NAT10/N-acetyltransferase 10

- Remodelin通过抑制NAT10纠正核纤层病变细胞（如 Hutchinson-Gilford 早老综合征（HGPS）患者的成纤维细胞）的核形态缺陷。用1 μM Remodelin处理72小时可降低核形态异常细胞的比例，增加核膜处的核纤层蛋白A/C水平，并改善染色质组织 [1]
- 在前列腺癌细胞系（DU145、PC-3）中，Remodelin（5 μM、10 μM）以剂量依赖方式抑制细胞增殖、集落形成和迁移。通过流式细胞术和蛋白质印迹法检测显示，它下调参与DNA复制的蛋白（如CDC6、MCM2）并诱导细胞周期停滞在G1期 [2]
- 在对阿霉素耐药的人肝癌（HCC）细胞系（HepG2、Huh7）中，Remodelin（5 μM）通过抑制上皮-间质转化（EMT）逆转耐药性。蛋白质印迹法和qPCR显示，它降低EMT相关转录因子（如Snail、Twist）和间质标志物（如N-钙粘蛋白）的表达，同时增加上皮标志物（如E-钙粘蛋白）[4]

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Remodelin Hydrobromide（10-40 μM，1-7 天）在 AR 阳性和 AR 阴性前列腺癌细胞中以剂量依赖性方式抑制 NAT10 活性和细胞增殖 [2]。 Remodelin Hydrobromide（20 μM，24 小时）可抑制 NAT10 并减少前列腺癌细胞中的 DNA 复制 [2]。在 LmnaG609G/G609G 成纤维细胞中，remodelin 氢溴酸（1 μM，7 天）可减少核形态缺陷并促进基因组稳定性 [3]。

- 在HGPS小鼠模型（LmnaG609G/G609G小鼠）中，口服Remodelin可改善健康跨度。从4周龄开始以100 mg/kg/天的剂量处理，可增加握力、减少脊柱后凸、延缓步态异常的发生，与载体对照组相比，中位生存期延长约15%。组织学分析显示肾脏和肌肉组织的核形态改善 [3]
- 在前列腺癌异种移植模型（裸鼠中植入DU145细胞）中，腹腔注射Remodelin（20 mg/kg，每周两次，持续4周）显著减小肿瘤体积和重量。TUNEL检测显示肿瘤组织中CDC6和MCM2的表达降低，凋亡细胞增加 [2]

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Remodelin 氢溴酸（2 或 20 mg/kg，腹腔注射，每两天一次，持续 4 周）可有效降低肿瘤异种移植裸鼠模型中 AR 阴性前列腺癌的生长 [2]。 Remodelin Hydrobromide（100 mg/kg，口服）可抑制 NAT10，并显着延长 LmnaG609G/G609G 小鼠早衰综合征 (HGPS) 模型的健康寿命 [3]。 Remodelin 氢溴酸（5 mg/kg，口服）在小鼠中的 T1/2 为 1.81 小时，口服生物利用度 (F%) 为 43.5% [3]。 Remodelin 氢溴酸在小鼠体内的药代动力学特征[1] 途径 剂量 (mg/kg) T1/2 (h) Tmax (h) Cmax (ng/mL) AUC0-t (ng/h/mL) AUC0-Ꝏ (ng/h) /mL) MRT_last (h) F(%) po 5 1.81 0.25 409 235 259 0.84 43.5%

重组NAT10蛋白与不同浓度（0.1-10 μM）的Remodelin在含乙酰辅酶A和荧光标记RNA底物的反应缓冲液中孵育。通过检测乙酰化产物发出的荧光信号来测量NAT10的乙酰转移酶活性。根据酶抑制的剂量-反应曲线计算IC50值 [1]
赖氨酸乙酰转移酶（KAT）测定。[1]
使用荧光HAT测定试剂盒进行KAT测定，使用从HEK293细胞纯化的NAT10和5μg纯化的富含MAP的猪Tubulin作为底物。重塑和可点击分子2在50μM下使用。[1]

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圆二色光谱法。[1]
CD实验使用Chirascan圆二色分光光度计进行。将200μl最终浓度为10μM的纯化FLAG-NAT10（TBS+0.1%NP-40）置于光路长度为1mm的石英试管中，转移至分光光度计。CD扫描在25°C下记录，波长范围为180至350 nm，响应时间为1s，间距为1 nm，带宽为1.5 nm。加入溶解在DMSO中的化合物1，并在记录扫描之前将溶液温育5分钟。缓冲液减去CD光谱，在300 nm处校正零并归一化（摩尔椭圆度θ以105°cm2 dmol−1为单位）。

- 对于核纤层病变细胞：将患者来源的成纤维细胞接种后，用Remodelin（0.1-5 μM）处理72小时。通过核纤层蛋白A/C的免疫荧光染色和DAPI染色评估核形态。量化核异常细胞的百分比，并通过共聚焦显微镜分析染色质组织 [1]
- 对于前列腺癌细胞：用Remodelin（5 μM、10 μM）处理DU145/PC-3细胞24-72小时。通过CCK-8法检测细胞活力；通过将细胞接种在软琼脂中并在14天后计数集落来评估集落形成能力。使用transwell实验评估迁移能力。蛋白质印迹法和qPCR用于检测与DNA复制和细胞周期相关的蛋白/基因 [2]
- 对于阿霉素耐药的肝癌细胞：用Remodelin（5 μM）预处理HepG2/Huh7细胞24小时，然后暴露于阿霉素。通过MTT法检测细胞活力以确定耐药性的逆转。通过蛋白质印迹法和qPCR分析EMT标志物，并通过transwell实验评估细胞迁移/侵袭能力 [4]

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细胞增殖测定[2]
细胞类型：前列腺癌细胞系 VCaP、PC3 和 DU145
测试浓度： 0、10、20、40 μM
孵育时间：1、2、7天
实验结果：抑制NAT10并抑制AR阳性和AR阴性前列腺癌细胞的生长。与对照组相比，随着时间的推移，细胞增殖活性显着降低。以剂量依赖性方式降低集落形成能力。

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免疫荧光[2]
细胞类型：前列腺癌细胞系 VCaP、PC3 和 DU145
测试浓度： 20 μM
孵育时间：24小时
实验结果：与对照组相比，阳性标记率和荧光强度均显着下降。与对照组相比，IdU 的染色焦点和 CldU 的染色焦点均显着减少。

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蛋白质印迹分析[3]
细胞类型： 来自 LmnaG609G/G609G 和野生型 (WT) 同窝小鼠的皮肤成纤维细胞
测试浓度： 1 μM
孵育时间：7天
实验结果：降低了DNA双链b的较高水平

- For HGPS mice: Remodelin is dissolved in 0.5% methylcellulose and administered orally via gavage at 100 mg/kg/day, starting from 4 weeks of age until the end of the study. Mice are monitored weekly for grip strength, kyphosis severity, and gait. Survival is recorded, and tissues are collected for histological and immunofluorescence analysis [3]
- For prostate cancer xenografts: Nude mice bearing DU145 tumors are randomized into control and treatment groups. Remodelin is dissolved in DMSO and diluted in PBS, then injected intraperitoneally at 20 mg/kg twice weekly for 4 weeks. Tumor volume is measured every 3 days, and tumors are harvested for western blot and TUNEL assay [2]

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Animal/Disease Models: PC-3 cells tumor xenograft model in nude athymic BALB/c nu/nu (nude) mice[2]
Doses: 2 or 20 mg /kg
Route of Administration: intraperitoneal (ip)injection, once every two days for 4 weeks
Experimental Results: Dramatically decreased AR-negative prostate cancer tumor growth. In the high-dose group, xenograft tumor weight at the endpoint was much smaller than that in the low -dose group.

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Animal/Disease Models: LmnaG609G/G609G hutchinson-gilford progeria syndrome (HGPS) mouse model[3]
Doses: 100 mg/kg
Route of Administration: po (oral gavage), daily schedule for 3 weeks of age onward, until the end- point
Experimental Results: Ameliorated age-dependent weight loss. Ameliorated cardiac pathology. Led to the dramatic amelioration of HGPS cardiac pathologies, including reduction of adventitial fibrosis of the aorta, rescue of vascular smooth muscle cell loss, and salvage of smooth muscle actin (SMA) loss, both in the aorta and the coronary arteries.

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Animal/Disease Models: WT Mice (pharmacokinetic/PK assay)[3]
Doses: 5 mg/kg
Route of Administration: Oral gavage

- In HGPS mice, Remodelin at 100 mg/kg/day shows no significant toxicity; body weight, liver, and kidney function parameters remain normal [3]
- In nude mice treated with Remodelin (20 mg/kg, intraperitoneal), no obvious weight loss or organ damage is observed [2]

[1]. Chemical inhibition of NAT10 corrects defects of laminopathic cells. Science. 2014 May 2;344(6183):527-32.

[2]. Inhibition of N-Acetyltransferase 10 Suppresses the Progression of Prostate Cancer through Regulation of DNA Replication. Int J Mol Sci. 2022 Jun 12;23(12):6573.

[3]. Targeting of NAT10 enhances healthspan in a mouse model of human accelerated aging syndrome. Nat Commun. 2018 Apr 27;9(1):1700.

[4]. N-Acetyltransferase 10 Enhances Doxorubicin Resistance in Human Hepatocellular Carcinoma Cell Lines by Promoting the Epithelial-to-Mesenchymal Transition. Oxid Med Cell Longev. 2019 Jul 1;2019:7561879.

- Remodelin is a small-molecule inhibitor of NAT10, a nucleolar acetyltransferase involved in rRNA acetylation and nuclear structure maintenance. Its mechanism of action involves correcting nuclear abnormalities by modulating NAT10-mediated acetylation of proteins involved in nuclear envelope integrity [1]
- Remodelin exhibits potential therapeutic effects in aging-related diseases (e.g., progeria) and cancers (prostate cancer, HCC) by targeting NAT10-dependent pathways [2,3,4]

C15H15BRN4S

363.28

362.02

C, 49.59; H, 4.16; Br, 22.00; N, 15.42; S, 8.83

1622921-15-6

Remodelin;949912-58-7

86280479

Light yellow to yellow solid

5.054

89.31

2

5

3

21

397

0

Br[H].S1C([H])=C(C2C([H])=C([H])C(C#N)=C([H])C=2[H])N=C1N([H])/N=C1/C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C/1([H])[H]

XNWBCMSPDCSWSD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H14N4S.BrH/c16-9-11-5-7-12(8-6-11)14-10-20-15(17-14)19-18-13-3-1-2-4-13;/h5-8,10H,1-4H2,(H,17,19);1H

4-[2-(2-Cyclopentylidenehydrazinyl)-4-thiazolyl]benzonitrile Hydrobromide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 10 mg/mL (27.53 mM) in 15% Cremophor EL + 85% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。