| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TNF-α (EC50 = 0.63 μM); IL-1β (EC50 = 1.45 μM)
R-7050's primary target is the tumor necrosis factor-alpha receptor 1 (TNFR1). By inhibiting TNFR1, it prevents the binding of TNF-α to the receptor, thereby blocking the downstream signaling pathways that lead to the production of pro-inflammatory cytokines and the induction of apoptosis. This makes it a potential therapeutic agent for inflammatory diseases. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
R-7050 对 TNFα 具有明显的亲和力，对 LPA 受体（一种 G 蛋白偶联受体）的亲和力稍弱，而非 IL-1β、酪氨酸激酶或 Fas 受体系统[2]。体外实验表明，R-7050 可抑制 TNF-α 诱导的信号传导。它已被证实能够阻断 TNF-α 刺激引起的 NF-κB 激活和促炎细胞因子的产生。其活性可通过 TNF-α 刺激的细胞进行细胞实验评估。
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| 体内研究 (In Vivo) |
R-7050 可减轻小鼠脑出血 (ICH) 引起的神经血管损伤。在损伤后两小时内给予 R-7050 可显著减少血脑屏障开放，并延缓损伤后 24 小时内脑水肿的发生。损伤后前三天，神经功能也得到改善。然而，R-7050 对血肿体积的减少没有影响[1]。体内研究已证实 R-7050 在动物模型中具有抗炎作用。通过抑制 TNFR1，它可以减轻炎症性疾病模型中的炎症和组织损伤。其疗效已在急性肺损伤和其他炎症性疾病模型中得到证实。
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| 酶活实验 |
高通量筛选 [2]
将化合物溶解于 DMSO 中，最终储备浓度为 10 mM，并储存于 -80°C。化合物库筛选采用全集成可编程机器人液体处理系统进行，该系统配备集成式酶标仪和环境可控的转盘式酶标仪，环境温度设定为 37°C，CO2 浓度为 5%。将 A549 细胞（1 × 10⁴ 个/孔）接种于 96 孔白色平底透明板中，每孔加入 100 μl 培养基，过夜培养。次日，从用相同培养基制备的约 30 万个化合物的化合物库中取出 100 μl 等分试样，加入到孔中，最终浓度为 10 μM，并溶于 0.2% (v/v) DMSO 中。细胞与化合物预孵育 1 小时后，用 TNFα 或 IL-1β（最终浓度为 1 ng/ml）刺激 4 小时。刺激结束后，使用小鼠抗人CD54单克隆抗体和HRP标记的抗小鼠IgG2a抗体（终稀释度分别为1:1000和1:10000）对细胞进行ICAM-1染色。37℃孵育1小时后，用300 μl PBS洗涤4次，并使用SuperSignal ELISA Pico化学发光底物显色。为测定EC50值，仅用TNFα（25 ng/ml）或IL-1β（10 ng/ml）刺激细胞4小时，以避免细胞自身产生的其他细胞因子的二次刺激。 基于图像的NFκB核转位分析[2] 在分析前一天，将HeLa细胞以2000个细胞/孔的密度接种于96孔板中。在检测当天，将细胞与系列稀释的测试化合物（例如R-7050）预孵育1小时，然后在37°C下用TNFα（25 ng/ml）或IL-1β（10 ng/ml）刺激30分钟。用PBS洗涤细胞两次，并在室温下用甲醇固定1小时。用1% BSA的PBS-Tween 20缓冲液封闭细胞1小时后，将细胞与含有抗NFκB p65兔多克隆抗体（1:1000稀释）的相同缓冲液孵育过夜，随后按照先前描述的方法，在室温下用Alexa Fluor 488标记的羊抗兔IgG（1:1000稀释）染色3小时。细胞还用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) 进行共染色1小时，以追踪细胞核形态。使用配备紫外滤光片组和Photometrics相机的蔡司Axiovert S100显微镜，以10倍物镜采集数字图像。 R-7050的体外活性通过基于细胞的检测方法进行评估。将细胞（例如HeLa或HEK293细胞）在有或无不同浓度R-7050的情况下用TNF-α处理。使用报告基因检测（例如NF-κB驱动的荧光素酶报告基因）评估NF-κB的激活。通过ELISA检测促炎细胞因子（例如IL-6、IL-8）的产生。通过测量caspase活性或流式细胞术评估细胞凋亡的诱导。 |
| 细胞实验 |
细胞死亡和活力检测 [2]
使用 CellTiter-Glo 发光细胞活力检测试剂盒评估细胞活力。将 TNFα 敏感的 ME180 细胞与测试化合物（例如 R-7050）在 37°C 下预孵育 1 小时，然后用不同浓度的 TNFα 刺激 24 小时。孵育结束后，用 50 μl 预稀释的 CellTiter-Glo 试剂（与 PBS 1:1 稀释）替换培养基，并使用微孔板读数仪测量相对发光强度。使用两种已知的 NFκB 通路抑制剂（IKK2-VI 和 MG132）以及一种已知可增强 TNFα 诱导的细胞毒性的 RNA 合成抑制剂（Act-D）作为对照。 半胱天冬酶活性检测 [2] 使用 Caspase-Glo 3/7 检测试剂盒测定化合物对半胱天冬酶活性的影响。 ME180 细胞先用测试化合物（如 R-7050）在 37°C 下预孵育 1 小时，然后用不同浓度的 TNFα 刺激 24 小时。孵育结束后，用 50 μl 稀释的 caspase-3/7 试剂（与 PBS 1:1 混合）替换培养基，并按照制造商的说明测定相对发光强度。蛋白酶体抑制剂 MG132（已知可增强 TNFα 诱导的细胞毒性）和广谱 caspase 抑制剂 Z-VAD-fmk 用作对照。 TNFα 受体内化的免疫荧光分析 [2] 本研究按照 Schutze 等人的方法进行。简而言之，将 HeLa 细胞接种到含有无菌圆形显微镜盖玻片的 12 孔组织培养板中。将细胞与测试化合物（如R-7050）或阳性对照（MDC）在37°C预孵育1小时后，将温度降至4°C，并向培养基中加入R&D Systems公司提供的Fluorokine试剂盒（NFTA0）中的生物素标记的人TNFα（100 ng/ml）。2小时后，用PBS洗涤细胞以去除未结合的TNFα，并使生物素标记的TNFα-TNFαR复合物内化10、30和60分钟。然后用PBS洗涤细胞两次，并用90%冷甲醇固定30分钟。再次用PBS洗涤细胞，并在室温下用含0.5% Triton X-100的Super Block溶液封闭2小时。细胞在4°C下用FITC标记的亲和素（1:50稀释）于相同的封闭液中孵育过夜。将盖玻片翻转到预先滴加一滴Vecta-shield封片剂的载玻片上。使用Axiovert S100荧光显微镜观察配体-受体复合物的定位。 对于细胞实验，将表达TNFR1的HeLa、HEK293或其他细胞系培养于合适的培养基中。在用TNF-α（例如，10 ng/mL）刺激前1-2小时，用不同浓度的R-7050（通常为0.1至100 µM）处理细胞。刺激4-24小时后，检测NF-κB的激活和细胞因子的产生。使用MTT法评估细胞活力。 |
| 动物实验 |
小鼠：本研究采用胶原酶诱导的脑出血小鼠模型。简而言之，将8-10周龄的雄性CD-1小鼠固定于立体定位仪上，在顶叶皮层上、距前囟外侧2.2 mm处钻取一个直径为0.5 mm的颅骨孔。使用装有0.04 U细菌IV型胶原酶（溶于0.5 L生理盐水）的26号Hamilton注射器，从颅骨表面向下3 mm处直接向左侧纹状体注射胶原酶。为避免溶液回流和过度扩散，注射速度为450 nL/min，注射后在原位停留数分钟。假手术组小鼠接受相同的操作，不同之处在于立体定位注射的是生理盐水而非胶原酶。取出注射器后，用骨蜡封闭颅骨孔，用手术钉缝合切口，并保持小鼠温暖直至翻正反射恢复。 R-7050（6-18 mg/kg）在损伤发生时或脑出血后2小时内通过腹腔注射给药。简而言之，将雄性CD-1小鼠（8-10周龄）固定于立体定位仪上，在顶叶皮层上、距前囟外侧2.2 mm处钻一个直径0.5 mm的颅骨孔。将装有0.04 U细菌IV型胶原酶（溶于0.5 μL生理盐水）的26号Hamilton注射器，从颅骨表面向下3 mm，直接注入左侧纹状体。注射器以450 nL/min的速度注入，并在注射后保持原位数分钟，以防止溶液回流和过度扩散。假手术组动物接受相同的手术操作，只是立体定位注射的是生理盐水而非胶原酶。取出注射器后，用骨蜡封闭钻孔，切口用手术钉缝合，并保持小鼠温暖直至翻正反射恢复。R-7050（6–18 mg/kg）在损伤发生时或脑出血后2小时内经腹腔注射给药。[1]
在体内，R-7050通常通过腹腔注射或口服给药于动物模型。例如，在急性肺损伤模型中，小鼠接受LPS或其他炎症刺激处理，并在诱导损伤之前或之后给予R-7050。通过测量支气管肺泡灌洗液中炎症细胞和细胞因子的水平以及对肺组织进行组织病理学检查来评估炎症的减轻情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
所提供的搜索结果中未提供R-7050的具体药代动力学数据。作为一种分子量为489.97 g/mol的小分子，预计其具有良好的口服生物利用度。其半衰期和代谢情况需要进一步研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
所提供的搜索结果中没有关于R-7050的具体毒性数据。作为一种TNF-α信号通路抑制剂，它可能对免疫系统产生影响。需要进行全面的毒理学研究以确定其完整的安全性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
脑出血（ICH）是出血性卒中最常见的类型，急性期死亡率最高，长期预后最差。遗憾的是，由于缺乏可行的治疗靶点，目前脑出血的治疗选择非常有限。炎症激活与临床前脑出血模型中的神经功能缺损以及临床脑出血患者病情恶化相关。本研究旨在验证R-7050（一种新型细胞穿透性三唑喹喔啉类肿瘤坏死因子受体（TNFR）复合物抑制剂）是否能够减轻小鼠脑出血后的神经血管损伤。在脑出血发生后2小时内给予R-7050可显著减少血脑屏障的开放，并在脑出血发生后24小时内减轻脑水肿。此外，小鼠的神经功能在脑出血发生后的前三天内得到改善。然而，R-7050并未减少血肿体积，表明TNFR抑制的有益作用发生在血栓形成/溶解之后。这些数据表明，TNFR拮抗剂作为辅助疗法，在减少脑出血后的神经损伤和改善患者预后方面具有潜在的临床价值。[1]
通过筛选小分子化合物库，发现了一类三唑基喹喔啉类化合物，它们能够抑制肺上皮细胞中TNFα诱导的细胞间黏附分子-1 (ICAM-1) 表达（而非白细胞介素-1β (IL-1β) 诱导的ICAM-1表达）。这些化合物不仅抑制了TNFα诱导的核因子κB (NF-κB) 存活通路，还阻断了死亡通路的激活。这种双重活性使其区别于其他已知的NF-κB通路抑制剂，后者仅抑制部分TNFα信号传导，从而导致TNFα诱导的细胞毒性增加。有趣的是，这些化合物抑制了TNFα受体（TNFαR）I与TNFαR相关死亡结构域蛋白（TRADD）和受体相互作用蛋白1（RIP1）的结合，而这些是TNFα刺激后最初的细胞内信号传导事件。进一步的研究表明，它们阻断了TNFα-TNFαR复合物的配体依赖性内吞作用，从而抑制了大部分TNFα诱导的细胞反应。因此，具有三唑喹喔啉骨架的化合物可能成为研究基于小分子的抗TNFα疗法的宝贵工具。[2] R-7050是一种用于研究TNF-α信号在炎症和其他疾病中作用的研究化合物。它是研究TNFR1抑制剂治疗潜力的工具。目前尚未获准用于临床。 |
| 分子式 |
C16H8CLF3N4S
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|---|---|
| 分子量 |
380.774730682373
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| 精确质量 |
380.011
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| 元素分析 |
C, 50.47; H, 2.12; Cl, 9.31; F, 14.97; N, 14.71; S, 8.42
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| CAS号 |
303997-35-5
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| 相关CAS号 |
303997-35-5
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| PubChem CID |
1486608
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.694
|
| LogP |
5.45
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| tPSA |
68.4
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
477
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC(F)(C1=NN=C2N1C3=CC(Cl)=CC=C3N=C2SC4=CC=CC=C4)F
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| InChi Key |
SUUMKHOVGVYGOP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H8ClF3N4S/c17-9-6-7-11-12(8-9)24-13(22-23-15(24)16(18,19)20)14(21-11)25-10-4-2-1-3-5-10/h1-8H
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| 化学名 |
8-chloro-4-phenylsulfanyl-1-(trifluoromethyl)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinoxaline
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| 别名 |
TNF-α Antagonist III; R-7050; 8-chloro-4-phenylsulfanyl-1-(trifluoromethyl)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinoxaline; 8-Chloro-4-(phenylthio)-1-(trifluoromethyl)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinoxaline; 8-chloro-1-(trifluoromethyl)[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinoxalin-4-yl phenyl sulfide; 8-chloro-4-(phenylsulfanyl)-1-(trifluoromethyl)-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinoxaline; R 7050; SUUMKHOVGVYGOP-UHFFFAOYSA-N; R7050; R 7050
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 9~25 mg/mL (23.6~65.7 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.57 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.57 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6263 mL | 13.1313 mL | 26.2626 mL | |
| 5 mM | 0.5253 mL | 2.6263 mL | 5.2525 mL | |
| 10 mM | 0.2626 mL | 1.3131 mL | 2.6263 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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