| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Dusp2; HSV-1
The target of Salubrinal is the eIF2α dephosphorylation complex, a selective inhibitor of the serine/threonine protein phosphatase 1 (PP1) catalytic subunit (PP1c) associated with regulatory proteins GADD34 (Growth Arrest and DNA Damage-Inducible Protein 34) and CReP (Constitutive Repressor of eIF2α Phosphorylation). It has no significant activity against other phosphatases. - For GADD34-PP1c complex-mediated eIF2α dephosphorylation (recombinant enzyme assay): IC₅₀ = 1.5 μM [1] - For CReP-PP1c complex-mediated eIF2α dephosphorylation (cell-based assay): EC₅₀ = 2.3 μM [1] - For free PP1c (recombinant): IC₅₀ > 100 μM (weak inhibition) [1] - For other phosphatases (PP2A, PP2B, PP5; recombinant): IC₅₀ > 50 μM (no significant activity) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Salubrinal 是一种细胞复合物的选择性抑制剂，可使真核翻译起始因子 2 亚基 α (eIF2α) 磷酸化去磷酸化。 salubrinal 的中位有效浓度 (EC50) 约为 15 μM，以剂量依赖性方式抑制蛋白质糖基化抑制剂衣霉素 (Tm) 诱导 ER 应激介导的细胞凋亡。 caspase-7（一种由 ER 应激激活的 caspase）的加工也受到 salubrinal 的抑制，这也阻止了 Tm 诱导的 DNA 断裂。不过，Salubrinal 并不是通用的细胞凋亡抑制剂。在 PC12 细胞中，salubrinal 诱导快速而强烈的 eIF2α 磷酸化及其下游效应，包括 GADD34 和 CHOP 的上调以及细胞周期蛋白 D1 的上调，这两种蛋白质的表达是由 eIF2α 磷酸化诱导的，而细胞周期蛋白 D1 的表达则由 eIF2α 磷酸化诱导。 -细胞周期蛋白D1的调节。 Salubrinal 阻断 PP1/GADD34 复合物，防止 eIF2 去磷酸化。 Salubrinal 阻断 eIF2α 去磷酸化，从而阻止 HSV 复制，IC50 约为 3μM。 [1] Salubrinal 改善了 NREM（非快速眼动）睡眠。 [2]
1. 诱导eIF2α磷酸化并抑制全局蛋白合成：Salubrinal（0.1–10 μM）处理HeLa细胞或小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）2–4小时，呈剂量依赖性诱导eIF2α（Ser51位点）磷酸化：10 μM时eIF2α-P水平较对照升高5倍（western blot检测）。³⁵S-蛋氨酸掺入实验显示，10 μM Salubrinal可抑制40%的蛋白合成，且不影响核糖体组装 [1] 2. 对抗内质网（ER）应激诱导的凋亡：在衣霉素（2 μg/mL，ER应激诱导剂）处理的HeLa细胞中，Salubrinal（1–10 μM）可将凋亡率（Annexin V-FITC/PI双染）从60%（仅衣霉素组）降至20%（10 μM Salubrinal组），同时减少caspase-3/PARP的切割（western blot），并使促凋亡UPR标志物CHOP的表达降低60% [1] 3. 保护心肌细胞免受缺血再灌注（I/R）损伤：新生大鼠心室肌细胞（NRVM）经模拟I/R处理（缺氧2小时+复氧2小时），Salubrinal（0.5–5 μM）预处理可使细胞活力（MTT法）从45%（仅I/R组）升至85%（5 μM Salubrinal组），乳酸脱氢酶（LDH）释放减少50%，并维持eIF2α-P水平（western blot）[2] 4. 对抗兴奋性毒性的神经保护作用：原代小鼠皮质神经元（培养7天）经红藻氨酸（100 μM，兴奋性毒素）+ Salubrinal（0.5–5 μM）处理24小时后，NeuN免疫荧光显示神经元存活率从30%（仅红藻氨酸组）升至70%（5 μM Salubrinal组），caspase-3活性较对照降低60% [3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠角膜感染模型中，沙丁胺醇可防止 HSV 复制。与载体对照相比，局部 Salubrinal 治疗显着降低了受感染动物眼拭子中发现的病毒滴度。 [1] 静脉注射 Salubrinal 显着改变稳态睡眠反应。 [3]
1. 减少大鼠I/R模型的心肌梗死面积：雄性Sprague-Dawley大鼠（250–300 g）行冠状动脉结扎（缺血30分钟+复氧24小时），复氧开始时静脉注射Salubrinal（1 mg/kg），TTC染色显示心肌梗死面积较溶媒组减少40%。心肌组织中eIF2α-P水平升高2倍（western blot），LDH释放减少35% [2] 2. 小鼠兴奋性毒性模型中的神经保护：雄性ICR小鼠（20–25 g）在红藻氨酸（30 mg/kg，腹腔注射）前30分钟腹腔注射Salubrinal（5 mg/kg），24小时后大脑皮质切片（5 μm）的NeuN染色显示存活神经元数量为溶媒组的2.5倍，小鼠惊厥严重程度（Racine评分）从4级降至2级 [3] 3. 体内无有害UPR通路激活：野生型C57BL/6小鼠经Salubrinal（5 mg/kg，腹腔注射，每日1次，连续7天）处理后，肝、肾、脑组织的western blot显示促凋亡UPR标志物CHOP或ER应激标志物GRP78无显著升高，提示未诱导过度ER应激 [3] |
| 酶活实验 |
磷酸酶的免疫沉淀物用于测量磷酸酶活性。简而言之，将 Salubrinal (20 µM)、PSI (10 nM)、两种药物组合或冈田酸 (100 nM) 应用于 2×106 K562 细胞 18 小时。 PBS 洗涤后，将细胞在 PP1LB 中冰上裂解 15 分钟（用于测定 PP1γ 活性；20 mM Tris-HCl，pH 7.5，1% Triton X-100，10% 甘油，132 mM NaCl，Roche）完全蛋白酶抑制剂）或 RIPA（用于 PP2A），辅以罗氏完全蛋白酶抑制剂）。将 500 µg (PP1γ) 或 300 µg (PP2A) 含蛋白质的细胞裂解物与 2-3 g 相应抗体在 4°C 下免疫沉淀过夜，然后将 Protein A-Sepharose 添加到混合物中。将免疫沉淀物在裂解缓冲液中洗涤三次，然后重悬于磷酸酶测定缓冲液中（PP2A：20 mM Tris-HCl，pH7.5，0.1 mM CaCl2；PP1γ：50 mM Tris HCl pH 7.0，0.2 mM MnCl2，0.1 mM CaCl2， 125 µg/mL BSA、0.05% Tween 20)，辅以 100 µM 6,8-二氟-4-甲基-伞形磷酸酯 (DiFMUP)。将沉淀物放入 Eppendorf Thermoshaker 中并在 37°C 下与底物反应 1 小时。离心混合物后，使用 BioTek Lambda Fluoro 320 酶标仪 (360 nmex/460 nmem) 测量 DiFMU 的荧光。相比之下，磷酸酶活性表示为与对照（DMSO 处理的细胞）相比的百分比变化。
1. GADD34-PP1c介导的eIF2α去磷酸化实验：将重组GADD34（1–245位氨基酸）与PP1c按1:1摩尔比混合，在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、100 mM NaCl、1 mM DTT、0.1 mg/mL BSA）中形成GADD34-PP1c复合物。将复合物（10 nM）与³²P标记的磷酸化eIF2α（Ser51，50 nM）及系列浓度的Salubrinal（0.01–100 μM）在37°C孵育30分钟，用SDS样品缓冲液终止反应，12% SDS-PAGE分离蛋白后通过放射自显影检测磷酸化eIF2α的放射性强度，计算抑制50%去磷酸化活性的IC₅₀ [1] 2. PP1c选择性实验：将重组PP1c（10 nM）、PP2A（10 nM）或PP2B（10 nM）与³²P标记的髓鞘碱性蛋白（MBP，50 nM，非特异性磷酸酶底物）及Salubrinal（0.1–100 μM）在各自反应缓冲液中孵育，37°C反应30分钟后通过液体闪烁计数定量释放的³²P。结果显示PP1c的IC₅₀ > 100 μM，PP2A、PP2B的IC₅₀ > 50 μM，证实其对GADD34-PP1c的选择性 [1] |
| 细胞实验 |
为了诱导 ER 应激，将 PC12 细胞以每孔 5000 个细胞的密度接种在 384 孔板中，并置于含有 3 g/ml Tm 的 40μL 无酚红培养基中。通过机器人针转移，将 100 nL DiverSet E（5 mg/ml，溶于 DMSO）或结构多样性组和开放集合（10 mM，溶于 DMSO）(NCI) 添加到孔中。 48 小时后，使用基于发光的 ATP 测定来确定细胞的活力。在每个板上，用 DMSO 或 zVAD.fmk 处理的孔分别作为 ER 应激诱导 ATP 损失的阴性和阳性对照的救援。
1. eIF2α磷酸化检测（western blot）：HeLa细胞（5×10⁵细胞/6孔板）经Salubrinal（0.1–10 μM）处理2小时，用含磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，30 μg蛋白经10% SDS-PAGE分离后转膜，用抗磷酸化eIF2α（Ser51）和总eIF2α抗体孵育，后续结合HRP标记二抗，通过光密度法定量条带强度，计算磷酸化eIF2α/总eIF2α比值 [1, 2] 2. 蛋白合成实验（³⁵S-蛋氨酸掺入）：HeLa细胞（1×10⁵细胞/24孔板）经Salubrinal（0.1–10 μM）处理1小时，在无蛋氨酸DMEM中加入³⁵S-蛋氨酸（10 μCi/mL）孵育30分钟，裂解细胞后通过液体闪烁计数检测³⁵S掺入蛋白的量，蛋白合成速率以溶媒组为对照进行标准化 [1] 3. 心肌细胞活力实验（MTT）：新生大鼠心室肌细胞（NRVM，1×10⁴细胞/96孔板）经Salubrinal（0.5–5 μM）预处理1小时，再经模拟I/R处理（缺氧2小时：1% O₂、5% CO₂、94% N₂；复氧2小时：21% O₂、5% CO₂）。加入MTT试剂（0.5 mg/mL）孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶后在570 nm处测吸光度，活力计算为（处理组吸光度/溶媒组吸光度）× 100% [2] 4. 神经元存活实验（NeuN免疫荧光）：原代小鼠皮质神经元（5×10³细胞/盖玻片）经Salubrinal（0.5–5 μM）+红藻氨酸（100 μM）处理24小时，4%多聚甲醛固定后用抗NeuN抗体（神经元特异性标志物）和DAPI（核染色）染色，荧光显微镜下计数存活神经元（NeuN⁺/DAPI⁺），存活率以溶媒组为对照进行标准化 [3] |
| 动物实验 |
DMEM培养基；75μM；角膜上8周龄雄性CD-1近交系小鼠
1. 大鼠心肌缺血/再灌注模型：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）麻醉。用6-0丝线结扎左前降支冠状动脉（LAD）30分钟（缺血），然后松开缝线24小时（复氧）。Salubrinal溶于DMSO（10% v/v）+生理盐水中，在复氧开始时单次静脉注射（1 mg/kg）；对照组注射DMSO/生理盐水。 24小时后，处死大鼠，取出心脏，并用TTC染色法（1% TTC PBS溶液，37℃染色15分钟）测量梗死面积[2] 2. 小鼠兴奋性毒性模型：雄性ICR小鼠（20-25 g）适应环境7天。将Salubrinal溶于DMSO（5% v/v）+生理盐水中，腹腔注射（5 mg/kg），并在注射红藻氨酸（30 mg/kg，腹腔注射，溶于生理盐水）前30分钟给药。使用Racine评分标准（1-5级）每30分钟对癫痫发作严重程度进行评分，持续4小时。注射红藻氨酸24小时后，处死小鼠，取脑组织，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片（5 μm）进行NeuN染色[3] 3. 小鼠慢性毒性模型：将雌性C57BL/6小鼠（20-22 g）分为两组（每组n=6）：溶剂对照组（DMSO/生理盐水，腹腔注射）和Salubrinal组（5 mg/kg，腹腔注射，连续7天）。每日称量小鼠体重，并观察其一般行为。第8天处死小鼠，取肝脏、肾脏和脑组织进行Western blot（CHOP、GRP78）和组织病理学检查（H&E染色）[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：Salubrinal（浓度高达 20 μM）对 HeLa 细胞、MEF 细胞、NRVM 细胞或原代皮层神经元均无显著细胞毒性（细胞存活率 > 80% vs. 溶剂对照组，MTT/NeuN 检测）。在治疗浓度（0.5–10 μM）下未观察到过度内质网应激（例如 CHOP 过表达）的诱导[1, 2, 3]
2. 体内急性毒性：用 Salubrinal 处理的大鼠（1 mg/kg，静脉注射）和小鼠（5 mg/kg，腹腔注射）在 24–72 小时内未出现异常行为（例如嗜睡、共济失调）、体重减轻（<5% vs. 基线）或器官损伤（肝脏、肾脏、大脑）。血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）均在正常范围内[2, 3] 3. 体内慢性毒性：用Salubrinal（5 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续7天）治疗的小鼠体重无明显变化，肝脏/肾脏/脑组织病理学未见异常，促凋亡标志物（CHOP）表达也未上调，表明慢性毒性较低[3] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Salubrinal 属于喹啉类化合物，是一种混合型氨基缩醛，由三氯乙醛与反式肉桂酰胺的酰胺氮和 1-喹啉-8-基硫脲的伯氨基缩合而成。它是一种选择性抑制剂，可抑制真核翻译起始因子 2 亚基 α (eIF2α) 的去磷酸化复合物。Salubrinal 属于喹啉类、硫脲类、氨基缩醛类、有机氯化合物和仲酰胺类化合物。其功能与三氯乙醛和反式肉桂酰胺相关。
1. 背景：Salubrinal 于 2005 年通过高通量筛选被鉴定，是首个 eIF2α 去磷酸化的小分子抑制剂。它是研究未折叠蛋白反应 (UPR) 的 PERK-eIF2α 分支的关键研究工具，UPR 是一种减轻内质网 (ER) 应激的细胞通路 [1] 2. 作用机制：Salubrinal 特异性地与 GADD34-PP1c 和 CReP-PP1c 复合物结合，阻断它们使磷酸化 eIF2α (eIF2α-P) 去磷酸化的能力。持续的 eIF2α-P 水平抑制整体蛋白质合成（降低内质网蛋白质负荷），同时促进 ATF4（一种诱导内质网应激保护基因表达的转录因子，例如 GRP78、HO-1）的翻译，从而增强细胞对内质网应激的耐受性 [1, 2] 3. 研究应用：Salubrinal 广泛用于内质网应激相关疾病的临床前模型，包括心肌缺血再灌注损伤、神经退行性疾病（例如阿尔茨海默病、帕金森病）、糖尿病和脓毒症。它尚未进入临床开发阶段，主要用作研究试剂 [1, 2, 3] 4. 局限性：Salubrinal 的效力较低（IC₅₀ ~1.5 μM）且溶解度差，限制了其在高通量研究中的应用。它无法区分 GADD34-PP1c 和 CReP-PP1c，因此难以解析这两个复合物在 UPR 中的具体作用。由于它并非临床药物，因此目前尚无 FDA 批准的适应症或安全警告 [1, 3]。 |
| 分子式 |
C21H17CL3N4OS
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
479.81
|
|
| 精确质量 |
478.018
|
|
| 元素分析 |
C, 52.57; H, 3.57; Cl, 22.17; N, 11.68; O, 3.33; S, 6.68
|
|
| CAS号 |
405060-95-9
|
|
| 相关CAS号 |
|
|
| PubChem CID |
5717801
|
|
| 外观&性状 |
Light brown to gray solid powder
|
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
|
| 折射率 |
1.732
|
|
| LogP |
6.21
|
|
| tPSA |
98.14
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
|
| 重原子数目 |
30
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
622
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| SMILES |
ClC(C([H])(N([H])C(/C(/[H])=C(\[H])/C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])=O)N([H])C(N([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C2C([H])=C([H])C([H])=NC1=2)=S)(Cl)Cl
|
|
| InChi Key |
LCOIAYJMPKXARU-VAWYXSNFSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H17Cl3N4OS/c22-21(23,24)19(27-17(29)12-11-14-6-2-1-3-7-14)28-20(30)26-16-10-4-8-15-9-5-13-25-18(15)16/h1-13,19H,(H,27,29)(H2,26,28,30)/b12-11+
|
|
| 化学名 |
(E)-3-phenyl-N-[2,2,2-trichloro-1-(quinolin-8-ylcarbamothioylamino)ethyl]prop-2-enamide
|
|
| 别名 |
Salubrinal
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 10 mg/mL (20.84 mM) in 45% PEG300 +5% Tween-80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0842 mL | 10.4208 mL | 20.8416 mL | |
| 5 mM | 0.4168 mL | 2.0842 mL | 4.1683 mL | |
| 10 mM | 0.2084 mL | 1.0421 mL | 2.0842 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|---|
|
|
GSK-2606414
反式-ISRIB
GSK-2656157
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
