TRPC6 (IC50 = 7.9 nM)
TRPC6 channel (IC₅₀ = 9.5 μM for TRPC6-mediated Ca²⁺ influx)
TRPC3 channel (IC₅₀ = 282 μM for TRPC3-mediated Ca²⁺ influx)
TRPC7 channel (IC₅₀ = 226 μM for TRPC7-mediated Ca²⁺ influx)
Does not affect TRPC4- or TRPC5-mediated Ca²⁺ entry [1]
TRPC6 channel (IC₅₀ = 9.5 nM for Ca²⁺ influx; IC₅₀ = 7.9 nM for whole-cell currents)
TRPC3 channel (IC₅₀ = 282 nM for Ca²⁺ influx)
TRPC7 channel (IC₅₀ = 226 nM for Ca²⁺ influx)
Does not affect TRPC4 or TRPC5-mediated Ca²⁺ entry (IC₅₀ > 10 µM). Store-operated Ca²⁺ entry driven by ORAI1/STIM1 is also largely resistant.[3]

SAR7334 可防止 TRPC6、TRPC3 和 TRPC7 介导的 Ca2+ 流入细胞，IC50 值分别为 9.5、282 和 226 nM[1][2][3]。相反，TRPC4 和 TRPC5 介导的 Ca2+ 内流不受影响。在足细胞中，SAR7334 (1 μM) 显着抑制 Ang II 引发的钙内流 [1]。 1 μM 的 SAR7334 几乎不影响 SOCE [2]。 SAR7334 的 IC50 为 7.9 nM，剂量依赖性地降低 TRPC6 电流。 SAR7334 (100 nM) 显着降低 TRPC6 电流 [3]。

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SAR7334（1 μM，预处理10分钟）能部分恢复由Ang II引起的离体大鼠肾小球体积变化的抑制，并显著阻断Ang II诱导的足细胞钙内流。[1]
SAR7334（1 μM）对培养的胚胎（E13）小鼠皮质神经元的储存操作钙内流（SOCE）影响甚微，表明TRPC通道（特别是TRPC3、TRPC6、TRPC7）不是这些神经元中天然SOC的关键组成部分。[2]
SAR7334 能有效抑制二酰基甘油（OAG）诱导的、在HEK-FITR细胞中表达的重组人TRPC6通道的钙内流，IC₅₀为9.5 nM。它对TRPC3和TRPC7的抑制效力较低（IC₅₀分别为282 nM和226 nM），但对TRPC4或TRPC5无明显影响（IC₅₀ > 10 µM）。[3]
全细胞膜片钳实验证实，SAR7334 可阻断OAG激活的TRPC6电流，IC₅₀为7.9 nM。[3]
SAR7334（100 nM）也能显著抑制由受体刺激（使用胰蛋白酶激活PLC偶联受体）引发的TRPC6电流，证明其对生理相关激活途径也有效。[3]

在离体灌注小鼠肺中，SAR7334（10 mg/kg，口服）可抑制 TRPC6 依赖性急性 HPV。 SAR7334 证明了其适合长期口服给药。在最初的短期试验中，SAR7334 并未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压 [3]。

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在离体灌注通气的小鼠肺中，SAR7334 剂量依赖性地抑制急性缺氧性肺血管收缩（HPV），该过程完全依赖于TRPC6通道。在此离体模型中，半数最大抑制浓度约为100 nM。[3]
在装有遥测装置的清醒自发性高血压大鼠（SHR）中，急性口服给予 SAR7334（10 mg/kg）并未显著影响平均动脉血压，表明TRPC6通道在此模型中可能不参与系统性血压的主要调节。[3]

Fluo-4测量细胞内钙浓度（[Ca2+]i）[3]
在室温下使用荧光成像板读数器进行Ca2+测量。在黑色聚-D-赖氨酸涂层96孔板上生长的细胞用标准细胞外溶液（140 mM NaCl、1 mM MgCl2、5.4 mM KCl、2 mM CaCl2、10 mM HEPES、10 mM葡萄糖，pH 7.35）洗涤，并在室温下用染料溶液（2μM Fluo-4 AM、0.02%pluronic F127、0.1%BSA的标准细胞外液）染色30分钟。冲洗细胞，并用补充有不同浓度测试化合物或载体的标准细胞外溶液孵育10分钟。
通过应用二酰基甘油、1-油酰基-2-乙酰基-sn-甘油（OAG）诱导Ca2+进入表达TRPC3/6/7的细胞。为了计算SAR7334诱导的抑制作用，绘制了随时间变化的荧光值，并将AUC视为Ca2+内流的量度。

离体灌注和通气肺缺氧性肺血管收缩（HPV）的测量[3]
C57/BL6N小鼠用甲苯噻嗪和氯胺酮麻醉，并用肝素抗凝，如前所述（Weissmann等人，2004；Fuchs等人，2011）。6-8周龄的雄性小鼠来自查尔斯河实验室。简而言之，在深度麻醉期间取出肺部，在37°C下用含有120 mM NaCl、4.3 mM KCl、1.1 mM KH2PO4、2.4 mM CaCl2、1.3 mM MgCl2、13.32 mM葡萄糖、5%（w/v）羟乙基支链淀粉和23.8 mM NaHCO3的Krebs-Henseleit缓冲液在2 mL·min-1下人工通气和灌注无血。左心房压力设定为2.0 mmHg。使用含21%O2、5.3%CO2的混合物进行正压通气（250μL潮气量，90次呼吸·min-1和2 cm H2O呼气末正压），与N2（常氧）或1%O2、5.3%二氧化碳（缺氧）平衡。测量肺动脉和左心房的压力。当肺部以恒定流量灌注时，肺动脉压的变化直接反映了肺血管张力的变化。以缺氧（10分钟）或常氧（15分钟）交替模式对肺部进行通气，以诱导急性HPV。在这样一系列重复的低氧通气操作中，在下一次低氧通气操作前5分钟施加了越来越多剂量的SAR7334。对于应用，将SAR7334储备溶液（2 mM在100%DMSO中）在灌注缓冲液中稀释1:100，并将适量累积加入再循环灌注液（15 mL）中。第一次应用是在第二次缺氧通气期后进行的。急性HPV的强度是指每个缺氧通气期肺动脉压的最大增加，参考第二次缺氧操作的强度（设置为100%）。

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在新鲜分离的大鼠肾小球中，足细胞用1 μM SAR7334 预处理10分钟，然后用10 μM Ang II刺激。通过荧光成像（Fluo4/FuraRed比率）监测钙内流。SAR7334 显著抑制了Ang II诱导的钙瞬变。[1]
胚胎（E13）小鼠的皮质神经元在体外培养2-3天。细胞用荧光Ca²⁺探针Fluo-4/AM负载。为诱发SOCE，细胞在无钙盐溶液中用200 nM毒胡萝卜素（Tg）处理以耗尽内质网钙储存，然后重新加入2 mM细胞外钙以触发钙内流。SAR7334（1 μM）在Tg应用前60秒加入记录盐溶液，并在整个实验过程中持续存在。通过时间推移荧光成像监测钙反应。SAR7334 未显著影响这些神经元SOCE的峰值幅度。[2]
对于细胞内钙（[Ca²⁺]i）测量，使用了表达人TRPC3、TRPC6或TRPC7通道的重组HEK或CHO细胞。细胞接种于96孔板，洗涤后负载Fluo-4 AM染料。负载后，细胞与不同浓度的 SAR7334 或载体孵育10分钟。随后使用二酰基甘油类似物1-油酰-2-乙酰-sn-甘油（OAG，30 µM）触发TRPC通道介导的钙内流。使用荧光成像板读数仪（FLIPR）监测荧光变化。计算荧光曲线下面积，用于确定 SAR7334 的抑制效力（IC₅₀）。[3]
对于全细胞膜片钳电生理学，使用生长在盖玻片上的TRPC6-HEK-FITR细胞。细胞用细胞外溶液持续灌流。通过施加50 µM OAG或200 nM胰蛋白酶（模拟受体激活）来引发TRPC6电流。通过灌流系统累积施加 SAR7334。在将细胞钳制在-70 mV的同时记录电流，并定期施加电压斜坡以评估电流-电压关系。通过量化 SAR7334 对OAG或胰蛋白酶诱导的稳态电流的抑制来生成剂量反应曲线。[3]

SAR7334的体内药代动力学测定[3]
在对雄性Sprague Dawley大鼠单次口服化合物SAR7334（250 g）后，采用连续采样研究测定了血浆中SAR7334的浓度。化合物溶于30%甘油/聚氧乙烯蓖麻油（75/25）和70%葡萄糖（5%）的混合溶液中。从每只动物身上采集8份血浆样本（通过尾尖取血，每次约200 µL血液），采集时间为24小时，并将样本储存在-15°C以下直至分析。加入含有类似内标的沉淀剂溶液（乙腈）后，使用配备CTC HTC PAL自动进样器的安捷伦液相色谱仪和Sciex API4000质谱仪，在正离子模式下，通过LC-MS/MS检测SAR7334。使用 50 μL 的样品体积，定量下限为 2.0 ng·mL⁻¹，线性范围为 2.0 至 2000 ng·mL⁻¹。

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血压遥测评估
成年雄性（6 月龄）自发性高血压大鼠连续两天接受治疗。第一天，动物经口灌胃给予 1 mL·kg⁻¹ 的溶剂。24 小时后，大鼠接受单独的溶剂或 10 mg·kg⁻¹ 的 SAR7334 治疗。血压遥测测量按文献所述进行（Lohn 等，2009）。简而言之，将遥测装置置于主动脉和下腔静脉之间，并将发射器的导管尖端插入主动脉。以 500 Hz 的采样率连续采集收缩压、舒张压和心率，并将数据以 5 分钟平均值存储。平均动脉压由收缩压和舒张压计算得出，并使用供应商软件（Dataquest ART V4.0，Data Sciences International）的快速傅里叶变换功能进行低通滤波，以便更好地可视化血压随时间的变化。统计分析中，原始数据取自给药载体或SAR7334后2小时开始的6小时时间段内的平均值（标记为“post”）。该时间段对应于SAR7334的血浆浓度峰值（见图6）。基线数据（标记为“pre”）在治疗前一天的相同时间段内采集。

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离体低氧性肺血管收缩（HPV）：在麻醉状态下从C57/BL6N小鼠中分离肺组织。对肺组织进行人工通气，并以恒定流速用无血的Krebs-Henseleit缓冲液灌注。通过交替使用常氧（21% O₂）和低氧（1% O₂）混合气体进行通气诱导急性低氧血症（HPV）。SAR7334溶解于DMSO中，配制成2 mM的储备液。使用时，将储备液以1:100的比例用灌注缓冲液稀释，并累积加入循环灌注液（总体积15 mL）中。在随后的低氧挑战前5分钟，逐渐增加剂量。测量低氧期间肺动脉压的升高，并将其标准化为对照反应。[3]
药代动力学研究：SAR7334配制成含有30%甘油/聚氧乙烯蓖麻油（75/25）和70%葡萄糖（5%）溶液的赋形剂。雄性Sprague Dawley大鼠单次灌胃给予SAR7334，剂量为10 mg/kg。在24小时内，从尾尖连续采集血样（约200 µL）进行血浆浓度分析。[3]
血压遥测研究：采用成年雄性自发性高血压大鼠（SHR）。通过手术植入遥测装置，进行连续血压监测。采用交叉设计，大鼠首先经口灌胃给予赋形剂（1 mL/kg）。24小时后，同一批大鼠再次接受赋形剂或SAR7334（10 mg/kg，口服）。连续记录血压参数。将给药后2小时（对应于血浆峰值浓度）开始的6小时数据与前一天同一时间段的基线数据进行比较。[3]

雄性Sprague Dawley大鼠单次口服10 mg/kg SAR7334后，血浆中达到药理学有效浓度，并维持数小时。[3]

[1]. The Role of Angiotensin II in Glomerular Volume Dynamics and Podocyte Calcium Handling. Sci Rep. 2017 Mar 22;7(1):299.

[2]. Pharmacological Characterization of the Native Store-Operated Calcium Channels of Cortical Neurons from Embryonic Mouse Brain. Front Pharmacol. 2016 Dec 12;7:486.

[3]. Discovery and pharmacological characterization of a novel potent inhibitor of diacylglycerol-sensitive TRPC cation channels. Br J Pharmacol. 2015 Jul;172(14):3650-60.

由于足细胞与疾病状态下进行性肾小球损伤密切相关，因此它们正成为研究的重点。足细胞丢失可能是由于细胞内钙离子过度内流所致，我们此前已证实血管紧张素II (Ang II) 通过经典的瞬时受体电位通道6 (TRPC6) 可导致足细胞内钙离子内流增加。本研究利用膜片钳电生理技术证实Ang II可激活TRPC通道；随后，我们利用共聚焦钙成像技术证明，阻断AT1或AT2受体 (ATR) 可抑制Ang II对足细胞钙离子内流的刺激作用。Ang(1-7)的应用对细胞内钙离子浓度无影响。使用SAR7334、SKF 96365、盐酸克米唑和La3+抑制TRPC通道可降低Ang II诱导的钙离子内流，而ML204则无此作用。我们利用一种新型的离体三维全肾小球成像方法，揭示了两种血管紧张素受体（ATR）均参与调控肾小球通透性；此外，我们使用TRPC6的特异性抑制剂和激活剂，证明这些通道与肾小球体积动态的调节有关。因此，我们提供的证据表明血管紧张素II/TRPC6轴在肾小球功能调控中起着关键作用，这可能对肾小球疾病的发生发展至关重要。[1]

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在小鼠脑中，胚胎发生过程中形成的第一批有丝分裂后皮层神经元表达对Pyr3敏感的储库操纵通道（SOC），Pyr3最初被认为是C型瞬时受体电位通道3（TRPC3通道）的阻滞剂。然而，Pyr3无法区分Orai通道和TRPC3通道，这使得TRPC3在SOC中的作用受到质疑。本研究旨在阐明E13皮层神经元中天然SOC的分子特性和药理学特征。采用定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测STIM1-2和Orai1-3的mRNA表达水平。结果显示，E13皮层神经元表达STIM1-2 mRNA，其中STIM2为主要亚型。仅检测到Orai2的转录本，未检测到Orai1和Orai3的mRNA。为进一步表征内源性SOC，我们使用了Orai和TRPC通道阻滞剂（Pyr6、Pyr10、EVP4593、SAR7334和GSK-7975A）。并使用荧光Ca2+探针Fluo-4记录了它们的活性。皮质SOC对Orai通道阻滞剂Pyr6和GSK-7975A以及EVP4593、锌离子、铜离子和钆离子均敏感，其中钆离子是所测试的SOC阻滞剂中最有效的（IC50约为10 nM）。SOC对TRPC通道阻滞剂Pyr10和SAR7334不敏感。此外，抑制线粒体Ca2+摄取可抑制SOC，而Ca2+非依赖性磷脂酶A2抑制剂对SOC无影响。总之，Orai2通道在小鼠胚胎皮质发育初期即已存在，并构成未成熟皮质中天然SOC的核心成分。这条Ca2+通路可能在大脑皮层的形成中发挥作用。[2]

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背景与目的：阳离子通道瞬时受体电位经典型（TRPC）6与多种疾病相关，包括局灶节段性肾小球硬化症、肺动脉高压和缺血再灌注引起的肺水肿。我们旨在发现新型TRPC6通道抑制剂，并研究这些药物的治疗潜力。实验方法：我们设计并合成了一个潜在的TRPC通道抑制剂库。通过测量细胞内Ca2+水平来评估化合物的活性。我们进一步利用全细胞膜片钳技术对先导化合物SAR7334进行了表征。本研究探讨了SAR7334对急性缺氧性肺血管收缩（HPV）和全身血压的影响。主要结果：SAR7334抑制TRPC6、TRPC3和TRPC7介导的Ca²⁺内流，IC₅₀值分别为9.5、282和226 nM，而对TRPC4和TRPC5介导的Ca²⁺内流无影响。膜片钳实验证实，该化合物以7.9 nM的IC₅₀值阻断TRPC6电流。此外，SAR7334抑制小鼠离体灌注肺中TRPC6依赖的急性HPV。SAR7334的药代动力学研究表明，该化合物适合长期口服给药。在一项初步的短期研究中，SAR7334 并未改变自发性高血压大鼠 (SHR) 的平均动脉压。结论和意义：我们的结果证实了 TRPC6 通道在缺氧性肺血管调节中的作用，并表明这些通道不太可能在 SHR 的血压调节中发挥主要作用。SAR7334 是一种新型、高效且生物利用度高的 TRPC6 通道抑制剂，为体内研究 TRPC 通道功能开辟了新的途径。[3]

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SAR7334 是一种新型的 TRPC6 通道特异性抑制剂，本研究利用它来证明 TRPC6 参与 Ang II 介导的肾小球体积动态变化和足细胞钙处理。[1]
SAR7334 被用作药理学工具，以研究 TRPC 通道对胚胎皮层神经元中天然储存操纵性钙通道 (SOC) 的贡献。其缺乏疗效支持了以下结论：Oral2通道而非TRPC通道构成该神经元群体中SOC的核心成分。[2]
SAR7334是通过基于阳离子通道抑制剂SKF96365类似物的靶向氨基茚满醇库的药效团导向设计发现的。[3]
它是一种新型的、高效的、口服生物利用度高的TRPC6通道抑制剂，兼具纳摩尔级的活性和适用于长期研究的良好药代动力学特征。[3]
其选择性和体内活性使其成为研究体内TRPC6介导过程的宝贵药理学工具，并可能对局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）、肺动脉高压和缺血再灌注引起的肺水肿等疾病具有潜在的治疗意义。[3]

CH7RNPI

190.951

349.028

1333210-07-3

SAR7334 hydrochloride;1333207-63-8

53378752

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.697

2.13

62.3

1

4

3

26

535

3

C1C[C@H](CN(C1)[C@@H]2CC3=CC=CC=C3[C@H]2OC4=C(C=C(C=C4)C#N)Cl)N

RLKRLNQEXBPQGQ-OZOXKJRCSA-N

InChI=1S/C21H22ClN3O/c22-18-10-14(12-23)7-8-20(18)26-21-17-6-2-1-4-15(17)11-19(21)25-9-3-5-16(24)13-25/h1-2,4,6-8,10,16,19,21H,3,5,9,11,13,24H2/t16-,19-,21-/m1/s1

4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-aminopiperidin-1-yl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chlorobenzonitrile

SAR7334; 1333210-07-3; CPA-1588; 4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-aminopiperidin-1-yl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chlorobenzonitrile; 4-(((1R,2R)-2-((R)-3-aminopiperidin-1-yl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl)oxy)-3-chlorobenzonitrile; CHEMBL4129809; SAR-7334; Benzonitrile, 4-[[(1R,2R)-2-[(3R)-3-aMino-1-piperidinyl]-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl]oxy]-3-chloro-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 370 mg/mL (~1005.79 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。