作用，>1.10表示拮抗作用。

为了评估体内抗增殖作用，将携带已建立的 Ty82 BRD-NUT 中线癌异种移植瘤的 BLAB/c-nu/nu 小鼠通过口服灌胃给予 Birabresib (OTX-015)（0、10、30 或 100 mg/kg qd 或 10 mg/kg bid），持续 14 天。在第15天处死动物，取出肿瘤并称重。[1]

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将10 × 10⁶个MDA-MB-231细胞皮下注射到小鼠右侧腹部。当平均肿瘤重量约为130 mg时，将小鼠随机分组（每组9只动物），分为以下实验组：载体组（OTX15组，每日两次口服水；依维莫司组，每周三次腹腔注射5% Tween-80/5%聚乙二醇400）；50 mg/kg Birabresib (OTX-015)组，每日两次口服；2 mg/kg依维莫司组，每周三次腹腔注射；50 mg/kg OTX015 + 2 mg/kg依维莫司组，给药方案与单药给药方案相同。在紫杉醇实验中，小鼠被随机分组（每组8只），分别接受赋形剂（聚氧乙烯蓖麻油：乙醇1:1，然后用生理盐水1:5稀释；每周一次，静脉注射）或0.15 mg/kg紫杉醇（每周一次，静脉注射）。小鼠在出现严重痛苦症状的第一时间被处死，并收集肿瘤。肿瘤重量（1 mm³ = 1 mg）采用公式d² × D/2计算，其中d和D分别为肿瘤的短径和长径（单位：mm）。[4]

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Birabresib (OTX-015)在血浆和实体组织中的定量：小鼠用二氧化碳处死。通过心脏穿刺采集血液，并立即进行肝素化。血浆在4°C下以2000 × g离心15分钟分离，并储存于-80°C。肿瘤和肿瘤周围组织用干冰快速冷冻，并储存于−80°C。OTX015浓度采用经验证的Acquity超高效液相色谱-串联质谱联用系统（UPLC/MS/MS）测定，方法如前所述。[4]

0、10、30 或 100 mg/kg qd 或 10 mg/kg bid;口服灌胃

携带已建立的 Ty82 BRD-NUT 中线癌异种移植瘤的 BLAB/c-nu/nu 小鼠。

[1]. Abstract C244: Development of the BET bromodomain inhibitor OTX015. Mol Cancer Ther November 2013 12; C244.

[2]. BET inhibitor OTX015 targets BRD2 and BRD4 and decreases c-MYC in acute leukemia cells. Oncotarget. 2015 Jul 10; 6(19): 17698–17712.

[3]. The BET inhibitor OTX015 reactivates latent HIV-1 through P-TEFb. Sci Rep. 2016 Apr 12;6:24100.

[4]. The bromodomain inhibitor OTX015 (MK-8628) exerts anti-tumor activity in triple-negative breast cancer models as single agent and in combination with RAD001. Oncotarget. 2017 Jan 31;8(5):7598-7613.

Birabresib (OTX-015) 是一种强效的溴结构域 (BRD2/3/4) 抑制剂。
Birabresib 正在临床试验 NCT02698176（一项针对特定晚期实体瘤患者的 MK-8628 剂量探索研究 (MK-8628-006)）中进行研究。
Birabresib 是一种合成的小分子抑制剂，可抑制 BET（溴结构域和末端结构域）家族的溴结构域蛋白 2、3 和 4，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，birabresib 与 BET 蛋白溴结构域上的乙酰化赖氨酸识别基序结合，从而阻止 BET 蛋白与乙酰化组蛋白肽的相互作用。这会破坏染色质重塑和基因表达。抑制某些促生长基因（包括 c-Myc 依赖性靶基因）的表达可能抑制肿瘤细胞生长。BET 蛋白 BRD2、BRD3 和 BRD4 的特征是 N 端具有串联重复的溴结构域，它们是转录调控因子，在细胞生长中发挥重要作用。

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引言：BET 溴结构域蛋白（包括 BRD2、BRD3 和 BRD4）已成为增殖和分化的主要表观遗传调控因子，并且与血脂异常或脂肪生成调控异常、炎症水平升高以及自身免疫性疾病易感性增加有关。OTX015 是一种新型噻吩并三唑二氮杂卓化合物，是在基于细胞的细胞黏附抑制剂筛选中发现的。随后，我们评估了OTX015对乙酰化组蛋白与BRD2、BRD3和BRD4结合的抑制作用，以及其在体外和体内肿瘤模型中的抗增殖作用。材料与方法：为了评估OTX015与BRD2、BRD3和BRD4的结合，我们将表达BRD的CHO细胞裂解液（来自转染了Flag标签BRD2、BRD3或BRD4表达质粒或空载体的CHO细胞）、铕标记的抗Flag抗体、XL-665标记的链霉亲和素和生物素标记的OTX015在室温下孵育0.2至2小时。使用EnVision 2103多功能酶标仪通过TR-FRET测量荧光强度，并使用PRISM 5.02版本通过非线性回归计算结合的EC50值。采用类似的系统，通过将生物素标记的乙酰化组蛋白H4 (AcH4)、表达BRD的CHO细胞裂解液、铕标记的抗Flag抗体和XL-665标记的链霉亲和素孵育，评估了OTX015对BRD2、BRD3和BRD4与AcH4结合的影响。使用EnVision 2103多功能酶标仪通过时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)法测量荧光强度，并将未添加生物素标记的AcH4的样品定义为0%，未添加OTX015的样品定义为100%，计算结合百分比。使用PRISM 5.02版本通过非线性回归计算IC50值。通过将人肿瘤细胞与递增浓度的OTX015孵育72小时，并使用基于四唑盐（WST-8）的比色法评估细胞增殖，来评价OTX015对癌细胞增殖的影响。为了评估体内抗增殖作用，将携带已建立的Ty82 BRD-NUT中线癌异种移植瘤的BLAB/c-nu/nu小鼠通过灌胃给予OTX015（0、10、30或100 mg/kg，每日一次；或10 mg/kg，每日两次），持续14天。于第15天处死动物，取出肿瘤并称重。结果：OTX015是BRD2、BRD3和BRD4的强效抑制剂，EC50值为10至19 nM。 OTX015 与 BRD2、BRD3 和 BRD4 的结合呈浓度依赖性地受到抑制，提示为竞争性抑制。OTX015 抑制 BRD2、BRD3 和 BRD4 与 AcH4 的结合，IC50 值介于 92 至 112 nM 之间。OTX015 抑制多种人类癌细胞系的生长；对于大多数受试的血液系统恶性肿瘤，GI50 值介于 60 至 200 nM 之间。口服OTX015可显著抑制裸鼠体内Ty82 BRD-NUT中线癌肿瘤的生长，每日一次100 mg/kg剂量组的肿瘤生长抑制率（TGI）为79%，每日两次10 mg/kg剂量组的TGI为61%。结论：OTX015是BRD2、BRD3和BRD4的强效抑制剂，可抑制BRD2、BRD3和BRD4与乙酰化酶4（AcH4）的结合。OTX015在体外和体内肿瘤模型中均显示出显著的抗肿瘤活性。这些发现促进了OTX015的临床开发，目前OTX015正在晚期血液系统恶性肿瘤患者中进行I期临床试验（ClinicalTrials.gov注册号：NCT01713582）。[1]溴结构域（BRD）和末端结构域（BET）蛋白，包括BRD2、BRD3和BRD4，已被确定为白血病维持的关键靶点。一种新型口服BRD2/3/4抑制剂，噻吩并三唑二氮杂卓类化合物OTX015，适用于人体，现已上市。本文报道了其在急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞系及白血病样本中的生物学效应。在亚微摩尔浓度下，OTX015可抑制急性白血病细胞系和患者来源的白血病细胞的生长，导致细胞周期阻滞和细胞凋亡，这与经典的BET抑制剂JQ1的作用相似。JQ1和OTX015处理在敏感细胞系中诱导了相似的基因表达谱，包括c-MYC表达降低和HEXIM1表达升高。OTX015处理还导致BRD2、BRD4和c-MYC蛋白表达显著降低，HEXIM1蛋白表达升高，而BRD3表达未发生改变。然而，c-MYC、BRD2、BRD3、BRD4和HEXIM1的mRNA水平与OTX015处理后的细胞活力之间并无相关性。 OTX015 与其他表观遗传修饰药物、帕比司他（panobinostat）和阿扎胞苷（azacitidine）的序贯组合对 KASUMI 细胞系的生长具有协同作用。我们的结果表明，OTX015 和 JQ1 在白血病细胞中具有相似的生物学效应，支持在复发/难治性白血病患者的 Ib 期临床试验中评估 OTX015。[2]

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目前尚无任何抗 HIV-1 药物能够有效清除潜伏的 HIV-1 病毒库，这是彻底治愈艾滋病的主要障碍。我们在此报告，一种新型口服 BET 抑制剂 OTX015（一种噻吩并三唑二氮卓类化合物，已进入晚期血液系统恶性肿瘤的 Ib 期临床开发阶段）能够在不同的潜伏模型中有效激活 HIV-1，其 EC50 值比已知能够激活 HIV-1 潜伏的 BET 抑制剂 JQ1 低 1.95-4.34 倍。我们还发现，OTX015 与前列腺素联合使用时效力更强。更重要的是，OTX015 治疗可诱导接受抑制性抗逆转录病毒疗法 (ART) 的感染者静息 CD4+ T 细胞中 HIV-1 全长转录本的产生和病毒增殖，同时对 T 细胞活化的影响极小。最后，生化分析表明，OTX015 介导的 HIV-1 活化涉及 CDK9 占位率的增加和 RNA 聚合酶 II C 端结构域 (CTD) 磷酸化的增加。我们的结果表明，BET 抑制剂 OTX015 可能是一种抗 HIV-1 潜伏期疗法的候选药物。[3]

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三阴性乳腺癌 (TNBC) 是一种侵袭性强且异质性高的乳腺肿瘤亚型，其临床特征是缺乏雌激素受体、孕激素受体和 HER2 受体，这限制了其他乳腺恶性肿瘤中使用的靶向疗法的应用。近期证据表明，c-MYC是三阴性乳腺癌（TNBC）的关键驱动因子。BET溴结构域抑制剂OTX015（MK-8628）在多种肿瘤类型中均表现出强效的抗增殖活性，并伴有c-MYC表达下调，且在不同模型中与mTOR抑制剂依维莫司具有协同作用。本研究旨在评估OTX015单药及联合依维莫司治疗TNBC的抗肿瘤活性。我们使用三种人TNBC细胞系HCC1937、MDA-MB-231和MDA-MB-468对OTX015进行了检测，结果显示，72小时后所有细胞系均表现出抗增殖活性（GI50 = 75-650 nM）。该活性伴随着细胞周期阻滞和癌症干细胞标志物表达降低。然而，仅在MDA-MB-468细胞中观察到c-MYC蛋白和mRNA水平的下调。基因集富集分析显示，参与转录、染色质和细胞周期表观遗传调控的基因表达上调，而干性相关基因表达下调。体外实验表明，OTX015 与依维莫司联合用药在 HCC1937 和 MDA-MB-231 细胞中具有协同作用，但在 MDA-MB-468 细胞中则具有拮抗作用。在 MDA-MB-231 小鼠异种移植瘤模型中，与载体对照组相比，OTX015 可显著降低肿瘤体积（p < 0.05）（最佳 T/C = 40.7%）。虽然依维莫司单药治疗无效，但联合用药的疗效优于 OTX015 单药治疗（最佳 T/C = 20.7%）。本研究结果支持目前正在进行的 OTX015 治疗三阴性乳腺癌的临床试验（NCT02259114）[4]。

C25H22CLN5O2S

491.992482662201

491.118

C, 61.03; H, 4.51; Cl, 7.21; N, 14.23; O, 6.50; S, 6.52

1983196-25-3

Birabresib;202590-98-5; 204587-26-8 (dihydrate)

118704772

White to off-white solid powder

4.5

121

2

6

4

34

770

1

CC1=C(SC2=C1C(=N[C@@H](C3=NN=C(N32)C)CC(=O)NC4=CC=C(C=C4)O)C5=CC=C(C=C5)Cl)C

GNMUEVRJHCWKTO-HXUWFJFHSA-N

InChI=1S/C25H22ClN5O2S/c1-13-14(2)34-25-22(13)23(16-4-6-17(26)7-5-16)28-20(24-30-29-15(3)31(24)25)12-21(33)27-18-8-10-19(32)11-9-18/h4-11,20,32H,12H2,1-3H3,(H,27,33)/t20-/m1/s1

2-[(9R)-7-(4-chlorophenyl)-4,5,13-trimethyl-3-thia-1,8,11,12-tetrazatricyclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-yl]-N-(4-hydroxyphenyl)acetamide

(R)-OTX-015; (R)-MK-8628; (R)-Birabresib; 1983196-25-3; 2-((6R)-4-(4-chlorophenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-6-yl)-N-(4-hydroxyphenyl)acetamide; (R)-2-(4-(4-Chlorophenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-6-yl)-N-(4-hydroxyphenyl)acetamide; 2-[(9R)-7-(4-chlorophenyl)-4,5,13-trimethyl-3-thia-1,8,11,12-tetrazatricyclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-yl]-N-(4-hydroxyphenyl)acetamide; starbld0038411; SCHEMBL23728706;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 200 mg/mL (406.51 mM）

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (10.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (10.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (10.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。