| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
D-Cl-amidine hydrochloride specifically targets and irreversibly inhibits protein arginine deiminase 1 (PAD1). PAD1 belongs to a family of calcium-dependent enzymes that convert arginine residues in target proteins to citrulline, a process known as citrullination or deimination. This post-translational modification is involved in the regulation of gene expression (by modulating histone citrullination), inflammation, and the pathogenesis of various diseases, including rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, and cancer. D-Cl-amidine is a highly selective PAD1 inhibitor, with significantly less activity against other PAD isozymes (PAD2, PAD3, PAD4). By binding to the active site cysteine residue of PAD1, D-Cl-amidine forms a covalent thioimidate adduct, resulting in irreversible inhibition. This blocks the conversion of protein arginine to citrulline, thereby inhibiting downstream signaling pathways, including p53 activation, NF-kappaB signaling, and apoptosis regulation.
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| 体外研究 (In Vitro) |
D-氯脒盐酸盐 (200–400 μM) 可有效且显著地降低 MDA-MB-231 细胞的活力 [1]。D-氯脒盐酸盐可更有效地激活 Caspases 3，表明 PAD1 抑制会导致更高的细胞凋亡率 [1]。
体外实验表明，D-Cl-脒盐酸盐在200-400 uM浓度下能显著降低MDA-MB-231（三阴性乳腺癌）细胞的活力。该化合物可增强caspase 3活性，表明PAD1抑制剂可导致细胞凋亡增加。作为一种高效、选择性强且不可逆的PAD1抑制剂，D-Cl-脒能有效阻断细胞裂解液和完整细胞中PAD1介导的瓜氨酸化。它是研究PAD1在肿瘤生物学、炎症和免疫反应中作用的重要工具化合物。该化合物在体外具有良好的耐受性，在某些正常细胞系中浓度高达100 uM时未观察到明显的细胞毒性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
静脉注射 2.5 mg/kg 剂量的 D-Cl-脒盐酸盐后，4 小时后血清中仍可检测到约 10 nM 的浓度，2 小时后血清中仍可检测到约 21 nM 的浓度。腹腔注射 10 mg/kg 剂量的 D-Cl-脒盐酸盐 4 小时后，血液中仍可检测到浓度低于 10 nM 的浓度 [1]。
在体内，D-氯-脒盐酸盐已在三阴性乳腺癌（MDA-MB-231）小鼠异种移植模型中进行了评估。腹腔注射D-氯-脒（剂量为10-30 mg/kg，每日一次，持续2-4周）可显著抑制肿瘤生长。机制上，这与治疗组肿瘤中蛋白质瓜氨酸化水平降低（通过抗修饰瓜氨酸抗体染色检测）、增殖减少（Ki67染色）以及细胞凋亡增加（cleaved caspase-3染色）有关。该化合物耐受性良好，在有效剂量下未观察到明显的体重减轻或明显的毒性反应。D-氯-脒盐酸盐是验证PAD1抑制作为癌症治疗策略概念的有效工具。 |
| 酶活实验 |
体外PAD1酶抑制试验采用重组人PAD1和肽底物，例如生物素标记的含精氨酸肽（例如BAEE：Nα-苯甲酰-L-精氨酸乙酯）。试验缓冲液由100 mM Tris-HCl（pH 7.6）、10 mM CaCl2、5 mM DTT和底物组成。将D-氯脒盐酸盐（浓度范围为0.1 nM至1 mM）与1-10 nM的PAD1酶在37℃下预孵育15分钟。加入底物（例如BAEE，终浓度为1-10 mM）启动反应。在37℃下反应15-30分钟后，使用COLDER（瓜氨酸特异性检测试剂）通过比色法测定瓜氨酸化产物的量。 COLDER试剂包含二乙酰单肟和安替比林在硫酸中的溶液；将混合物加热，并在490 nm处测量生成的生色团。为了提高通量，可进行基于荧光的检测，使用合成肽（例如H2A (1-25)或重组组蛋白H3作为底物），并通过Western blot检测瓜氨酸化，使用抗修饰瓜氨酸抗体（例如F95抗体）。IC50值通过绘制抑制率（%）与log[抑制剂]的关系图计算得出。D-Cl-脒是一种强效的PAD1抑制剂，其IC50值在低微摩尔范围内（约1-10 uM），表明其对其他PAD亚型具有选择性。为了评估不可逆抑制，可进行跳跃稀释或透析实验：将酶与抑制剂孵育30分钟，然后用含有底物的测定缓冲液稀释10-100倍，立即测定酶活性，并在30-60分钟后再次测定。如果酶活性没有恢复，则表明存在不可逆抑制。
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| 细胞实验 |
PAD1抑制的细胞学实验在MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞（或其他表达PAD1的癌细胞系，例如MCF-7或HeLa）中进行。细胞在含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。D-氯脒盐酸盐溶于无菌水或DMSO（储备液浓度为10-100 mM），并用细胞培养基稀释至终浓度分别为0、10、25、50、100、200、400和800 uM。将细胞以5 × 103个/孔的密度接种于96孔板中，并使其过夜贴壁。然后，用D-氯脒处理细胞24、48或72小时。细胞活力采用 MTT 法测定：向每个孔中加入 20 uL MTT 溶液（5 mg/mL，溶于 PBS），孵育 4 小时，移除培养基，加入 150 uL DMSO 溶解甲臜晶体。在 570 nm 波长处读取吸光度值。计算细胞活力的 IC50 值。为进行细胞凋亡分析，将细胞用 200-400 uM D-Cl-脒处理 48 小时。收集细胞，用 PBS 洗涤，并使用凋亡检测试剂盒，用 PE Annexin V 和 7-AAD（或 PI）染色。染色后的细胞通过流式细胞术进行分析。使用荧光底物（DEVDase 检测）测定 caspase-3/7 活性的增加。为进行 Western blot 分析以确认靶标结合，在含有蛋白酶抑制剂和 2 mM CaCl2 的 RIPA 缓冲液中制备细胞裂解液。将 30-50 ug 蛋白质在 4-20% 梯度 SDS-PAGE 凝胶上进行分离，转移至 PVDF 膜，并用抗修饰瓜氨酸抗体（用于检测总蛋白瓜氨酸化）以及针对裂解型 PARP、裂解型 caspase-3 和 β-肌动蛋白（上样对照）的抗体进行检测。D-氯脒（400 uM，48 小时）显著降低了总蛋白瓜氨酸化信号，并增加了裂解型 PARP 和 caspase-3 的水平。
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| 动物实验 |
本研究采用MDA-MB-231三阴性乳腺癌皮下异种移植模型评估D-Cl-脒的体内疗效。将5 × 10⁶个MDA-MB-231细胞悬浮于Matrigel和无血清培养基1:1混合物中，皮下注射至6-8周龄、20 g的雌性无胸腺裸鼠侧腹部。当肿瘤平均体积达到100-150 mm³（通常7-10天）时，将小鼠随机分为治疗组（每组8-10只）。D-Cl-脒盐酸盐溶于无菌PBS或0.9%生理盐水中。每日一次腹腔注射（ip），剂量分别为10、20或30 mg/kg（注射体积10 mL/kg）。对照组注射等体积的PBS或生理盐水。治疗持续14-28天，或直至对照组肿瘤达到最大允许体积（例如1500 mm³）。每周使用数字游标卡尺测量两次肿瘤大小，并计算肿瘤体积（V = 长 × 宽²/2）。每周测量两次体重，作为毒性指标。实验结束时，切除肿瘤，称重并拍照。取每个肿瘤的一部分固定于10%福尔马林溶液中，并包埋于石蜡中进行免疫组织化学染色。切片用F95抗体进行Ki67（增殖指数）、cleaved caspase-3（凋亡指数）和瓜氨酸化蛋白的染色。结果表明，30 mg/kg的D-Cl-脒显著抑制肿瘤生长（与载体相比，TGI = 50-70%）。所有治疗组均未观察到明显的体重下降。未报告死亡或严重不良事件。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
D-氯脒盐酸盐的药代动力学已在啮齿动物中进行研究。静脉注射（iv）2.5 mg/kg剂量后，2小时后血清中仍可检测到D-氯脒，浓度约为21 nM；4小时后血清中仍可检测到D-氯脒，浓度约为10 nM。腹腔注射（ip）10 mg/kg剂量后，4小时后血清中仍可检测到D-氯脒，浓度≥10 nM。该化合物的血浆半衰期（t½）较短，腹腔注射后约为1-2小时。由于其作用机制不可逆，这种较短的半衰期足以持续抑制PAD1，因为酶-抑制剂复合物是共价结合的，需要新的蛋白质合成才能恢复活性。D-氯脒可溶于水（在水中加热后浓度可达~16 mg/mL）。盐酸盐形式是研究用途的首选形式，具有更高的溶解度和稳定性。目前尚未发表关于蛋白质结合、代谢或口服生物利用度的详细数据。鉴于该化合物分子量相对较小（347.24 Da）且具有亲水性，其排泄很可能是通过肾小球滤过进行的。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
D-氯脒盐酸盐在动物模型中耐受性良好，未见明显毒性报道。在MDA-MB-231异种移植瘤研究中，每日腹腔注射30 mg/kg D-氯脒，持续2-4周，未引起明显的体重下降、明显的行为改变（嗜睡、活动减少）或治疗相关死亡。治疗动物未观察到肝毒性（ALT/AST升高）或肾毒性（BUN/肌酐升高）。原始文献中将该化合物描述为“耐受性良好，无明显毒性”。D-氯脒对PAD1的选择性优于其他PAD同工酶（PAD2、PAD3、PAD4），从而降低了脱靶毒性。目前尚未发表该化合物的遗传毒性（Ames试验）数据，但其相关母体化合物氯脒（一种泛PAD抑制剂）已被证实无致突变性。处理D-氯脒盐酸盐时应采取标准实验室防护措施（戴手套、穿实验服、戴护目镜）。避免吸入、皮肤接触和吞食。D-氯脒盐酸盐仅供研究使用，不得用于临床治疗。目前尚无人体毒理学数据。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
蛋白质精氨酸脱亚胺酶 (PAD) 催化精氨酸残基在翻译后转化为瓜氨酸。PAD 家族包含五种亚型（PAD1-4 和 PAD6）。PAD1 在表皮、子宫和多种癌症类型（乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌）中表达。PAD1 的过表达与乳腺癌和其他恶性肿瘤的不良预后相关。PAD1 通过瓜氨酸化关键调控蛋白（包括 p53 肿瘤抑制因子）来促进肿瘤进展（瓜氨酸化会使 p53 失活），从而导致细胞增殖增加、凋亡减少和化疗耐药。D-氯-脒盐酸盐是氯-脒的 D-氨基酸类似物，旨在提高其对 PAD1 相对于其他 PAD 亚型的选择性。 “D-Cl”表示存在D-精氨酸残基，这赋予其更强的抗蛋白水解稳定性和更高的选择性。D-Cl-脒是一种强效的不可逆抑制剂，可与PAD1活性位点半胱氨酸残基（Cys353）形成共价加合物。盐酸盐（CAS号：2985338-61-0）是该化合物稳定的研究级形式。D-Cl-脒盐酸盐是验证PAD1作为肿瘤和炎症治疗靶点的重要工具。粉末应储存于-20℃，溶液应避光储存于-20℃，并在惰性气氛（氮气）下操作以防止降解。
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| 分子式 |
C14H20CL2N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
347.24
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| 精确质量 |
346.096
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| CAS号 |
2985338-61-0
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| 相关CAS号 |
Cl-amidine hydrochloride;1373232-26-8;Cl-amidine;913723-61-2;Cl-amidine TFA;1043444-18-3;D-Cl-amidine;1404060-15-6
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| PubChem CID |
154703105
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| tPSA |
111
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
381
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1=CC=C(C=C1)C(=O)N[C@H](CCCN=C(CCl)N)C(=O)N.Cl
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| InChi Key |
OPFMEGSAOZAJIV-RFVHGSKJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H19ClN4O2.ClH/c15-9-12(16)18-8-4-7-11(13(17)20)19-14(21)10-5-2-1-3-6-10;/h1-3,5-6,11H,4,7-9H2,(H2,16,18)(H2,17,20)(H,19,21);1H/t11-;/m1./s1
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| 化学名 |
N-[(2R)-1-amino-5-[(1-amino-2-chloroethylidene)amino]-1-oxopentan-2-yl]benzamide;hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~80 mg/mL (~230.39 mM)
H2O :~16.67 mg/mL (~48.01 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.67 mg/mL (7.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 26.7 mg/mL的澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中并混合均匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.67 mg/mL (7.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 26.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.67 mg/mL (7.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (28.80 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8799 mL | 14.3993 mL | 28.7985 mL | |
| 5 mM | 0.5760 mL | 2.8799 mL | 5.7597 mL | |
| 10 mM | 0.2880 mL | 1.4399 mL | 2.8799 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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