Salirasib (Farnesyl Thiosalicylic Acid)   中文名称: 沙利雷塞

RAS; PPMTase (Ki = 2.6 μM)

体外活性：Salirasib抑制人 Ha-ras 转化 Rat1 细胞的生长，这与其对 PPMTase 的抑制作用密切相关。 Salirasib抑制 Rat-1 成纤维细胞、Ras 转化的 Rat-1 和 B16 黑色素瘤细胞中的 Ras 甲基化。 Salirasib 还可以降低细胞膜中 Ras 的水平，并抑制 Ras 依赖性细胞生长，与甲基化无关，但通过调节 Ras-Raf 通讯来实现。在 Ras 转化的 EJ 细胞中，Salirasib 干扰 Raf-1 和 MAPK 的激活并抑制 DNA 合成。激酶测定：大鼠脑小脑的突触体膜或培养细胞系的总膜（100,000 × g 颗粒）用于无细胞系统中的甲基转移酶测定。甲基转移酶测定在 50 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 7.4）中于 37°C 下进行，使用 100 μg 蛋白质、25 μM [methyl-3H]AdoMet (300,000 cpm/nmol) 和 50 μM AFC（作为储备溶液制备） DMSO 中），总体积为 50 μL。所有测定中的 DMSO 浓度均为 8%。如文中所示，多个实验中使用了不同的 AFC 浓度。 10 分钟后，通过添加 500 μL 氯仿:甲醇 (1:1) 终止反应，随后添加 250 μL H2O，混合并相分离。将 125 µL 氯仿相在 40°C 下干燥，并添加 200 µl 1 N NaOH、1% SDS 溶液。通过气相平衡法对由此形成的甲醇进行计数。典型的背景计数（未添加 AFC）为 50-100 cpm，而带有 AFC 的典型反应产量为 500-6,000 cpm。测定一式三份进行，并减去背景计数。进行内源底物的甲基化和凝胶电泳。使用 100 μCi/mL [甲基-3H]蛋氨酸测定完整细胞中的蛋白质羧甲基化。在含有 5 mL 标记培养基的 10 厘米平板中生长的近汇合培养物中对细胞进行分析。细胞测定：细胞在24孔板中生长。电镀后 2 小时，细胞接受从储备溶液中新鲜制备的溶剂或 FTS，以在 0.1% DMSO 中产生最终指定浓度。每 4 天更换一次含有溶剂或药物的新鲜培养基。单独的实验表明溶剂本身对细胞生长没有影响。在指定的日子里，通过胰蛋白酶/EDTA将细胞从平板上分离并在光学显微镜下计数。所有测定均一式四份进行。在平行实验中，细胞用台盼蓝或MTT染色，并在光学显微镜下检查染色的细胞。在一些 MTT 染色培养物中，将细胞溶解在 0.2 mL 100% DMSO 中，并使用酶联免疫吸附测定读数仪通过分光光度法测定染色程度。

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我们的研究结果表明，ELT3细胞中，Rheb。GTP水平在结构上很高（图2），比表达TSC2的ELT3细胞（图1）增殖更快，其中TSC2促进Rheb。GTP水解。我们发现FTS/Salirasib在体外抑制了TSC2缺失的ELT3细胞的增殖，并且这种抑制作用在很大程度上被TSC2表达所抵消（图1a-1c）。因此，FTS优先抑制快速增殖的细胞。此外，我们的研究结果表明，增殖的抑制主要归因于Rheb蛋白的抑制，而不是Ras的抑制。根据这一发现，DN Rheb（而非DN Ras）模拟了FTS对细胞增殖的生长抑制作用。FTS还降低了TSC2-null ELT3细胞中Rheb蛋白及其下游靶点S6K的量（图2a和2b）。

ELT3细胞中的大多数Rheb蛋白似乎都是GTP结合的形式。5,20我们发现ELT3细胞含有相对大量的Rheb。[32P]-GTP（约占Rheb总量的50%），其中唾液酸/FTS治疗减少了88%（图2e）。因此，这些新的结果表明，FTS/Salirasib通过抑制活性Rheb来下调Rheb蛋白（图2a）。GTP（图2e）和降低Rheb稳定性（图2d）。研究表明，Rheb定位对于Rheb介导的mTOR激活是必不可少的。28还表明，FTS不会破坏Rheb的亚细胞定位。28与这些发现一致，我们没有观察到FTS对Rheb的错误定位（数据未显示）。我们假设Rheb与细胞膜紧密结合，并附着在一个假定的锚定蛋白上；FTS干扰了推测的锚定蛋白和Rheb的相互作用。GTP，从而阻断Rheb GTP的负载和活性，而不影响其总体细胞定位。因此，我们提出了一个方案，描述了FTS在ELT3细胞中作用的可能机制（图6）。该方案结合了前面所述的Ras和Rheb信号29，以及本文所述的FTS对Ras和Rheb的影响。有趣的是，Ras的量。我们TSC2缺失的ELT3细胞中的GTP相对较小，并且正如预期的那样，FTS对Ras的影响（如果有的话）仅为轻微22（图2a）。这些结果表明：（i）活性Ras对ELT3细胞生长的重要性不如活性Rheb，以及（ii）FTS诱导的对ELT3肿瘤生长的抑制是其对Rheb而非Ras作用的结果。高Rheb之间可能存在关联。GTP和低Ras。GTP因观察到表达TSC2的ELT3细胞中Rheb的量如预期的那样显著低于TSC2缺失的ELT3电池中的Rheb量而得到加强，20而Ras的量。GTP高于亲本ELT3细胞（图2a）。这种相互关系的原因尚不清楚，但如果这是一种普遍现象，则可能与Ras和Rheb生物学以及与这些蛋白质相关的疾病（如LAM、2结节硬化症30和癌症）有关。这种现象的原因尚不清楚，需要进一步研究，但它并不干扰我们的主要结论。[1]

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在这项研究中，我们首次报道了新型异戊二烯基半胱氨酸类似物Salirasib通过干扰ras和mTOR抑制三种人类HCC细胞系细胞生长的作用。更重要的是，salirasib能够抑制EGF和IGF诱导的人HCC细胞系增殖，这可能会降低与一种生长因子途径激活相关的逃逸机制的可能性，以应对另一种途径的抑制。尽管三种受试细胞系在治疗三天后的IC50相似，但时间过程实验表明，在三种受测细胞系中，Hep3B细胞对唾液酸盐最敏感，而Huh7细胞则更具耐药性。重要的是，我们的研究结果还表明，在远低于估计的IC50的剂量下，长期使用salirasib治疗是有效的。

另一方面，凋亡也有助于Salirasib的生长抑制作用，与其他两种细胞系相比，Huh7的相对耐药性可能是由于这些细胞在处理后没有凋亡诱导。然而，至少在我们的实验条件下，凋亡的贡献似乎不如salirasib的抗增殖作用显著。事实上，半胱天冬酶在HepG2细胞中的激活比在更敏感的Hep3B细胞中更为明显。此外，在后一种细胞中，在50μM或100μM的salirasib下没有观察到凋亡诱导，尽管这些剂量已经随着时间的推移导致细胞计数急剧下降。

然而，高剂量Salirasib在两种细胞系中诱导了caspase-3/7的激活，这可能至少部分是由线粒体凋亡途径介导的。我们的细胞凋亡可能是由survivin的下调引起的，因为salirasib已被证明可以减少胶质母细胞瘤细胞中survivin的表达，这足以引发细胞凋亡。此外，反义寡核苷酸下调存活素已被证明可以抑制细胞生长并诱导包括HepG2在内的几种细胞系凋亡。然而，在抗凋亡的Huh7细胞中，它也受到抑制，这表明需要额外的事件来触发细胞死亡。我们的研究结果还表明，柳氮可能通过上调HepG2和Hep3B细胞中TRAIL受体DR4和DR5，以及HepG2细胞中Fas表达的增加和Hep3B电池中TNFα的诱导，使细胞对死亡受体诱导的凋亡敏感。然而，单独上调Fas和TRAIL受体可能不足以在体外诱导重大影响，因为它们的配体FasL和TRAIL主要在免疫细胞上表达，而免疫细胞在单一培养物中不存在。然而，通过Salirasib等治疗上调肿瘤细胞上的死亡受体及其与免疫细胞上各自配体的相互作用在体内可能具有重要意义，进一步增强了Salirasib的抗肿瘤作用[3]。

在 Panc-1 异种移植裸鼠中，Salirasib (5 mg/kg ip) 显着抑制肿瘤生长，且无全身毒性。在雄性 Wistar 大鼠中，Salirasib (5 mg/kg ip) 显着抑制硫代乙酰胺诱导的肝硬化。在先天性肌营养不良症 dy(2J)/dy(2J) 小鼠模型中，Salirasib（5 mg/kg ip）可减轻纤维化并提高肌肉力量。

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FTS/Salirasib抑制体内ELT3肿瘤的生长[1]
接下来，我们研究了FTS对裸鼠ELT3肿瘤生长的影响，即对体内模型中细胞转化的影响，如材料和方法所述。在三个不同FTS剂量的独立实验中，小鼠在右侧腹部皮下注射4×106个细胞，如上所述。21,27治疗开始于5天后，三个实验组（每组n=10）的小鼠每天口服FTS（40、60或80 mg/kg），而对照组（n=10）只接受赋形剂（羧甲基纤维素）。在治疗开始54天后杀死小鼠。如图4a所示，从第33天开始，80 mg/kg的FTS显著抑制了肿瘤生长，到第54天，与对照组相比，肿瘤生长抑制了约85%。这种生长抑制是剂量依赖性的（图4b）。在实验结束时（第54天），当肿瘤被切除并称重时，FTS（80mg/kg）使肿瘤重量减轻了65.8±12.5%（n=10，p<0.01；图4a）。值得注意的是，无论是对照组还是接受FTS治疗的小鼠，即使在2个月后也没有死亡。可能需要更详细的校准来检查FTS对小鼠存活的可能影响。

部分肿瘤也被切片并用苏木精和伊红染色（图5A），分别对核酸和细胞质进行染色。我们还对凋亡细胞进行了TUNEL染色（图5B）。病理检查显示，Salirasib治疗组的肿瘤细胞增殖速度比对照组慢得多。图5A显示了两只FTS治疗小鼠肿瘤的典型切片（放大4倍、10倍和40倍）；一个肿瘤相对较大（图5A-d–5A-f），另一个是几乎完全被FTS根除的小肿瘤（图5A-g–5A-i）。还显示了对照小鼠的肿瘤切片（图5A-d–5A-f）。每组另外四个部分得出了类似的结果（未显示）。如图5A所示，FTS治疗（60 mg/kg，40天）导致切片中肿瘤细胞数量显著减少（白色箭头），而与此同时，这些肿瘤中纤维化结缔组织的数量增加（黑色箭头）。每组5只小鼠的染色切片的统计分析表明，FTS治疗组的染色面积百分比明显小于对照组（14.2%±3.6%比25.7%±3.1%；n=5，p<0.05）。值得注意的是，TUNEL染色显示没有明显的细胞死亡，对照组和FTS治疗的小鼠之间也没有差异（n=5；图5B）。这些结果与体外实验的结果一致，表明FTS抑制了ELT3细胞的生长，但没有诱导细胞死亡（图1）。

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Ras表达和Ras-GTP[2]
WT和dy2J/dy2J小鼠用S/SalirasibFTS治疗12周。研究结束时，使用抗Ras抗体对骨骼肌进行免疫印迹。与野生型组相比，未经治疗的dy2J/dy2J小鼠显示出显著更高的Ras表达（555.08±66.32比100±22.45密度，对照百分比；P<0.01；图1A）。FTS治疗与dy2J/dy2J小鼠Ras表达显著降低有关（205.76±19.37；P<0.01）。用FTS治疗WT小鼠导致Ras表达增加，远低于dy2J/dy2J小鼠中观察到的增加（206.76±29.37）。除了Ras表达外，在研究结束时通过Ras结合结构域下拉分析测量Ras活性。在该测定中，GTP结合的Ras通过其优先结合Raf1的RBD结构域来检测，Raf1与琼脂糖珠结合[26]。我们发现dy2J/dy2J小鼠的Ras-GTP水平高于WT小鼠（157.40±14.53 vs.100±10.23；P<0.05。图1B）。FTS治疗的dy2J/dy2J组Ras-GTP水平显著降低（97.16±10.54；P<0.01）。此外，治疗组dy2J/dy2J中的Ras-GTP恢复正常，与WT组相当。用FTS治疗WT小鼠诱导Ras-GTP增加（141.72±12.4），与这些小鼠Ras表达的增加相当。在WT小鼠中观察到的这些增加的性质尚不清楚。
此外，我们测量了Ras下游蛋白ERK的磷酸化（图1C）。与WT组相比，dy2J/dy2J小鼠的ERK磷酸化非常高（424.97±63.85对100±21.56；P<0.02），而Salirasib/FTS治疗显著降低了这种磷酸化（175.62±21.53；P<0.002）。WT FTS中pERK略有增加（169.29±31.1），而总ERK根本没有变化。

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肌肉力量[2]
使用电子握力计每周测定一次总峰值力。在整个研究过程中，未经治疗的dy2J/dy2J和WT小鼠的后肢肌力存在显著差异（P<0.01；图2）。与未治疗的dy2J/dy2J小鼠相比，经Salirasib/FTS治疗的小鼠后肢肌肉力量显著增加（P<0.05）。在研究期间，接受治疗的dy2J/dy2J小鼠的肌肉力量从3.01±0.27增加到4.79±0.22（克力/克体重），而未接受治疗的dy2J/dy2U组的肌肉力量则从2.67±0.22保持不变，为2.72±0.19。此外，在试验结束时，dy2J/dy2J治疗的小鼠后肢肌肉力量完全恢复到两个WT组的水平（4.79±0.22 vs.WT:4.64±0.39；WT+FTS:4.77±0.25）。在dy2J/dy2J小鼠的前肢（更强壮）（图S1）以及治疗和未治疗WT组的前肢和后肢中没有检测到这种差异。

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肌肉组织学[2]
与正常WT相比（图3A），18周龄未经治疗的dy2J/dy2J小鼠股四头肌的苏木精和伊红染色显示严重的晚期营养不良变化，纤维大小、内核异常变化，严重纤维化过度（图3B）。Salirasib/FTS治疗的dy2J/dy2J肌肉显示出相当大的纤维化衰减（见下一段），但仍然存在异常的肌病性变化，纤维大小不同，中心核数量增加（图3C）。

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Salirasib在皮下异种移植物模型中抑制肿瘤生长[3]
最后，我们在裸鼠HepG2细胞的皮下异种移植物模型中评估了salirasib的体内抗肿瘤活性。从治疗的第5天开始，salirasib诱导肿瘤体积在统计学上显著减少（图8A）。治疗12天后，平均肿瘤重量为131.7±18.9 mg，而对照组（赋形剂）为297.5±48.2 mg，表明salirasib使肿瘤生长减少了56%（图8B）。此外，在对照组和治疗组之间没有观察到肿瘤重量的重叠，这意味着即使是对照组中最小的肿瘤也比治疗组中最大的肿瘤大（图8C）。在整个实验过程中，动物保持良好状态，治疗后没有观察到体重减轻，这表明该剂量方案对salirasib具有良好的耐受性（数据未显示）。

对于无细胞系统中的甲基转移酶测定，使用培养细胞系的总膜（100,000 × g 颗粒）或大鼠脑小脑的突触体膜。 50 μL 50 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 7.4）、100 μg 蛋白质、25 μM [methyl-3H]AdoMet (300,000 cpm/nmol) 和 50 μM AFC（在 DMSO 中制备为储备溶液）用于甲基转移酶化验。测定在 37°C 下进行。所有测定均使用 8% DMSO。如文中所述，许多实验中使用了不同的 AFC 浓度。 10 分钟后，加入 500 μL 1:1 氯仿:甲醇混合物，然后混合并相分离，然后加入 250 μL H2O，终止反应。将 200 μl 1 N NaOH 和 1% SDS 溶液添加到已在 40°C 干燥的 125 μL 氯仿相中。使用气相平衡法来计算由此形成的甲醇。添加 AFC 后，典型的背景计数（无 AFC）范围为 50 至 100 cpm，而典型的反应产量为 500 至 6,000 cpm。每个测定进行三份重复，并扣除背景计数。进行凝胶电泳和内源底物的甲基化。在完整细胞中，使用 100 μCi/mL [甲基-3H]蛋氨酸测量蛋白质羧基甲基化。分析前，在 10 厘米平板中用 5 mL 标记培养基培养接近汇合的细胞培养物。

在时间依赖性反应研究中，每天使用 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 收获细胞，持续 1 至 7 天。然后在显微镜下使用台盼蓝排除法对细胞进行计数。将细胞在补充有 Salirasib或 DMSO 的培养基中培养三天，以进行剂量反应研究。按照制造商的指示，使用比色 WST-1 测定来评估细胞活力。使用 GraphPad Prism 软件，使用非线性回归分析来确定 IC50 值，或与 DMSO 对照相比，50% 的细胞生长被抑制的点。

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荧光激活细胞分选仪分析[1]
对于细胞死亡评估，以每10 cm板2×105个细胞的密度接种细胞，用Salirasib/FTS处理72小时，然后根据制造商的说明收集细胞并用膜联蛋白-V/碘化丙啶（PI）双重染色进行检测。用CBA软件分析FACSCalibur流式细胞术获得的结果。

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克隆形成试验[1]
表达ETL3和TSC2的ELT3细胞以每24孔板2.5×104个细胞的密度铺板，生长24小时，然后用Salirasib/FTS或0.1%Me2SO4处理（对照）。3天后，将细胞分离并铺在10cm板上（1:50稀释）。四天后，用结晶紫对细胞进行染色，并对菌落进行计数。

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免疫印迹分析[1]
ETL3细胞以每10 cm板4×105个细胞的密度铺板，生长24小时，然后用Salirasib/FTS或0.1%Me2SO4（对照）处理。如上所述裂解细胞，14并用小鼠抗泛Ras抗体、兔抗Rheb抗体、兔抗pS6K抗体、抗Flag抗体、家兔抗S6K抗体、小鼠抗pERK抗体、兔抗ERK抗体和兔抗β-微管蛋白抗体对裂解物（100μg蛋白质）进行免疫印迹。免疫印迹暴露于适当的次级过氧化物酶偶联IgG并进行增强化学发光。使用图像EZQuant凝胶统计分析软件通过密度测定法对蛋白质条带进行定量。

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总RNA纯化和实时PCR分析[1]
使用RNeasy Plus迷你试剂盒从未处理或75μM Salirasib处理的ELT3细胞中分离总RNA。如前所述，纯化的RNA用于实时PCR。16使用以下引物靶向Rheb基因：正向5′-GCTTATCGGTGTGGGAA-3′，反向5′-CTGCCTGGTGTCTACA-3′，以及看家基因GAPDH：正向5’-CCAGAACATCATC CCTGC-3′，逆向5′-GGAAGGGCCAATGCCAGTAGGAGC-3′。靶基因的mRNA表达被标准化为GAPDH参考基因的表达。

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Rheb的测量。GTP[1]
实验按照其他描述进行。17简而言之，ETL3细胞以每10 cm板4×105个细胞的速度铺板，生长24小时，然后用Salirasib/FTS或0.1%Me2SO4（对照）处理。2天后，将细胞饥饿过夜，然后换成无磷酸盐培养基30分钟，然后用0.25 mCi/ml[32Pi]正磷酸盐标记4小时。收获细胞的裂解物用蛋白-G琼脂糖珠和sc-6341抗Rheb抗体免疫沉淀1小时。核苷酸在65°C下洗脱，并进行薄层色谱（TLC）。GTP和GDP被用作标记，并用碘进行检测。通过在-80°C下用增感屏暴露于X射线胶片6天来检测信号。GDP和GTP通过Image EZ Quant Gel统计分析软件进行密度定量。Rheb结合的GTP百分比计算为[GTP/（GDP×1.5）+GTP]×100%。

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生长抑制研究[3]
对于时间依赖性反应研究，每天用0.05%胰蛋白酶-EDTA收获细胞1至7天，并在显微镜下使用台盼蓝排除法进行计数。 对于剂量反应研究，细胞在添加了Salirasib或DMSO的培养基中孵育3天。根据制造商的说明，使用比色WST-1测定法测定细胞存活率。

6周龄的雌性无胸腺NMRI nu/nu小鼠饲养于顶部带有过滤器的笼子中，并可自由摄取食物和饮水。12只小鼠接受皮下注射，注射液为100 μL PBS中悬浮的5×10⁶个HepG2细胞，用于在其右侧腹部建立肿瘤模型。细胞接种两周后，当肿瘤可触及时，将小鼠分为两组：一组接受Salirasib治疗（n = 6），另一组作为对照组（n = 4）。其中两只小鼠因此时未形成肿瘤而被排除在研究之外。在接下来的12天里，每天对小鼠进行腹腔注射（10 mg/kg salirasib）或等体积的溶剂（含2.5% v/v乙醇的PBS，pH 8.0）。从治疗第一天开始，每周三次使用数字游标卡尺记录肿瘤的大小。为了估算肿瘤体积，使用公式 V (mm³) = (长度 × 宽度²) / 2。为了评估治疗效果，在处死动物时记录肿瘤重量。无胸腺裸鼠（6 周龄）饲养于屏障设施中，光照/黑暗周期为 12 小时，并提供充足的食物和水。实验组小鼠每日口服 Salirasib/FTS (0.1 ml)。使用游标卡尺测量皮下肿瘤，并每 4 天记录一次动物体重。肿瘤体积使用公式 [长度 × 宽度] × [(长度 + 宽度) / 2] 计算。 [1]

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按照先前在肝硬化大鼠模型中的实验方案，从6周龄开始，每周3次腹腔注射Salirasib/FTS 5 mg/kg或对照溶液（见下文），持续12周（每组n = 7，每组4只雄性小鼠和3只雌性小鼠）。实验结束时，解剖双侧后肢肌肉。部分肌肉样本用液氮速冻，并储存于-80°C用于生化分析。股四头肌样本用液氮预冷的异戊烷快速冷冻，用于冰冻切片和组织学分析。[2]

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6周龄的雌性无胸腺NMRI nu/nu小鼠饲养于带滤网的笼子中，自由摄取食物和水。将5 × 10⁶个HepG2细胞悬浮于100 μl PBS中，皮下注射至12只小鼠右侧腹部，诱导肿瘤形成。接种细胞两周后，待肿瘤可触及时，将小鼠分为Salirasib治疗组（n = 6）和对照组（n = 4）。此时有两只小鼠未形成肿瘤，因此被排除在研究之外。治疗组小鼠每日腹腔注射10 mg/kg Salirasib或等体积的溶剂（含2.5% v/v乙醇的PBS，pH 8.0），持续12天。从治疗第一天开始，每周三次使用数字游标卡尺测量肿瘤尺寸。肿瘤体积按以下公式估算：V (mm³) = (长 × 宽²)/2。处死小鼠时记录肿瘤重量，以评估治疗反应。 [3]

沙利拉西布血浆药代动力学[4]
从24例患者中获得了可评估的药代动力学数据，涉及41个药代动力学研究周期（表4）。沙利拉西布的药代动力学特征为口服给药后吸收缓慢，消除迅速（图1）。未发生蓄积，因为第1天和第15天的沙利拉西布暴露量（Cmax；第1天AUCinf与第15天AUC0-12 h）相似（P > 0.05）。第1天，T_1/2（平均值±标准差）为3.6±2.2小时。第1天和第15天，Salirasib的ClS/F（平均值±标准差）分别为103.0±112.5和73.3±37.3 L/h，且在第1天和第15天，其分布范围均超过血容量，V/F分别为458.0±466.1和255.7±187.8 L（表4）。
尽管大多数药代动力学参数存在变异性，但配对分析显示，第1天和第15天的Salirasib药物暴露量（C_max和AUC）和ClS/F相似（P>0.05）。 Cmax 或 AUC 未出现累积，这与给药间隔（即 12 小时）约为 T1/2（即 3.6 小时）的四倍相符。Cmin 浓度似乎在第 8 天达到平台期，而 C1h 值在第 1、8 和 15 天保持稳定。全身药物暴露量（Cmax 和 AUC）随 salirasib 剂量从 100 mg 增加到 800 mg 而呈比例增加，剂量组间剂量标准化参数无显著差异（P > 0.05）证实了这一点。

毒性[4]
截至目前，共进行了103个周期的沙利拉西布治疗。每位患者的中位治疗周期数为2个（范围1-13个周期）。除一名患者在第二个周期将剂量从100 mg增加到200 mg外，所有患者均按初始剂量接受治疗（总周期数为2个）。表2列出了按剂量划分的药物相关不良事件。仅发生1-2级药物相关毒性。最常见的毒性反应是腹泻，发生率为79%（75%为1级，4%为2级）。腹泻持续时间随沙利拉西布剂量的增加而延长。接受较高剂量沙利拉西布治疗的患者腹泻发生率也较高：每日两次分别服用100、200、400、600和800 mg沙利拉西布的患者中，腹泻发生率分别为67%（3例患者中的2例）、67%（6例患者中的4例）、100%（6例患者中的6例）、67%（6例患者中的4例）和100%（3例患者中的3例）。腹泻不会导致临床化学指标异常，通常可通过口服止泻药（如洛哌丁胺或盐酸地芬诺酯）缓解。医嘱告知患者，如出现腹泻，应服用这些药物。19例（79%）患者未出现1级以上毒性反应。其他毒性反应包括21%的患者出现腹痛，以及各17%的患者出现恶心、呕吐和疲乏。在每日两次、每次 800 mg 的剂量下（即测试的最高剂量），未观察到典型的剂量限制性毒性 (DLT)。然而，接受该剂量治疗的三名患者均出现了 1-2 级持续性腹泻，因此决定进一步增加剂量无法耐受。在每日两次、每次 600 mg 的口服剂量下，所有患者均未出现 DLT 或持续性腹泻，因此，认为该剂量是 II 期研究的最佳剂量。

[1]. Farnesylthiosalicylic acid (salirasib) inhibits Rheb in TSC2-null ELT3 cells: a potential treatment for lymphangioleiomyomatosis. Int J Cancer. 2012 Mar 15;130(6):1420-9.

[2]. The Ras antagonist, farnesylthiosalicylic acid (FTS), decreases fibrosis and improves muscle strength in dy/dy mouse model of muscular dystrophy. PLoS One. 2011 Mar 22;6(3):e18049.

[3]. Salirasib inhibits the growth of hepatocarcinoma cell lines in vitro and tumor growth in vivo through ras and mTOR inhibition. Mol Cancer. 2010 Sep 22;9:256.

[4]. Phase 1 first-in-human clinical study of S-trans,trans-farnesylthiosalicylic acid (salirasib) in patients with solid tumors. Chemother Pharmacol. 2010 Jan;65(2):235-41.

沙利拉西布是一种倍半萜类化合物。
沙利拉西布已用于非小细胞肺癌诊断的临床试验。
沙利拉西布是一种水杨酸衍生物，具有潜在的抗肿瘤活性。沙利拉西布可使所有Ras亚型从其膜锚定位点脱离，从而阻止RAS信号通路的激活，进而抑制细胞增殖、分化和衰老。据信，RAS信号通路在三分之一的人类癌症中异常激活，包括胰腺癌、结肠癌、肺癌和乳腺癌。

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小GTP酶蛋白Ras和Rheb作为分子开关，调控细胞增殖、分化和凋亡。 Ras 还通过灭活结节性硬化症复合物 (TSC) 来调控 Rheb，该复合物包含 TSC1 和 TSC2 基因的产物，分别编码错构瘤蛋白 (TSC1) 和结节蛋白 (TSC2)。Ras 作为一种 Rheb 特异性 GTP 酶激活蛋白发挥作用。TSC1 或 TSC2 功能丧失会导致活性 Rheb·GTP 水平升高，进而引发翻译异常和细胞过度增殖，这些是结节性硬化症和淋巴管肌瘤病 (LAM) 这两种遗传性疾病的特征。为了确定 Rheb、Ras 或两者失活是否可能是 LAM 的潜在治疗方法，我们使用 TSC2 敲除的 ELT3 细胞作为 LAM 模型。我们用 Ras 抑制剂 S-反式,反式-法尼基硫代水杨酸 (FTS; salirasib) 处理这些细胞，FTS 可模拟 Ras 和 Rheb 共有的 C 端 S-法尼基半胱氨酸残基。该C端对于它们与细胞膜的结合及其生物活性至关重要。未经处理的ELT3细胞表达大量的Rheb，但Ras.GTP表达量很低，而TSC2的重新表达逆转了这种表型。FTS处理仅使TSC2缺失细胞中的Ras.GTP略有下降，但却降低了其过度活跃的Rheb以及细胞增殖、迁移和肿瘤生长。值得注意的是，在这些ELT3细胞中重新表达TSC2可以使其摆脱FTS的抑制作用。因此，FTS显然可以阻断TSC2缺失的ELT3细胞中的活性Rheb，并可能具有治疗LAM的潜力。[1]

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Ras超家族是一类鸟苷三磷酸（GTP）结合蛋白，调节着多种参与炎症和纤维化的细胞内过程。法尼基硫代水杨酸 (FTS) 是一种独特且强效的 Ras 抑制剂，可降低实验诱导的肝硬化中的炎症和纤维化，并改善系统性红斑狼疮、神经炎和肾炎动物模型中的炎症过程。本研究在肌营养不良蛋白缺陷型先天性肌营养不良症 (merosin 缺陷型先天性肌营养不良症) 的 dy(2J)/dy(2J) 小鼠模型中评估了 FTS 对 Ras 表达和活性、肌肉力量和纤维化的影响。与野生型小鼠相比，dy(2J)/dy(2J) 小鼠的 RAS 表达和活性显著升高。FTS 治疗显著降低了 RAS 的表达和活性。此外，FTS 治疗后，dy(2J)/dy(2J) 小鼠中 Ras 下游蛋白 ERK 的磷酸化水平也显著降低。临床上，FTS 治疗的小鼠后肢肌肉力量（通过电子握力计测量）显著增强。定量天狼星红染色和较低的肌肉胶原含量表明，治疗组的纤维化程度显著降低。FTS 的作用与 MMP-2 和 MMP-9 活性的显著抑制相关。我们得出结论，FTS 对 RAS 的活性抑制与先天性肌营养不良症 dy(2J)/dy(2J) 小鼠模型中纤维化的减轻和肌肉力量的增强相关。[2]

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背景：表皮生长因子和胰岛素样生长因子信号传导的失调在人类肝细胞癌 (HCC) 中起着重要作用，导致其下游靶点 ras/raf/细胞外信号调节激酶 (ERK) 和磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 通路的频繁激活。沙利拉西布是一种S-异戊二烯基半胱氨酸类似物，已被证实能够阻断多种非肝肿瘤细胞系中的ras和/或mTOR激活。我们体外研究了沙利拉西布对人肝癌细胞系（HepG2、Huh7和Hep3B）生长的影响及其作用机制，并在HepG2细胞皮下异种移植模型中研究了其体内作用。
结果：沙利拉西布通过抑制细胞增殖和部分诱导细胞凋亡，以时间和剂量依赖的方式抑制肝癌细胞的生长。在含血清培养基中，150 μM的沙利拉西布可使所有三种细胞系的生长减少50%。相比之下，在无血清条件下，经EGF或IGF2刺激后，沙利拉西布抑制细胞生长的效果更佳，IC50值范围为60 μM至85 μM。药物诱导的抗增殖作用与细胞周期蛋白A（cyclin A）的下调以及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）的下调（程度较轻）和p21及p27的上调有关。细胞凋亡的诱导与整体促凋亡平衡相关，包括caspase 3激活、细胞色素c释放、死亡受体上调以及凋亡抑制因子cFLIP和survivin的mRNA表达降低。这些作用与ras下调和mTOR抑制相关，而ERK和Akt的激活并未降低。体内实验表明，salirasib从第5天起即可抑制肿瘤生长。治疗12天后，治疗组动物的平均肿瘤重量减少了56%。
结论：我们的研究结果首次表明，salirasib通过抑制增殖和诱导凋亡来抑制人肝癌细胞系的生长，而这与ras和mTOR的抑制有关。在皮下异种移植模型中，salirasib 在人类肝细胞癌 (HCC) 中的治疗潜力得到了进一步证实。[3]

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目的：这项 I 期首次人体试验评估了 salirasib，一种硫代水杨酸的 S-异戊烯基衍生物，可竞争性阻断 RAS 信号通路。
方法：晚期癌症患者每 4 周接受一次 salirasib 治疗，每日两次，持续 21 天。剂量从 100 mg 递增至 200 mg、400 mg、600 mg 和 800 mg。
结果：最常见的毒性反应是剂量相关性腹泻（1-2 级，24 例患者中的 79%）。其他毒性反应包括腹痛、恶心和呕吐。未观察到 3-4 级毒性反应。 19 例（79%）患者未出现 1 级以上的药物相关毒性。未达到剂量限制性毒性 (DLT)，但所有 3 例接受 800 mg 治疗的患者均出现 1-2 级腹泻，因此未进行剂量递增。6 例患者接受 600 mg 剂量治疗，未出现 DLT。7 例（29%）患者接受 salirasib 治疗后病情稳定 ≥4 个月（范围 4-23+ 个月）。salirasib 的药代动力学特征为口服后吸收缓慢，消除迅速。第 1 天和第 15 天的 salirasib 暴露量（Cmax；第 1 天 AUC(inf) 与第 15 天 AUC(0-12 h)）相似（P > 0.05）。第 1 天的 T1/2（平均值 ± 标准差）为 3.6 ± 2.2 小时。
结论：Salirasib 治疗耐受性良好。 II 期研究的推荐剂量为每日两次，每次 600 毫克。[4]

C22H30O2S

358.54

358.196

C, 73.70; H, 8.43; O, 8.92; S, 8.94

162520-00-5

5469318

White to light yellow solid powder

1.1±0.1 g/cm3

486.0±45.0 °C at 760 mmHg

64-66°C

247.7±28.7 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.559

8.53

62.6

1

3

10

25

498

0

S(C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C(=O)O[H])C([H])([H])/C(/[H])=C(\C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C(/[H])=C(\C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C(/[H])=C(\C([H])([H])[H])/C([H])([H])[H]

WUILNKCFCLNXOK-CFBAGHHKSA-N

InChI=1S/C22H30O2S/c1-17(2)9-7-10-18(3)11-8-12-19(4)15-16-25-21-14-6-5-13-20(21)22(23)24/h5-6,9,11,13-15H,7-8,10,12,16H2,1-4H3,(H,23,24)/b18-11+,19-15+

2-[(2E,6E)-3,7,11-trimethyldodeca-2,6,10-trienyl]sulfanylbenzoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.97 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。