TRPC6 (IC50 = 7.9 nM)
SAR-7334 targets transient receptor potential canonical (TRPC) channels, specifically TRPC6, TRPC3, and TRPC7. TRPC6 is a non-selective cation channel that mediates Ca2+ influx into cells and is involved in various physiological and pathological processes, including smooth muscle contraction, neuronal excitability, and kidney function. By blocking TRPC6 channels with an IC50 of 7.9 nM, SAR-7334 prevents Ca2+ influx into cells. The compound shows selectivity for TRPC6 over TRPC4 and TRPC5 (IC50s = 282 and 226 nM, respectively), and also inhibits TRPC3 and TRPC7-mediated Ca2+ influx.

SAR7334 可抑制 TRPC6、TRPC3 和 TRPC7 介导的 Ca2+ 内流，其 IC50 值分别为 9.5、282 和 226 nM[1][2][3]。它对 TRPC4 和 TRPC5 介导的 Ca2+ 内流没有影响。在足细胞中，SAR7334 (1 μM) 可显著阻断 Ang II 诱导的钙内流[1]。SAR7334 (1 μM) 对 SOCE 的影响极小[2]。SAR7334 可剂量依赖性地降低 TRPC6 电流，其 IC50 值为 7.9 nM。 SAR7334 (100 nM) 可显著降低 TRPC6 的电流 [3]。体外实验表明，SAR-7334 可抑制 TRPC6、TRPC3 和 TRPC7 介导的 Ca2+ 内流，其 IC50 值分别为 9.5 nM、282 nM 和 226 nM。它对 TRPC4 和 TRPC5 介导的 Ca2+ 内流没有影响。在足细胞中，SAR-7334 在 1 μM 浓度下可显著阻断血管紧张素 II 诱导的钙内流。SAR-7334 可剂量依赖性地降低 TRPC6 电流，其 IC50 值为 7.9 nM，而 100 nM SAR-7334 可显著降低该电流。SAR-7334 对胞内钙库操纵性钙内流 (SOCE) 的影响极小。

在离体灌注小鼠肺模型中，口服 SAR7334（10 mg/kg）可抑制 TRPC6 依赖性急性低氧性肺血管收缩 (HPV)。SAR7334 的长期口服给药安全性已得到证实。在初步的短期试验中，SAR7334 并未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压 [3]。
体内实验表明，SAR-7334 在动物模型中具有疗效。在离体灌注小鼠肺模型中，口服 10 mg/kg 的 SAR-7334 可抑制 TRPC6 依赖性急性低氧性肺血管收缩 (HPV)。该化合物的长期口服给药安全性已得到证实。在初步的短期试验中，SAR7334 并未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压。这些结果支持该化合物在体内研究 TRPC 通道功能方面的潜力。

采用 Fluo-4 法测定细胞内钙离子浓度 ([Ca2+]i)[3]
在室温下使用荧光成像板读数仪进行 Ca2+ 测量。将生长在黑色聚赖氨酸包被的 96 孔板上的细胞用标准细胞外液（140 mM NaCl、1 mM MgCl2、5.4 mM KCl、2 mM CaCl2、10 mM HEPES、10 mM 葡萄糖，pH 7.35）洗涤，然后在室温下用染料溶液（2 μM Fluo-4 AM、0.02% Pluronic F127、0.1% BSA，溶于标准细胞外液）染色 30 分钟。细胞经冲洗后，在添加了不同浓度测试化合物或溶剂的标准细胞外液中孵育10分钟。
通过施加二酰甘油1-油酰-2-乙酰基-sn-甘油（OAG）诱导表达TRPC3/6/7的细胞内Ca2+内流。为了计算SAR7334诱导的抑制作用，将荧光值随时间变化绘制成曲线，并将曲线下面积（AUC）作为Ca2+内流的指标。
由于SAR-7334靶向离子通道而非酶或经典受体，因此体外酶/受体结合试验不适用于该化合物。然而，可以使用电生理测定或钙流测定来评估该化合物的活性。在电生理测定中，使用膜片钳技术测量表达重组TRPC6通道的细胞中的TRPC6电流，并评估SAR-7334对电流的抑制作用。在钙流测定中，用 SAR-7334 处理加载了 Fluo-4 AM 的细胞，并使用荧光成像板读数仪测量 Ca2+ 流入。

在离体灌注和通气肺中测量低氧性肺血管收缩（HPV）[3]
C57/BL6N 小鼠用赛拉嗪和氯胺酮麻醉，并用肝素抗凝，如前所述（Weissmann 等，2004；Fuchs 等，2011）。6-8 周龄雄性小鼠购自 Charles River Laboratories。简而言之，在深度麻醉下取出肺脏，并以2 mL·min⁻¹的流速在37°C下进行人工通气和灌注，灌注液为含有120 mM NaCl、4.3 mM KCl、1.1 mM KH₂PO₄、2.4 mM CaCl₂、1.3 mM MgCl₂、13.32 mM葡萄糖、5% (w/v) 羟乙基支链淀粉和23.8 mM NaHCO₃的Krebs-Henseleit缓冲液。左心房压力设定为2.0 mmHg。采用正压通气（潮气量250 μL，呼吸频率90次·min⁻¹，呼气末正压2 cm H₂O），通气气体为21% O₂、5.3% CO₂，以N₂平衡（常氧）或1% O₂、5.3% CO₂（低氧）。测量肺动脉和左心房的压力。在恒定流速灌注肺部时，肺动脉压力的变化直接反映肺血管张力的变化。采用交替模式进行低氧（10分钟）或常氧（15分钟）通气，以诱导急性低氧性肺血管病变（HPV）。在重复低氧通气操作过程中，于下一次低氧通气操作前5分钟给予递增剂量的SAR7334。使用时，将SAR7334储备液（2 mM，溶于100% DMSO）用灌注缓冲液稀释100倍，并将适量溶液累积加入循环灌注液（15 mL）中。首次给药在第二次低氧通气结束后进行。急性低氧通气强度以每次低氧通气期间肺动脉压的最大增幅表示，并以第二次低氧操作的强度（设定为100%）为参考。
SAR-7334的体外细胞试验采用表达重组TRPC3、TRPC6或TRPC7通道的细胞系进行。细胞用钙敏感荧光染料（如Fluo-4 AM）标记，并用不同浓度的SAR-7334处理。通过施加二酰甘油类似物（如1-油酰-2-乙酰基-sn-甘油 (OAG)）诱导Ca2+内流。使用荧光成像板读数仪测量细胞内钙浓度。根据剂量反应曲线确定抑制Ca2+内流的IC50值。

SAR7334的体内药代动力学测定[3]
在对雄性Sprague Dawley大鼠单次口服化合物SAR7334（250 g）后，采用连续采样研究测定了血浆中SAR7334的浓度。化合物溶于30%甘油/聚氧乙烯蓖麻油（75/25）和70%葡萄糖（5%）的混合溶液中。从每只动物身上采集8份血浆样本（通过尾尖取血，每次约200 µL血液），采集时间为24小时，并将样本储存在-15°C以下直至分析。加入含有类似内标的沉淀剂溶液（乙腈）后，使用配备CTC HTC PAL自动进样器的安捷伦液相色谱仪和Sciex API4000质谱仪，在正离子模式下，通过LC-MS/MS检测SAR7334。使用 50 μL 的样品体积，定量下限为 2.0 ng·mL⁻¹，线性范围为 2.0 至 2000 ng·mL⁻¹。

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血压遥测评估：对 6 月龄成年雄性自发性高血压大鼠连续两天进行治疗。第一天，动物经口灌胃给予 1 mL·kg⁻¹ 的溶剂。24 小时后，大鼠分别接受溶剂或 10 mg·kg⁻¹ 的 SAR7334 治疗。血压遥测测量按文献所述进行（Lohn 等，2009）。简而言之，将遥测装置置于主动脉和下腔静脉之间，并将发射器的导管尖端插入主动脉。以 500 Hz 的采样率连续采集收缩压、舒张压和心率，并将数据以 5 分钟平均值存储。平均动脉压由收缩压和舒张压计算得出，并使用供应商软件（Dataquest ART V4.0，Data Sciences International）的快速傅里叶变换功能进行低通滤波，以便更好地可视化血压随时间的变化。统计分析中，原始数据取自给药载体或SAR7334后2小时开始的6小时时间段内的平均值（标记为“post”）。该时间段对应于SAR7334的血浆浓度峰值（见图6）。基线数据（标记为“pre”）在治疗前一天的相同时间段内采集。
已在小鼠和大鼠模型中进行了SAR-7334的体内动物实验。在离体灌注小鼠肺中，口服10 mg/kg的SAR-7334，以评估其对TRPC6依赖性急性缺氧性肺血管收缩的影响。在自发性高血压大鼠模型中，评估了该化合物对平均动脉压的影响。标准实验方案包括口服SAR-7334，随后评估血流动力学参数、肺功能或其他生理终点。该化合物的长期口服给药适用性已得到证实。

SAR-7334 HCl 的分子量为 399.7 g/mol，分子式为 C20H19Cl2N3O·HCl（二盐酸盐）。该化合物可溶于 DMSO 和其他有机溶剂。它具有良好的口服生物利用度，支持其用于体内研究。该化合物粉末在 -20°C 下可稳定保存长达 3 年，溶液在 -80°C 下可稳定保存长达 6 个月。对于体内给药，可将其配制成合适的口服制剂。

SAR-7334 HCl 已在临床前研究中进行评估，据报道在有效剂量下耐受性良好。在一项针对自发性高血压大鼠的初步短期试验中，SAR-7334 未改变平均动脉压，表明其具有良好的心血管安全性。现有文献中未报道明显的毒性。然而，仍需进行全面的毒理学研究，以充分评估该化合物在临床开发中的安全性。

[1]. The Role of Angiotensin II in Glomerular Volume Dynamics and Podocyte Calcium Handling. Sci Rep. 2017 Mar 22;7(1):299.

[2]. Pharmacological Characterization of the Native Store-Operated Calcium Channels of Cortical Neurons from Embryonic Mouse Brain. Front Pharmacol. 2016 Dec 12;7:486.

[3]. Discovery and pharmacological characterization of a novel potent inhibitor of diacylglycerol-sensitive TRPC cation channels. Br J Pharmacol. 2015 Jul;172(14):3650-60.

足细胞因其与疾病状态下进行性肾小球损伤密切相关，而成为研究的重点。足细胞丢失可能由细胞内钙离子过度内流引起，我们此前已证实血管紧张素II (Ang II) 可通过经典的瞬时受体电位通道6 (TRPC6) 增加足细胞内的钙离子内流。在本研究中，我们利用膜片钳电生理技术证实Ang II可以激活TRPC通道；随后，我们利用共聚焦钙成像技术证实阻断AT1或AT2受体 (ATRs) 可抑制Ang II对足细胞钙离子内流的刺激作用。Ang(1-7)的应用对细胞内钙离子浓度无影响。使用SAR7334、SKF 96365、盐酸西替利嗪和La3+抑制TRPC通道可降低Ang II诱导的钙离子内流，而ML204则无此作用。我们采用了一种新型的体外三维全肾小球成像方法，揭示了血管紧张素受体（ATR）均参与调节肾小球通透性；此外，我们使用TRPC6的特异性抑制剂和激活剂，证实这些通道参与调节肾小球体积动态变化。因此，我们提供的证据表明，血管紧张素II/TRPC6轴在调节肾小球功能中发挥着关键作用，这可能对肾小球疾病的发生发展至关重要。[1]

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在小鼠脑中，胚胎发生过程中形成的第一批有丝分裂后皮层神经元表达对Pyr3敏感的储库操纵通道（SOC），Pyr3最初被认为是C型瞬时受体电位通道3（TRPC3通道）的抑制剂。然而，Pyr3无法区分Orai通道和TRPC3通道，这引发了关于TRPC3在SOC中作用的疑问。本研究旨在阐明E13皮层神经元中天然SOC的分子特征和药理学特性。采用定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测STIM1-2和Orai1-3的mRNA表达水平。结果显示，E13皮层神经元表达STIM1-2 mRNA，其中STIM2为主要亚型。仅检测到Orai2转录本，未检测到Orai1和Orai3 mRNA。为进一步表征内源性皮层SOC，我们使用了Orai和TRPC通道阻滞剂（Pyr6、Pyr10、EVP4593、SAR7334和GSK-7975A）。使用荧光Ca2+探针Fluo-4记录了它们的活性。皮质SOC对Orai通道阻滞剂Pyr6和GSK-7975A以及EVP4593、锌离子、铜离子和钆离子均敏感，其中钆离子是测试中最有效的SOC阻滞剂（IC50约为10 nM）。SOC对TRPC通道阻滞剂Pyr10和SAR7334不敏感。此外，抑制线粒体Ca2+摄取可抑制SOC，而Ca2+非依赖性磷脂酶A2抑制剂对SOC无影响。总之，Orai2通道存在于小鼠胚胎皮质发育的早期阶段，是未成熟皮质中天然SOC的核心组成部分。该Ca2+通路可能在大脑皮层的形成中发挥作用。 [2]

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背景与目的：瞬时受体电位经典型（TRPC）6阳离子通道与多种疾病相关，包括局灶节段性肾小球硬化症、肺动脉高压以及缺血再灌注引起的肺水肿。本研究旨在发现新型TRPC6通道抑制剂，并探讨这些药物的治疗潜力。实验方法：我们设计并合成了一个潜在的TRPC通道抑制剂库。通过测量细胞内Ca2+水平评估化合物的活性。我们进一步利用全细胞膜片钳技术对先导化合物SAR7334进行了表征。本研究探讨了SAR7334对急性缺氧性肺血管收缩（HPV）和全身血压的影响。主要结果：SAR7334 分别以 9.5、282 和 226 nM 的 IC₅₀ 值抑制 TRPC6、TRPC3 和 TRPC7 介导的 Ca²⁺ 内流，而对 TRPC4 和 TRPC5 介导的 Ca²⁺ 内流无影响。膜片钳实验证实，该化合物以 7.9 nM 的 IC₅₀ 值阻断 TRPC6 电流。此外，SAR7334 抑制离体灌注小鼠肺中 TRPC6 依赖的急性 HPV。SAR7334 的药代动力学研究表明，该化合物适合长期口服给药。在一项初步的短期研究中，SAR7334 未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压。结论与意义：我们的研究结果证实了TRPC6通道在缺氧性肺血管舒缩调节中的作用，并提示这些通道不太可能在自发性高血压大鼠（SHR）的血压调节中发挥主要作用。SAR7334是一种新型、高效且生物利用度高的TRPC6通道抑制剂，为体内研究TRPC通道功能开辟了新的途径。[3]
SAR-7334 HCl是一种新型、强效且口服生物利用度高的TRPC6通道抑制剂，其IC50值为7.9 nM。它还能抑制TRPC3和TRPC7介导的Ca2+内流，IC50值分别为282 nM和226 nM，而TRPC4和TRPC5不受影响。SAR-7334可抑制离体灌注小鼠肺中TRPC6依赖的急性缺氧性肺血管收缩。该化合物是一种用于体内研究TRPC通道功能的研究工具，尚未获批上市。

C21H24CL3N3O

440.794

439.098

C, 57.22; H, 5.49; Cl, 24.13; N, 9.53; O, 3.63

1333207-63-8

SAR7334;1333210-07-3

78357800

White to yellow solid powder

4.317

62.28

3

4

3

28

535

3

C1C[C@H](CN(C1)[C@@H]2CC3=CC=CC=C3[C@H]2OC4=C(C=C(C=C4)C#N)Cl)N.Cl.Cl

LFMYIKNZNTZSJX-IQJQELQDSA-N

InChI=1S/C21H22ClN3O.2ClH/c22-18-10-14(12-23)7-8-20(18)26-21-17-6-2-1-4-15(17)11-19(21)25-9-3-5-16(24)13-25/h1-2,4,6-8,10,16,19,21H,3,5,9,11,13,24H22*1H/t16-,19-,21-/m1../s1

4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-Amino-1-piperidinyl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chlorobenzonitrile dihydrochloride

SAR-7334; SAR 7334; SAR7334; SAR7334 hydrochloride; SAR7334 (hydrochloride); TRPC6 inhibitor; 4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-aminopiperidin-1-yl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chlorobenzonitrile;dihydrochloride; SAR 7334 Dihydrochloride; SAR 7334; CPA-1588 dihydrochloride;SAR-7334 HCl; SAR-7334 hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~226.87 mM)
H2O : ~50 mg/mL (~113.43 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。