TRPC6 (IC50 = 7.9 nM)

SAR7334 可防止 TRPC6、TRPC3 和 TRPC7 介导的 Ca2+ 流入细胞，IC50 值分别为 9.5、282 和 226 nM[1][2][3]。它对 TRPC4 和 TRPC5 介导的 Ca2+ 内流没有影响。在足细胞中，SAR7334 (1 μM) 显着阻断 Ang II 诱导的钙内流 [1]。 SAR7334 (1 μM) 对 SOCE 的影响很小 [2]。 SAR7334 剂量依赖性地降低 TRPC6 电流，IC50 为 7.9 nM。 SAR7334 (100 nM) 显着降低了 TRPC6 的电流 [3]。

在离体灌注小鼠肺中，SAR7334（10 mg/kg，口服）可抑制 TRPC6 依赖性急性 HPV。 SAR7334 证明了其适合长期口服给药。在最初的短期试验中，SAR7334 并未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压 [3]。

Fluo-4测量细胞内钙浓度（[Ca2+]i）[3]
在室温下使用荧光成像板读数器进行Ca2+测量。在黑色聚-D-赖氨酸涂层96孔板上生长的细胞用标准细胞外溶液（140 mM NaCl、1 mM MgCl2、5.4 mM KCl、2 mM CaCl2、10 mM HEPES、10 mM葡萄糖，pH 7.35）洗涤，并在室温下用染料溶液（2μM Fluo-4 AM、0.02%pluronic F127、0.1%BSA的标准细胞外液）染色30分钟。冲洗细胞，并用补充有不同浓度测试化合物或载体的标准细胞外溶液孵育10分钟。
通过应用二酰基甘油、1-油酰基-2-乙酰基-sn-甘油（OAG）诱导Ca2+进入表达TRPC3/6/7的细胞。为了计算SAR7334诱导的抑制作用，绘制了随时间变化的荧光值，并将AUC视为Ca2+内流的量度。

离体灌注和通气肺缺氧性肺血管收缩（HPV）的测量[3]
C57/BL6N小鼠用甲苯噻嗪和氯胺酮麻醉，并用肝素抗凝，如前所述（Weissmann等人，2004；Fuchs等人，2011）。6-8周龄的雄性小鼠来自查尔斯河实验室。简而言之，在深度麻醉期间取出肺部，在37°C下用含有120 mM NaCl、4.3 mM KCl、1.1 mM KH2PO4、2.4 mM CaCl2、1.3 mM MgCl2、13.32 mM葡萄糖、5%（w/v）羟乙基支链淀粉和23.8 mM NaHCO3的Krebs-Henseleit缓冲液在2 mL·min-1下人工通气和灌注无血。左心房压力设定为2.0 mmHg。使用含21%O2、5.3%CO2的混合物进行正压通气（250μL潮气量，90次呼吸·min-1和2 cm H2O呼气末正压），与N2（常氧）或1%O2、5.3%二氧化碳（缺氧）平衡。测量肺动脉和左心房的压力。当肺部以恒定流量灌注时，肺动脉压的变化直接反映了肺血管张力的变化。以缺氧（10分钟）或常氧（15分钟）交替模式对肺部进行通气，以诱导急性HPV。在这样一系列重复的低氧通气操作中，在下一次低氧通气操作前5分钟施加了越来越多剂量的SAR7334。对于应用，将SAR7334储备溶液（2 mM在100%DMSO中）在灌注缓冲液中稀释1:100，并将适量累积加入再循环灌注液（15 mL）中。第一次应用是在第二次缺氧通气期后进行的。急性HPV的强度是指每个缺氧通气期肺动脉压的最大增加，参考第二次缺氧操作的强度（设置为100%）。

SAR7334的体内药代动力学测定[3]
在对雄性Sprague Dawley大鼠单次口服化合物SAR7334（250 g）后，采用连续采样研究测定了血浆中SAR7334的浓度。化合物溶于30%甘油/聚氧乙烯蓖麻油（75/25）和70%葡萄糖（5%）的混合溶液中。从每只动物身上采集8份血浆样本（通过尾尖取血，每次约200 µL血液），采集时间为24小时，并将样本储存在-15°C以下直至分析。加入含有类似内标的沉淀剂溶液（乙腈）后，使用配备CTC HTC PAL自动进样器的安捷伦液相色谱仪和Sciex API4000质谱仪，在正离子模式下，通过LC-MS/MS检测SAR7334。使用 50 μL 的样品体积，定量下限为 2.0 ng·mL⁻¹，线性范围为 2.0 至 2000 ng·mL⁻¹。

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血压遥测评估：对 6 月龄成年雄性自发性高血压大鼠连续两天进行治疗。第一天，动物经口灌胃给予 1 mL·kg⁻¹ 的溶剂。24 小时后，大鼠分别接受溶剂或 10 mg·kg⁻¹ 的 SAR7334 治疗。血压遥测测量按文献所述进行（Lohn 等，2009）。简而言之，将遥测装置置于主动脉和下腔静脉之间，并将发射器的导管尖端插入主动脉。以 500 Hz 的采样率连续采集收缩压、舒张压和心率，并将数据以 5 分钟平均值存储。平均动脉压由收缩压和舒张压计算得出，并使用供应商软件（Dataquest ART V4.0，Data Sciences International）的快速傅里叶变换功能进行低通滤波，以便更好地可视化血压随时间的变化。统计分析中，原始数据取自给药载体或SAR7334后2小时开始的6小时时间段内（标记为“post”）的平均值。该时间段对应于SAR7334的血浆浓度峰值（见图6）。基线数据（标记为“pre”）在治疗前一天的相同时间段内采集。

[1]. The Role of Angiotensin II in Glomerular Volume Dynamics and Podocyte Calcium Handling. Sci Rep. 2017 Mar 22;7(1):299.

[2]. Pharmacological Characterization of the Native Store-Operated Calcium Channels of Cortical Neurons from Embryonic Mouse Brain. Front Pharmacol. 2016 Dec 12;7:486.

[3]. Discovery and pharmacological characterization of a novel potent inhibitor of diacylglycerol-sensitive TRPC cation channels. Br J Pharmacol. 2015 Jul;172(14):3650-60.

由于足细胞与疾病状态下进行性肾小球损伤密切相关，因此它们正成为研究的重点。足细胞丢失可能是由于细胞内钙离子过度内流所致，我们此前已证实血管紧张素II (Ang II) 通过经典的瞬时受体电位通道6 (TRPC6) 可导致足细胞内钙离子内流增加。本研究利用膜片钳电生理技术证实Ang II可激活TRPC通道；随后，我们利用共聚焦钙成像技术证明，阻断AT1或AT2受体 (ATR) 可抑制Ang II对足细胞钙离子内流的刺激作用。Ang(1-7)的应用对细胞内钙离子浓度无影响。使用SAR7334、SKF 96365、盐酸克米唑和La3+抑制TRPC通道可降低Ang II诱导的钙离子内流，而ML204则无此作用。我们利用一种新型的离体三维全肾小球成像方法，揭示了两种血管紧张素受体（ATR）均参与调控肾小球通透性；此外，我们使用TRPC6的特异性抑制剂和激活剂，证明这些通道与肾小球体积动态的调节有关。因此，我们提供的证据表明血管紧张素II/TRPC6轴在肾小球功能调控中起着关键作用，这可能对肾小球疾病的发生发展至关重要。[1]

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在小鼠脑中，胚胎发生过程中形成的第一批有丝分裂后皮层神经元表达对Pyr3敏感的储库操纵通道（SOC），Pyr3最初被认为是C型瞬时受体电位通道3（TRPC3通道）的阻滞剂。然而，Pyr3无法区分Orai通道和TRPC3通道，这使得TRPC3在SOC中的作用受到质疑。本研究旨在阐明E13皮层神经元中天然SOC的分子特性和药理学特征。采用定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测STIM1-2和Orai1-3的mRNA表达水平。结果显示，E13皮层神经元表达STIM1-2 mRNA，其中STIM2为主要亚型。仅检测到Orai2的转录本，未检测到Orai1和Orai3的mRNA。为进一步表征内源性SOC，我们使用了Orai和TRPC通道阻滞剂（Pyr6、Pyr10、EVP4593、SAR7334和GSK-7975A）。并使用荧光Ca2+探针Fluo-4记录了它们的活性。皮质SOC对Orai通道阻滞剂Pyr6和GSK-7975A以及EVP4593、锌离子、铜离子和钆离子均敏感，其中钆离子是所测试的SOC阻滞剂中最有效的（IC50约为10 nM）。SOC对TRPC通道阻滞剂Pyr10和SAR7334不敏感。此外，抑制线粒体Ca2+摄取可抑制SOC，而Ca2+非依赖性磷脂酶A2抑制剂对SOC无影响。总之，Orai2通道在小鼠胚胎皮质发育初期即已存在，并构成未成熟皮质中天然SOC的核心成分。这条Ca2+通路可能在大脑皮层的形成中发挥作用。[2]

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背景与目的：阳离子通道瞬时受体电位经典型（TRPC）6与多种疾病相关，包括局灶节段性肾小球硬化症、肺动脉高压和缺血再灌注引起的肺水肿。我们旨在发现新型TRPC6通道抑制剂，并研究这些药物的治疗潜力。实验方法：我们设计并合成了一个潜在的TRPC通道抑制剂库。通过测量细胞内Ca2+水平来评估化合物的活性。我们进一步利用全细胞膜片钳技术对先导化合物SAR7334进行了表征。本研究探讨了SAR7334对急性缺氧性肺血管收缩（HPV）和全身血压的影响。主要结果：SAR7334抑制TRPC6、TRPC3和TRPC7介导的Ca²⁺内流，IC₅₀值分别为9.5、282和226 nM，而对TRPC4和TRPC5介导的Ca²⁺内流无影响。膜片钳实验证实，该化合物以7.9 nM的IC₅₀值阻断TRPC6电流。此外，SAR7334抑制小鼠离体灌注肺中TRPC6依赖的急性HPV。SAR7334的药代动力学研究表明，该化合物适合长期口服给药。在一项初步的短期研究中，SAR7334 并未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压。结论和意义：我们的结果证实了 TRPC6 通道在缺氧性肺血管调节中的作用，并表明这些通道不太可能在 SHR 的血压调节中发挥主要作用。SAR7334 是一种新型的、高效且生物利用度高的 TRPC6 通道抑制剂，为体内研究 TRPC 通道功能开辟了新的途径。[3]

C21H24CL3N3O

440.794

439.098

C, 57.22; H, 5.49; Cl, 24.13; N, 9.53; O, 3.63

1333207-63-8

SAR7334;1333210-07-3

78357800

White to yellow solid powder

4.317

62.28

3

4

3

28

535

3

C1C[C@H](CN(C1)[C@@H]2CC3=CC=CC=C3[C@H]2OC4=C(C=C(C=C4)C#N)Cl)N.Cl.Cl

LFMYIKNZNTZSJX-IQJQELQDSA-N

InChI=1S/C21H22ClN3O.2ClH/c22-18-10-14(12-23)7-8-20(18)26-21-17-6-2-1-4-15(17)11-19(21)25-9-3-5-16(24)13-25/h1-2,4,6-8,10,16,19,21H,3,5,9,11,13,24H22*1H/t16-,19-,21-/m1../s1

4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-Amino-1-piperidinyl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chlorobenzonitrile dihydrochloride

SAR-7334; SAR 7334; SAR7334; SAR7334 hydrochloride; SAR7334 (hydrochloride); TRPC6 inhibitor; 4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-aminopiperidin-1-yl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chlorobenzonitrile;dihydrochloride; SAR 7334 Dihydrochloride; SAR 7334; CPA-1588 dihydrochloride;SAR-7334 HCl; SAR-7334 hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~226.87 mM)
H2O : ~50 mg/mL (~113.43 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。